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Digesto e Electroforese de

DNA

Electroforese

Separao de componentes de uma mistura.Protenas ou cidos nucleicosDNAou RNA

Migrao dependente da carga elctrica da

molcula.

Arne Tiselius

Cientista sueco ganhou o

prmio Nobel da Qumica em

1948.

Foi assistente de Svedberg edesenvolveu o mtodo da

electroforese para separao

de protenas em suspenso a

partir da sua carga elctrica

PolinucletidoCadeia simples de DNA

Carga global negativa

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ElectroforeseProcedimento experimental

Em Gel de Agarose

Toma partido da carga global negativa das molculas de DNA

ElectroforeseGlobal

Visualizao do DNA

A visualizao do DNA corado com

brometo de etdeocorante

fluorescente - s possvel com luz

UltraVioleta

Visualizao de DNA

Separa molculas de DNA de diferentes tamanhos

Visualizao do DNA

W R T W R T W R T

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DNA do Fago Lambda

Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell( Garland Science 2008)

Enzimas de restrio

Corte cego

ou

Deixando extremidadesadesivas

Biologia 2009 5aula

Corte frequente ou raro

Enzyme Recognit ion sequence Type of ends End sequences

________________________________________________________________________________

AluI 5 -AGCT-3 Blunt 5 -AG CT-3'

3' -TCGA-5 3' -TC GA-5

Sau3AI 5-GATC-3' Sticky, 5 overhang 5' - GATC-3'

3' -CTAG-5' 3' -CTAG-5'

HinfI 5' -GANTC-3' Sticky, 5' overhang 5' -G ANTC-3'

3' -CTNAG-5' 3' -CTNA G-5'

BamHI 5' -GGATCC-3' Sticky, 5' overhang 5' -G GATCC-3'

3' -CCTAGG-5' 3' -CCTAG G-5'

BsrBI 5' -CCGCTC-3' Blunt 5' - NNNCCGCTC-3'

3' -GGCGAG-5' 3' - NNNGGCGAG-5'

EcoRI 5' -GAATTC-3' Sticky, 5' overhang 5' -G AATTC-3'

3' -CTTAAG-5' 3' -CTTAA G-5'

PstI 5' -CTGCAG-3' Sticky, 3' overhang 5' -CTGCAG-3'

3' -GACGTC-5' 3' -G ACGTC-5'

NotI 5' -GCGGCCGC-3' Sticky, 5' overhang 5' -GC GGCCGC-3'

3' -CGCCGGCG-5' 3' -CGCCGGCG-5'

BglI 5' -GCCNNNNNGGC-3' Sticky, 3' overhang 5' -GCCNNNNNGGC-3'

3' -CGGNNNNNCCG-5' 3' -CGGN NNNNCCG-5'

________________________________________

N = any nucleotide.

Note that most, but not all, recognition sequences have inverted symmetry: when read in the 5' 3 direction, thesequence is the same in both strands.

_____________________________________ Figure 8-32 Molecular Biology of the Cell( Garland Science 2008)

Molculas hbridas

DNAs de diferentes origens cortados

pelas mesmas enzimas podem dar

origem a molculas hbridas