metodos_contagem
-
Upload
ablescarrone -
Category
Documents
-
view
150 -
download
0
Transcript of metodos_contagem
![Page 1: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/1.jpg)
Eduardo Alécio – CEFET/PE
Métodos Microbiológicos para Contagem de Fungos e Bactérias
1
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 2: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/2.jpg)
Contagem Padrão em PlacaÉ um método de inoculação, onde se introduz uma quantidade de amostra num meio de cultura adequado.
Eduardo Alécio – CEFET/PE 2
• Inoculação em placas de Petri: Técnica em superfície (Spread Plate)
IncubaçãoMeio Sólido
Espalhamento
Amostra
Adiciona-se 0,1 mL de uma diluição da amostra com pipeta estéril no centro da placa e espalha-se com o auxílio de uma alça de Drigalski ou um bastão estéril.
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 3: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/3.jpg)
Contagem Padrão em Placa (cont.)3
• Inoculação em placas de Petri:
Técnica em Profundidade (Pour Plate)
Incubação
Meio Líquido
Amostra
Adiciona-se 1 mL da amostra ou sua diluição na placa de Petri vazia. Verte-se 20 mL de meio de cultura fundido e resfriado a 45ºC. Agita-se a placa em movimentos circulares .
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 4: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/4.jpg)
Resultado a ser alcançado:
• Que no meio sólido cada célula viável (UFC) dê origem a uma colônia isolada.
4
Contagem Padrão em Placa (cont.)
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 5: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/5.jpg)
Número Mais Provável - NMPTécnica de diluição idealizada por McCrady (1915), onde se faz uma estimativa da densidade média dos microrganismos na amostra
De fácil execução, mas é laboriosa.
Baseia-se em fórmulas de probabilidade
É estimada utilizando fórmula ou tabelas
A densidade microbiana é estimada pela relação de tubos positivos e negativos
Aplicado apenas para contagem de Bactérias
5Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 6: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/6.jpg)
6
Número Mais Provável - NMP (cont.)
1. Diluições sucessivas:
10 g
da Amostra
1mL 1mL
90mL
9 mL 9 mL
Dil 1/10 Dil 1/100 Dil 1/100
1 mL Dil. 1/10
1 mL Dil. 1/100
1 mL Dil. 1/1000
1 mL Diluente
2. Incubação: Em meios adequados
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 7: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/7.jpg)
Número de tubos cujo crescimentoé visível para cada quantidade do
produto sob exame
NúmeroMais
Provávelde
microrganismos
por g oumL
Limite NMP
100 mg ou 0,1 mL
/tubo
10 mg ou0,01 mL
/tubo
1 mg ou0,001 mL
/tubo
Inferior
Inferior
00011111222233333
00100112001123333
01001010010120123
<333477
11119
141520210240460
1100>2.400
-<0,5<0,50,511331337
35367150-
-913202123363636374489
470130024004800
-
Número Mais Provável - NMP (cont.)
Leitura: Tabela estatística
7Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 8: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/8.jpg)
Filtração por Membrana8
O método baseia-se na filtração de volumes adequados da amostra diluída através de membrana filtrante com porosidade de 0,45 µm.
As bactérias e fungos a serem detectados, apresentando dimensões maiores, ficarão retidas na superfície da membrana, a qual é então transferida para placa de Petri contendo meio seletivo e diferencial.
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 9: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/9.jpg)
Filtração por Membrana (cont.)9
2. Montar assepticamente a membrana no sistema de filtração
3. Ligar a fonte de vácuo
1. Diluir a amostra
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 10: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/10.jpg)
Filtração por Membrana (cont.)
10
4. Filtrar a amostra diluída (Equivalente a 1g da amostra)
5. Transferir o filtro para o meio sólido em placa de Petri
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 11: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/11.jpg)
Filtração por Membrana (cont.)
11
6. Incubar em temperatura para bactéria e fungo
7. Contar as colônias e calcular o nº de microrganismo / g ou mL
Eduardo Alécio – CEFET/PE
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 12: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/12.jpg)
12
•Determinar o número total de bactérias e fungos em produtos e matérias-primas Não-estéreis
Eduardo Alécio – CEFET/PE
Contagem de Microrganismos Viáveis Totais em Produtos Farmacêuticos (Farmacopéia Brasileira 4ª edição, 1988)
-Contagem da população microbiana que cresce após 4 dias emágar Caseína-soja a 30-35ºC
-Contagem da população microbiana que cresce após 7 dias emágar Sabouraud Dextrose a 20-25ºC
Sobre o Método:
Realizar o teste preferencialmente em capela de fluxo laminar.
Quando possível utilizar filtração por membrana.
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com
![Page 13: metodos_contagem](https://reader036.fdocumentos.tips/reader036/viewer/2022082917/5515ad68497959071e8b4c79/html5/thumbnails/13.jpg)
13
•Limites Microbianos para Produtos Farmacêuticos (USP XXIV)
Eduardo Alécio – CEFET/PE
Contagem de Microrganismos Viáveis Totais em Produtos Farmacêuticos (cont.)
-Preparações para Uso Oral e Tópico:
Bactérias mesófilas aeróbias: Máximo 500/g ou mLBolores e leveduras: Ausência
-Outros Produtos
Bactérias mesófilas aeróbias: Máximo 103/g ou mLBolores e leveduras: Máximo 102/g ou mL
PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com