CROMATOGRAFIAINTRODUÇÃO:

A cromatografia envolve uma série de processos de separação de misturas,

acontece pela passagem de uma mistura através de duas fases: uma estacionária

(fixa) e outra móvel. A interação dos componentes da mistura com estas duas fases é influenciado por diferentes forças intermoleculares, incluindo iônica, bipolar, apolar, e específicos efeitos de afinidade e

solubilidade.

A cromatografia pode ser utilizadapara a identificação de compostos, porcomparação com padrões previamente

existentes, para a purificação decompostos, separando-se as

substânciasindesejáveis e para a separação

dos componentes de uma mistura.

As diferentes formas de cromatografiapodem ser classificadas considerando-se diversos critérios:

1. Classificação pela forma física dosistema cromatográfico

2. Classificação pela fase móvelempregada

3. Classificação pela faseestacionária utilizada

4. Classificação pelo modo deseparação

1. Classificação pela forma física dosistema cromatográfico

Em relação à forma física do sistema,a cromatografia pode ser subdividida

em cromatografia em coluna ecromatografia planar.

EM COLUNA: cromatografia líquida, gasosa e supercrítica.

PLANAR: Centrífuga, em papel e camada delgada.

2. Classificação pela fase móvelempregada

São de 3 tipos: a cromatografia gasosa, a cromatografia líquida e a cromatografia supercrítica (CSC). A cromatografia líquida apresenta uma importante subdivisão: a cromatografia líquida clássica (CLC) e a

cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). No

caso de fases móveis gasosas, separações podem

ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por

cromatografia gasosa de alta resolução (CGAR).

3. Classificação pela faseestacionária utilizada

Quanto à fase estacionária, distingue- se entre fases estacionárias sólidas, líquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionária ser constituída por um líquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte sólido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados são considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separação.

4. Classificação pelo modo deseparação

Separações cromatográficas se devem à adsorção, partição, troca iônica, exclusão

ou misturas desses mecanismos.

CROMATOGRAFIA

PLANAR COLUNA

CENTRÍFUGA CCD

CP

CSC GASOSA

LÍQUIDA

CLÁSSICA CLAE

CG CGAR

Cromatografia planar

A cromatografia em papel (CP) é uma técnica

de partição líquido–líquido. Baseia-se na diferença de solubilidade das substâncias

em questão entre duas fases imiscíveis, sendo

geralmente a água um dos líquidos. Este método

é muito útil para a separação de compostos polares, sendo largamente usado em

bioquímica.

A cromatografia em camada delgada (CCD) é uma

técnica de adsorção líquido–sólido. Nesse caso, a separação se dá pela diferença de afinidade dos

componentes de uma mistura pela fase estacionária.

Cromatografia em coluna

A cromatografia líquida clássica é muito utilizada para isolamento de produtos naturais e purificação de produtos de reações químicas. As fases estacionárias mais utilizadas são sílica e alumina, entretanto estes adsorventes

podem servir simplesmente como suporte para uma fase estacionária líquida. Fases estacionárias sólidas levam à separação por adsorção e fases estacionárias líquidas por partição.

A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE)

é uma técnica analítica usada para separar e quantificar componentes numa mistura líquida. A utilização de suportes com partículas diminutas são os responsáveis pela alta eficiência desse método de cromatografia. A fase móvel (líquida) movimenta-se continuamenteatravés da coluna contendo a FASE ESTACIONÁRIA(sólido). O soluto interage com as fases estacionáriae móvel por adsorção, partição, exclusão molecular,troca iônica.As separações em CLAE podem se dar por adsorção (separação sólido-líquido), partição (separação líquido-líquido) ou ambos.

INSTRUMENTAÇÃO BÁSICA DA CLAE

O detector mais utilizado para separações por CLAE é o detector de ultravioleta (Absorção da

luz na faixa UV – visível), sendo também empregados detectores de fluorescência, de indíce de refração, e eletroquímicos, entre

outros.

Cromatografia Gasosa

Técnica de separação e análise de misturas por

interação dos seus componentes entre uma fase

estacionária e uma fase móvel.

Mecanismo de separação

A amostra é injetada (injetor de

amostra) e arrastada pela fase

móvel (gás arrastador) através

da coluna que contém a fase

estacionária (coluna CG

aquecida), onde ocorre a

separação da mistura. As

substâncias separadas saem da

coluna dissolvidas na fase móvel

e passam por um detector que

gera um sinal elétrico

proporcional à quantidade de

material separado.

Mas o que é um detector?

É um dispositivo que indica os componentes separados

pela coluna. Examinam continuamente o material, gerando um sinal na passagem de substâncias que

foram separadas. 3 tipos:• Universais – geram um sinal para qualquer

composto.• Seletivos – geram um sinal apenas para compostos

com determinadas características.• Específicos – geram um sinal para compostos que

tenham um determinado elemento na sua estrutura.

Características da fase móvel ou gás de arraste:

• Inerte Não interage nem com a amostra, nem com a fase estacionária, apenas transporta a amostra através da coluna.

• Puro Isento de impurezas que possam contaminar a amostra, ou gerar ruído no sinal.

• Compatível com o detector.• Exemplo: H2, N2, He

Características da fase estacionária:

• Características próximas das dos solutos a serem separados.

• Seletividade, deve ser um bom solvente diferencial dos componentes da amostra.

• Quimicamente inerte relativamente à amostra.• Volatilidade baixa.• Estabilidade térmica.• Pouco viscoso.• Puro.

Fases estacionárias utilizadas:

• Parafinas – apolares• Poliglicóis – polares• Poliésteres - polares• Silicones – cobrem ampla faixa de

polaridade.

Fase estacionária – Mecanismo de separação

A amostra atinge a fase estacionária sendo parte absorvida e estabelece-se o equilíbrio entre esta parte e uma outra que permanece na fase gasosa, que por sua vez continua no gás de arraste até estabelecer o equilíbrio. O gás de arraste atinge a fase estacionária, o que leva a amostra a entrar novamente neste para restabelecer o equilíbrio.

Aplicações práticas da Cromatografia Gasosa:

Química:- Determinação de antioxidantes, nutrientes ou

contaminantes em alimentos.

Indústria:- Monotorização de processos industriais.

Saúde:- Análises dos constituintes do sangue.- Análise forense.

Ambiente:- Determinação de resíduos de pesticidas em produtos

alimentares, águas ou esgotos.- Determinação de gases e solventes orgânicos na

atmosfera, solos ou rios.

Cromatografia gasosa de altaresolução (CGAR)

O principal mecanismo de separação da cromatografia gasosa está baseado na

partição dos componentes de uma amostra entre a

fase móvel gasosa e a fase estacionária líquida. A utilização de fases estacionárias sólidas, as quais levariam à separação por adsorção, apresenta poucas aplicações.

A cromatografia gasosa é uma das técnicas analíticas mais utilizadas. Além de possuir um alto poder de resolução, é muito atrativa devido à possibilidade de

detecção em escala de nano a picogramas.

A diferença entre CG e CGAR está na coluna (tubos longos de metais como aço

ou cobre, vidro ou teflon). Colunas de CGAR são maiores em comprimento,

menores em diâmetro, possuem a fase líquida como um filme aplicado diretamente

às paredes do tubo da coluna e são mais eficientes.

Referências BibliográficasCOLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S.

Introdução a métodos cromatográficos. 5ª ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1993.

LOUGH, W.J. e WAINER, I.W. High Performance liquid chromatography: fundamental principles and practice. Blackie Academic and Professional, 1995.

CHAVES, M.H.; Análise de extratos de plantas por CCD: uma metodologia aplicada à disciplina “Química Orgânica”. Química Nova, v. 20, n. 5, p. 560-562, 1997.

ANDRADE, J.B.; PINHEIRO, H.L.C.; LOPES, W.A.; MARTINS, S.; AMORIM, A.M.M. e BRANDÃO, A.M. Determinação de cafeína em bebidas através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Química Nova, v. 18, n. 4, p. 379-381, 1995.

NETO, F.R.A.; CGAR em análise de resíduos. Química Nova, v. 18, n. 1, p.65-67, 1995.