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Cromatografia em camada delgada: Análise qualitativa da composição de analgésicos Alunos: Paula Gomes Paulo Sanches Professores: Prof. Dr. José Eduardo de Oliveira Profa. Dra. Angela Regina Araújo

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Cromatografia

• “A cromatografia é uma técnica usada para a separação dos componentes de uma amostra, os quais se distribuem em duas fases, uma estacionaria e a outra móvel. A fase estacionaria pode ser um sólido, um liquido retido sobre um sólido ou um gel. A fase móvel pode ser líquida ou gasosa.” – IUPAC

• O nome deriva das palavras gregas “chrom” (cor) e “graphe” (escrever), embora o processo não dependa da cor, exceto para facilitar a identificação dos componentes separados. Where

is our daddy?

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Cromatografia

Planar Coluna

Centrífuga CCD CP Líquida CSC Gasosa

Clássica CLAE

CG CGAR

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•Seu principio de funcionamento é semelhante a extração com solventes

Extração com solventes

• Os componentes da mistura distribuem-se

entre dois solventes de acordo com a solubilidade.

Cromatografia

• O processo de separação depende das diferenças de adsorção dos componentes na fase estacionária e da solubilidade na fase

móvel.

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Cromatografia em camada delgada (CCD)

Consiste na separação dos componentes de uma mistura através da migração diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfície plana.

O processo de separação está fundamentado, principalmente no fenômeno de ADSORÇÃO.

Usando fases estacionarias tratadas pode ocorrer também por PARTIÇÃO ou TROCA IÔNICA.

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Os adsorventes • Os adsorventes mais utilizados em CCD são a sílica, a

alumina, a celulose e a poliamida.

Sílica (SiO2) •Um dos adsorventes mais utilizados em cromatografia por adsorção; •Apresenta caráter ácido; •Utilizada na separação de compostos lipofílicos como aldeídos, cetonas fenois, ácidos graxos, entre outros.

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Alumina ( Al2O3) •Depois da sílica, é o adsorvente mais utilizado. •Tem características alcalinas; •Pode catalisar diversas reações orgânicas; •Geralmente é empregada na separação de compostos lipofílicos. Separa bem hidrocarbonetos policíclicos, alcaloides e aminas.

Celulose •É empregada como suporte da fase estacionária liquida em cromatografia por partição ou troca iônica. •Empregada na separação de ácidos carboxílicos, aminoácidos, carboidratos, entre outros.

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Partição

A fase estacionaria líquida reveste um suporte sólido inerte formando um leito não miscível com a fase móvel.

Suporte inerte:

• Poroso: terras diatomáceas, sílica gel.

• Porosidade limitada: Zipax e Corasil.

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Troca Iônica

Troca Aniônica Troca Catiônica

-SO3- -trocadores fortes de cátions -CO2- -trocadores fracos de cátions -NR3+ -trocadores fortes de ânions -NH2R+ - trocadores fracos de ânions

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Vantagens

• Fácil compreensão e execução;

• Separações em breve espaço de tempo;

• Versatilidade;

• Grande reprodutibilidade;

• Baixo custo.

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Força de Eluição e Escolha do Solvente

A eluição consiste no arraste do composto através da coluna pela fase móvel.

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Saturação da Cuba

Tampa para saturação da cuba com o solvente

Após adição de solvente na cuba aguardar cerca de 5 min para saturação. Após, adicionar a placa.

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Ativação das placas

Objetivo: retirar substâncias interferentes e eliminar água Metodologia : Varia de uma adsorvente para outro. Exemplo : Sílica e alumina ⇒ estufa 105 – 110 ºC por 30 –60 min; Celulose ⇒ estufa 105ºC por 10 min;

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1-Riscar as placas ƒƒ2- Determinar altura de ƒƒ Início e fim da cromatografia

Preparação das Placas

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Como aplicar a amostra

Capilar contendo a amostra

Ponto de aplicação

• As amostras são aplicadas na forma de solução de solventes voláteis; • Utilizam-se micropipetas ou microseringas para aplicar as amostras; • Pode-se utilizar tubos capilares de vidro ou aplicadores automáticos; • As manchas devem ser aplicadas 1,5 a 2,0 cm acima da borda inferior; • a distância entre cada gota é de 1,0 cm.

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Fator de Retenção (Rf)

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•Tornar visíveis as substâncias incolores presentes na amostra •ƒƒ Nem sempre é necessário •ƒƒ Formas de visualização ƒ Física ƒ Química ƒƒ Biológica

Revelação das Placas

Exposição à radiação U.V. para compostos fluorescentes. ƒƒ Cromóforos

Física

ƒ Agentes cromogênicos ƒƒ Borrifação . ƒƒ Adsorção sobre o composto, tornando--o colorido ƒ

Química

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ƒ Fatores ƒƒ Insolubilidade na FM ƒƒ Forte adsorção na FE ƒƒ Quantidade de amostra aplicada ƒƒ Vedação da cuba ƒƒ Variação de temperatura (< 5 ºC) ƒƒ Alinhamento do ponto de aplicação da amostra

Reprodutibilidade

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Propriedades dos Reagentes

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Referencias Bibliográficas

• COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S., Introdução a métodos cromatográficos. 7 ed. Campinas, SP, editora da UNICAMP, 1997.

• CIENFUEGOS, F.; VAITSMAN, D.; Análise Instrumental. 3 ed. Rio, RJ, Editora Interciência Ltda, 2000.

• HOLLER, F. J.; SKOOG, D. A.; CROUCH, S. R., Princípios de Análise Instrumental. 6 ed. Porto Alegre, Editora Bookman, 2009.

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- Placa de 10 x 6,6 cm

- Com um lápis trace uma reta cerca de 1 cm acima de uma

extremidade

- Marque 6 pontos na linha

- Aplique uma mancha com cerca de 1-2 mm de diâmetro

Acetaminofeno, aspirina, cafeína, ibuprofeno, salicilamida e a mistura padrão

- Em uma jarra, de 500 mL com tampa, envolver um papel filtro,

já umedecido com o solvente, de modo a não cobrir a parede

interna do recipiente.

0,5-0,7 cm de 0,5% de ácido acético glacial em acetato de etila

- Coloque a placa na jarra de modo que ela não toque no papel

filtro.

- Deixe que a amostra se desenvolva até o solvente chegar a 0,5

cm do topo.

- Remova a placa, marque a frente com um lápis e deixa-a secar.

- Revelar com UV.

- Calcule os fatores de retenção.

Cromatografia de referência

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Analise de analgésicos comerciais

15 mL de etanol + 15 mL de cloreto de metileno

- Coloque 5 mL deste solvente em

cada béquer que será colocado a

amostra

1/2 comprimido de cada amostra

- Reduza o comprimido a pó e coloque no béquer

já como solvente.

Amostra + solvente

- Aqueça por alguns minutos em banho de vapor.

- Deixe em repouso.

- Aplique os extratos líquidos transparente na placa.

- Aplique na placa o padrão de referencia.

- Desenvolva a placa.

- Revele com UV.

- Compare o cromatograma obtido com o de referência