Cláudia Turra - FísicaGabriel Kaulfmann - Informática

Ismael Osmari - QuímicaMichelli Antonow - Farmácia

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Grupo 2 – Nanotecnologia:

Profª Drª Solange Binotto FaganProfª Drª Marta Palma AlvesProfª Drª Renata P. Raffin

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3333

SUMÁRIO

Introdução

Materiais e Métodos

Resultados e Discussão

Conclusão

4444

O objecivo deste trabalho foi desenvolver nanopartículas lipídicas sólidas e avaliar o potencial dessas nanopartículas como portadoras de Penciclovir para aplicação tópica.

SLNs

Materiais e preparação das SLNs

Caracterização Físico-química das SLNs

Avaliação da permeação percutânea in vitro e comportamentos da absorção na pele

Análise por HPLC do Penciclovir

Investigação sobre os mecanismos de penetração

Caráter promissor das SLNs como carregadoras de Penciclovir na aplicação tópica.

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INTRODUÇÃO

Penciclovir é um nucleosídeo sintético análogo, é um potente e altamente seletivo inibidor do vírus da herpes.

Inibidor:

Vírus herpes simplex tipo 1 e tipo 2.

Vírus varicela-zoster.

Vírus Epstein-Barr.

Vírus da hepatite e citomegalovírus.

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Mas...

As várias formulações tópicas na literatura incluindo gel, creme e veículos adequados com capacidade de permeação alta.

A biodisponibilidade oral do Penciclovir é muito baixa (5 à 10%) e sua aplicação clínica é muito restrita.

Sendo que...

Um caminho promissor de administração do penciclovir é a entrega tópica.

O que tem atraído a atenção de pesquisadores

Na qual

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A alternativa que surge é...

Nanopartículas lipídicas sólidas (SLNs)

Sendo utilizada como transportadora do Penciclovir

Devido vantagens como:

Irritação da pele desprezível.

Liberação controlada.

Da protecção para assubstâncias ativas.

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MATERIAIS

Poloxamer 188 e Brij 78 foram obtidos da Sigma Chemical(St. Louis, MO, EUA).

O Penciclovir (pureza 99%) foi comprado da Livzon Pharmaceutical Group Co., Ltd. (Changzhou, China).

Fosfatidilcolina de ovo (EPC) foi obtido a partir Lipoid(Ludwigshafen, Alemanha).

Monoestearato de Gliceril (GMS) foi fornecido pela Shanghai Co. Ltd. (China Shanghai).

Diclorometano, Tween 80 e Tween 20 foram adquiridos daYongda reagente químico Co. Ltd. (Tianjin, China).

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MÉTODOS

PREPARAÇÃO DAS NANOPARTÍUCLAS LIPÍDICAS SÓLIDAS

SLNs foram preparados por técnica de dupla emulsão (água/óleo/água) com ligeiras modificações.

6mg de penciclovir foi dissolvido numa solução de 200 µl de hidróxido de sódio 0,1 M.

fase de óleo foi preparada por dissolução de uma quantidade diferente de GMS e 40mg de EPC em 1 ml de diclorometano.

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A fase interna aquosa foi misturada com a fase de óleo e em seguida submetida a sonda ultra-sônica por 60 segundos de 40 Watts para obter a primeira parte da emulsão água/óleo.

A emulsão água/óleo/água foi formado após a adição de 3,8 ml da solução com surfactante em diferentes concentrações e em seguida passou por sonicação por 18 segundos em 40 Watts.

A emulsão formada foi mantida em 25 ºC sob agitação mecânica em 700 rpm por 5 h para remover o solvente orgânico e formar as SLNs.

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As variáveis como a concentração de GMS, tensoativos na fase externa e suas concentrações estão diretamente ligadas a eficácia das SNLs contendo Penciclovir.

Sendo que estas...

Foram investigadas para conseguir uma formulação ideal.

O pó de SLNs foi preparado por liofilização com 5,0%manitol como agente de apoio, a fim de facilitar a investigação.As amostras de SNLs dispersão com manitol foram congeladas em um freezer ultra frio a -80°C durante 24 h, em seguida, liofilizadas utilizando um liofilizador em -40°C, com pressão de 0,10 mbar por 48 h para produzir o pó seco.

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Caracterização físico-química das SLNs

Tamanho de Partícula e Potencial Zeta

Diâmetro – PCS – distribuição de volume

Potencial Zeta

25° Ctriplicata

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MorfologiaPlaca de cobre

Tingimento com PTA

Excesso removido

Secagem da amostra

Análise com TEM

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Eficiência de Encapsulação (EE) e Carregamento de Fármaco (DL)

ultrafiltração

10.000 rpm centrifugação 1h

25° C

%100

Fi

FLFi

W

WWEE

%100

Lip

FLFi

W

WWDL

1515

Estudo de Estabilidade

Estabilidade Físico-química:

T = 4° Ct = 3 meses

Estabilidade Física:

Teste de centrífuga – 13.000 rpm/30 minutos

TransparênciaTamanho de partícula

EE

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Análise de calorimetria diferencial de varredura (DSC)

Células de Al

10° C/min → 30 - 400° C

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Permeação percutânea in vitro e comportamento de absorção na pele

Preparação da pele

Ratos Wistar machos (~200g)

Pêlos removidos

Pele da região abdominalIntegridade – lâmpada de inspeção

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Estudo de permeação in vitro

Amostras com 3,8 cm2

Hidratação

37° C – 600 rpm

1,2 mg de penciclovir

800 μl de suspensão 120 mg de creme

Aplicação na pele

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Cálculo dos dados de permeação in vitro

A

VCVCQ

n

iiin

n

1

10

2

22

2220

)1(2

6

1 L

tDnt

n

n

enL

DCLKAQ

6

120 L

DCLK

A

Q tnpKC

L

DKCJ

00

2020

Determinação do conteúdo de fármaco na epiderme e na derme

2, 6 e 12 horas após tratamento

Excesso removido – lavagem com álgool e água

Imersão em água destilada (2 min)

Epiderme/Derme – ácido perclórico (24 h)

Homogeneização (1 min)

Sonicação (1 h)

Centrifugação

2121

Análise HPLC do penciclovir

HPLC + coluna

Alíquotas de 20 μg

Ensaio linear para 1-50 μg/ml

Nenhuma interferência

Filtro de membrana de celulose

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Investigação do mecanismo de reforço de penetração

Efeito das SLNs na superfície da pele do rato

Encontrar efeito tópico nas peles

Estudos patológicos – formalina 10%

coloração com

hematoxilina/eosina

figuras microscópicas -

microscópio

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Investigação DSC

Epiderme em filtro com tripsina

4° C por 24h/ 37° C por 1h

EC removido - tripsina

Enxágue – “dessecador”

Amostra dividida – análise em DSC

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Resultados e discussão Otimização de Formulação

Para otimizar SLNs penciclovir foi elaborado um método de dupla emulsão, diferentes variáveis na formulação foram avaliados.

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Otimização de Formulação:

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Caracterização:

272727

• SLNs Penciclovir apresentaram uma boa estabilidade durante o período de três meses;

• Nenhuma alteração óbvia de clareza e de degradação foram encontrados;

• O diâmetro médio delas foi 264,5 ± 9.3nm.

Estabilidade:

282828

Estudo DSC:

292929

Permeação cutânea e comportamentos de absorção da pele:

Fig. 3. Percutaneous permeation profiles of penciclovir from the SLNs and the commercial cream through the excised rat skins (mean±S.D.; n = 5).

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Permeação cutânea e comportamentos de absorção da pele:

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Permeação cutânea e comportamentos de absorção da pele:

Fig. 4. The amount of penciclovir in epidermis (a) and dermis (b) after 2, 6, and 12 h, respectively.

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Efeito na superfície da pele de ratos:

Fig. 5. Microphotograph (400×) of vertical section of rat skin (H/E staining): (a) untreated skin, (b) skin treated with commercial cream, and (c) skin treated with penciclovir-loaded SLNs.

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CONCLUSÃO

SLNs de Penciclovir penetrou na pele de ratos 2 X mais que o

creme comercial, com um controle de 12 após a administração.

SLNs de Penciclovir teve um aumento de 130% na penetração na

derme comparado com o creme comercial.

O estudo mostrou que as SLNs aumentaram a penetração de

Penciclovir.

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OBRIGADO!