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CARLOS FREDERICO

MARTINS MENCKe ARMANDO

MORAIS VENTURAso professores doDepartamento deMicrobiologia do Institutode Cincias Biomdicasda USP.

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3/12REVISTA USP, So Paulo, n.75, p. 50-61, setembro/novembro 200752

ALTOS E BAIXOS

DA TERAPIA GNICA

m 1990, foi realizado nos

Estados Unidos o primeiro

Protocolo Clnico de Terapia

Gnica em humanos, em duas

crianas portadoras da imuno-

deficincia combinada severa.

O sucesso parcial desse pro-

tocolo levou a uma exploso

no desenvolvimento de vrios

estudos com perspectivas de

uso teraputico dos genes. O

frenesi causado pelos resul-

tados iniciais levou, durante

a dcada de 1990, a se comparar a terapia

gnica com outras tecnologias que revo-

lucionaram a medicina moderna, como o

desenvolvimento de vacinas, anestesias

e a descoberta de antibiticos. A relativa

facilidade de manipulao dos vetores

genticos derivados de vrus e o aumento

na capacidade de se isolar genes humanos

geraram expectativas de avano rpido

nesse tipo de terapia e muita excitao

na mdia e mesmo nas pesquisas na rea.

Esse entusiasmo inicial, no entanto, no foi

confirmado, e vrios problemas foram en-

contrados em protocolos clnicos de terapia

gnica realizados em seres humanos, o que

deixou claro que ainda temos uma longa

estrada a percorrer antes que o emprego

dessa tecnologia possa ser incorporado

de forma mais genrica ao dia-a-dia dos

hospitais. No entanto, avanos claros tm

sido conseguidos, e novas abordagens tm

ampliado o espectro de ao da terapia g-

nica, abrindo novos horizontes de uso.

O aumento na quantidade de protocolos

clnicos reflete o fato de que h grandes es-

peranas de sucesso da terapia gnica para

combater doenas que afligem a sociedade

h muito tempo, com poucas perspectivas namedicina clssica. Entre as grandes mudan-

as recentes, destacamos o uso de molculas

de RNA dupla-fita que agem como silen-

ciadores gnicos atravs de mecanismos de

RNA interferncia (RNAi). Esses mecanis-

mos eram praticamente desconhecidos at

poucos anos atrs, e sua descoberta resultou

na premiao do Nobel em Medicina de

2006 aos americanos Andrew Z. Fire e

Craig C. Mello. As expectativas dessas

novas abordagens empregando RNAi so

descritas no final deste artigo. Em relao

a nosso pas, cabe a ns optar por assistir

a esses avanos como espectadores, para

posteriormente pagar pelos medicamentos

que sero criados, ou investir para tambm

contribuir com propostas nossas, criando

alternativas, e tambm considerar o combate

a doenas que afligem principalmente os

pases menos desenvolvidos.

HISTRICO

O trabalho pioneiro descrito por Oswald

T. Avery e seus colaboradores em 1944 j

mostrou que possvel transferir genes de

uma cepa bacteriana patognica para outra

no-patognica, identificando o DNA como

portador da informao gentica. Essa des-

coberta fundamental foi logo seguida pela

proposta da estrutura dupla-hlice do DNA,

por James Watson e Francis Crick em 1953.

Estavam lanadas bases para a busca de uma

forma de inserir genes saudveis em indi-

vduos que deles necessitassem, hiptese

que foi aventada em 1964 por trs prmios

Nobel: Edward L. Tatum, Joshua Lederberg

e Arthur Kornberg. O isolamento do primei-

ro gene, por Jon Beckwith e colaboradores

em Harvard (1969), levou a declaraes

reforando essa possibilidade. No entanto,

teve incio tambm uma polmica sobre a

segurana da engenharia gentica e possi-

bilidades de sua utilizao para propsitos

de eugenia. Esse debate estendeu-se durante

toda a dcada de 1970 e culminou na criao

de legislaes adequadas de segurana em

diversos pases.

Em 1977, os pesquisadores MichaelWigler e Richard Axel conseguiram a pri-

meira correo gentica propriamente dita

em clulas de mamfero cultivadas in vitro.

Esses pesquisadores inseriram o gene que

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codifica a enzima timidina quinase em c-

lulas portadoras de deficincia nesse gene.

A metodologia utilizada, com DNA purifi-

cado, apesar de fornecer dados inequvocos,

ainda era pouco eficiente. Ganhou fora,

ento, a proposta aventada anteriormente de

utilizar vrus no-patognicos como vetores

transportadores de genes. Essa idia gerou

intensas pesquisas e j nos anos de 1983 e

1984 foram propostos os primeiros sistemas

de vetores derivados de trs espcies virais:

retrovrus, adenovrus e vrus adenoassocia-

dos (AAV). Uma ilustrao desses vrus

mostrada na Figura 1.

A idia de usar os prprios vrus como

veculos para transportar e introduzir

genes em um paciente, promovendo a

cura de doenas, de uma simplicidade

extraordinria e abre enormes perspecti-

vas para a sade humana. Basicamente,

essa proposta pretende utilizar estratgias

dos vrus, que puderam aperfeioar essa

entrega gentica atravs de evoluo

por milhes de anos. A conseqncia

do domnio da manipulao dos genes

trouxe possibilidades que extrapolam a

experimentao em bancada, podendo

ento ser propostas aplicaes clnicas

em seres humanos, como as implcitas na

definio de terapia gnica, qual seja: a

Vrus

Retrovrus Adenovrus adenoassociado

FIGURA 1

Principais vrus que servem de vetores para protocolos de terapia gnica

transferncia de material gentico novo

para clulas de um indivduo resultando

em benefcio teraputico.

No incio do sculo XXI, com o seqen-

ciamento do genoma humano e o desenvol-

vimento das ferramentas de comparao de

genes baseada na informtica, foi desvendado

um universo jamais imaginado anteriormente.

Essas ferramentas foram um apoio fundamen-

tal na medida em que vrias doenas humanas

eram, custa de muito trabalho, relacionadas

a defeitos em genes especficos. Os dados do

genoma humano foram anunciados vrias

vezes com pompa e euforia. As manchetes

identificavam que, com a revelao do Livro

da Vida, estaramos prximos de resolver

problemas seculares. De fato, com esses

dados foi possvel identificar pelo menos

70.000 defeitos genticos em seres humanos

(http://www.ornl.gov/sci/techresources/Hu-

man_Genome/posters/chromosome/). A ca-

pacidade de interferir na constituio gentica

de um indivduo, por meio da terapia gnica,

surge ento como uma espcie de tbua de

salvao para resolver problemas relaciona-

dos sade humana, pela cura de doenas

genticas herdadas dos pais, ou mesmo de

doenas que podem ser adquiridas durante

a vida, como o cncer, doenas do corao

e infeces virais.

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VETORES GENTICOS E OS

PROCESSOS DE TERAPIA GNICA

O desenvolvimento de novos vetores

genticos tem buscado superar os problemas

encontrados nos trabalhos iniciais de terapia

gnica. O vetor ideal deve ser de fcil pro-

duo, no deve gerar resposta imunolgica

ao vrus ou ao transgene pelo paciente, deve

promover a expresso do transgene de modo

eficiente e por longo tempo, alm de, se pos-

svel, ter especificidade no tecido alvo. Os

principais vetores testados at o momento

tm sido os derivados de adenovrus e retro-

vrus, sendo que ambos apresentam vrias

limitaes. Embora vetores adenovirais

apresentem alta eficincia, estes induzem

uma elevada resposta imunolgica que re-

duz o tempo de expresso do transgene e

praticamente impede a reaplicao em um

mesmo paciente.

Pelo menos em um caso o resultado foi

dramtico: em 1999, a aplicao de grandes

quantidades de adenovrus recombinantes

provocou a morte de um jovem paciente,

gerando enorme controvrsia sobre o uso de

terapia gnica em seres humanos. Vetores

retrovirais, por outro lado, permitem a in-

tegrao do transgene no genoma da clula

hospedeira, restaurando a deficincia celular

de um modo que pode ser permanente. No

entanto, a eficincia na produo de retro-

vrus recombinantes baixa, o que limita

a possibilidade de seu uso, e a insero no

genoma no impede o silenciamento poste-

rior da expresso do transgene. Alm disso,

recentemente foi reportada a inativao de

um proto-oncogene em linfcitos, induzin-

do a proliferao tumoral (leucemia) em

pacientes submetidos ao tratamento com

esse tipo de vrus durante trs anos. Vetores

derivados de vrus adenoassociados (AAV)

parecem resolver alguns desses problemas,

pois esses pequenos vrus no esto ligados a

nenhuma doena humana, so relativamentefceis de se obter, e pouco estimulam o

sistema imunolgico do paciente, aumen-

tando o tempo de expresso do transgene.

Sua produo em larga escala, no entanto,

consiste em um problema cuja soluo ainda

no simples.

Sistemas de transferncia gnica inde-

pendentes de vrus tm sido desenvolvidos

como alternativas aos problemas causados

pelos vrus recombinantes. Em uma dessas

abordagens, o transgene, na forma de DNA

livre, aplicado diretamente no paciente.

Essas vacinas de DNA so compostas pela

clonagem do gene de um antgeno prove-

niente de um patgeno, em um plasmdeo

bacteriano. Isso possibilita obter esse

plasmdeo em grande quantidade a partir

do cultivo de bactrias e purific-lo (DNA

apenas). Ao ser injetado num tecido, a parte

eucaritica desse plasmdeo expressa a pro-

tena antignica e gera uma resposta imune,

de forma similar a uma vacina normal com-

posta por antgenos proticos. No caso das

vacinas de DNA, no entanto, descobriu-se

que algumas delas, alm de despertar uma

resposta imune que protege o indivduo

contra uma infeco futura (preveno),

podem tambm atenuar a sintomatologia

de uma infeco em andamento, atuando

como uma vacina teraputica. Um exemplo

a ao que uma vacina de DNA, composta

por um antgeno da bactria que causa a

tuberculose, tem ao combater a infeco

ativa em camundongos. Como se trata da

transferncia de um gene novo para um

tecido causando benefcio teraputico,

mais uma estratgia de terapia gnica que

est prestes a ser testada em seres humanos,

e com grande possibilidade de sucesso.

Os lipossomos catinicos constituem

uma categoria parte em termos de m-

todos de transferncia gnica, sendo at

chamados de vetores no-virais. Estes

so compostos por lipdeos com cabea

polar positiva e formam complexos com o

DNA neutralizando a sua carga negativa,

o que permite seu transporte atravs da

membrana citoplasmtica. Complexos de

lipossomos e plasmdeos expressando ge-

nes que medeiam a resposta imune celular

foram injetados diretamente em clulastumorais de melanomas. Como resultado,

observou-se inibio do crescimento do

tumor e remisso parcial em parte dos

pacientes. A tendncia de um aperfeio-

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amento cada vez maior da eficincia dessa

metodologia.

De uma forma genrica, as etapas envol-

vidas em um experimento de terapia gnica

so: o isolamento do gene, a construo

de um vetor, a transferncia para clulas

no tecido-alvo, e a produo da protena

codificada e expressa pelo gene teraputico

nessas clulas. A transferncia do gene para

clulas est mostrada na Figura 2.

Para introduo de genes em organismos

atravs de terapia gnica, duas estratgias

bsicas podem ser utilizadas: in vivo e

ex vivo(Figura 3). Na estratgia in vivo,

vetores eficientes (como os adenovrus)

podem levar o transgene diretamente ao

rgo-alvo adequado (como o fgado) por

aplicao direta no organismo (como a

injeo endovenosa), levando eficiente

expresso do transgene. A estratgia ex vivo

baseia-se na modificao de clulas (como

pela infeco por um vetor retroviral) de um

tecido-alvo (como os linfcitos), retiradas

de um paciente e cultivadas in vitro. Essas

clulas selecionadas, em geral atravs de

uma marca de resistncia a antibiticos,

que so expandidas e reintroduzidas no

paciente, iro expressar o gene exgeno

desejado. A possibilidade de realizar pro-

tocolos ex vivotem assumido perspectivas

novas na associao de protocolos de terapia

gnica e uso de terapia celular, atravs da

modificao gentica de clulas-tronco,

que apresentam diferenciao em vrios

tecidos potenciais.

APLICAES DA TERAPIA GNICA

Como discutido anteriormente, os pa-

cientes portadores de doenas genticas

so vistos como potenciais beneficirios

da terapia gnica, pois a introduo de

um gene normal poderia reverter o quadro

clnico. Um exemplo fcil de entender a

hemofilia, em que os indivduos tm umamutao em um dos genes responsveis

pela sntese de um dos fatores de coagula-

o. Caso esse fator seja reintroduzido no

sangue, o tempo de coagulao volta ao

FIGURA 3

Estratgias de terapia gnica in vivoe ex vivo

FIGURA 2

Etapas envolvidas em um experimento de terapia

gnica, exemplificado com um vetor viral

1. Isolamentodo gene

2. Construodo vetor

3. Transduo

4. Liberao daprotena teraputica

Clula-alvo

mRNA

Protena

Ex vivo:1. coleta e cultivo in vitrodas clulas do paciente;

2. transduo com vetor carregando o gene teraputico;3. seleo e expanso das clulas com gene teraputico;4. reintroduo das clulas modificadas no paciente.

In vivo:1. formulao apropriada do vetor que carrega o gene teraputico;2. injeo direta do vetor no tecido-alvo do paciente.

12

3

4

1

2

Ex vivo In vivo

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normal, evitando hemorragias que podem

ser fatais. Os genes que codificam para os

fatores VIII e IX (hemofilias A e B) foram

clonados em diferentes vetores. Para que

haja o benefcio teraputico necessrio

que o gene seja expresso nas clulas de

um tecido do indivduo que possibilite

a liberao do fator de coagulao no

sangue. Nesse caso, as clulas do fgado

mostraram-se apropriadas, pois esse rgo

intensamente irrigado.

Doenas genticas adquiridas durante a

vida, como o cncer, doenas do corao

e infeces virais (Aids, por exemplo),

no entanto, tambm so alvos para pro-

tocolos de terapia gnica. A idia nesses

casos basicamente introduzir genes que

possam interferir no metabolismo da clula

cancerosa, bloquear a replicao viral ou

simplesmente estimular o sistema de defesa

imunolgico, propiciando um benefcio

teraputico ao paciente. Esses protocolos

de terapia gnica para doenas genticas

adquiridas tm sido muito estudados dada

a clara relevncia que sucessos podem ter

em sade humana.

Mais de 1.300 protocolos clnicos

aplicados diretamente em seres humanos

(apenas em 2006, foram iniciados 97 novos

protocolos), envolvendo terapia gnica, es-

to sendo aplicados no mundo atualmente,

e podemos utilizar esse nmero como um

parmetro do avano de cada estratgia

desse tipo de terapia. A revista cientfica The

Journal of Gene Medicinemantm uma re-

lao atualizada dos protocolos clnicos em

humanos para consulta no site http://www.

wiley.co.uk/genetherapy/clinical/, sendo a

maior parte (61,2%) desses protocolos ainda

correspondente a testes de fase I (objeti-

vando apenas verificao de segurana do

tratamento em poucos pacientes), enquanto

apenas 32 protocolos esto em fase III, mas

com chances reais de serem utilizados em

sade humana.

Esses dados, quando organizados por

tipo de doena (Figura 4), indicam que

atualmente temos uma predominncia de

protocolos clnicos voltados a tratamento

de cncer, com cerca de dois teros de to-

dos os testes (66,5%), seguido das doenas

cardiovasculares, doenas monognicas

e doenas infecciosas. Ao contrrio das

doenas monognicas recessivas como a

hemofilia, que requerem apenas a expres-

so do gene funcional para a correo do

estado patolgico, no cncer o objetivo

a eliminao do tecido tumoral. O gene

teraputico, nesse caso, tem um carter

diferente. Ele deve levar eliminao das

clulas tumorais, basicamente por duas vias.

Em uma dessas vias o gene txico (ou

gera produto txico) apenas para o tumor,

e, em outra via, o gene busca despertar a

resposta imune contra o tumor eliminan-

do-o. Aqui temos as maiores possibilidades

de aplicao da terapia gnica na clnica

em curto prazo. Um bom exemplo o gene

supressor de tumores p53, que, transportado

por vetores adenovirais, mostra-se efetivo,

isoladamente ou em combinao com outros

tratamentos como a radioterapia, para tratar

diferentes tumores.

As doenas cardiovasculares, como

doenas cardacas isqumicas, isquemia

de membros, neuropatia isqumica ou

diabtica, podem ser tratadas pelo estmulo

neovascularizao, que leva normali-

zao da circulao sangunea local. Uma

estratgia de terapia gnica em especial,em que o gene do fator de crescimento de

endotlio vascular aplicado localmente,

teve efeitos clnicos positivos. Da o grande

nmero de protocolos em andamento, cada

FIGURA 4

Distribuio da aplicao de protocolos clnicos

por tipo de doena

Cncer Doenasmonognicas

Doenasinfecciosas

Doenascardiovasculares

Outras doenasGenesmarcadores

Pessoas sadias

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vez mais aperfeioados, e uma expectativa

de aplicao mais ampla tambm em futuro

prximo.

As doenas infecciosas, dependendo do

agente patognico, podem ser vistas como

doenas genticas adquiridas, conceito mais

fcil de ser entendido quando se trata de

infeces virais. Esses microorganismos

desenvolveram a habilidade de inserir seus

genomas no interior de clulas do organismo

hospedeiro, e nelas multiplicarem-se. Nesse

processo ocorrem patologias devido des-

truio dos tecidos e reao do organismo.

O desenvolvimento de genes anti-HIV,

por exemplo, possibilitou o desenho de es-

tratgias promissoras de terapia gnica para

tratar a Aids, sendo contra esse vrus o maior

nmero de protocolos clnicos para doenas

infecciosas em andamento. A expectativa

de que em breve haja a possibilidade de

inserir genes anti-HIV em clulas-tronco

da medula ssea in vivo. Essas clulas do

origem s clulas do sangue, e j foram

obtidos dados de que linfcitos originrios

de clulas-tronco com genes anti-HIV tor-

nam-se resistentes multiplicao do HIV,

trazendo uma perspectiva promissora para

pacientes com Aids.

Na Figura 5, apresentada a distri-

buio de tipos de vetores que tm sido

empregados em protocolos clnicos. Como

pode ser observado, os vetores derivados

de adenovrus e retrovrus continuam como

os principais veculos para ensaios em seres

humanos, perfazendo quase metade de todos

os testes. Outros vrus bastante empregados

so os derivados de vrus adenoassociados

(AAV), vrus no-patognicos, que, apesar

de muito limitados no espao disponvel

para o transgene, permitem a sua expresso

durante bastante tempo, no induzindo res-

posta imunolgica, e os derivados de vrus

da famlia poxviridae (como o vaccinia,

empregado em seres humanos durante mais

de dois sculos em processos de imunizao

contra a varola).

Vetores no-virais tambm esto setornando populares, atravs de uso direto

de DNA plasmidial livre ou em lipossomos.

Um destaque o uso de transferncia di-

reta de molculas de RNA em pouco mais

de 1% dos ensaios clnicos (1,3%, Figura

5). Esse valor ainda bastante pequeno,

mas h expectativas de aumento signifi-

cativo nos prximos anos medida que

se apresentarem novas propostas com o

emprego de RNAi. De fato, o processo

celular de interferncia de RNA, ou RNAi,

tem provocado uma verdadeira corrida de

empresas farmacuticas para estudar suas

propriedades farmacolgicas. Esse fato foi

impulsionado pela facilidade de fabricao

dessas molculas, aliado s possibilidades

de uso in vivo, e discutido em detalhes

a seguir.

RNAi: A NOVA FACE DA TERAPIA

GNICA

O fenmeno de silenciamento gnico a

partir de molculas de RNA dupla-fita teve

seu mecanismo revelado em 1998, atravs

de experimentos com um verme nematide

(Caenorhabditis elegans). Poucos anos mais

tarde (2001) foi comprovada sua existncia

tambm em clulas de mamferos, o que

abriu enormes perspectivas tecnolgicas.

Basicamente, pequenas molculas de RNA

so sintetizadas nas clulas, a partir do seu

genoma, de modo a produzir estruturas

similares a grampos, formando molculas

FIGURA 5Distribuio dos protocolos clnicos por tipo de vetor

Retrovrus

Vrusadenoassociado

Lipossomos

Poxvrus

Transfernciade RNA livre

Outrossistemas

Transfernciade DNA livreAdenovrus

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de RNA dupla-fita (ou duplexes de RNA,

tambm conhecidos como microRNA, ou

miRNA) que controlam a expresso de

genes celulares, seja a partir da degradao

do RNA mensageiro, seja a partir de um

bloqueio da sntese protica. Esse sistema

interfere na expresso gnica das clulas,e por isso recebeu o nome de RNA inter-

ferncia (RNAi).

A descoberta do mecanismo de RNAi

mudou completamente a forma como

entendemos o metabolismo de controle

gentico na clula humana, e tambm

propiciou uma ferramenta poderosa para

inibir genes especficos e assim determinar

sua funo na clula. Isso pode ser obtido

pela introduo de uma pequena molculaduplex de RNA (19 a 30 pares de base)

diretamente nas clulas em cultura, visando

ao silenciamento especfico do gene-alvo

a ser estudado. Essas molculas, conheci-

das como siRNA (small interfering RNA),

devem ser complementares seqncia

do gene-alvo e podem reduzir a expresso

deste em at 80%. Alternativamente, ve-

tores (em geral derivados de vrus, como

adenovrus, retrovrus ou vrus adenoas-sociados) podem tambm ser usados para

entregar, no interior das clulas, genes

que expressam uma molcula de RNA

palindrmica, que pode gerar uma duplex

de RNA na forma de grampo, conhecida

como shRNA (do ingls short hairpin

RNA). Como o siRNA, o shRNA tem como

objetivo o silenciamento do gene-alvo em

estudo, apresentando a possibilidade de um

silenciamento permanente nas clulas, nocaso de uso de retrovrus. O mecanismo de

silenciamento gnico por RNAi ilustrado

na Figura 6.

FIGURA 6

Esquema de silenciamento gnico atravs do mecanismo de RNAi, seja atravs

de vetores virais recombinantes, seja atravs de molculas duplexes de siRNA. DICER e

RISC so as principais enzimas envolvidas no processo que leva degradao do RNAm

Vrusrecombinante siRNA exgeno

siRNA

siRNA

siRNA e RISC

degradaodo mRNA

shRNA

transcrio

Genoma do vrus

DICER

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Apesar de a descoberta do mecanismo

de RNAi datar de pouco mais de 6 anos,

rapidamente se demonstrou que vetores

virais ou pequenas molculas de siRNA

podem atuar in vivo. Atualmente j foram

publicados mais de 100 artigos cientficos

relatando o funcionamento de RNAi dire-tamente com experimentos em animais,

alguns cujo gene-alvo do silenciamento

pode trazer benefcios teraputicos. Mais

recentemente, foram iniciados protocolos

clnicos em fase I (de segurana no uso em

humanos), e alguns j foram concludos,

sem que se verificasse nenhum efeito

txico. possvel que em mais alguns

poucos anos seja lanado o primeiro

produto farmacolgico formado apenaspor pequenas duplexes de RNA, que atue

silenciando a expresso de um gene. Essa

velocidade no desenvolvimento de um

produto baseado em siRNA espantosa

e deve-se a vrios fatores, incluindo os

extensos trabalhos anteriores para terapia

gnica e a alta eficincia dessas molculas

na modulao da expresso gnica.

Defato, vrios so os problemas de sa-

de que resultam de expresso aumentadade um ou mais genes, entre eles, tumores,

hipercolesterolemia e infeces virais.

E esses alvos tm sido extensivamente

investigados em trabalhos com clulas e

em animais. As estratgias variam pelo

uso direto de duplexes de RNA (siRNA)

ou vetores virais (shRNA), e pela forma

de aplicao nos animais, dependendo do

objetivo do trabalho. Molculas pequenas

e artificiais de siRNA esto se tornandocada vez mais populares pela versatilidade

e facilidade na sua produo e introduo

em clulas ou in vivo. Alm disso, so

consideradas como drogas pequenas e

assim podero ser usadas em pouco tempo

como produtos farmacuticos comuns,

podem ser introduzidas diretamente ou

atravs de lipossomos, sem as questes

de biossegurana normalmente levantadas

para vetores virais.Essas molculas esto sendo testadas

a partir de aplicaes que podem ser

intravenosas (sistmicas), mas tambm

podem ser direcionadas a tecidos espec-

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ficos. Aplicaes intra-oculares tm tido

bastante interesse, visando obteno de

terapia a doenas genticas associadas no

olho. Destacam-se estudos de inibio do

gene VEGF (vascular endothelial growth

factor), que pode promover vasculariza-

o prxima retina, o que est associado

doena de degenerao macular relacio-

nada idade (AMD, do ingls age-related

macular degeneration), causando perda

de viso em milhes de idosos no mundo

inteiro. Vrias empresas farmacuticas j

iniciaram protocolos clnicos de fase I com

humanos, sendo que pelo menos alguns

desses j esto recrutando pacientes para

iniciar os de fase II. Os resultados tm

sido animadores.

Resultados promissores, e surpreen-

dentes, tambm tm sido obtidos com a

aplicao de molculas de siRNA atravs

de inalao com administrao intranasal,

tendo como alvo doenas respiratrias.

Esses estudos tm se mostrado eficientes

na inibio de vrus que agridem o sistema

respiratrio, tais como o vrus respiratrio

sincicial (RSV, que j est sendo testado

em protocolo clnico em fase I) e mesmo

o vrus influenza H5N1, que provoca a

temida gripe aviria.

Outros alvos para testes com RNAi

incluem a reduo da apoliprotena B

(APOB) no fgado, o que em macacos

resultou em reduo de colesterol no

sangue. Vrios vrus mortais, como

hepatite B, hepatite C, rotavrus e HIV

(Aids), tambm tm sido alvos para

terapia com siRNA, tambm com re-

sultados promissores. Silenciamento

gnico atravs do mecanismo de RNAi

tambm tem sido proposto como poss-

vel terapia para vrios tipos diferentes

de tumores. Os alvos para combate ao

cncer envolvem uma grande quantidade

de vias: oncogenes, mediadores de ciclo

celular e apoptose, genes envolvidos

em degradao e estabilidade protica,

angiognese, molculas relacionadas invaso metasttica e adeso celular.

Alm disso, siRNA tambm pode auxiliar

no tratamento com radiao ionizante e

agentes quimioterpicos.

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ser teis de acordo com o objetivo terapu-

tico a ser alcanado, sendo que em alguns

casos a terapia gnica deve ser usada em

combinao com protocolos mais clssicos,

de modo a garantir, se no a cura, pelo

menos uma melhoria de qualidade de vida

de pacientes que hoje padecem de doenasgenticas herdadas ou adquiridas.

Os avanos recentes esto sem dvida

fazendo renascer as perspectivas que eram

esperadas anteriormente, mas os sucessos

devem ser observados com otimismo cau-

teloso, e ainda requerem intenso trabalho

de pesquisa. Temos convico de que o

empenho da comunidade acadmica, que

estamos testemunhando, trar mais apli-

caes bem-sucedidas da terapia gnica eque esta deve se firmar como importante

ferramenta na prtica clnica de um futuro

relativamente prximo. Esperamos que o

Brasil possa atuar como participante ativo

nessas pesquisas, pois tem condies de rea-

lizar contribuies significativas, e ampliar

seu impacto na medicina experimental.

BIBLIOGRAFIA

MIR, Luis (org.). Genmica: Cincias da Vida. So Paulo, Atheneu, 2004.

MORALES, Marcelo M. (ed.). Terapias Avanadas: Clulas-tronco, Terapia Gnica e Nanotecnologia Aplicada Sade. So

Paulo, Atheneu, 2007.

VENTURA, A. M. Terapia Gnica Utilizando Vetores Virais, in Luiz Rachid Trabulsi e Flvio Alterthum (eds.). Microbiologia.

4aed. So Paulo, Atheneu, pp. 573-9.

Site

http://www.wiley.co.uk/genetherapy/clinical/.

MUITAS ESPERANAS PARA A

TERAPIA GNICA

Durante as dcadas de 1980 e 1990,

artigos sobre terapia gnica anunciavamuma nova revoluo da medicina. Apesar

de alguns resultados positivos terem sido

alcanados, as dificuldades encontradas

e os problemas criados, sobretudo pela

introduo de vrus recombinantes em

organismos, infelizmente, no permitiram

que essa revoluo ocorresse como previsto.

Essa frustrao, no entanto, tem dado lugar

a um trabalho cada vez mais consistente,

com protocolos clnicos sendo realizadosde modo cada vez mais direcionado, e com

boas perspectivas. Alm disso, o conheci-

mento acumulado com os experimentos de

terapia gnica tem servido de base para no-

vas estratgias e uso de novas ferramentas,

como o caso de protocolos com RNAi.

provvel que as vrias estratgias possam

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