TCNICAS DE DNA RECOMBINANTEDesde a elucidao da complexa estrutura da molcula de DNA, em 1953, segundo modelo proposto por Francis Crick e James Watson, a Cincia nunca mais foi a mesma. Mais tarde, em 1958, Crick relaciona o DNA, o RNA e as protenas, salientando o fluxo unidirecional da informao, do DNA protena. Apesar destas descobertas e dos avanos obtidos, de acordo com Nascimento et al (2003) at o incio da dcada de 70 o material gentico dos organismos era o componente qumico mais difcil de ser analisado, quando ento comearam a surgir as primeiras tcnicas de isolamento e purificao de genes especficos, atravs do processo de clonagem gnica.Muitas dessas tcnicas eram provenientes da Microbiologia, Bioqumica, Imunologia e Gentica Microbiana e permitiram que a molcula de DNA ganhasse um novo enfoque. A partir da tornaram o DNA mais fcil de ser analisado, possibilitando o isolamento de regies especficas da molcula, obt-las em grandes quantidades e determinar a sua seqncia numa velocidade de milhares de nucleotdeos por dia (NASCIMENTO et al, 2003; PIERCE, 2004).Em conjunto, estas descobertas foram decisivas e de fundamental importncia para o surgimento de uma nova rea de pesquisa dentro do campo da Biologia: a Tecnologia do DNA Recombinante.Segundo Pierce (2004), a Tecnologia do DNA Recombinante, tambm chamada engenharia gentica ou simplesmente biotecnologia, um conjunto de tcnicas para localizar, isolar, alterar e estudar segmentos de DNA. O termo recombinante devido freqentemente tais tcnicas serem usadas para combinar o material gentico de fontes distintas, tornando-o bem sugestivo.Vantagens do DNA recombinanteCriar mutaes e observar alteraes no fentipo;Fornecer mais informaes sobre a estrutura e o funcionamento dos genes;Detectar a existncia de cdons no universais no DNA mitocondrial;Aperfeioamento da replicao, transcrio, traduo, processamento de DNA e regulao gnica;Criao de Drogas, hormnios e enzimas;Diagnosticar doenas genticas e infecciosas;TCNICAS DE RECOMBINAO GNICACORTE E UNIO DE FRAGMENTOS DE DNAMtodo feito por endonucleases de restrio, que vo reconhecer e fazer cortes bifilamentares na seqncia acar-fosfato das molculas de DNA, em seqncias especificas de nucleotdeos.Nas bactrias, as endonucleases de restrio reconhecem seqncias particulares do DNA viral e as cortam. Elas tambm modificam a seqncia de reconhecimento e adicionam grupos metila ao seu DNA.Existem trs tipos de enzimas de restrio em bactrias:Enzimas de restrio do tipo I: Cortam o DNA em stios aleatrios distante do sitio de reconhecimento.Enzimas de restrio do tipo II: Cortam o DNA dentro da seqncia de reconhecimentoEnzimas de restrio do tipo III: Cortam o DNA em stios prximos ao sitio de reconhecimento

TCNICAS DE RECOMBINAO GNICAVISUALIZAO DOS FRAGMENTOS DE DNAOcorre devido a uma tcnica bioqumica padro, chamada Eletroforese que separa molculas com base em seu tamanho e carga eltrica. Existem vrios tipos de eletroforese; mas para separar as molculas de DNA utilizada a eletroforese em gel. Essa tcnica empregada para determinar o nmero, tamanho ou isolar os fragmentos de DNA.LOCALIZAO DOS FRAGMENTOS DE DNA COM A TRANSFERNCIA DE SOUTHERN E SONDASTransferncia de Southern: uma tcnica usada para transferir os fragmentos unifilamentares desnaturados de um gel para um suporte slido. Sonda: uma molcula de DNA ou RNA com uma sequencia de bases complementares a uma sequencia no gene de interesse.CLONAGEM GNICA um mtodo utilizado para obteno de cpias idnticas, atravs do fragmento de uma bactria para que esta replique o DNA. So utilizados alguns tipos de vetores de clonagem: Vetores PlasmdiaisOs plasmdios so molculas circulares de DNA existentes em bactrias, que contem origens de replicao e so portanto capaz de se replicar independentemente do cromossomo bacteriano.Bacterifagos vetoresTransfere DNA para uma bactria e garante que o fragmento de DNA exgeno seja replicado aps entrar na clula. Cosmdeo vetoresSo pequenos plamideos que elevam stios cos de fago . Eles podem ser embalados em capas virais e transferidos para bactrias por infeco viral.Vetores de Expresso um mtodo, que, em replicao, sitio de restrio e marcadores selecionveis, contem as sequencias necessrias para que o gene clonado seja transcrito e traduzido em bactrias.Vetores de clonagem para EucariontesSo utilizados vetores especiais para introduzir genes em eucariontes. Eles incluem vetores de transporte que podem se reproduzir em dois hospedeiros diferentes: Leveduras e cromossomos artificiais de bactrias. Eles possuem fragmentos de DNA com milhares de pares de bases e o plasmideo Ti, que transfere genes para plantas.

REFERNCIAShttp://www.ebah.com.br/content/ABAAAA-v8AC/tecnologia-dna-recombinantehttp://www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/recombinante.phphttp://www.webartigos.com/artigos/a-tecnologia-do-dna-recombinante-e-suas-multiplas-aplicacoes/10701/#ixzz3VUBpkIzv