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Disponible en www.sciencedirect.com

Revista Mexicana de Biodiversidad

www.ib.unam.mx/revista/Revista Mexicana de Biodiversidad 87 (2016) 10–17

Taxonomía y sistemática

Primer registro de Agaricus bisporus (Basidiomycota, Agaricaceae)silvestre en Tlaxcala y Veracruz, México

First report of wild Agaricus bisporus (Basidiomycota, Agaricaceae)from Tlaxcala and Veracruz, Mexico

Gerardo Mata a,∗, Rosario Medel b, Philippe Callac c, Christophe Billette c

y Roberto Garibay-Orijel d

a Instituto de Ecología, A.C., Apartado postal 63, Xalapa, 91000, Veracruz, Méxicob Universidad Veracruzana, Instituto de Investigaciones Forestales, Apartado postal 551, Xalapa, Veracruz, 91000, México

c Institut National de la Recherche Agronomique, UR 1264 MycSA, Villenave d’Ornon, F-33882, Franciad Instituto de Biología, Universidad Nacional Autónoma de México, Apartado postal 70-153, México D.F., 04510, México

Recibido el 9 de diciembre de 2014; aceptado el 5 de noviembre de 2015Disponible en Internet el 2 de marzo de 2016

esumen

El hongo conocido popularmente como champinón, Agaricus bisporus, es la especie comestible más cultivada comercialmente en el mundo. pesar de su importancia y de que se ha incluido en listados de diferentes estados de México, su presencia de forma silvestre no se había

orroborado. El objetivo de este trabajo fue determinar si esta especie crece de manera silvestre en México. Se realizaron recolectas en losstados de Tlaxcala y Veracruz, y se aislaron 7 cepas a partir de ejemplares silvestres. Se obtuvieron basidiomas de dichas cepas cultivadasn un sustrato a base de composta. Los ejemplares silvestres que se depositaron en el Herbario XAL, y los obtenidos en cultivo, se estudiaronacro y micromorfológicamente. La cepa IE 623 se utilizó para obtener la secuencia de la región ITS del ADN ribosomal. Los ejemplares

evisados coinciden morfológicamente con A. bisporus y presentan en promedio 63.4% de basidios bispóricos. La secuencia de ADN corroboró laeterminación taxonómica, y de acuerdo con los análisis de similitud y filogenéticos se concluyó que la cepa proviene de un ejemplar silvestre yo de una cepa comercial cultivada. Las cepas de A. bisporus silvestres en México podrían aportar germoplasma para mejorar su cultivo comercial.erechos Reservados © 2016 Universidad Nacional Autónoma de México, Instituto de Biología. Este es un artículo de acceso abierto distribuidoajo los términos de la Licencia Creative Commons CC BY-NC-ND 4.0.

alabras clave: Champinón silvestre; Germoplasma nativo; Basidios bispóricos; Hongos comestibles

bstract

The fungus commonly known as white button mushroom, Agaricus bisporus, is the most commercially cultivated species among edible onesorldwide. In spite of its importance, its presence in wild stage had not been confirmed even when it has been included in lists of species fromifferent states of Mexico. The aim of this study was to determine if this species grows wild in Mexico. Collections were made in the states oflaxcala and Veracruz, where 7 strains were isolated from wild specimens. Basidiomes of these strains were grown in commercial compost-basedubstrate. Wild specimens, deposited at XAL Herbarium, and those obtained in culture were studied macro and micro morphologically. IE 623

train was used to obtain the DNA ITS ribosomal sequence. The revised specimens match morphologically with A. bisporus and have an average of3.4% of bisporic basidia. The DNA sequence confirmed the taxonomic identity and through similarity and phylogenetic analysis, it was concludedhat the strain derived from a wild specimen and not from a commercially cultivated strain. Native strains of A. bisporus from Mexico could provide

ico, Instituto de Biología. This is an open access item distributed under the

mportant germplasm to improve its commercial cultivation.ll Rights Reserved © 2016 Universidad Nacional Autónoma de Méxreative Commons CC License BY-NC-ND 4.0. eywords: Wild white button mushroom; Native germoplasm; Bisporic-basidia; Edi

∗ Autor para correspondencia.Correo electrónico: gerardo.mata@inecol.mx (G. Mata).La revisión por pares es responsabilidad de la Universidad Nacional Autónoma d

http://dx.doi.org/10.1016/j.rmb.2016.01.019870-3453/Derechos Reservados © 2016 Universidad Nacional Autónoma de Méxicos términos de la Licencia Creative Commons CC BY-NC-ND 4.0.

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e México.

o, Instituto de Biología. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo

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G. Mata et al. / Revista Mexican

ntroducción

Las especies del género Agaricus L. son actualmente muypreciadas, no solo por sus propiedades nutricionales, sino tam-ién por sus cualidades organolépticas y medicinales. El hongoonocido popularmente en México como champinón, Agaricusisporus (J.E. Lange) Imbach, es la especie más célebre delénero y también la de mayor producción en el mundo entreas especies cultivadas (Arrillaga, 2004). Su producción mun-ial se estimó en más de 4 millones de toneladas en el ano 2009Sonnenberg et al., 2011). Agaricus bisporus se diferencia deodas las especies del género por presentar 2 esterigmas en la

ayoría de sus basidios (Parra, 2008), aunque con frecuenciae pueden observar basidios mono, tri e incluso tetraspóricosCallac, Imbernon, Guinberteau, Desmerger y Theochari, 2003).

pesar de este carácter morfológico —2 esporas por basidio—,ue hace inconfundible a la especie, existen 2 variedades silves-res, además de A. bisporus var. bisporus, que han mostrado serrincipalmente tetraspóricas: A. bisporus var. burnettii Kerrigan

Callac con distribución en América del Norte y A. bisporusar. eurotetrasporus Callac y Guinb. presente en Europa (Callac,illette, Imbernon y Kerrigan, 1993; Callac et al., 2003).

En México A. bisporus se ha citado en diversos trabajosomo parte de inventarios en distintas entidades; sin embargo,n ninguno de ellos se ha proporcionado una descripción com-leta de la especie y en muy pocos se especificó el tipo deegetación donde crecía. Se registró en el Distrito Federal, sinrecisar el tipo de vegetación (Herrera y Guzmán, 1972) y deonas urbanas, suburbanas y agrícolas (Zarco, 1986); en JaliscoGuzmán-Dávalos, Nieves y Guzmán, 1983; Sánchez-Jácome yuzmán-Dávalos, 2011); en Morelos en jardines y zonas per-

urbadas (López, Mora, Montiel y Guzmán, 1985). Agaricusisporus var. albidus (J.E. Lange) Singer y A. bisporus var.isporus se conocen en Michoacán (Conabio, 2005). Además,lgunos trabajos han citado esta especie de cultivos comercialesn Baja California (Ayala y Guzmán, 1984), Veracruz (López-amírez, 2011). Guzmán (1977) citó A. bisporus var. albidus y. bisporus var. bisporus cultivados comercialmente sin preci-ar la localidad. Por otra parte, Martínez-Carrera et al. (2001)itaron la especie en Tlaxcala, en el volcán La Malinche; sinmbargo, dichos autores no mencionaron en qué herbario fueepositado el material estudiado y aislado, por lo que no seiene un registro certero. Los objetivos del presente trabajo fue-on: demostrar la presencia de esta especie de manera silvestren México, corroborar la determinación de los materiales a tra-és de la producción de basidiomas obtenidos a partir de lasepas aisladas y por medio de análisis filogenéticos, así comoescribir sus características morfológicas de valor taxonómicoajo condiciones experimentales de cultivo en compost utilizadoara la producción comercial.

ateriales y métodos

Se realizaron salidas de campo en los estados de Tlaxcala Veracruz para recolectar ejemplares frescos. Se tomaron losatos de localidad, sustrato y hábitat de cada sitio de recolecta.

cuar

Biodiversidad 87 (2016) 10–17 11

ara el estudio macroscópico de los materiales se registraron losatos en fresco de píleo y estípite —forma, color y tamano—,rreglo y color de las láminas, posición del anillo y el colorel que se mancha el contexto. Además, se realizaron reaccio-es macroquímicas, Schäffer y KOH 5%, de acuerdo con Parra2008). El estudio microscópico de los ejemplares se llevó aabo bajo las técnicas rutinarias en micología (Largent, Johnson

Watling, 1977), con un microscopio estereoscópico (Carleiss, Stemi DV4) y un microscopio compuesto (Carl Zeiss,rimo Star). Las fotografías se tomaron con una cámara digi-

al (Sony Cyber-shot). Para la determinación de la especie seonsultaron los trabajos de Arrillaga (2004); Cappelli (1984);errigan (1986) y Parra (2008). De algunos ejemplares recolec-

ados se aislaron cepas de manera vegetativa, de acuerdo cona metodología de Guzmán, Mata, Salmones, Soto-Velasco yuzmán-Dávalos (2013) en medio de cultivo de glucosa y agar

dicionado con extracto de compost o medio de cultivo de papaextrosa agar (PDA, Bioxon) (Mata y Savoie, 2007).

Para la obtención de esporomas se preparó inóculo de 4 cepas,e acuerdo con la metodología de Mata y Savoie (2007), utili-ando semillas de sorgo (Sorghum vulgare Pers.). Se prepararonuestras de 4 kg de compost comercial, a las que se les agregó

n 5% de inóculo, se mezcló uniformemente y se colocaron enolsas de plástico. Después de 14 días de incubación a 25 ◦Ce anadió una capa de 5 cm de tierra de cobertura para indu-ir la aparición de los esporomas, y las bolsas se colocaron enn cuarto a 18 ◦C con humedad relativa de 90% y un fotope-iodo de 12/12 h (Mata, Calderón-Fuentes y Savoie, 2012). Losjemplares se cosecharon en diferentes estadios de desarrollo.

Todos los ejemplares estudiados, incluyendo los ejemplaresrovenientes de cultivo, están depositados en la colección mico-ógica del Herbario XAL del Instituto de Ecología, A.C. En losjemplares de las cepas cultivadas se determinó el porcentajee basidios bispóricos en relación con los mono, tri y tetras-óricos, con un fragmento de una lámina madura colocado enn portaobjetos para su observación directa en el microscopioompuesto. Se determinó el número de esporas por basidio, enn total de 150 basidios por ejemplar, de acuerdo con la meto-ología de Imbernon, Callac, Gasqui, Kerrigan y Velcko (1996);errigan y Ross (1987) y Callac et al. (2003) y el número prome-io de esporas expresado como average spore number (ASN),e acuerdo con la fórmula establecida por Callac et al. (1996).

nálisis molecular

Las secuencias de la región ITS —espaciador internoranscrito— del ADN ribosomal, que comprende el ITS1, 5.8S

el ITS2, se obtuvieron de la cepa IE 623 aislada del ejem-lar Mata 641 (XAL). El ADN de la cepa se extrajo con elaquete XNAP (Sigma-Aldrich). Para esto se rasparon conna aguja de disección aproximadamente 1-2 mm2 de mice-io aéreo de la cepa cultivada en PDA. El micelio se colocón un tubo Eppendorf® con 20 �l de solución de extrac-

◦ ◦

ión y se calentó por 10 min a 65 C y 10 min a 95 C enn termociclador (Bio-Rad, modelo T100), posteriormente senadieron 20 �l de solución de dilución y se incubó a tempe-atura ambiente por 30 min (Garibay-Orijel, Morales-Maranón,

1 a de Biodiversidad 87 (2016) 10–17

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2 G. Mata et al. / Revista Mexican

omínguez-Gutiérrez y Flores-García, 2013). La región ITS semplificó con los cebadores ITS1F e ITS4 (Gardes y Bruns,993) bajo las condiciones descritas por Izzo, Agbowo y Bruns2005). Los productos de PCR fueron revisados por medio delectroforesis en geles de agarosa al 1% en amortiguador TE.os amplicones de buena calidad se limpiaron usando una mez-la de 1 �l de ExoSAP-IT (USB-Affimetrix) con 1 �l de aguaor 3.5 �l de producto de PCR. La reacción de secuenciación seealizó con Big Dye Terminator 3.1 (Applied Biosystems) segúnas instrucciones del fabricante. Se obtuvieron las secuenciase ambas direcciones en un secuenciador ABI 3100 (Appliediosystems) en el Laboratorio de Secuenciación Genómica de

a Biodiversidad y la Salud del Instituto de Biología, UNAM.as secuencias se editaron y ensamblaron en Geneious Pro R7

Biomatters).Se construyó una matriz de secuencias con especies de Agari-

us sección Bivelares utilizadas en estudios filogenéticos previosChallen, Kerrigan y Callac, 2003; Geml, Geiser y Royse, 2004)

también se incluyeron aquellas secuencias de GenBank queesultaron similares a la secuencia de la región ITS de la cepaE 623 mediante una búsqueda en Blast. Las secuencias fue-on alineadas en Muscle (Edgar, 2004) y la matriz de datose analizó mediante los métodos Neighbor-Joining, máximaerosimilitud e inferencia bayesiana en Geneious Pro R7 (Bio-atters). Agaricus bitorquis (AF432899) se usó como grupo

xterno (Geml et al., 2004). Los árboles de Neighbor-Joiningueron construidos con el modelo de distancia genética Tamura-ei remuestreando con bootstrap a través de 1,000 réplicas.ara los análisis de máxima verosimilitud se utilizó el programahyML (Guindon et al., 2010) buscando la topología de losrboles con SPRs y HKY85 como modelo de sustitución; se uti-izó bootstrap con 1,000 réplicas para probar el soporte de lasamas. También se realizaron análisis Bayesianos en MrBayesHuelsenbeck y Ronquist, 2001) usando el radio de variaciónamma, el modelo de sustitución GTR con 4 cadenas de Montearlo sobre 1,100,000 generaciones submuestreando cada00 generaciones y un valor de temperatura de 0.2. Los mejoresodelos de sustitución se eligieron con MrModelTest versión

(Nylander, 2004). Se almacenaron los valores de largo de lasamas y se calcularon las probabilidades posteriores. Tambiéne comparó la secuencia de la cepa IE 623 con 63 secuenciase la misma especie disponibles en GenBank. Las secuenciase alinearon y se determinaron las posiciones que presentaroneteroalelismos en la región ITS.

escripción

nálisis morfológico

Se revisaron 10 ejemplares silvestres, de los cuales se aislaronn total de 7 cepas que se depositaron en el Cepario de Hongosel Instituto de Ecología con las claves: IE 623, IE 673, IE 674, IE08, IE 746, IE 790 e IE 802. Se revisaron también los ejemplares

btenidos de las muestras sembradas en compost de las cepas IE23, IE 746 e IE 802. Todos los materiales revisados coincidenon la descripción morfológica de A. bisporus var. bisporus quee presenta a continuación.

GEIM

igura 1. Agaricus bisporus. A. Basidiosporas. B. Basidios bispóricos. C. Quei-ocistidios.

Agaricus bisporus var. bisporus (J.E. Lange) Imbach, Mitt.aturf. Ges. Luzern 15: 15, 1946 (figs. 1 y 2).

Píleo de 50-90 mm de diámetro, globoso en etapas juveni-es, convexo a plano-convexo y finalmente plano, blanquecinon etapas juveniles, beige, ocráceo a finalmente de color cafélaro, con el centro café oscuro, con fibrillas separadas hacial margen de color café. Láminas libres, muy juntas, anchas,on lamélulas intercaladas, blanquecinas cuando son jóvenes,ue cambian a color rosado y finalmente a café oscuro, casiegras, con tonos vináceos al madurar; arista blanquecina y lige-amente fimbriada. Contexto grueso, blanquecino que se manchae color rojizo-vináceo al maltrato. Estípite de 50-55 × 12-7 mm de cilíndrico a claviforme, a veces ligeramente bulboson la base, hueco, liso, blanquecino, la parte interna se man-ha de color rojizo-vináceo al maltrato, con frecuencia presentaordones miceliales, los cuales pueden tener aspecto de rizo-orfos cortos. Anillo ínfero o intermedio —en pocas ocasiones

úpero—, membranoso, grueso, blanco. Basidiosporas de (6-)-8 (-9) × 5.5-7 (-9) �m, ampliamente elípticas, de color café,on pared gruesa de 0.6-0.8 �m de grosor. Basidios de 18-6 (-30) × 6-8 �m, clavados, la mayoría bispóricos —pocosrispóricos o tetraspóricos—, hialinos, de pared delgada. Queilo-istidios de 15-35 (-45) × 10-12 (-14) �m, clavados, hialinos, deared delgada, abundantes. Reacciones macroquímicas: Schäf-er y KOH negativas. Basidioma con olor débil, fúngico,gradable; sabor dulce típicamente fúngico, agradable.

esumen taxonómicoHábitat. Terrícola, gregario, bajo árboles del género Cupres-

us en terrenos con cultivo de papa o en pastizales.Material estudiado. Tlaxcala. Municipio de Cuapiaxtla, ran-

ho El Tejocote a 2 km de Cuapiaxtla, julio 19, 2001, Mata 641XAL), cepa aislada IE 623; octubre 3, 2002, Gándara 371-A,76 (XAL); octubre 3, 2002, Ramírez-Guillén 174 (XAL), cepaislada IE 673, 176 (XAL), cepa aislada IE 674, 178 (XAL);ctubre 10, 2003, Mata 674 (XAL), cepa aislada IE 708; sep-iembre 18, 2006, Mata 719 (XAL), cepa aislada IE 746; agosto9, 2007, Mata 755 (XAL), cepa aislada IE 790. Veracruz.unicipio de Coatepec, Unidad Deportiva Lic. Roberto Amorósuiot, mayo 30, 2008, Mata 785 (XAL), cepa aislada IE 802.

jemplares obtenidos en cultivo: Planta de cultivo de hongos del

nstituto de Ecología, A.C., Xalapa, Veracruz, junio 28, 2002,ata 647 (de la cepa IE 623, XAL); marzo 20, 2002, Mata 724

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Figura 2. Agaricus bisporus. A y B. Ejemplares silvestre

de la cepa IE 746, XAL); junio 14, 2011, Mata 869 (de la cepaE 802, XAL).

La tabla 1 muestra la proporción de basidios bispóricos res-ecto a los otros tipos de basidios, encontrada en los ejemplaresnalizados. Los esporomas de las cepas estudiadas mostraronariaciones entre 44% y 82.5% (promedio = 64.3%) de basidiosispóricos típicos de la especie, de 18.5% a 56% (prome-io = 35.5%) de trispóricos y de 0.5-2.5% (promedio = 0.8%)e tetraspóricos. Se obtuvo un ASN promedio de 2.65.

nálisis molecular

Se obtuvieron 4 secuencias de ADN en ambos sentidos dea cepa IE 623 de diferentes resiembras y medios de cultivoon entre 620 y 710 pares de bases. Entre ellas existió unaimilitud nucleotídica de 99.99% y su secuencia consenso de12 pares de bases quedó registrada en GenBank bajo el númeroe acceso KM677957. Todos los análisis dieron resultadosimilares y se recuperó para Agaricus sección Bivelares, una

structura similar a la registrada por Challen et al. (2003). Enodos los casos, el clado de A. bisporus tuvo un soporte alto

bootstrap de Neighbor Joining 99.4%, bootstrap de máximaerosimilitud 94.6%, probabilidades posteriores bayesianas

6(oe

ta 641). C y D. Ejemplares cultivados de la cepa IE 623.

—. En los 3 análisis la cepa IE 623 se ubicó dentro del cladoe A. bisporus. La figura 3 muestra los resultados del análisis deáxima verosimilitud. Si bien dentro de A. bisporus hay poca

structura y los clados que se forman tienen poco soporte, laecuencia de la cepa IE 623 tiene una similitud genética mayor

cepas silvestres que a variedades cultivadas.Se encontraron 4 posiciones —39, 510, 516, 552—, en las

ue se presentaron heteroalelismos en A. bisporus var. bisporus.a cepa IE 623 mostró C, Y, C y C en estas posiciones, respecti-amente, y solo una de las secuencias de GenBank (JF223230)iene la misma secuencia, pero esta última difiere, además, porna A en la posición 522. La cepa IE 623 tiene, por lo tanto, unaecuencia única. En las 4 posiciones de importancia heteroalé-ica el genotipo «CYCC» de A. bisporus var. bisporus indica queno de sus núcleos tiene un genotipo «CCCC» que aparece conayor frecuencia (8/58; 13% de las secuencias), mientras que

l otro núcleo que es «CTCC» es menos frecuente (2/58; 3%)tabla 2).

En la posición heteroalélica 510 de la región ITS las3 secuencias de GenBank son C (18), T (41), o C/T = Y (4)

tabla 3). Sin embargo, estas 4 últimas secuencias difieren entras posiciones de la cepa IE 623, lo que corrobora que noxiste ninguna secuencia idéntica a la secuencia de dicha cepa.

14 G. Mata et al. / Revista Mexicana de Biodiversidad 87 (2016) 10–17

Tabla 1Variación en el número de esporas por basidio (%) y en el número promedio de esporas en diferentes cepas mexicanas silvestres de Agaricus bisporus.

Ejemplar del que se obtuvo la cepa Colector Cepa Esporas por basidio ASN

1 2 3 4

Mata 641 PC-GM IE 623 0 47.5 50.0 2.5 2.53Ramírez Guillén 174 GM IE 673 0 44.0 56.0 0 2.44Ramírez Guillén 176 GM IE 674 0 81.0 18.5 0.5 2.82Mata 674 GM IE 708 0 82.5 17.5 0 2.83Promedio 0 63.4 35.5 0.8 2.65

ASN: número promedio de esporas por basidio (Average Spore Number); GM: Gerardo Mata; PC-GM: Philippe Callac-Gerardo Mata.

AF432899, Agaricus bitorquisKF702398, Agaricus sp. ql-2EU363037, Agaricus sp. CA103AF432890, Agaricus bridghamiAF432891, Agaricus bridghamiAF432897, Agaricus devoniensisEU363036, Agaricus devoniensisAF432893, Agaricus devoniensisAF432892, Agaricus devoniensisAF432896, Agaricus devoniensisAF432889, Agaricus subperonatusEU257801, Agaricus agrinferusAF432888, Agaricus subfloccosusEU131639, Agaricus subfloccosusAF432887, Agaricus subfloccosusAF465400, Agaricus bisporus var. eurotetrasporus

AF465399, Agaricus bisporus var. eurotetrasporus

DQ404388, Agaricus bisporusAF432886, Agaricus bisporus

AF465404, Agaricus bisporus

AF187270, Agaricus bisporusFJ223224, Agaricus bisporusFJ223229, Agaricus bisporusFJ223230, Agaricus bisporusC623, Agaricus bisporusJN807464, Agaricus bisporus

EF460354, Agaricus bisporus

AF432882, Agaricus bisporusAF188033, Agaricus bisporusAY484694, Agaricus bisporusAJ884645, Agaricus bisporusFJ223226, Agaricus bisporusAF188034, Agaricus bisporusAF432884, Agaricus bisporusHM149321, Agaricus bisporusHM149314, Agaricus bisporusHM149319, Agaricus bisporusHM149315, Agaricus bisporusHM149316, Agaricus bisporusKF986267, Agaricus bisporusAJ884644, Agaricus bisporusAF432883, Agaricus bisporusHM149322, Agaricus bisporusHM149320, Agaricus bisporusHM149318, Agaricus bisporusHM149317, Agaricus bisporus

AF188035, Agaricus bisporusAY484693, Agaricus bisporusAM930981, Agaricus bisporusJN22411, Agaricus bisporus

0,02

94,6

98,8

95,5

99,4

84,8

90,8

AF465402, Agaricus bisporus var. bisporus

GU327643, Agaricus bisporus var. burnettii

AF465401, Agaricus bisporus var. burnettii

EF460355, Agaricus bisporus

FJ223227, Agaricus bisporus

FJ755218, Agaricus bisporus

FJ869182, Agaricus bisporusHM561976, Agaricus bisporus

HM561978, Agaricus bisporus

JN234843, Agaricus bisporusJN234841, Agaricus bisporus

Figura 3. Árbol obtenido de un análisis de máxima verosimilitud de Agaricus sección Bivelares basado en secuencias de la región ITS del ADN ribosomal. Semuestran solo los valores de soporte de las ramas con un bootstrap mayor a 80.0%; en azul se indica el clado de A. bisporus y en azul y negritas la secuencia de lacepa IE 623.

G. Mata et al. / Revista Mexicana de Biodiversidad 87 (2016) 10–17 15

Tabla 2Número de casos que comparten el orden en las 4 posiciones heteroalélicas (39, 510, 516, 552) de los genotipos encontrados en las 63 secuencias de Agaricusbisporus de las variedades bisporus, burnettii y eurotetrasporus, obtenidas de GenBank.

Posición heteroalélica Agaricus bisporus

39, 510, 516, 552 var. bisporus var. burnettii var. eurotetrasporus

CTCT 35CTCC 2 2CCCC 8 3CCAC 7TTCT 2YYCY 1CYMY 1CYCY 1CYCC 1

Tabla 3Frecuencia heteroalélica en las 4 posiciones relevantes de los genotipos encontrados en las 63 secuencias de Agaricus bisporus obtenidas de GenBank.

Posición Secuencia Frecuencia

39 TCTTYGGAG Y:1 C:60 T:2510 TGGCYCCTT Y:4 T:41 C:18516 CTTAMTTGG M:1 C:55 A:7552 GGAAYCGTC Y:3 T:37 C:23

Las letras en negrita indican los nucleótidos con variación heteroalélica.

Tabla 4Secuencias idénticas a los 2 tipos de núcleo de la cepa heterocariótica IE 623, encontrados en 63 secuencias depositadas en GenBank.

N.o GB Id Ref Material Región Tipo

EF460354 A Geml et al., 2008 Cepa GAL18055 Alaska, EE. UU. SilvestreJN807464 A Cepa Tarimg01 (¿China?)AF432886 B Challen et al., 2003 Cepa RWK1885 Copenhague, Dinamarca SilvestreFJ755218 B Cepa CZ450-1 (¿China?)AF465403 B Callac et al., 2003 Cepa Bs 261-150 Francia (protoplasto de Bs261) SilvestreFJ223225 B Cepa AGRHS202 (¿China?)F pa AS

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lcyt(ycce1sPmmdhrb

J223228 B Ce

d: identidad con el tipo de núcleo; N.o GB: número de acceso de GenBank.

or lo tanto, entre los 2 núcleos de la cepa heterocariótica IE 623n núcleo que se podría denominar A contiene el nucleótido C,ientras que el otro núcleo llamado B contiene el nucleótido. Se compararon las secuencias de estos 2 núcleos, A y B,on las 18 y 41 secuencias de GenBank, respectivamente conte-iendo C o T en la posición 510. Entre ellas se encontró que 2ecuencias eran idénticas al núcleo A y 5 al núcleo B (tabla 4).ntre las 2 secuencias de tipo A se observó que una corresponde

una cepa silvestre proveniente de Alaska (EF460354; Geml,aursen y Taylor, 2008); mientras que entre las 5 de tipo B,na es un homocarión aislado por el método de protoplastos aartir de una cepa silvestre procedente de Francia (AF465403;allac et al., 2003) y otra es una cepa silvestre de Dinamarca

AF432886; Challen et al., 2003); de las 4 secuencias restantese GenBank no existe información en la base o publicada sobreu procedencia.

iscusión

El material estudiado coincide con Agaricus bisporus var.isporus (Arrillaga, 2004; Cappelli, 1984; Parra, 2008), ya que

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2796 (¿China?)

a presencia de basidios bispóricos es un carácter distintivo, asíomo la medida de las basidiosporas mayores a 6 �m de longitud

queilocistidios no mayores en promedio a 35 �m de longi-ud (Callac et al., 1993; Cappelli, 1984; Parra, 2008). Kerrigan1986) mencionó que las reacciones macroquímicas de Schäffer

KOH son negativas en A. bisporus, y que su característica prin-ipal es la presencia predominante de basidios bispóricos. Se halasificado en la sección Bitorques (Kuhn. y Rom. ex Hein.) Bont Cappelli grupo Bisporus Cappelli (Arrillaga, 2004; Cappelli,984) y en la sección Bivelares (Kauffman) L.A. Parra sub-ección Hortenses (Kauffman) L.A. Parra (Kerrigan, Callac, &arra, 2008; Parra, 2008). Arrillaga (2004) mencionó medidasás grandes del diámetro del píleo, hasta 100 mm con escamasarrón pardusco, que no se observaron en los ejemplares estu-

iados. La proporción de basidios bispóricos y tetraspóricos sea documentado en otros trabajos para A. bisporus var. bispo-us; Martínez-Carrera et al. (2001) registraron 67.5% de basidiosispóricos y 27.5% de tetraspóricos, mientras que Callac et al.

2003) encontraron 80% y 1.27% de bi y tetraspóricos, res-ectivamente. Si bien la mayoría de las cepas han mostradoltos porcentajes de basidios bispóricos, en algunos casos este

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orcentaje ha variado de 17% a 55% en cepas silvestres (Callact al., 1993, 2003). De acuerdo con los resultados obtenidosor Kerrigan, Billette, Callac y Velcko (1996) y Callac et al.2003) tanto A. bisporus var. burnettii Kerrigan y Callac comoa var. eurotetrasporus Callac y Ginb. poseen un porcentaje altoe basidios tetraspóricos, no así la var. bisporus, que presentaás bispóricos que tetraspóricos. En este trabajo se obtuvieron

esultados similares a los registradas por Kerrigan et al. (1996) Callac et al. (2003), aunque con menor porcentaje de basi-ios tetraspóricos. El ASN de los ejemplares obtenidos a partire cepas cultivadas (promedio = 2.65) se corresponde bien conos ejemplares considerados como bispóricos por Callac et al.1996) (Callac, Theochari y Kerrigan, 2002), además, la cepaE 623 presentó un ASN de 2.53 (tabla 1). El número de espo-as por basidio es una característica determinada principalmenteor un locus genético simple llamado BSN, el cual está ligadol locus de apareamiento MAT y a otros loci del cromosoma IImbernon et al., 1996). Agaricus y otros géneros cercanos de laribu Agariceae Pat. son considerados ancestralmente tetraspó-icos, es decir, que producen basidios predominantemente con

esterigmas (Kerrigan y Ross, 1987), lo que podría signifi-ar que el carácter bispórico de esta especie es resultado de unroceso de una adaptación evolutiva (Callac et al., 2003).

Las cepas comerciales provienen de un número limitado deenotipos tradicionales (Royse y May, 1982), y la mayoría sondénticas o muy similares a los primeros híbridos Horst U1® yorst U3® obtenidos en la década de 1980 al cruzar las varie-ades white y off white (Fritsche, 1983). En contraste con laniformidad encontrada entre las cepas cultivadas, las silves-res muestran una diversidad genética mayor (Foulogne-Oriol,pataro y Savoie, 2009). La secuencia de la región ITS del ADNibosomal de la cepa IE 623 apoyó la determinación taxonómicael ejemplar Mata 641 —del cual se obtuvo la cepa—. Los 3 aná-isis ubicaron esta secuencia dentro del clado de A. bisporus conlto nivel de soporte. El análisis de similitud nucleotídica (tabla) demuestra que la cepa IE 623 es genéticamente muy simi-ar a cepas silvestres de diferentes países del Hemisferio Norte,omo Estados Unidos de América, Dinamarca y Francia —de losjemplares recolectados en China no se tiene certeza de que seanilvestres—. De hecho, las secuencias de las cepas comercialesás cercanas (HM149321, HM149322, FJ869182) son consi-

erablemente diferentes (0.5%). Esto demuestra que al menosa cepa IE 623 es silvestre y se desarrolla de manera naturaln el estado de Tlaxcala, y que no se trata de una cepa comer-ial cultivada que provenga de los cultivos de champinones. Laecuencia de la cepa IE 623 es típica de A. bisporus; sin embargo,epresenta una disposición única de los alelos conocidos en estaspecie hasta ahora.

De acuerdo con Parra (2008) A. bisporus crece en Europa,rincipalmente en lugares donde se practica la ganadería, conrecuencia bajo árboles de la familia Cupressaceae, raras vecesajo otros árboles y en dunas; los materiales recolectadosn Tlaxcala también se encontraron bajo árboles del género

upressus, no así los materiales de Veracruz. Si bien el trabajoe Martínez-Carrera et al. (2001) citó esta especie de Tlaxcala,o mencionó en qué herbario se depositó el material estudiado,or lo que este trabajo corrobora la presencia de A. bisporus en

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laxcala y lo registra por primera vez de Veracruz, en ambosasos creciendo de manera silvestre. Aunque el número dejemplares recolectado fue bajo, los resultados sugieren quea especie podría tener una distribución amplia en México. Ascala mundial A. bisporus se ha registrado de forma silvestren América del Norte (Estados Unidos de América y Canadá),mérica del Sur (Argentina), Europa (Dinamarca, Espana,rancia, Grecia) y Asia (Israel, China) (Albertó, 1996; Callact al., 2002; Challen et al., 2003; Geml et al., 2008; Niveiro ylbertó, 2013; Parra, 2008; Wang et al., 2008). El germoplasma

ncontrado en México puede ser una fuente importante de carac-erísticas genéticas a partir de las cuales se podría realizar unrograma de trabajo encaminado a la obtención de cepas mejo-adas capaces de desarrollarse bajo las condiciones ambientalesocales. La capacidad de resistencia a plagas y enfermedades,l crecimiento adecuado en materiales regionales, así como laabilidad para fructificar a temperaturas superiores a 25 ◦C sonlgunas de las cualidades deseables en las cepas de champinónLargeteau, Callac, Navarro-Rodríguez y Savoie, 2011; Navarro

Savoie, 2014; Salmones, Ballesteros-Hernández, Zulueta yata, 2012). El reto será lograr que el germoplasma mexicano

e incorpore en corto tiempo a la producción comercial.

gradecimientos

Este trabajo fue financiado en el marco de la cooperaciónilateral México-Francia, a través del proyecto Agasub 115790onacyt-ANR. La secuenciación de ADN fue financiada por

a red MEXBOL a través del proyecto Conacyt 1251085. Segradece al técnico Ranulfo Castillo-del Moral, del INIFOR-V, su asistencia en el trabajo de gabinete y elaboración deguras. Al Dr. Gastón Guzmán y al técnico Juan Lara-Carmona,e la colección de hongos del Herbario XAL del INECOL, por suyuda en la consulta y búsqueda de materiales. Al ingeniero Juanarlos Sucarrats, de la empresa Riojal, la donación de compostara el cultivo de las cepas aisladas. Se agradece al M. en C.odolfo Ángeles-Argaiz, del Instituto de Biología de la UNAM,

u apoyo en la obtención de las secuencias de ADN.

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