UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA

PROGRAMA DE RESIDÊNCIA MULTIPROFISSIONAL EM ÁREA

PROFISSIONAL DE SAÚDE EM MEDICINA VETERINÁRIA

CÁSSIA MARIA PEDROSO DOS SANTOS

Ocorrência de micoplasmas hemotrópicos em gatos domésticos

(Felis catus)

BELÉM

2018

OCORRÊNCIA DE MICOPLASMAS HEMOTRÓPICOS EM GATOS

DOMÉSTICOS (Felis catus)

Resumo

Micoplasmas hemotrópicos são de grande importância na medicina veterinária, pois são causadores de doenças

infecciosas que podem acometer várias espécies de animais. Objetivou- se detectar a presença de hemoplasmas

em amostras de sangue de gatos clinicamente sadios através da técnica de PCR e correlacionar sexo, idade e

alterações hematológicas. Foram coletadas 100 amostras para realização do hemograma e PCR. Das amostras

analisadas 44% foram positivas para Mycoplasma spp., onde 42% foram machos e 45%fêmeas, sendo a

maioria dos animais positivos a cima de um ano de idade. Nas alterações hematológicas não houve diferenças

estatisticamente significativas quando se comparou os animais positivos e negativos a PCR. A infecção por

hemoplasmas em felinos clinicamente sadios é frequente, não havendo predisposição por sexo e ocorre

principalmente em animais adultos e não há alterações hematológicas significativas em animais infectados,

portanto, o exame molecular é um diagnóstico de extrema importância na rotina clínica veterinária.

Palavras chave: Hemoplasmas, felino, PCR

OCCURRENCE OF HEMOTROPIC MICOPLASMS IN DOMESTIC CATS (Felis catus)

Abstract

Hemotropic mycoplasmas are of great importance in veterinary medicine, as they cause infectious diseases

that can affect several species of animals. The aim of this study was to detect the presence of haemoplasmas

in blood samples from clinically healthy cats through the PCR technique and to correlate sex, age and

hematological alterations. 100 samples were collected for blood counts and PCR. Of the analyzed samples,

44% were positive for Mycoplasma spp., 42% were male and 45% females, with most animals being over one

year old. In hematological alterations, there were no statistically significant differences when comparing

positive and negative animals to PCR. Haemoplasmas infections in clinically healthy felines is frequent, there

is no predisposition by sex and occurs mainly in adult animals and there are no significant hematological

alterations in animals infected, therefore, molecular examination is a diagnosis of extreme importance in

veterinary clinical routine.

Key words: haemoplasmas, feline, PCR

INTRODUÇÃO

As hemoparasitoses são enfermidades de grande importância na clínica médica de animais e

podem acometer os caninos, felinos, equinos e bovinos (MUNDIM et al., 2008). Os gatos são

infectados por três espécies principais: Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma

haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis. Pode atingir animais de qualquer faixa etária

e de ambos os sexos, a morbidade é considerada alta e a mortalidade e letalidade são baixas em

animais imunoconpetentes (SANTOS; GUIMARAES; BIONDO, 2016).

Micoplasmas Hemotrópicos são hemoparasitas causadores de doenças infecciosas que

caracterizam-se pelo parasitismo dos eritrócitos em gatos (SANTOS; GUIMARAES; BIONDO,

2016), que podem variar de assintomáticos até casos com anemia hemolítica grave, tornando um

grande desafio na rotina dos clínicos veterinários (ROURA et al., 2010).

A transmissão de hemoplasmas ocorre principalmente através de vetores hematófagos, tendo

estudos demonstrando que artrópodes infectados podem transmitir experimentalmente o patógeno,

dentre eles destaca-se a pulga (Ctenocephalides felis) e o carrapato marrom do cão (Rhipicephalus

sanguineus) (SENEVIRATNA et al., 1973; WOODS et al., 2005).

A detecção do organismo em esfregaços sanguíneos como meio de diagnóstico dos

hemoplasmas ainda é bastante utilizada no país (VALLE, 2011), no entanto, apresenta uma

sensibilidade baixa, outro método de diagnóstico como a reação em cadeia da polimerase (PCR) é

considerada o método diagnóstico definitivo para detecção e identificação do agente (SANTOS,

2008). A PCR é uma técnica altamente sensível e específica que partindo de sequências alvo –

principalmente do 16S rRNA – promove a amplificação exponencial in vitro de um fragmento de

DNA bacteriano, permitindo o diagnóstico em infecções agudas e crônicas servindo ainda como

método de identificação de animais portadores impedindo assim o uso desses como doadores

sanguíneos (FOLEY; PEDERSEN, 2001; JENSEN et al., 2001; SANTOS, 2008).

Objetivou-se com esse estudo detectar a presença de hemoplasmas em amostras de sangue de

gatos clinicamente sadios, através da técnica de PCR e correlacionar sexo, idade e alterações

hematológicas.

MATERIAL E MÉTODOS

Foram coletadas 100 amostras de sangue de gatos domésticos clinicamente sadios,

independente de raça, sexo ou idade oriunda de um programa de castração da Universidade Federal

Rural da Amazônia (UFRA) em Belém-PA, do período de novembro a dezembro de 2017. Esta

pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética da UFRA com protocolo nº 048/2017.

As amostras de sangue foram coletadas por venopunção da jugular, de forma asséptica para

armazenamento de 1-2 mL de sangue total em tubo estéril contendo anticoagulante EDTA (Ácido

Etilenodiamino Tetra-Acético) para imediata realização do hemograma e posteriormente armazenada

em ultra freezer -80 ºC até o momento da análise molecular.

Com relação a faixa etária, as diferentes idades foram agrupadas em intervalos, das amostras

coletadas 64% (64/100) encontravam-se no intervalo de 6 meses de idade até 1 ano de idade, 26%

(26/100) eram maiores de 1 ano de idade até 2 anos de idade e 10% (10/100) eram maiores de 2anos

de idade até 4 anos de idade.

As análises de eritrograma (hemácias e índices hematimétricos), leucograma (contagem de

leucócitos) e plaquetometria (contagem de plaquetas) foram determinadas por um analisador de

hematologia compacto automático (BC-2800), com configuração para a espécie felina. Os valores de

referência utilizados no presente trabalho foram: hemácias (5,0- 10,0 106 céls/mm3); hemoglobina (8-

15 g/dL); leucócitos totais (5.500-19.500); linfócitos (1.500-7.000 céls/mm3); plaquetas (300.000-

800.000 106 céls/mm3) (WEISS; WARDROP, 2010).

A extração de DNA foi realizada através da utilização de um kit comercial (Pure Link ®

Genomic DNA Mini Kit) de acordo com as recomendações do fabricante. O DNA foi eluído em 50µl

de tampão de eluição que acompanha o kit e foi armazenado no ultra freezer -80ºC.

Para a avaliação da diversidade de microrganismo do gênero Mycoplasma foi realizado a

amplificação de fragmento do gene 16S rRNA utilizando os iniciadores universais MycoLF (5’-

AGCAATRCCATGTGAACGATGAA-3’), MycoLR1 (5’-TGGCACATAGTTTGCTG TCACTT-

3’) e MycoLR2 (5’-GCTGGCACATAGTTAGCTGTCACT-3’), previamente descritos e

estabelecidos (WILLI et al., 2009).

As reações foram realizadas em um volume total de 25 µL contendo 10 – 20 ng de DNA

molde, 1,5 mM de MgCl2, 2,5 mM de cada um dos dNTPs, 5 mM de cada iniciador e 1,25

U de Taq DNA polimerase (Invitrogen®) e água purificada para completar o volume final da

reação. O perfil de amplificação consistiu de uma desnaturação inicial de 10 min a 94°C, 40 ciclos

de 30 seg a 95°C, 30 seg a 60°C e 30 seg a 72°C, seguidos de uma extensão final de 10 min a 72°C.

Como controle positivo foi utilizado em cada uma das reações uma amostra previamente

identificada como positiva para mycoplasmas específico e como controle negativo foi utilizado água

bidestilada estéril.

O produto resultante da PCR foi adicionado e analisado em 3% de gel de agarose, submetido

à eletroforese a 100V durante 50 minutos. Depois foi realizada a leitura em um transluminador de luz

ultravioleta. O tamanho do fragmento amplificado (151bp) foi estimado comparando-se com os

marcadores de peso molecular 100 pb e/ou 1 Kb (DNA ladder Invitrogen®).

Os dados foram tabelados e tratados estatisticamente por percentual simples e as diferenças

entre os percentuais foram comparados entre si pelo teste do qui-quadrado admitindo-se significância

estatística para p<0,05 e para valores menores que 5 o teste G, implementados nos programas

Microsoft Excel e BioEstat 5.3.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A realização dessa pesquisa permitiu avaliar a ocorrência de micoplasmas hemotrópicos em

uma população de gatos domésticos clinicamente sadios, em que 44% (44/100) foram positivos para

Mycoplasma spp. Até o momento, os hemoplasmas já foram relatados em diferentes poluções de

gatos em várias regiões do Brasil. Santis et al., (2014) no estado de Mato Grosso do Sul, observaram

uma positividade de 36.4% (55/151), corroborando com os resultados encontrados neste estudo.

Em outros estados brasileiros essa taxa de infecção foi inferior ao resultado encontrado neste

estudo como pode ser observado por Macieira et al.,(2008) no Rio de Janeiro 11,7% (18/149), Braga

et al., (2012) no Maranhão 12% (29/200), Bortoli et al., (2012) em São Paulo 6,5% (3/46), Miceli et

al., (2013) no Mato Grosso 8,4% (15/178), Aragão de Sousa et al., (2013) em Belém 19,9%

(40/201), Santis et al., (2014) no Mato Grosso do Sul 36,4% (55/151) e Petry (2016) no Rio Grande

do Sul 14,60%. Segundo Greene (2015) a prevalência dos micoplasmas hemotrópicos é problemática

quando se faz a comparação com diferentes estudos, pois a população estudada é bastante diferente,

em algumas pesquisas a amostragem é constituída de gatos anêmicos, outras com afecções clínicas

ou ate mesmo independente do seu estado de saúde. Além disso, outros fatores que podem influenciar,

como o clima e a geografia de diferentes regiões, assim como a frequência de exposição a

ectoparasitas (WILLI et al., 2006).

Com relação ao sexo dos 44% (44/100) positivos, 42% (14/33) foram machos e 45% (30/67)

fêmeas não havendo diferença significativa entre machos e fêmeas, esse resultado corrobora com a

pesquisa de Vicente (2015), no entanto, Marques (2013) Montaño (2014), Aquino (2015) e Petry

(2016) verificaram que os machos foram mais afetados pelos hemoplasmas do que as fêmeas, ainda

segundo Aquino (2015) essa maior frequência de infecção em machos pode estar ligada aos padrões

de comportamento como brigas, mordidas e acesso a rua. Algumas espécies de hemoplasmas já foram

identificados, através de técnicas moleculares na saliva e glândulas salivares de gatos infectados

experimentalmente, o que sugere que lambeduras ou até mesmo a ocorrência de brigas entre animais

pode facilitar a transmissão da doença, porém, como a carga bacteriana na saliva é baixa, a interação

entre os animais deve ser agressiva para permitir a infecção (WILLI et al., 2007; DEAN et al., 2008).

Quanto à idade 39% (25/64) foram positivos na PCR e tinham de 6 meses de idade até 1 ano

de idade, 50% (13/26) foram positivos e eram maiores de 1 ano de idade até 2 anos de idade e 60%

(6/10) foram positivos e eram maiores de 2 anos de idade até 4 anos de idade, a maioria dos animais

positivos neste estudo eram adultos, o que corrobora com Bauer et al., (2008) e Santos et al. (2014)

onde descrevem uma maior relação em animais mais velhos, onde estes permanecem como estado

portador por vários anos, porém esse resultado difere do observado na pesquisa de Marques (2013),

Aquino (2015) e Petry (2016), onde houve maior predisposição a infecção em felinos jovens.

Diferente do resultado desta pesquisa, Vicente (2015) não obteve uma diferença significativa com

relação à idade, quando observado na faixa etária abaixo ou maior que sete anos.

Na análise hematológica, a anemia não esteve presente em nenhuma das amostras analisadas.

Segundo Tasker (2010) os gatos podem ser acometidos por diferentes espécies de mycoplasmas, que

podem causar diferentes graus de anemia. Por outro lado, Duarte et al. (2014) e Santos et al., (2014)

explicam que a ausência de anemia pode estar ligada a portadores crônicos onde a relação parasita

hospedeiro atinge um equilíbrio e a replicação do agente se torna estável pela fagocitose e eliminação

do organismo, diminuindo assim a carga parasitária.

Em 40% das amostras não houve nenhuma alteração hematológica, as demais 60 (60%)

amostras apresentaram alterações, sendo 23 com alteração linfocitária (linfocitose e linfopenia), 43

com trombocitopenia e 9 com leucocitose, sendo a trombocitopenia a alteração mais prevalente (Qui-

quadrado 5.063, p=0.0244), os desdobramentos e sobreposições de alterações podem ser observados

na figura abaixo (Figura 1). Das amostras examinadas 56 (56%) resultaram negativas e 44 (44%)

positivas, não havendo diferença estatística (Qui-quadrado 1.44, p=0.2301).

Figura 1: Diagrama de Venn demonstrando as alterações hematológicas e seus cruzamentos, entre

amostras positivas e negativas pela PCR

Legenda: (A) Alterações hematológicas pelo total de amostras examinadas. (B) Alterações

hematológicas pelo total de amostras positivas. (C) Alterações hematológicas pelo total de amostras

negativas.

Ao avaliar separadamente as plaquetas, foi observado que 43 felinos apresentaram alteração

plaquetária com trombocitopenia, destes 49% (21/43) resultaram positivos pela PCR e 51% (22/43)

foram negativos, porém, 57 felinos não apresentaram alterações de números de plaquetas, dos quais

Trombocitopenia 31

Leucocitose

6

Alteração linfocitária

12

8

1

2

Trombocitopenia 16

Leucocitose

4

Alteração linfocitária

3

41

Trombocitopenia 17

Leucocitose

2

Alteração linfocitária

9

41

1

N=100

Positivos(44)

Negativos(56)

A

B C

40% (23/57) resultaram positivos pela PCR. Com relação aos linfócitos, foi observado que apenas 23

felinos apresentaram alteração linfocitária, no qual 35% (8/23) foram positivos na PCR e 65% (15/23)

foram negativos, no entanto, 77 felinos apresentaram a série linfocitária normal, dos quais 47%

(36/77) resultaram positivos pela PCR. Já os leucócitos foram observados que apenas 9 felinos

apresentaram alteração, leucocitose, destes 56% (5/9) resultaram positivos pela PCR e 44% (4/9)

negativos; os demais 91 felinos não apresentaram alterações de números de leucócitos, dos quais 43%

(39/91) foram positivos pela PCR.

As alterações hematológicas dos gatos analisados quando relacionado ao resultado da PCR

não tiveram uma diferença significativa, o mesmo pode ser observado na pesquisa de Aquino (2015).

Segundo Messick e Harvey (2012) o hematócrito em gatos assintomáticos pode variar ao longo do

tempo de normal ou de leve a moderadamente diminuído, assim como o percentual de leucócitos é

muito variável e de pouco auxilio no diagnóstico, na contagem de plaquetas os valores geralmente

estão entre os valores de referência.

Segundo Firmino (2008) quando analisado o leucograma, este não apresenta alterações

significativas, assim como não a uma correlação entre a fase da doença e o percentual de neutrófilos

e linfócitos. Neste estudo pode se observar que apesar das alterações leucocitárias e linfocitárias, estas

não tiveram valores significativos quando comparado aos resultados da PCR.

CONCLUSÃO

A infecção por hemoplasmas em felinos clinicamente sadios está presente principalmente em

animais adultos, independentes do gênero e muitas vezes pode não estar associada a anemia, outras

alterações hematológicas quando correlacionadas com os animais positivos e negativos na PCR não

tiveram uma diferença significativa entre elas, o que torna essencial o uso da PCR como ferramenta

de diagnóstico para clínico veterinário na detecção de Mycoplasma spp. Além disso, Gatos saudáveis

podem ser portadores assintomáticos de hemoparasitas o que requer uma maior cautela ao submeter

esses animais a qualquer tipo de procedimento que possa causar algum tipo de imossupressão, pois a

reativação da infecção pode levar a doença clínica.

REFERÊNCIAS

1 Aquino, LC. Estudo das infecções por hemoplasmas em cães e gatos domésticos. 2015. 92f. Tese (Doutorado

em saúde animal) - Universidade de Brasília Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Brasília, 2015.

(http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/19383/1/2015_LarissaCamposAquino.pdf)

2 Aragão de Sousa SKS, Sampaio Junior FD, Sousa LO, Santos RC, Gonçalves EC, Scofield A, Góes-

Cavalcante G. Diagnóstico molecular da infecção por hemoplasmas em gatos domésticos naturalmente

infectados da cidade de Belém, Pará. Pesquisa Veterinária Brasileira. 2013. 33 (9): 1116-1120.

(http://www.scielo.br/pdf/pvb/v33n9/a11v33n9.pdf)

3 Bauer N, Balzer HJ, Thure S, Moritz A. Prevalence of feline haemotropic mycoplasmas in convenience

samples of cats in Germany. Journal of Feline Medicine and Surgery, 2008, 10(3), 252-258.

(DOI: 10.1016/j.jfms.2007.12.004)

4 Bortoli CP, Andre MR, Seki MC, Pinto AA, Machado S.Z, Machado RZ. Detection of hemoplasmas and

Bartonella species and coinfection with retroviruses in cats subjected to a spaying/neutering program

in Jaboticabal, SP, Brazil. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária, 2012, (3): 219-223.

(http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1984-29612012000300008)

5 Braga MSCO, André MR, Freschi CR, Teixeira MCA, Machado RZ. Molecular detection of hemoplasma

infection among cats from São Luís island, Maranhão, Brazil. Brazilian Journal of Microbiology, 2012, p 569-

575.

(http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822012000200018)

6 Dean RS, Helps CR, Jones TJG, Tasker S. Use of real-time PCR to detect Mycoplasma haemofelis and

‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ in the saliva and salivary glands of haemoplasma-infected

cats. Journal of Feline Medicine and Surgery, 2008, 10 (4): 413-417.

(https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1098612X08000041)

7 Duarte A, Marques V, Correia JHD, et al. Molecular detection of haemotropic Mycoplasma species in

urban and rural cats from Portugal. Journal of Feline Medicine and Surgery, 2014, v. 15, n., 6, p. 516-522.

(DOI: 10.1177/1098612X14550172)

8 Foley JE, Pedersen NC. ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’, a low virulence epierythrocytic

parasite of cats. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2001, 51(3): 815-817.

(http://www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/ijsem/51/3/0510815a.pdf?expires=1521402537&id

=id&accname=guest&checksum=0835C96C64948337542D1A962BD59F25)

9 Macieira DB, Menezes RCAA, Damico CB, Almosny NRP, Mclane JKD, Messick JB. Prevalence and risk

factors for hemoplasmas in domestic cats nat urally infected with feline immunodeficiency virus and/or feline

leukemia vírus in Rio de Janeiro, Brazil. Journal of Feline Medicine and Surgery, 2008, v.10, n.2, p.120-129.

(DOI:10.1016/j.jfms.2007.08.002)

10 Marques VRF. Contribuição para o estudo das micoplasmoses hemáticas felinas em Portugal. 110f.

Dissertação (Mestrado Integrado em Medicina Veterinária) - Universidade de Lisboa Faculdade de Medicina

Veterinária, Lisboa, 2013.

(https://www.repository.utl.pt/bitstream/10400.5/6296/1/Contribui%C3%A7%C3%A3o%20para%20o%20es

tudo%20das%20Micoplasmoses%20hem%C3%A1ticas%20felinas%20em%20Portugal.pdf)

11 Messick JB, Harvey J W. Micoplasmose Hemotrópica. In Craig E. Greene, Doenças infecciosas em cães e

gatos. ­ 4. ed. ­ Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2015, p 674 - 695.

12 Miceli NG, Gavioli FA, Gonçalves LR, André MR, Sousa VR, Sousa KC, Machado RZ. Molecular

detection of feline arthropodborne pathogens in cats in Cuiabá, state of Mato Grosso, centralwestern

region of Brazil. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaria, 2013, 22: 385-390.

(http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1984-29612013000300385)

13 Montaño PY. Ocorrência de coinfecções em gatos domésticos anêmicos e não anêmicos. 61f. Dissertação

(Mestrado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal do Paraná, Curitiba, 2014.

(https://acervodigital.ufpr.br/handle/1884/36263)

14 Mundim ECDS, Francisco MMDS, Souza JN, Alencar MAG, Ramalho PCD. Incidência de

hemoparasitoses em cães (Canis familiares) de rua capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) da

cidade de Anápolis-GO. Ensaios e Ciência: Ciências Biológicas, Agrárias e da Saúde, 2008, 12:107-115.

(http://www.redalyc.org/html/260/26012841009/)

15 Petry LS. Micoplasmas hemotrópicos em felinos domésticos na cidade de Santa Maria, Rio Grande do Sul,

Brasil. 2016. 45f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) - Universidade Federal de Santa Maria,

Santa Maria, 2016.

(http://repositorio.ufsm.br/bitstream/handle/1/10224/PETRY%2C%20LETICIA%20DOS%20SANTOS.pdf?

sequence=1&isAllowed=y)

16 Roura X, Peters IR, Altet L, Tabar MD, Barker EN, Planellas M, Helps CR, Francino O, Shaw SE., Tasker

S. Prevalence of hemotropic mycoplasmas in healthy and unhealthy cats and dogs in Spain. Journal of

Veterinary Diagnostic, 2010, 22 (2) :270-274.

(http://journals.sagepub.com/doi/full/10.1177/104063871002200219)

17 Santis AC, Herrera HM, Sousa KC, Goncalves LR, Denardi NC, Domingos IH, Campos JB, Machado

RZ, Andre MR. Molecular detection of hemotrophic mycoplasmas among domiciled and free-roaming cats

in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária, 2014,

23: 231-236.

(http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1984-29612014000200231)

18 Santos AP. Infecção por hemoplasmas em felinos domésticos na região de Porto Alegre, RS, Brasil. 2008.

164f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre,

2008.

(http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/handle/10183/14852/000670337.pdf?sequence=1)

19 Santos AP, Conrado FO, Messick JB, et al. Hemoplasma prevalence and hematological abnormalities

associated with infection in three different cat populations from Southern Brazil. Revista Brasileira de

Parasitologia Veterinária, 2014, v. 23, n. 4, p. 428-434.

(DOI: 10.1590/S1984-29612014079)

20 Santos AP, Guimarães MAS, Biondo AW. Doenças Infecciosas em animais de produção e de companhia/

Jane Megid, Márcio Garcia Ribeiro, Antônio Carlos Paes. 1. ed. Rio de Janeiro: Roca, 2016. p 1063- 1068.

21 Seneviratna P, Weerasinghe, Ariyadasa SS. Transmission of Haemobartonella canis by the dog tick,

Rhipicephalus sanguineus. Research in Veterinary Science, 1973, 14 (1): 112-114.

(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4736045)

22 Tasker, S. Haemotropic mycoplasmas: what’s the real significance in cats? Journal of Feline Medicine and

Surgery, 2010, v12, p. 369–381.

(DOI: 10.1016/j.jfms.2010.03.011.)

23 Valle SF. Prevalência, fatores de risco e alterações laboratoriais na infecção pelos heoplasmas caninos e

felinos em caninos atendidos no Hospital da Universidade de Passo Fundo. 2011. 92f. Tese (Doutorado em

Ciências Veterinárias) - Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 2011.

(http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/handle/10183/34680/000792345.pdf?sequence=1)

24 Vicente ARA. Caracterização clínica e laboratorial de gatos considerados suspeitos de Mycoplasma

haemofelis. 53f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) – Universidade Lusófona de Humanidades

e Tecnologias Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa, 2015.

(http://recil.grupolusofona.pt/bitstream/handle/10437/7091/Disserta%C3%A7%C3%A3o%20Ana%20Vicent

e.pdf?sequence=1)

25 Weiss DJ, Wardrop KJ. Schalm’s veterinary hematology. 6ed. Philadelphia. 2010.

(http://www.armchairpatriot.com/Home-Vet/Schalm's%20Veterinary%20Hematology%206th%20ed%20-

%20D.%20Weiss,%20J.%20Wardrop%20(Wiley-Blackwell,%202010)%20WW.pdf)

26 Willi B, Boretti FS, Baumgartner C, Tasker S,Wenger B, Cattori V, Meli ML, Reusch CE, Lutz H,

Hofmann-Lehmann R. Prevalence, risk factor analysis, and follow-up of infections caused by three feline

hemoplasma species in cats in Switzerland. Journal of Clinical Microbiology, 2006,44 :961–969.

(DOI:10.1128/JCM.44.3.961-969.2006)

27 Willi B, Boretti FS, Meli ML, Bernasconi MV, Casati S, Hegglin D, Puorger M, Neimark H, Cattori V,

Wengi N, Reusch CE, Lutz H, Hofmann-Lehmann R. Real-time PCR investigation of potential vectors,

reservoirs and shedding patterns of feline hemotropic mycoplasmas. Appl. Environ. Microbiol, 2007,

73(12):3798–802.

(DOI:10.1128/AEM.02977-06)

28 Willi B, Meli ML, Lüthy R, Honegger H, Wengi N, Hoelzle LE, Reusch CE, Lutz H, Hofmann-Lehmann

R. Development and application of universal hemoplasmas screening assy based onde the SYBR green PCR

principle. Journal of Clinical Biology, 2009,47(12): 4049-4054.

(DOI: 10.1128/JCM.01478-09)

29 Woods JE, Brewer MM, Hawley JR, Wisnewski N, Lappin M.R. Evaluation of experimental transmission

of Candidatus Mycoplasma haemominutum and Mycoplasma haemofelis by Ctenocephalides felis to

cats. American Journal of Veterinary Research, 2005, 66 (6): 1008-1012.

(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16008224)

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA

COMISSÃO DE ÉTICA NO USO DE ANIMAIS

____________________________________________________________ COMISSÃO DE ÉTICA NO USO DE ANIMAIS – CEUA

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA – UFRA Av. Tancredo Neves, no 2501, Bairro Montese, Belém – PA. CEP: 66.077-901

Contatos: (1)3210-5165 ceua@ufra.edu.br www.comissao.ufra.edu.br/ceua

CERTIFICADO

Certificamos que o Projeto de Pesquisa, intitulado “Ocorrência de Micoplasmas

hemotrópicos em felinos domésticos (Felis catus)”, protocolo nº 048/2017 (CEUA) e

23084.016900/2017-48 (UFRA), sob a responsabilidade do Prof. Dr. Alexandre do

Rosário Casseb – que envolve a produção, manutenção e/ou utilização de animais

pertencentes ao Filo Chordata, Subfilo Vertebrata (exceto o homem), para fins de

PESQUISA – encontra-se de acordo com os preceitos da Lei nº 11.794, de 8 de outubro

de 2008, do Decreto nº 6.899, de 15 de julho de 2009, e com as normas editadas pelo

Conselho Nacional de Controle da Experimentação Animal (CONCEA), e foi aprovado

pela COMISSÃO DE ÉTICA NO USO DE ANIMAIS da Universidade Federal Rural da

Amazônia, na reunião de 13/11/2017.

Vigência do projeto 13 de novembro de 2017 a 13 de novembro de 2019

Espécie/linhagem Felis catus (gato) / SRD

Número de animais 400 (quatrocentos) animais

Peso/Idade Aprox. 2kg / acima de 6 meses

Sexo 200 Machos e 200 Fêmeas

Origem Clínicas e hospitais veterinários da Região Metropolitana

de Belém

Belém, 11 de dezembro de 2017.

____________________________ Profa. Maria Cristina Manno

Coordenadora CEUA/UFRA