MICROSCOPIA
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HISTOLOGIA E EMBRIOLOGIA - FISIOTERAPIA - 1 O ANO
I. Apresentação geral da disciplina
II. Importância da disciplina
III. Uso e manutenção do microscópio óptico composto
1. Componentes de um microscópio óptico composto
. parte mecânica = suporte
. parte óptica
- condensador
- objetiva ( secas e de imersão)
- ocular
2. Cálculo do aumento (ampliação) da imagem
. aumento da objetiva X aumento da ocular
3. Limite de resolução
a menor distância entre 2 pontos que permite que sejam visualizados individualmente
LR = K x , onde,K = constante (0,61);
= comp. de 1 onda de luz empregada (0,55 m);
AN = abertura numérica (vem gravado na objetiva).
LR AN
4. Como usar o microscópio
4.1 acenda a fonte de luz;
4.2 limpe a lâmina, as objetivas e a ocular com um lenço de papel;
4.3 gire o revólver do microscópio para que a objetiva panorâmica fique em
posição de uso;
4.4 com o macrométrico abaixe a platina até o ponto máximo;
4.5 coloque a lâmina com a lamínula voltada para cima e prenda-a com as
presilhas;
4.6 manipulando o macrométrico e olhando através da ocular suba
vagarosamente a platina até visualizar a imagem;
4.7 verifique as condições de iluminação, manuseando condensador e diafragma;
4.8 melhore o foco usando o parafuso micrométrico;
4.9 centre a estrutura utilizando o sistema “charriot”;
4.10 gire o revólver e mude para a objetiva imediatamente de maior aumento
(faça uso do parafuso micrométrico para ajuste do foco).
4.11 etapas para retirar a lâmina
4.11.1 volte o revólver à objetiva panorâmica;
4.11.2 usando o macrométrico desça completamente a platina;
4.11.3 retire a lâmina;
4.11.4 desligue a fonte de luz;
4.11.5 enrole o fio de luz em torno da base do aparelho;
4.11.6 cubra-o com o protetor plástico.
5. O que não deve ser feito
5.1 não deixe a lâmpada do microscópio acesa quando não o estiver usando;
5.2 nunca mergulhe as objetivas em líquidos para limpá-las;
5.3 nunca faça o foco das objetivas de maior aumento sem tê-lo feito nas
precedentes;
5.4 não tente fazer consertos em seu microscópio e nunca troque peças de um
microscópio para outros;
5.5 não “arraste” seu microscópio de uma lado para outro da bancada;
5.6 nunca tente desmontar as oculares e objetivas;
5.7 não se retire do laboratório sem deixar seu microscópio em ordem.
IV. Técnicas gerais de preparação de uma lâmina permanente para microscopia de luz
1. Introdução
2. Material
. autópsia;
. biópsia;
. 4 mm de espessura.
3. Fixação
. evitar autólise;
. impedir a atividade e a proliferação de bactérias;
. endurecer as células;
. aumentar a afinidade das estruturas celulares;
. fixação química = sol. formol a 10% 24 hs.
4. Descalcificação
. peças ósseas;
. ácidos.
5. Desidratação
. 1 a 2hs em cada álcool etílico (70%, 80%, 90%, 95% e absoluto I, II e III)
6. Diafanização
. xilol ou benzol;
. álcool absoluto + benzol (1:1) benzol I, II e III;
. peças pequenas = 40 min. em cada estágio;
. peças grandes = 1h:30min. em cada estágio;
7. Inclusão
. blocos de parafina
8. Microtomia
. micrótomo
9. Fixação dos cortes na lâmina
. albumina de Meyer
10. Desparafinização e hidratação
. xilol I e II 5 min. em cada;
. álcool absoluto I e II, 95%, 90%, 80% e 70% 5 min. em cada água
corrente 10 min.
11. Coloração
. corantes ácidos;
. corantes básicos;
. técnicas citoquímicas.
12. Montagem
. lamínula;
. Bálsamo do Canadá, Entelan ou Permout.
V. Microscópio de contraste de fase
. detalhes celulares in vivo
. #s de fase + #s de amplitude = #s de intensidade luminosa
VI. Microscópio confocal
. raios laser = gera imagens de planos ópticos do tecido em exame
. imagens muito nítidas
VII. Microscópio de polarização
. filtro polaróide = luz polarizada
- polarizador
- analisador
VIII. Microscopia de fluorescência
. substâncias fluorescentes
. radiação ultravioleta
. fonte de luz ultravioleta
. filtros = radiação
. vitamina A e porfirinas
. alaranjado-de-acridina + DNA = fluorescência verde-amarelada
. alaranjado-de-acridina + RNA = fluorescência vermelho-amarelada
IX. Microscopia eletrônica
. alta resolução
1. Microscópio eletrônico de transmissão
. aquecimento do filamento catódio - emissão de elétrons
. # de potencial entre o filamento e o anódio (placa perfurada no centro que
forma um feixe de elétrons)
. feixe defletido por lentes eletromagnéticas
. condensador focaliza o feixe no plano do objeto
. objetiva forma uma imagem do objeto
. imagem ampliada por 1 ou 2 lentes projetoras = imagem final - tela
fluorescente ou filmes fotográficos
. cortes finos de tecido (20 a 100nm de espessura)
. incluir em resinas duras
. ultramicrótomos (navalhas de vidro ou diamante)
2. Microscópio eletrônico de varredura
. bobina de varredura - entre a lente eletromagnética e a objetiva
. desvio feixe de elétrons - incide sobre objeto ponto a ponto = numa seqüencia
determinada
. feixe eletrônico não atravessa o objeto - sofre reflexões - elétrons secundários -
sinal elétrico = tubo de vídeo
X. Histoquímica e citoquímica
. localização de #s substâncias nos cortes de tecido
. reações químicas específicas ou interação macromolecular de alta afinidade
. compostos insolúveis, corados ou elétron-densos
. Microscópio óptico ou eletrônico
. alguns exemplos de moléculas orgânicas que podem ser observadas:
. lipídeos
. ácidos nucléicos
. polissacarídeos
. enzimas
. fosfatase ácida
. desidrogenases
. peroxidase
Objetivos educacionais da disciplina
. Cohecer os diferentes tipos de células e seus componentes;
. Conhecer o desenvolvimento embrionário dos diferentes órgãos;
. Nomear, reproduzir e reconhecer as estruturas componentes dos órgõs de diversos
sistemas;
. Reproduzir em desenhos esquemáticos cortes histológicos dos vários órgãos de
sistemas;
. Relacionar as estruturas histológicas dos vários sistemas com suas respectivas funções;
. Automatizar as operações de uso de microscópio;
. Dominar a linguagem técnica usada em Histologia;
. Diferenciar os diversos órgãos de um mesmo sistema;
. Comparar as estruturas histológicas nos diferentes órgãos;
. Estabelecer comparações funcionais das estruturas nos diferentes orgãos;
. Demonstrar conhecimentos sobre a organização histológica dos diversos órgãos e
sistemas;
. Aplicar conhecimentos da Histologia geral na compreensão da histologia de órgãos e
sistemas;
. Demonstrar conhecimentos de Histofisiologia nos diversos órgãos e sistemas.