Apresentao do PowerPoint

Alta resoluomicroscopia 4 Cristina Mary Orikaza ToqueiroResoluo de ImagensComponentes modernos de lentesDesign ptico auxiliado por computadorDifrao das ondas de luz visvelhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmResoluo de ImagensComponentes modernos de lentesDesign ptico auxiliado por computadorLimite mximo de resoluo pticaBarreira de Difrao de AbbeDifrao das ondas de luz visvelhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmResoluo de ImagensComponentes modernos de lentesDesign ptico auxiliado por computadorLimite mximo de resoluo pticaBarreira de Difrao de AbbeDifrao das ondas de luz visvelErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmPonto focalNA

ndice de refraoResoluo de ImagensComponentes modernos de lentesDesign ptico auxiliado por computadorLimite mximo de resoluo pticaBarreira de Difrao de AbbeDifrao das ondas de luz visvelErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmPonto focalNA

ndice de refraoo menor nvel de detalhe que pode, eventualmente, ser trabalhada , e que as estruturas peridicas tm maior frequncia espacial (comprimentos de onda mais curtos) no sero transferidos para a imagem.estruturas menores que meio Resoluo de ImagensErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www.microscopyu.com/articles/superresolution/diffractionbarrier.htmlResoluo de ImagensErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www.microscopyu.com/articles/superresolution/diffractionbarrier.htmlAlongado no eixo zd min Airy Resoluo de ImagensErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www.microscopyu.com/articles/superresolution/diffractionbarrier.html

Alongado no eixo zd min Airy Resoluo de ImagensErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www.microscopyu.com/articles/superresolution/diffractionbarrier.html

O ideal:uma frente de onda esfrica cheia, de um ngulo slido de 4 conduziria a um ponto esfrico.Alongado no eixo zd min Airy Resoluo de ImagensErnst Abbe (1873) fsico alemohttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www.microscopyu.com/articles/superresolution/diffractionbarrier.html

O ideal:uma frente de onda esfrica cheia, de um ngulo slido de 4 conduziria a um ponto esfrico.melhoria da resoluo espacial no eixo axial (z)Alongado no eixo zd min Airy Qualidade e Funo dos Laseres Ondas coerentes

Interferncia construtivaQualidade e Funo dos Laseres

Ondas coerentes

Interferncia construtivaMicroscopia 4 Excitao coerente2 objetivas justapostasInterferncia construtivaAmplificao do ponto focalMelhor resoluo axialhttp://www.ks.uiuc.edu/Research/microscope/

Microscopia 4 Excitao coerente2 objetivas justapostasInterferncia construtivaAmplificao do ponto focalMelhor resoluo axialhttp://www.ks.uiuc.edu/Research/microscope/

Microscopia 4 Microscopia 4 Tipo A: excitao coerente Tipo C: excitao coerente multiftons e deteco coerenteshttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/publications/pdf/Handbook_Biol_Conf_Micr_561-570.pdfMicroscopia 4 Tipo A: excitao coerente Tipo C: excitao coerente multiftons e deteco coerentes

http://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/publications/pdf/Handbook_Biol_Conf_Micr_561-570.pdfMicroscopia 4 Tipo A: excitao coerente Tipo C: excitao coerente multiftons e deteco coerentes

http://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/publications/pdf/Handbook_Biol_Conf_Micr_561-570.pdf

Microscopia 4 - Aquisio de ImagensVarredura laserAquisio baseada em CCD rpidoMicroscpio multifocal multifton4 Microscopia 4 - Aquisio de ImagensVarredura laserAquisio baseada em CCD rpidoMicroscpio multifocal multifton4 1 seg/fatiaImerso1 tcnica: imagens-3D de cl vivas (100nm)Microscopia 4 - Aquisio de ImagensVarredura laserAquisio baseada em CCD rpidoMicroscpio multifocal multifton4 1 seg/fatiaImerso1 tcnica: imagens-3D de cl vivas (100nm)Artefatos x deconvoluo

xzhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmMicroscopia 4 - Aquisio de ImagensVarredura laserAquisio baseada em CCD rpidoMicroscpio multifocal multifton4 1 seg/fatiaImerso1 tcnica: imagens-3D de cl vivas (100nm)

http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12551-010-0037-0/fulltext.html#Fig1Artefatos x deconvoluo

xzhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htmMicroscopia 4 - Aquisio de Imagens

http://light.ece.illinois.edu/NBSS09/UIUC_Bewersdorf_forDistribution.pdfVarredura laserAquisio baseada em CCD rpidoMicroscpio multifocal multifton4 1 seg/fatiaImerso1 tcnica: imagens-3D de cl vivas (100nm)

http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12551-010-0037-0/fulltext.html#Fig1Artefatos x deconvoluo

xzhttp://www3.mpibpc.mpg.de/groups/hell/4Pi.htm

Microscopia 4 - AplicaesReconstruo 3D da matriz mitocondrial (GFP) de uma levedura viva (S. cerevisae) com brotamento

Hell SW, Nat Biotech 21, 1347-55 (2003)

Microscopia 4 - AplicaesReconstruo 3D da matriz mitocondrial (GFP) de uma levedura viva (S. cerevisae) com brotamento

Hell SW, Nat Biotech 21, 1347-55 (2003)Scale bar = 0,5 mImunofluorescncia (hibridizao in situ) e reconstruo 3D da protena PML (vermelho) ao redor do DNA telomrico (verde).

Chung I, et al., Nucleus 3, 263-75 (2012)Confocal Resoluo lateral: 200-300 nm para luz visivel

Confocal X Microscopia 4 Confocal Resoluo lateral: 200-300 nm para luz visivel

Microscopia 4pi Duas objetivas justapostas Gera interferncia construtiva Reduz resoluo axial (z) pra 100 nm Varredura pixel-a-pixel, como confocal, mas Pode usar fontes multiftons e cmeras CCD

Confocal X Microscopia 4

Confocal Resoluo lateral: 200-300 nm para luz visivel

Microscopia 4pi Duas objetivas justapostas Gera interferncia construtiva Reduz resoluo axial (z) pra 100 nm Varredura pixel-a-pixel, como confocal, mas Pode usar fontes multiftons e cmeras CCD

PSF lateral 1,5x melhor que confocal PSF axial 5-7x melhor que confocalConfocal X Microscopia 4

http://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2007/MB/B705460B

http://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2007/MB/B705460B