I-2 -Mioglobina Espectros Grupo1 PL2

I-2. Mioglobina: Espectroscopia de

UV - Visível

Bioquímica Experimental II, PL2, 2011/2012, Grupo 1:

Alexandra Salvado 40267, Ana Lamy 40279, Andreia Sousa 40261 e Telmo Paiva 40243

Professora: Maria Luísa Serralheiro

Objectivos

DQB-Licenciatura em Bioquímica 2

• Extracção e identificação da Oxi-Mb e da Met-Mb

através das suas propriedades espectrais;

• Estudo da reacção de oxidação-redução de

interconversão.

Resumo


• Usou-se a amostra de mioglobina isolada para traçar os 3 espectros:

Mioglobina “total”

Espectro

Met-mioglobina (oxidada)

Agente oxidante:

Ferricianeto de Potássio

Espectro

Oxi-mioglobina (reduzida)

Agente redutor:

Ditionito de sódio

Espectro

Grupo Hemo

4 DQB-Licenciatura em Bioquímica

• É um grupo prostético que consiste num

átomo de ferro contido no centro de um

anel heterocíclico designado protoporfirina;

• A protoporfirina é constituída por 4 anéis

pirrólicos que formam um anel tetrapirrólico.

• A região de Soret corresponde a uma banda

onde os grupos porfirínicos têm a absorção

máxima.

Amostra Região de Soret

Met – Mb (Fe3+) 409 nm

Oxi – Mb (Fe2+) 417 nm, 348 (nm) Figura 1 – Estrutura do grupo hemo

http://qnint.sbq.org.br/ Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.

Mioglobina


• Proteína globular

• Armazenamento de O2

• Possui um grupo hémico (protoporfirina IX de ferro) ligado através

de um resíduo de histidina

• Apresenta duas formas estáveis e bastante comuns:

Oxi-mioglobina

( Fe2+ – O2 – Mb) Met-mioglobina

( Fe3+ – H2O – Mb)

Figura 2 – Met-mioglobina e oxi-mioglobina

Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.

Procedimento


Centrifugação

5 000 RPM

(60 minutos)

Filtração

Espectro Mb

(200 a 800 nm)

Filtração em Gel

Espectro Met-Mb

(200 a 800 nm) Espectro Oxi-Mb

(200 a 800 nm)

Espectro da Mioglobina


Número C.D.O /nm Absorvência Forma

23 348 (Soret) 1,108 Oxi-Mb

24 411 2,427 Oxi e

Met-Mb

25 540 0,449 Oxi-Mb

26 577 0,406 Oxi-Mb

Met-Mb

Oxi-Mb

504

635

Espectro da Mioglobina (literatura)



Espectro da Oxi-Mb

Fe3+-H2O-Mb + Agente Redutor (Na2S2O4) Fe2+-O2-Mb

Número C.D.O /nm Absorvência

1 348 (Soret) 0,344

2 417 (Soret) 0,404

3 542 0,051

4 580 0,048

1

3

2

4


Espectro da Oxi-Mb (literatura)

Fe3+-H2O-Mb + Agente Redutor (Na2S2O4) Fe2+-O2-Mb



Espectro da Met-Mb (diluição 1:3)

Fe2+-O2-Mb + Agente Oxidante (K6[FeCN6]) Fe3+-H2O-Mb

15 16


14 401(Soret) 1,467

15 504 0,303

16 637 0,182


Espectro da Met-Mb (concentrada)



14 401(Soret) 1,467

15 504 0,303

16 637 0,182

15

16


Espectro da Met-Mb (literatura)




Conclusões


• Espectro Mioglobina “total”

• Espectro Met – Mb

• Espectro Oxi - Mb

Semelhantes à

literatura

• Carne estava fresca

Porquê? No espectro da mioglobina

“total” , os picos mais

visíveis correspondiam à

mioglobina reduzida (Oxi-

Mb)

Referências


• Bylkas, S.A. & Anderson, L.A. (1997) Microburger biochemistry: extraction and

spectral characterization of myoglobin from hamburger. J. Chem. Ed., 74, 426-430.

• Voet, O.H., Voet, J.G. (1995). Biochemistry. 2ª ed. John Wiley & Sons, Nova Iorque.

• http://www.imb-jena.de/ImgLibDoc/ftir/IMAGE_FTIR.html, consultado a 2 de Março

de 2012.

• http://pucrs.campus2.br/~thompson/Roca107.pdfm, consultado a 1 de Março de

2012.

• http://repositorio.ul.pt/bitstream/10451/1299/9/19332_ulfc091258_tm_9_CAPITULO_

1.pdf, consultado a 1 de Março de 2012.

• http://pfbrandt.faculty.noctrl.edu/teaching/CHM205/lab/7_burger.pdf, consultado a 12

de Março de 2012.

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