A ao tpica do ch verde como agente potencializador de fotoproteo cutnea.

ResumoEste estudo teve a finalidade de avaliar o desempenho do ch verde uso tpico como agende potencializador na fotoproteo da pele, em formulaes contendo filtro solar UVA e UVB, e formulaes sem associao dos filtros (pr-filtro). O ch verde, rico em polifenis, um dos fitoqumicos mais estudados e seu uso regular na forma tpica e ou uso oral, est associado reduo do cncer de pele, principalmente o no-melanoma, e ao envelhecimento, devido a suas propriedades antioxidantes, anti-inflamatrias, antimutagnicas e quimiopreventivas.Comparou-se estudos com soluo do ch verde aplicado, em mdia 30 minutos antes da exposio radiao solar, em concentraes de 0,25% a 10% na pele humana, onde houve uma reduo expressiva do processo inflamatrio induzida pela radiao UVB. A proteo mxima foi obtida com concentrao de 10%, significando que dose dependente. Foi analisado, ainda, formulaes contendo ch verde associado a filtros UVA e UVB, e o resultado demonstrou que o mesmo, alm da fotoproteo, apresentou capacidade fotoestabilizadora quando armazenado a temperatura ambiente e a 5 C. Assim foi comprovado para este artigo, a importncia da utilizao na forma tpica do ch verde, como potencializador na fotoproteo da pele em vrios tipos de formulaes cosmticas.

Palavras-chaves: ch verde, Camellia sinensis, formulaes fotoprotetoras, polifenis, quimiopreveno.

AbstractThis study had as its goal to evaluate the performance of the topical use of green tea as an enhancer agent on the photoprotection of the skin, in formulations containing UVA and UVB solar filters, and in formulations with no association with these filters.The green tea, rich in polyphenols, is one of the most studied phytochemicals and its regular use in the topical form or in oral use, is associated with the reduction of skin cancer, especially in the non-melanoma cases, and to aging, due to its antioxidants, anti-inflammatory, antimutagenic and chemopreventive properties.The studies of the use of the green tea applied to the human skin, on an average of 30 minutes before the exposition to solar radiation, in concentrations from 0,25% to 10%, in which there was an expressive reduction on the inflammatory process induced by UVB radiation, were compared. The maximum protection was obtained with the 10% concentration, meaning it is dose dependent.Formulations containing green tea associated with UVA and UVB filters were also analyzed, and the result showed that it, on top of photoprotection, presented photostabilizing capacity when stored at a 5C ambient temperature. Thus, it was proven to this article, the importance of the utilization of the green tea in its topical form as an enhancer of the photoprotection of the skin in several types of cosmetics formulations.

Key-words: green tea, Camellia sinensis, photoprotective formulations, polyphenols, chemopreventive.

IntroduoO aumento da expectativa de vida, associado a mudanas no seu estilo, tanto no que se refere a alimentao, atividade fsica, profisso, bem como poluio, destruio de camada de oznio, tem levado a exposio cada vez mais frequente da pele radiao solar UV. Como consequncia a incidncia de cncer de pele, principalmente o no-melanoma, tem aumentado significativamente, assim como o envelhecimento cutneo (fotoenvelhecimento). Algumas aes tem sido adotadas e a indstria cosmtica tem investido muito na pesquisa e desenvolvimento de produtos mais eficientes para proteo da pele exposta. Com foco nas tendncias atuais do uso de matrias-primas naturais, sustentabilidade, agentes menos agressivos pele, o ch verde ou green tea, juntamente com outros bioativos esto sendo amplamente estudados, evidenciando seus efeitos benficos em vrios rgos de nosso corpo.Neste artigo, o objetivo ser analisar alguns estudos feitos com o ch verde uso tpico, em formulaes com variadas concentraes e ainda, associado a filtro solares UVA e UVB, evidenciando sua ao de potencializao da fotoproteo cutnea. Pretende-se tambm avaliar se em alguma destas formulaes (com ou sem associao a filtros) este efeito ser mais evidenciado. O ch verde obtido a partir da vaporizao de folhas frescas de Camellia sinensis rico em polifenis (principalmente flavonoides e epicatequinas) que so substncias responsveis pelas propriedades fotoprotetoras tendo ao antioxidante, anti-inflamatria e anticarcinognica. Destas epicatequinas, a epigalogatequina 3 galato (EGCG) a mais potente contra os efeitos nocivos da radiao UV solar.A maioria dos protetores solares tm ao menos dois filtros na sua composio, para elevar o fator de proteo solar (FPS), com abrangncia na regio UVB (290-320nm) e UVA (320-400nm). Nesta metodologia estudada, foi utilizado o octilmetoxinamato (filtro solar UVB) e a avobenzona (filtro solar UVA). A formulao foi desenvolvida com substituio total da fase externa de emulso leo/gua (O/A) pelo ch verde. Na preparao do ch, aqueceu-se a gua destilada a 90 C, sendo 250ml de gua para 2 gramas de ch acondicionado em saquinhos. A infuso descansou por 5 minutos, retirou-se o saquinho, agitando manualmente o lquido 10 vezes no mesmo sentido. Filtrou-se de imediato e deixou em repouso at esfriar. Na preparao da emulso, pesaram-se os compostos da fase oleosa (BHT 0,1%, miristato de isopropila 2%, avobenzona 5%, octilmetoxinamato 10%) e, separadamente, os compostos da fase aquosa (EDTA 0,1%, polyetylenogycol 4.000 5%, propylenoglycol 5%, ch verde- 70,8% ou no placebo, gua destilada -70,8%, e o aristoflex 2% que foi adicionado por ltimo). Em seguida aqueceu-se os compostos at 60C em placa de aquecimento e adicionou-se a fase oleosa fase aquosa sob agitao mxima por 5 minutos. Foram feitos estudos de estabilidade tanto para o ch verde como na formulao com gua(placebo), sendo: teste de centrifugao, onde foi colocado 5 gramas de cada, em tubos de centrfuga, a velocidade de 3.000 rpm, temperatura ambiente, durante 30 minutos; stress trmico, com 5 gramas de cada formulao em tubos de ensaio colocados em banho termostatizado indo de 40C a 80C, aumentando 10C a cada 30 minutos. Foi realizado tambm teste de estabilidade durante o armazenamento, onde cada formulao foi guardada sob luz indireta temperatura ambiente 25+- 2C, refrigerao 5 +-0,5C e estufa a 40 +-0,5C, durante 14 dias. As amostras foram analisadas quanto ao pH, viscosidade e propriedades organolpticas nos tempos t0, t6, t7, t12 e t14. Para analisar a eficcia fotoprotetora e fotoestabilizadora in vitro, foi usado um espectofotometro UV-2000S, de refletncia difusa com esfera de integrao frente a proteo UVA e UVB. As amostras (1,3g/cm) foram aplicadas uniformemente sobre o substrato, na forma de um filme fino, em movimentos circulares, sobre a superfcie da placa. Cada amostra foi analisada em triplicado e no mnimo cinco registros de transmitncia foram obtidos. Aps a realizao deste, as placas, contendo as amostras, foram irradiadas por 1 hora no UV de 55W/m (dose=198 KJ/m) e os valores do FPS e comprimento de onda crtico ps- irradiao foram analisados e comparados com os valores pr-irradiao.Na metodologia das formulaes sem associao ao filtro solar, a pele das costas de 6 voluntrios foi tratada 30 minutos antes da exposio, com solues de polifenis de ch verde em diversas concentraes (0,25%-10%). Esta regio foi irradiada com um simulador solar com o dobro da dose eritematosa mnima. A rea da pele exposta foi quantificada com um cronmetro aos 24, 48 e 72 horas, tambm sendo realizadas biopsias desta pele. Comparou-se ainda, o tempo em que houve a aplicao (30 minutos antes e vrias horas antes da exposio). Os voluntrios foram submetidos tambm a radiao UVA (135J/cm em uma nica vez), realizando uma experincia paralela a esta, na qual testou-se separadamente os quatro principais tipos de polifenis do ch verde epicatequina = EC, epigalocatequina = EGC, epicatequina 3 galato = ECG, epicalocatequina 3 galato = EGCG, afim de terminar a grau de eficcia de cada componente.

CAPTULOS

1-Pele HumanaA pele que corresponde a uma rea de superfcie por volta de 1,5-2,0 m, o maior rgo do nosso corpo. Ela tem funo de barreira fsica protetora, sobre os rgos e tecidos internos em fase ao ambiente externo e seus agentes agressores. Morfologicamente composta de camadas com funes particulares, sendo a epiderme a camada mais externa e composta basicamente pelos queratincitos (90%), que so clulas de suporte estrutural, alm das clulas de Langerhans, melancitos. J a derme, camada mais interna, possui fibroblastos, clulas dendrticas, mastcitos, clulas endoteliais...Todo este conjunto epidrmico-drmico capaz de detectar as agresses externas-ambientais, fsicas(trauma), qumicas(xenobiticos), microrganismos patognicos, exposio radiao UV solar. Dando nfase a exposio da pele radiao UV solar, esta a grande responsvel por desencadear uma srie de danos pele, levando ao envelhecimento precoce(fotoenvelhecimento), rugas, hipopigmentao e hiperpigmentao, tumores benignos e cncer, principalmente o no melanoma. (GRUIJL FR., 1994, p.319-359 MUKHTAR H.,1996, p.355-447) citao indireta

2-Efeitos nocivos da radiao UVO espectro solar UV dividido em trs, com base em seus comprimentos de ondas e efeitos biolgicos, sendo os mais importantes para ns, o UVA-ondas longas(320-400nm) e que corresponde a 95% e UVB-ondas mdias(290-320nm) que corresponde a 5% do espectro UV que chega superfcie da Terra. (Baliga MS, Katiyar SK. Photobiol. Sci. 2006, p.5). citao indireta A frequente exposio da pele ao UVA pode causar fotodermatose, envelhecimento precoce e at cncer, por conta das reaes fototxicas que desencadeia. J o excesso de exposio da pele ao UVB leva queimaduras solares, vermelhido, danos ao DNA, aumenta riscos de cncer no melanoma e leses oculares, j que a pele exposta a essas radiaes sofrer uma srie de reaes, levando a formao de radicais livres (RL), espcies reativas de oxignio (ROS), que so responsveis por imunossupresso e por danificar as clulas proteicas, lipdicas e DNA das mesmas.A intensidade da radiao e o comprimento de onda da luz solar dependem de fatores tais como, condies atmosfricas, horrio de exposio, latitude, altitude, estao do ano, com exceo da radiao UVA cuja a intensidade a mesma durante todo o ano (RUSSO apud HALLIDAY, 2006 p.408-415). Segundo dados estatsticos, o nmero de casos de cncer de pele vem aumentando nos ltimos anos, provavelmente, devido combinao do aumento da expectativa de vida, maior exposio ao sol e um melhor diagnstico do cncer de pele. De acordo com uma estimativa, cerca de 3,5 milhes de cancros de pele basocelular e espinocelular so diagnosticados a cada ano nos Estados Unidos e ocorrem em cerca de 2,2 milhes de americanos, j que algumas pessoas tm mais de um. (Fonte: American Cncer Society -03/04/2015)Aqui no Brasil, segundo o Instituto Nacional de Cncer (INCA) estima para 2014 e 2015, que sejam diagnosticados 98.420 novos casos de cncer de pele nos homens e 83.710 nas mulheres.O corpo humano possui processos antioxidantes naturais que so capazes de neutralizar os radicais livres, porm quando estes so produzidos em excesso, o organismo no consegue neutraliz-los, necessitando de alimentos ou substncias com capacidade antioxidante (VARALDO, 2007). Uma das causas de produo em excesso de radicais livres a exposio da pele radiao UV. Desta forma, torna-se necessrio evit-la, principalmente em horrios de maior intensidade, usar roupas e acessrios apropriados, alm de filtros solares, e outros cosmticos com funo fotoprotetora. Neste contexto, a indstria cosmtica tem feito investimentos cada vez maiores na pesquisa de filtros solares mais eficientes quanto a sua proteo, estabilidade e sensorial mais agradvel. Estratgias de como aumentar a estabilidade e potencializar seus efeitos, tem levado pesquisa de novos ativos e principalmente bioativos, focando no uso de produtos naturais, seguros e ecologicamente corretos.

3- Papel dos bioativos na imunossupresso induzida por UVO uso de compostos orgnicos extrados de plantas tem recebido imenso interesse por sua capacidade de proteger a pele dos os efeitos biolgicos adversos resultantes da exposio radiao solar (Vavalil et al. 2003). Estes tm propriedades antioxidantes, anti-inflamatrias, imunomodulatrias e fotoquimiopreventivas. A fotoquimiopreveno um termo definido como o uso de agentes capazes de reverter os efeitos adversos da radiao UV na pele (F.GUYER et al., 2003), e esta capacidade est diretamente relacionada a estrutura destes compostos. Por isso tcnicas adequadas de extrao so necessrias para assegurar a melhor maneira de analisar seus constituintes individualmente e utilizar o mximo de suas propriedades (JACQUES et al., 2007). Tais tcnicas tambm influenciaro na biodisponibilidade e metabolismo destes fitoqumicos, sendo que os extratos vegetais devem ser padronizados com relao a quantidade e qualidade de seus princpios ativos.

4-Polifenis do ch verdeDentre o grupo dos bioativos com funes fotoprotetora e anti-inflamatrias, os polifenis do ch verde so uns dos mais estudados. fonte de vitaminas C, B1, B2, K, cido flico. Tambm chamados de catequinas se dividem em quatro tipos: epicatequina, epigalocatequina, epicatequina -3- galato e epigalocatequina-3-galato(EGCG), sendo este ltimo, o principal e mais eficaz polifenol do ch verde.

Figura 1: Principais polifenis encontrados no Ch Verde (Camellia sinensis)Extrado de: Yusuf et.al. 2007

Estes, e em especial a EGCG so capazes de impedir a penetrao da radiao UV, estimulando a proliferao dos queratincitos, reduzindo o nmero de clulas proveniente de queimadura solar (primeiro indicador de apoptose das clulas epidermais), protegendo a pele contra o stress oxidativo causado pela radiao UVB, danos a clulas de Langerhans e danos ao DNA, retardando, revertendo e controlando o risco das doenas de pele, e envelhecimento cutneo. (SCHWARZ et al. 2005, ZIEGLER et al. 1994, KATIYAR SK, 2007, p.287-296). Todas estas propriedades(antioxidantes, anti-inflamatrias, imunomoduladores, e quimiopreventivas) so devidas estrutura qumica destes polifenis que podem quelar ons metlicos e diminuir danos causados pelos radicais livres (RL), inibir a imunossupresso provocada por UVB, atravs da induo da IL-12 (citocina imunorreguladora da pele, responsvel pelo reparo do DNA) (VINK et al.1997), inibe a ativao e fosforilao de MAPK (protena quinase ativada por mitgenos) induzido por UVB (V. MUTHUSAMY, 2010, p.5-17), inibe a ao de esgotamento das enzimas antioxidantes, catalase, glutationa, peroxidase, superxido dismutase e glutationa, induzidas por UVB (S. K. KATIYAR apud F. AFAQ, 2001, p.287-294), impede a formao de subprodutos (dmeros de ciclobutano e 8-OH-dG) gerados quando h danos no DNA provocado pela radiao UVB principalmente, e que induz a imunossupresso e desencadeiam mutaes tpicas de cncer de pele (KATIYAR SK, MATSUI M.S, MUKHATAR H., 2000, p.788-793, RUNGER apud KAPPES, 2008).

Figura 2:Propriedades do ch verde na fotoproteo contra radiao UV(HSU-2005)

Vrios testes in vitro e in vivo foram realizados nas ltimas dcadas para se chegar a estas constataes, seguindo protocolos onde foram analisados os efeitos do ch verde ou tambm chamados, polifenis do green tea (GTP), uso oral (forma de soluo ou ch) e ou uso tpico, tanto em pele de ratos como em pele humana (KATIYAR S. ELMETS CA, KATIYAR SK.J.Nutr.Biochem.2007, p.18). Direcionando este trabalho para a anlise dos GTP uso tpico, em pele humana, foram analisados dois estudos metodolgicos, com o intuito de evidenciar a ao potencializadora de fotoproteo em duas apresentaes diferentes, onde em um, o ch verde associado aos filtros solares, avobenzona (FPS UVA) e octilmetoxinamato (FPS UVB), substituindo a fase externa da emulso leo em gua (O/A) pelo produto da infuso do ch verde, e em outro usado sozinho e em diferentes concentraes.No estudo com associao a filtros solares, foram comparadas as formulaes contendo ch verde, o placebo (formulao padro com gua), e o ch preto. (MARGARIDA PEREIRA et.al, 2015;(12), p.107-116- Biomed Biopharm Res). Aps a realizao dos testes de estabilidade, stress trmico, PH, viscosidade, propriedades organolpticas e armazenamento, foi comprovada a capacidade fotoestabilizadora que melhora o efeito de fotoproteo do ch verde. O grfico abaixo mostra que aps a irradiao numa cmara de fotoestabilidade, tanto a amostra com ch preto (52%), como a com o placebo (47%) tiveram uma reduo do Fator de Proteo Solar (FPS) bem maior que a amostra com ch verde (18%).

External PhaseFigura 3: Filtros solares com ch verde, ch preto e placebo (gua como fase externa), mostrando alteraes do % de queda do FPS aps a preparao

Porm com o passar dos dias (14 dias de armazenamento) e com a exposio das amostras variadas temperaturas, houve alteraes maiores na reduo do FPS, chegando-se a concluso de que a ao fotoestabilizadora ideal do ch verde ocorre a temperatura ambiente e a 5C, conforme grfico abaixo:

Figura 4: Filtros solares com ch verde e ch preto, mostrando alteraes do % de queda do FPS armazenados a temperatura ambiente, 5C e 40C

Nas formulaes em que se utilizou diferentes concentraes de soluo de polifenis do green tea (0,25%-10%), em determinada rea das costas de seis voluntrios, foi usado um simulador solar com o dobro da dose eritematosa mnima. Quantificaes do eritema realizadas em 24, 48 e 72 hs ps-exposio, e feitas bipsias da pele irradiada. Com este estudo, determinou-se a concentrao e a quantidade de tempo necessrios para se obter o efeito ideal de fotoproteo sobre a pele, que foi soluo de 10%, 30 minutos antes da irradiao. O resultado da biopsia foi reduo de 66% no nmero de clulas de queimadura solar, alm de menor migrao de clulas de Langerhans aos 4 dias ps-exposio, e uma reduo de 55% nas leses do DNA. (Journal of the American Academy of Dermatology, 44 (3): 425-432, Elmets CA, Singh D, K Tubesing, Matsui M, S Katiyar, Mukhtar H, (2001) com permisso de Elsevier). Em uma experincia paralela, foram testados os polifenis em separado, em soluo de 5%, onde os indivduos tambm foram irradiados com 135 J / cm 2 nica UVA RUV simulador solar. Apenas os EGCG e ECG foram eficazes na inibio do eritema, e isto foi atribudo ao grupamento galloyl na posio 3, reafirmando que EGCG um dos polifenis que mais contribui para os efeitos fotoprotetores de ch verde. (ELMETS, 1996 et.al.p.355-447).

5-ConclusoComo supracitado nos captulos anteriores deste estudo, evidenciou-se a importncia dos polifenis do ch verde como agente potencializador de fotoproteo cutnea, nas duas apresentaes que foram estudadas.Considerando que o cncer de pele o mais comum entre todos os tipos da doena e que a exposio crnica radiao UV fator chave desencadeante, o uso do ch verde em variadas apresentaes cosmticas um aliado importante como agente fotoprotetor. Formulaes tpicas base de cremes e emulses hidroflicas melhoram a penetrao dos extratos de ch verde, devido a suas caractersticas estruturais e as da epiderme, resultando numa maior eficincia de suas aes quimioprotetoras, antioxidantes, anti-inflamatrias e fotoprotetoras, importantes no rejuvenescimento, preveno e manuteno da sade da pele.Todavia alguns desafios ainda devem ser transpostos sem perder nenhuma de suas funes, como melhorar a penetrao e estabilidade destes ativos, alm de manter o sensorial agradvel e o apelo de produto de origem vegetal, itens importantes para atender as expectativas crescentes dos consumidores.

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