Exames laboratoriais específicos para o diagnóstico de Dengue.para o diagnóstico de Dengue.

Sônia Conceição Machado DinizEspecialista em diagnóstico laboratorial de doenças tropicais IMT/SPResponsável pelo Serviço de Virologia e Riquetsioses/FUNED

OBJETIVOS DO DIAGNÓSTICO LABORATORIAL

• Viabilizar as ações da Vigilância Epidemiológica

• Diagnóstico diferencial

• Detecção da circulação do vírus em áreas novas

• Estimativa da incidência depois das epidemias

• Confirmação dos casos suspeitos de FHD

• Caracterização das cepas e sorotipos circulantes

DENGUE

• Família Flaviviridae,

• Gênero Flavivirus

• É um arbovírus• É um arbovírus

• Transmitidos por mosquitos (Aedes)

• Composto por RNA fita simples

• Possui 4 sorotipos distintos(DENV-1, 2, 3, 4)

Etapas do exame laboratorial

Etapa Pré-analítica

Etapa Analítica

Frequência de erros*:

~ 60 a 70%

~ 20 a 30 %

Etapa Pós-analítica ~ 10 %

* Labtest

Etapa Pré-analítica

Exame clínico

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Solicitação do exame

▼▼

Preparo do paciente

▼

Obtenção da amostra

FICHA EPIDEMIOLÓGICA PREENCHIDA CORRETAMENTE

Obtenção da amostra

FASE AGUDA - SINTOMÁTICA/VIRÊMICA

Do 1º ao 5º dia do aparecimento dos primeiros sintomas presença do vírus

▼

Isolamento do vírus/Sorotipagem

NS1

PCR

Acondicionamento e transporte de amostras para isolamento viral

Obtenção da amostra

FASE CONVALESCENTE - ASSINTOMÁTICA

Presença de Ac totais à partir do 5o dia do aparecimento dos primeiros sintomas

▼

Inibição da hemaglutinação

Elisa IgM (até 60 dias)

Identificação e acondicionamento inadequado das amostras

Identificação e acondicionamento adequado das amostras

DIAGNÓSTICO

LABORATORIAL DE LABORATORIAL DE

DENGUE

Detecção do vírus Dengue

Isolamento Viral (Igarashi, 1978) Cultura de células de mosquito A.

albopictus clone C6/36

Inoculação intratoráxica de mosquitos Toxorhynchites

Imunofluorescência Indireta anticorpos Monoclonais tipo-específicos (Gubler et al., 1984)

ISOLAMENTO VIRAL

Sorologia – captura de Ac. IgM ELISA

PLACA DE ELISA

Nota de esclarecimento:

Os níveis de anticorpos da classe IgM contra o vírus Dengue alcançam seu pico dentro de duas semanas após o início dos sintomas, decaem nas semanas seguintes e podem ser detectados por no máximo 90 dias nas detectados por no máximo 90 dias nas infecções primárias ou até 30 dias nas infecções secundárias (Innis, BL. In: Dengue and Dengue Hemorrhagic Fever. DJ Gubler & G Kuno, Eds., 1997).

Valores de referênciaMac ElisaDO > 0,220 - Reação Reativa: Presença de anticorpos IgMDO < 0,180 - Reação Não Reativa: Ausência de anticorpos IgMDO 0,180 – 0,220 - Reação Indeterminada:Sorologia não conclusiva

PanbioDO/CO < 0,9 – Reação Não Reativa: Ausência de anticorpos IgMDO/CO > 1,1 – Reação Reativa: Presença de anticorpos IgMDO/CO 0,9 - 1,1 – Reação Indeterminada: Sorologia não conclusiva DO/CO 0,9 - 1,1 – Reação Indeterminada: Sorologia não conclusiva

NS1 Early Elisa - PANBIODO/CO < 0,9 – Reação Não Reativa: Antígeno NS1 não detectávelDO/CO > 1,1 – Reação Reativa: Presença de antígeno NS1DO/CO 0,9 - 1,1 – Reação Indeterminada: Sorologia não conclusiva

NS1 PLATÉLIA – BIO-RADDO/CO < 0,50 – Reação Não Reativa: Antígeno NS1 não detectável 0,50 ≤ DO/CO < 1,0 – Reação Indeterminada: Sorologia não conclusivaDO/CO ≥ 1,0 – Reação Reativa: Presença de antígeno NS1.

ESTUDO DE CASO

H.B.S, masculino, 47 anos, procedente de área endêmica. Início dos sintomas 12/03/2010 sendo eles: exantema, prostração, mialgia, náuseas/vômitos,

- petéquias, - petéquias, - prova do laço positiva,- Plaquetas 61.000.Data do óbito/coleta 15/03/2010.Ausência de coleta de amostras pós-mortem.

• Sorologia dengue Mac-ELISA = Não reativo (D.O. 0,104)

• Sorologia dengue PANBIO = Não reativo (Razão D.O./C.O: 0,806)

Análise de resultados.

• Sorologia dengue Antígeno NS1 = Reativo(Razão D.O./C.O: 5,6)

• Isolamento Viral = Positivo (Isolado Denv3)

Coleta, conservação e transporte de material para óbitos suspeitos de Dengue

• A necropsia deverá ser realizada o mais rapidamente possível após o óbito. Colher fragmentos de fígado, baço, gânglios, timo, pulmão e cérebro. Em casos de punção aspirativa, colher, preferencialmente, fragmentos de fígado e baço, usando-se agulhas longas e de grosso calibre.

• Colocar uma amostra de cada fragmento, separadamente, em recipiente estéril e armazenar em freezer -80º C para a realização de isolamento viral.

• Colocar uma outra amostra de cada fragmento, separadamente, em frasco com formalina tamponada para histopatologia, mantendo-a à temperatura ambiente.

• OBSERVAÇÃO: Solução de formalina tamponada:Solução de formol concentrado (40%) _ 100mLTampão Fosfato Salina (PBS) _ 900mL.

IMUNOHISTOQUÍMICA

Etapa Pós-analítica

Resultado▼

Avaliação do resultadoAvaliação do resultado▼

Notificação

Obrigada!virologia@funed.mg.gov.br

Serviço de Virologia e Riquetsioses (31) 3371 4448