1.MICROPROPAGAÇÃO

2.MICRO-ENXERTIA

3.RESGATE DE EMBRIÕES

4.CULTURA E FUSÃO DE PROTOPLASTOS

5.CULTURA DE CELULAS EM SUSPENSAO

6.CULTURA DE ANTERAS

TÉCNICAS DE CULTURA DE TECIDOS DE PLANTAS

Prof. Dr. Luiz Antonio BiasiDepartamento de Fitotecnia e Fitossanitarismo

Universidade Federal do Paraná

E-mail: biasi@ufpr.br

1.MICROPROPAGAÇÃO

Planta matriz Assepsia Cultivo inicial

Multiplicação Enraizamento Aclimatização

Alongamento (se necessário)

PLANTA MATRIZCondições necessárias de uma planta matriz:

-Material genético superior selecionado

-Bom estado fitossanitário (sadia)

-Bom estado nutricional

-Bom estado hídrico

ASSEPSIA

Concentração do agente germicida x tempo de exposição

Agentes germicidas:

-Etanol

-Hipoclorito de sódio e cálcio

-Fungicidas

-Antibióticos

-Clorexidina

CULTIVO INICIAL

*Condições de sucesso no isolamento:

-Fluxo de ar asséptico (Câmaras de fluxo laminar, lâmpadas UV)

-Material asséptico (Autoclave, flambagem, calor)

-Técnica e rapidez de isolamento

*Pré-incubação no escuro (evitar oxidação)

*Meio de cultura: geralmente com citocininas

*Isolamento em frascos individuais

*Problemas: Oxidação

Contaminação

Tipos de explantes:

Meristemas(0,2 a 0,5mm)

Ápices meristemáticos(0,5 a 2mm)

Segmentos nodais(5 a 15mm)

Isolamento de meristema: maracujazeiro

Isolamento de meristema: caquizeiro

MULTIPLICAÇÃO

Multiplicação: 1)Gemas axilares

2)Gemas adventíceas

Eficiência Alta taxa de multiplicação

Curto intervalo entre subcultivos

Brotações com qualidade e homogêneas

Taxa de multiplicação = Número de novos explantes

Explante inicial

Subcultivo 1)Brotações individuais inteiras

2)Micro-estacas

3)Tufos

Momento ideal do subcultivo = fase de crescimento ativo

Frascos de cultivo

BIOREATORES

ENRAIZAMENTO

Sucesso na formação adventícia de raízes:

-Competência da espécie: Herbáceas > Lenhosas

-Juvenilidade

-Qualidade das brotações

-Estímulo de forma correta (auxinas)

Formas de enraizamento:

-In vitro em brotos individuais

-Durante a fase de multiplicação

-Ex vitro

Formação de raízes adventícias:

-Indução - Dependem de auxina

-Iniciação

-Alongamento – Inibido pela auxina

Formas de indução:

-Auxinas no meio de enraizamento

-Auxinas no meio de indução e sem auxinas no meio de alongamento

-Sem auxinas

-Tratamento “pulso”

Meio de cultura: -Concentração reduzida de sais

-Carvão ativado

Tempo de permanência em dias em meio de cultura MS1/2NO3 + 10 µM de AIB

50 µM 100 µM

100 µM de AIB

ACLIMATIZAÇÃO

Fatores que a planta deve superar para sobreviver:

-Elevação do fluxo transpiratório

-Passagem para um estado apenas autotrófico

-Limitação na disponibilidade e absorção de nutrientes

-Ausência de ambiente asséptico

-Grandes variações de temperatura e intensidade luminosa

-Diferença de fotoperíodo

Ambiente para aclimatização:

-Alta umidade - câmaras de nebulização; câmaras plásticas

-Sombreamento

-Temperatura

-Substrato

Pré-tratamentos:

-Redução da concentração de sacarose

-Aumento da intensidade luminosa

-Abertura da tampa dos frascos na sala de crescimento

-Enraizamento ex vitro ou no início do enraizamento

-Toalete de raízes

BIOFÁBRICAS

Sete Lagoas-MG

Joinville-SC

Andradas-MG

Eusébio-CE

Cuiabá-MT

Astolfo Dutra-MG

Holambra-SP

Ilhéus-BA

São Cristovão-SE

BioMudaSe

Holambra-SP

Venda Nova do Imigrante-ESItajaí-SCItápolis-SP

2.MICRO-ENXERTIA

3.RESGATE DE EMBRIÕES

Melhoramento convencional

Progenitor ♀Pireno

Progenitor ♂Apireno

X

25% de apirenos

►2 gerações de 4 anos (8 anos)

► Lançamento da cultivar – 20 anos

Resgate de embriões

Progenitor ♀Apireno

Progenitor ♂Apireno

X

80% de apirenos

► 1 geração de 4 anos

► Lançamento da cultivar– 10 anos

Melhoramento de uvas sem semente (apirenas)

BRS Morena BRS Clara BRS Linda

4.CULTURA E FUSÃO DE PROTOPLASTOS

5.CULTURA DE CÉLULAS EM SUSPENSÃO

*Fonte de células para micropropagação

*Produção de protoplastos

*Transformação de plantas

*Produção de metabólitos secundários

*Conservação de recursos genéticos

6.CULTURA DE ANTERAS*Para obtenção de plantas haploides.

*Duplicação do número de cromossomas com colchicina = duplo-haploides

*Redução do tempo de melhoramento

Fonte: http://nptel.ac.in/courses/102103016/module1/lec9/3.html

Fonte: http://www.yourarticlelibrary.com/biotechnology/plant-tissues/haploid-plants-anther-culture-for-haploid-plants-explained-ith-diagram/33239/

Fonte: http://jhered.oxfordjournals.org/content/92/1/56/F1.expansion