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HPLC-RMN/ LC-RMN
1A RMN uma tcnica de espectroscopia nuclear
Matria2
Comprimento de onda ()CurtoEnergiaLongoEnergia
Espectro de Radiao Eletromagntica3C126O168S3216Grandeza fsica envolvida em RMNH11C136SpinNO POSSUE SPIN
NO APRESENTAM MOMENTO ANGULAR ASSOCIADO
NO EXIBEM PROPRIEDADES MAGNTICAS
AUSNCIA DE SINAIS DETECTVEIS POR RMN
NO SO APLICVEIS ANLISES DE RMN
4Princpio
Ncleos magneticamente ativos so expostos um campo magntico externo;Absorvem energia e saltam para nveis energticos superiores;Ao retornarem, liberam energia, que ser processada por um computador e interpretada na forma de um grfico.
5No Espectro de RMN
Campo baixoCampo altoOnda pulsadaOnda Contnua (RMN CW)RMN7RMN no Domnio de Tempo (RMN-DT)
Utilizam ms permanentes de baixo campo magntico (100 MHz), mais homogneos e estveis.Alta resoluo
Intensidade x Frequncia
Onda pulsadaPrincipal vantagem: alta razo sinal/rudo para um mesmo tempo de medida
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Interface LC-RMN interface for on-flow measuremetsInterface with valve for stopped-flow measurementsInterface with storage loops for stopped flow measurementsSolid phase extration unit for LC-SPE-RMN9
Evaporao do solventeDissoluo do composto em solvente delteradoTubo de RMN(5mm)Equipamento de RMNModo de Operao: Stopped Flow 10Modo de Operao: Continuous - Flow Pr-requisitos
Instrumentao do HPLC;Instrumentao da RMN;Sonda de fluxo contnuo;Vlvula instalada antes da sonda para registrar tanto o espectro no modo stopped-flow quanto continuous flow.Uso de solventes deuterados j na fase de separao por HPLC
11LC-RMNTcnica hifenada;Fornece informaes estruturais da molcula;Tcnica com baixa sensibilidade;Alto custo;Condies de fase reversa
Mtodos de supresso de solvente12Cuidados geraisAmostras devem ser solveis em solventes deuterados
Ex. CDCl3,DMSO-d6,MeOH-d4,MeCN-d3,acetona-d6,benzeno-d6,D2O.
Quantidade ideal de amostra
RMN de H 5-10 mg(amostras muito concentradas alargam as linhas do espectro)
Observaes:
As amostras devem ser filtradas, pois a presena de partculas insolveis pode prejudicar o ajuste de homogeneidade do campo magntico.
Transferir a soluo para um tudo de RMN de 5 mm limpo, seco e isento de trincas.
Aps a anlise, a amostra deve ser imediatamente retirada do tubo de RMN, pois ela poder ficar parcialmente impregnada em sua parede, tornando com o tempo inadequado para anlise de RMN.
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14Condies CromatogrficasColuna C18 250 mm x 4,6 mm
Fase mvel : D2O com 1% cido Triclorofluoractico 80:20 Acetonitrila
Fluxo 1 mL/min
UV 254 nm
HPLC acoplado a RMN stopped-flow
Amostra um extrato metanlico diludo em D2O
15Standard20-hydroxyecdysone2-deoxy-20-hydroxyecdysone
16Resultado Cromatogrfico
17Ecdisterides presentes no extrato de Silene otites
(A) 20-hydroxyecdysone(B) 2-deoxy-20-hydroxyecdysone (C) 2-deoxyecdysone 18Estruturas Qumicas
(A) 20-hydroxyecdysoneB) 2-deoxy-20-hydroxyecdysone (C) 2-deoxyecdysone 19Concluso Estes resultados demonstram claramente que o HPLC-RMN eficientemente utilizvel para a identificao dos ecdisterides presentes neste extrato parcialmente purificado atravs da separao realizada no HPLC deSileneotite.20RefernciasALBERT, KLAUS. Liquid chromatography-nuclear magnetic resonance spectroscopy. Jounal of Chromatography A, v. 856, p. 199-211, 1999.LUZYANIN, K.; ABRANTES, M. Ressonncia Magntica Nuclear - Ferramenta verstil em Qumica Farmacutica e Imagiologia Mdica. Qumica, v. 117, p. 25-20, 2010.PATEL, K. N.; PATEL, J. K.; PATEL, M. P. RAJPUT, G. C.; PATEL, H.Introduction to hyphenated techniques and their application in pharmacy. Pharmaceutical Methods., v. 1, n. 1, p. 2-13, 2010.SARKER, S. D.; NAHAR, L. Hyphenated Techiques. In: SARKER, S. D.; LATIF, Z.; GRAY, A.Natural Products Isolation.2. ed. Totowa, New Jersey: Humana Press Inc., 2006, p.240-244.SNYDER, L. R.; KIRKLAND, J. J.; DOLAN, J. W. Introduction Modern Liquid Chromatography. 3.ed.Hoboken, New Jersey.John Wiley & Sons, Inc., 2010, p.192-193.TOKUNAGA, T; OKAMOTO, M. Recent Progress in LC-NMR.Sumitomo Kagaku, v.2, p. 1-10 2010.WILSON, I. D.; MORGAN, E. D.; LAFONT, R.; WRIGHT, B. Hight-performance liquid chromatography coupled to nuclear magnetic resonance spectroscopy: Application to the ecdysteroids of Silene Oyite. Journal of Chromatography A, v. 799, p. 333-336, 1998.
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