CROMATOGRAFIA EM CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADACAMADA DELGADA
Leonardo Leonardo GodoiGodoi
Watson Watson BeckBeck JuniorJunior
Origem do termoOrigem do termo
Do grego: Do grego: chrom = cor *graphe = escrever
1903 1903 –– Michael Michael SemenovichSemenovich TswettTswett
MMéétodo Ftodo Fíísicosico--ququíímico demico deSeparaSeparaççãoãoIdentificaIdentificaçção (comparaão (comparaçção com padrões)ão com padrões)QuantificaQuantificaçção dos componentes de uma misturaão dos componentes de uma mistura
DistribuiDistribuiçção dos componentes entre duas ão dos componentes entre duas fasesfases
Fase estacionFase estacionáária (FE) ria (FE) –– contcontéém o adsorventem o adsorventeFase mFase móóvel (FM) vel (FM) –– contcontéém o solventem o solvente
A TA Téécnicacnica
A TA Téécnicacnica
GGáás s –– SSóólidolido
GGáás s –– LLííquidoquido
LLííquido quido –– SSóólidolido
LLííquido quido –– LLííquidoquido
FE FE ssóólidolidoFM FM ggááss
FE FE llííquido não volquido não voláátiltilFM FM ggááss
FE FE ssóólidolidoFM FM llííquidoquido
FE FE llííquidoquidoFM FM llííquidoquido
ClassificaClassificaççãoão
TiposTipos
Fase NormalFase NormalPolaridade: FE > FMPolaridade: FE > FMFE utilizada: SFE utilizada: Síílica Glica G
Fase reversaFase reversaPolaridade: FE < FMPolaridade: FE < FMFE utilizada: SFE utilizada: Síílica Clica C1818
Uma outra classificaUma outra classificaççãoão
< polaridade
> polaridade
> polaridade
< polaridade
Cromatografia em camada Cromatografia em camada DelgadaDelgada -- CCDCCD
1938 1938 –– IzmailovIzmailov e e ShraiberShraiber
ApApóós 1960 s 1960 –– maior utilizamaior utilizaççãoão
LLííquido quido –– ssóólidolido
SeparaSeparaçção de misturasão de misturasAnAnáálise qualitativalise qualitativa
MigraMigraçção diferencialão diferencialDiferenDiferençça de afinidade dos compostos pela FEa de afinidade dos compostos pela FE
Fundamentado no fenômeno de Fundamentado no fenômeno de adsoradsorççãoão
CCDCCD
IdentificaIdentificaçção de compostos orgânicos com p. f. ão de compostos orgânicos com p. f. prpróóximosximosEstudos preliminares da complexidade dos Estudos preliminares da complexidade dos componentes de um extrato orgânicocomponentes de um extrato orgânicoInvestigaInvestigaçção de ão de
casos de envenenamentocasos de envenenamentoIngestão de estimulantes por atletasIngestão de estimulantes por atletas
Estudos de reaEstudos de reaççõesõesPresenPresençça de intermedia de intermediáários estrios estááveisveis
AnAnáálise da pureza de compostoslise da pureza de compostosAnAnáálise da eficiência delise da eficiência de
DestilaDestilaççõesõesCristalizaCristalizaççõesões
AplicaAplicaççõesões
VantagensVantagens
Uso de pequenas quantidades do analitoUso de pequenas quantidades do analito
FFáácil compreensãocil compreensão
FFáácil execucil execuççãoão
RapidezRapidez
VersatilidadeVersatilidade
Boa resoluBoa resoluçção (distância mão (distância míínima entre 2 nima entre 2 manmancchashas))
Baixo custoBaixo custo
CCDCCD
AcAcúúmulo de uma substância (mulo de uma substância (adsorvatoadsorvato) ) sobre a superfsobre a superfíície de outra (adsorvente)cie de outra (adsorvente)
AdsorAdsorçção fão fíísica (sica (vanvan der der WaalsWaals, dipolo, dipolo--dipolodipolo, lig. de H), lig. de H)AdsorAdsorçção quão quíímica (ligamica (ligaçções quões quíímicas)micas)
AdsorAdsorççãoão
≠
Adsorção Absorção
Atuam como FEAtuam como FE
Atividade varia em funAtividade varia em funçção do teor de ão do teor de ááguagua
AtivaAtivaçção por altas temperaturasão por altas temperaturas
ExemplosExemplosSSíílica (Slica (SiiOO22))Alumina (AlAlumina (Al22OO33))Terra diatomTerra diatomááceaceaCeluloseCelulosePoliamidaPoliamida
AdsorventesAdsorventes
Mais utilizado em CCDMais utilizado em CCDSSóólido branco e amorfolido branco e amorfoAtivaAtivaççãoão
10105 a 110 5 a 110 ººC por 30C por 30--60 min60 min
Diversos tiposDiversos tipos (Merck(Merck))G G –– contcontéém aglutinantesm aglutinantesH H –– não contnão contéém aglutinantesm aglutinantesP P –– uso em camada preparativauso em camada preparativaF F –– com substâncias fluorescentescom substâncias fluorescentesR R –– extra puro (sem aditivos)extra puro (sem aditivos)
PreparaPreparaççãoão30g em 6030g em 60--70 mL de H70 mL de H22O = 5 placas de 20 x 20 x 0,03 cmO = 5 placas de 20 x 20 x 0,03 cm
SSíílicalica
CuidadoCuidadoSua asSua aspirapiraççãoão pode pode causacausarr SILICOSE!SILICOSE!
Segundo mais utilizado em CCDSegundo mais utilizado em CCDPode apresentar caracterPode apresentar caracteríísticassticas
ÁÁcidascidasBBáásicas (mais comum)sicas (mais comum)NeutraNeutra
Pode catalisar reaPode catalisar reaçções diversas orgânicasões diversas orgânicasAtivaAtivaçção: 105ão: 105--110 110 ººC por 30C por 30--60 min60 minDiversos tiposDiversos tipos
E E –– superfsuperfíície especcie especíífica de 120fica de 120--180 m180 m22.g.g--11
T T –– superfsuperfíície especcie especíífica de 60fica de 60--90 m90 m22.g.g--11
PreparaPreparaççãoão30 g em 40 mL de H30 g em 40 mL de H22O = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cmO = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm))
AluminaAlumina
Menos adsorvente que a sMenos adsorvente que a síílica e a aluminalica e a aluminaMenor poder de resoluMenor poder de resoluççãoão
Pode Pode ser misturado a sser misturado a síílicalicaDiminuiDiminuiçção do poder adsorventeão do poder adsorvente
TiposTiposCom aglutinantesCom aglutinantesSem aglutinantesSem aglutinantes
Utilizada em cromatografia por partiUtilizada em cromatografia por partiççãoão
AtivaAtivaçção: 105ão: 105--110 110 ººC por 30C por 30--60 min60 min
Terra DiatomTerra Diatomááceacea
Cromatografia por partiCromatografia por partiçção ou troca iônicaão ou troca iônica
TiposTiposPEI PEI –– celulose (nucleotcelulose (nucleotíídeos e nucleosdeos e nucleosíídeos)deos)CM CM –– celulose (protecelulose (proteíínas)nas)DEAE DEAE –– celulose (protecelulose (proteíínas e nas e áácidos nuclcidos nuclééicos)icos)ECTEOLAECTEOLA--celulose (protecelulose (proteíínas e nas e áácidos nuclcidos nuclééicos)icos)Microcristalina (cromatografia em papel)Microcristalina (cromatografia em papel)
PreparaPreparaççãoão25 g em 90 mL de H25 g em 90 mL de H22O = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cmO = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm))
CeluloseCelulose
SeparaSeparaçção de fenão de fenóóis e is e ÁÁcidos Carboxcidos Carboxíílicoslicos
LigaLigaçções de hidrogênio com o analitoões de hidrogênio com o analito
Baixa aderência ao vidroBaixa aderência ao vidroDificuldade de preparaDificuldade de preparaçção das placasão das placas
TiposTipos11 11 –– áácido poliaminoundecancido poliaminoundecanóóico (Nylon 11)ico (Nylon 11)6 6 –– aminopolicaprolactama (Perlon)aminopolicaprolactama (Perlon)
PreparaPreparaççãoão15 g em 60 mL de metanol = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm15 g em 60 mL de metanol = 5 placas (20 x 20 x 0,03 cm))
PoliamidaPoliamida
Escolha da fase EstacionEscolha da fase Estacionááriaria
PreparaPreparaçção das placasão das placas
AtivaAtivaçção das placasão das placas
SeleSeleçção da fase mão da fase móóvelvel
AplicaAplicaçção das amostrasão das amostras
PreparaPreparaçção da cubaão da cuba
Desenvolvimento da tDesenvolvimento da téécnicacnica
RevelaRevelaçção do ão do cromatogramacromatograma
CCáálculo do fator de retenlculo do fator de retençção (ão (RRff))
Etapas da tEtapas da téécnicacnica
Liofilicidade e liofobicidadeLiofilicidade e liofobicidadeInteraInteraçção com os componentes (polaridade)ão com os componentes (polaridade)
Necessidade de aditivosNecessidade de aditivosAglutinantesAglutinantesSubstâncias fluorescentesSubstâncias fluorescentes
Capacidade adsorvedoraCapacidade adsorvedora
Escolha da fase estacionEscolha da fase estacionááriaria
Limpeza da placa (facilitar aderência)Retirada de compostos gordurosos
DeposiçãoImersão da placa em uma suspensão do adsorventeUtilização de espalhadores (uniformidade)
Secagem ao ar livre ou em uma estufa.
DificuldadesObtenção de solução com viscosidade adequada
Placas prPlacas préé--fabricadasfabricadasMais uniformes e homogêneasMais uniformes e homogêneasMaior reprodutibilidade do RMaior reprodutibilidade do Rff
PreparaPreparaçção das placasão das placas
EspalhadoresEspalhadores
PreparaPreparaçção das placasão das placas
Riscar as placasRiscar as placas
Determinar altura deDeterminar altura deInInííciocioFim da cromatografiaFim da cromatografia
PreparaPreparaçção das placasão das placas
FinalidadeRetirar substâncias interferentesEliminar H2O
MétodoVaria de um adsorvente para outroPara a sílica e alumina, estufa a 105-110 ºC por 30-60 min.Para celulose, 105 ºC por 10 min.
AtivaAtivaçção das placasão das placas
Dela depende Dela depende a eficiênciaa eficiênciaa resolua resoluçção do ensaio cromatogrão do ensaio cromatográáficofico
CompetiCompetiçção entre amostra e solvente pela ão entre amostra e solvente pela superfsuperfíície da FEcie da FE
Natureza quNatureza quíímica do compostomica do compostoPolaridade da fase mPolaridade da fase móóvelvel
Pode ser utilizado uma mistura de solventesPode ser utilizado uma mistura de solventes
SeleSeleçção da fase mão da fase móóvelvel
MMéétodo de seletodo de seleççãoão
SeleSeleçção da fase mão da fase móóvelvel
SoluSoluçções ões 0,10,1--1%, dependendo da sensibilidade do revelador1%, dependendo da sensibilidade do reveladorSolvente volSolvente voláátiltil
AplicadorAplicadorMicropipetasMicropipetasSeringasSeringasCapilares de vidro (pouca precisão)Capilares de vidro (pouca precisão)
Gotas Gotas Aplicadas a uma distância d da borda inferiorAplicadas a uma distância d da borda inferiord > altura atingida pelo solvente na cubad > altura atingida pelo solvente na cuba~ 1,0 cm entre as gotas~ 1,0 cm entre as gotasAlinhamento horizontal uniformeAlinhamento horizontal uniforme
AplicaAplicaçção das amostrasão das amostras
AplicaAplicaçção das amostrasão das amostras
Cuba de vidroCuba de vidro com fundo planocom fundo plano
SaturaSaturaçção da cubaão da cuba1,5 cm de altura da FM1,5 cm de altura da FMPapel de filtroPapel de filtroFechamento hermFechamento hermééticotico
ColocaColocaçção da placa ão da placa na cubana cubaRRáápida pida (evitar evapora(evitar evaporaçção)ão)VerticalVertical
PreparaPreparaçção da cubaão da cuba
EluiEluiççãoãoPProcessorocesso de de dessordessorççãoão que ocorre que ocorre devido a um fluxo de ldevido a um fluxo de lííquido atravquido atravéés de s de um um adsorventeadsorvente. .
AscenAscençção da FM por capilaridadeão da FM por capilaridade
TTéérmino: solvente atinge rmino: solvente atinge uma altura uma altura estabelecida (antes de chegar estabelecida (antes de chegar àà parte parte superior da placasuperior da placa))..
Desenvolvimento da tDesenvolvimento da téécnicacnica
Tornar visTornar visííveis as substâncias incolores veis as substâncias incolores presentes na amostrapresentes na amostra
Nem sempre Nem sempre éé necessnecessááriorio
Formas de visualizaFormas de visualizaççãoãoFFíísicasicaQuQuíímicamicaBiolBiolóógicagica
RevelaRevelaçção do cromatogramaão do cromatograma
ExposiExposiçção ão àà radiaradiaçção ão U.V.U.V. para compostos para compostos fluorescentes.fluorescentes.
CromCromóóforosforosEx: clorofila.Ex: clorofila.
FFíísicasica
Agentes cromogênicosAgentes cromogênicosBorrifaBorrifaççãoãoAdsorAdsorçção sobre o composto, tornandoão sobre o composto, tornando--o coloridoo colorido
Exemplos de agentes cromogênicosExemplos de agentes cromogênicosAlcalAlcalóóides: ides: DragendorffDragendorff, , iodoplatinatoiodoplatinatoAntiAnti--oxidantes: oxidantes: ββ--carotenocarotenoFlavonFlavonóóidesides: NP: NP--PEGPEGSaponinasSaponinas, terpenos e , terpenos e esteresteróóidesides: : anisaldeanisaldeíídodosulfsulfúúricoricoFenFenóólicos, licos, saponinassaponinas e e terpenterpenóóidesides: vapor de iodo e : vapor de iodo e solusoluçção de ão de CeSOCeSO44Compostos fenCompostos fenóólicos: FeCllicos: FeCl33
QuQuíímicamica
QuQuíímicamica
UtilizaUtiliza--se rease reaçções enzimões enzimááticas ticas ou bacterianasou bacterianas
ExemploExemplosubstância antisubstância anti--ffúúngicangica
BiolBiolóógicagica
RelaRelaçção entre velocidades de deslocamentoão entre velocidades de deslocamentoDo analitoDo analitoDa fase mDa fase móóvelvel
Razão entreRazão entreDeslocamento do analito (dDeslocamento do analito (dRR))Deslocamento da fase mDeslocamento da fase móóvel (dvel (dMM))
Rf= vR / vM = dR/dM
Fator de RetenFator de Retençção (Rão (Rff))
dR1
dR2
dM
Fator de RetenFator de Retençção (ão (RRff))
EficiênciaEficiêncian = 16 (dr n = 16 (dr –– WsWs))22
ResoluResoluççãoãoRsRs = 2(dr= 2(dr11 –– drdr22) / (Ws) / (Ws11 + Ws+ Ws22))
Eficiência e resoluEficiência e resoluççãoão
FatoresFatoresInsolubilidade na FMInsolubilidade na FM
Forte adsorForte adsorçção na FEão na FE
Quantidade de amostra aplicadaQuantidade de amostra aplicada
VedaVedaçção da cubaão da cuba
VariaVariaçção de temperatura (< 5 ão de temperatura (< 5 ººC)C)
Alinhamento do ponto de aplicaAlinhamento do ponto de aplicaçção da amostraão da amostra
Falta de ReprodutibilidadeFalta de Reprodutibilidade
CCD aperfeiCCD aperfeiççoadaoadaParâmetros controladosParâmetros controlados+ R+ Ráápidapida+ Eficiente+ Eficiente+ Sens+ Sensíívelvel
AplicaAplicaçções ões qualitativaqualitativaquantitativaquantitativa
CCD de Alta EficiênciaCCD de Alta Eficiência
ParâmetroParâmetro CCDCCD CCDAECCDAETamanho usual da placaTamanho usual da placa 20 x 20 20 x 20 cmcm 10 x 10 10 x 10 cmcm
Volume aplicado da amostraVolume aplicado da amostra 11--5 5 μμLL 0,10,1--0,2 0,2 μμLL
NNúúmero de amostras por placamero de amostras por placa 77--1010 1010--2020
Diâmetro da manchaDiâmetro da mancha 33--6 6 mmmm 1 1 mmmm
Distância de migraDistância de migraçção do solventeão do solvente 1010--15 15 cmcm 33--6 6 cmcm
Tempo de corridaTempo de corrida 3030--200 200 minmin 33--20 20 minmin
Diâmetro mDiâmetro méédio da partdio da partíícula de scula de síílicalica 20 20 μμmm 2 2 μμmm
Limites de detecLimites de detecççãoão
Por absorPor absorçção de luzão de luz ~ 5 ~ 5 ngng ~ 0,5 ~ 0,5 ngng
Por fluorescênciaPor fluorescência ~ 0.1 ~ 0.1 ngng ~ 0.01 ~ 0.01 ngng
CCD x CCDAECCD x CCDAE
SubstânciaSubstância DensidadDensidadee((gg//mLmL))
p.fp.f((ººC)C)
p.ep.e..((ººC)C)
M.MM.M(g/(g/molmol))
FFóórmularmulamolecularmolecular
ToxicidadeToxicidade
EtanolEtanol 0,7890,789 --114,1114,1 78,478,4 46,0746,07 CC22HH55OHOH Causa nCausa nááusea, vômito e usea, vômito e depressãodepressão
ÁÁcido accido acééticotico 1,0491,049 16,716,7 118118 60,0560,05 CC22HH44OO22 Se ingerido causa vômito, Se ingerido causa vômito, diarrdiarrééia e colapso circulatia e colapso circulatóóriorio
DiclorometanoDiclorometano 1,3261,326 --2525 39,7539,75 84,9384,93 CHCH22ClCl22 Causa fadiga, nCausa fadiga, nááusea, irritausea, irritaçção ão nos olhos e cabenos olhos e cabeççaa
1,2 1,2 --dicloroetanodicloroetano 1,2571,257 --4040 8383--8484 98,9698,96 CC22HH44ClCl22 Depressão do sistema nervoso Depressão do sistema nervoso centralcentral
AspirinaAspirina 1,401,40 135135 -- 180,16180,16 CC99HH88OO44 NNááusea, vomito e irritausea, vomito e irritaççãoão
AcetaminofenolAcetaminofenol 1,2931,293 170,5170,5 -- 151,16151,16 CC88HH99NONO22 [Anti[Anti--ttéérmico]rmico]
CafeCafeíínana 1,231,23 238238 -- 194,19194,19 CC88HH1010NN44OO22 Estimulante do sistema nervoso Estimulante do sistema nervoso centralcentral
Acetato de EtilaAcetato de Etila 0,9020,902 --8383 7777 88,1088,10 CC44HH88OO22 IrritaIrritaçção nos olhos, pele, nariz ão nos olhos, pele, nariz e garganta.e garganta.
ÁÁcido cido AcetilsalicAcetilsalicíílicolico
-- 152152 -- 300,26300,26 CC1616HH1212OO66 [Anti[Anti--ttéérmico]rmico]
MetanolMetanol 0,78660,7866 --97,897,8 64,764,7 32,0432,04 CHCH44OO Dermatite, dor de cabeDermatite, dor de cabeçça, a, nnááusea, vômitos, anorexiausea, vômitos, anorexia
Constantes fConstantes fíísicassicas
FluxogramaFluxograma
COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. IntroduCOLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. Introduçção a ão a mméétodos cromatogrtodos cromatográáficos. 7ficos. 7ªª ed, 1997ed, 1997
BREWSTER, R.Q. Curso prBREWSTER, R.Q. Curso práático de qutico de quíímica mica orgânica. 2orgânica. 2ªª ed, 1970.ed, 1970.
FESSENDEN, R.J. OrganicFESSENDEN, R.J. Organic LaboratoryLaboratoryTechniques. 2Techniques. 2ªª ed, 1993.ed, 1993.
PAVIA, D.L. OrganicPAVIA, D.L. Organic LaboratoryLaboratory Techniques. Techniques. 11ªª ed, 1998.ed, 1998.
BibliografiaBibliografia
Marquinhoooooos (modelo fotogrMarquinhoooooos (modelo fotográáfico)fico)
Daniara (pelo TOUR pela Dep. Orgânica)Daniara (pelo TOUR pela Dep. Orgânica)
Pipoca (fotPipoca (fotóógrafo improvisado)grafo improvisado)
FlFláávia e Mônica (pelo modelo de apresentavia e Mônica (pelo modelo de apresentaçção)ão)
BBóóris (por agris (por agüüentar nosso mauentar nosso mau--humor)humor)
Vocês (pela paciência e atenVocês (pela paciência e atençção)ão)
AgradecimentosAgradecimentos
FIMFIM
Finalmente acabou
Substância Densidade (g/mL)
p.f (ºC)
p.e. (ºC)
M.M (g/mol)
Fórmula molecular
Toxicidade
Etanol 0,789 -114,1 78,4 46,07 C2H5OH Causa náusea, vômito e depressão
Ácido acético 1,049 16,7 118 60,05 C2H4O2 Se ingerido causa vômito, diarréia e colapso
circulatório Diclorometano 1,326 -25 39,75 84,93 CH2Cl2 Causa fadiga, náusea,
irritação nos olhos e cabeça1,2 -dicloroetano 1,257 -40 83-84 98,96 C2H4Cl2 Depressão do sistema
nervoso central Aspirina 1,40 135 - 180,16 C9H8O4 Náusea, vomito e irritação
Acetaminofenol 1,293 170,5 - 151,16 C8H9NO2 [Anti-térmico]
Cafeína 1,23 238 - 194,19 C8H10N4O2 Estimulante do sistema nervoso central
Acetato de Etila 0,902 -83 77 88,10 C4H8O2 Irritação nos olhos, pele, nariz e garganta.
Ácido Acetilsalicílico - 152 - 300,26 C16H12O6 [Anti-térmico]
Metanol 0,7866 -97,8 64,7 32,04 CH4O Dermatite, dor de cabeça, náusea, vômitos, anorexia
FLUXOGRAMA 1) Colocar em uma cuba cromatográfica até atingir 1,5 cm de altura.
2) Colocar uma folha de papel de filtro da altura da cuba .
3) Enquanto a cuba vai saturando
Cuba com o solvente (fase móvel)
Cuba saturada
1,2- diclorometano e ácido acético (12:1) (fase móvel)
4) Preparar separadamente soluções-padrão (cafeína, ácido acetil salicílico e acetominofen) em tubos de ensaio, dissolvendo 0,1g de cada em 5,0mL de mistura de etanol/diclorometano (1:1).
5) Aquecer rapidamente em banho-maria (evitando a perda de solventes).
6) Pipetar 1 ml de cada solução-padrão p/ o mesmo tubo de ensaio.
7)Agitar bem e homogeneizar a solução e, assim, obter a mistura de referência
Cafeína, acetominofen e Ácido acetil salicílico
(soluções padronizadas)
11) ativar a placa de sílica para retirar toda a água da placa ativando-a em uma estufa.
12) Preparar a placa com sílica, riscando-a em 4 colunas (com espessura de 1,0 cm) p/ aplicação das soluções-padrão e da mistura de referência (cafeína, ac. acet. salicílico e acetominofen).
8) Triturar um comprimido de cada um dos analgésicos a serem analisados e transferir p/3 béqueres de 10 mL.
9) Adicionar 5 ml de solução a cada béquer
de (etanol/diclorometano 1:1) 10)Aquecer rapidamente em banho-maria. p/ evitar evaporar a mistura de solventes
Placa de vidro (com sílica)
Análise de analgésicos (3 comprimidos)
3 comprimidos triturados
Mistura de referência
Comprimidos solubilizados
13) Aplicar c/ um capilar cada
solução no centro de cada coluna a 2,0 cm da base sem furar a silica.
14) Aplicar a solução de referência e as 3 frações de analgésico.
15) Colocar dentro da cuba cromatográfica e esperar até que toda fase móvel atinja o limite pré-estabelecido.
16) Não deixar a cuba saturada muito tempo aberta para não evaporar o solvente. 17) Aguardar a evaporação do solvente e com o auxílio da luz ultravioleta, marcar c/ um riscador (lápis).
Placa de sílica ( ativada)
Placa com o resultado Cromatograma)
Placa úmida com solvente
Placa com as soluções aplicadas
18) Medir a distância dos centros de massa das manchas até a origem e determinar o R.f..
19) Determinar a composição de cada analgésico.
Método 2
1) Reagentes e soluções Padrão: - Solução de acido acetilsalicílico, preparada em metanol a 2%. - Solução de acetaminofen preparada em metanol a 2%. - Solução de cafeína preparada em água a 2%. - Fase estacionária: Placa de sílica gel G, com espessura de 0,25 mm. - Fase móvel: acetato de etila: hidróxido de amônia:água 10:0,25:0,25.
Reveladores: a) Solução aquosa de FeCl3 a 10%. b) Solução de Dragendorff: Solução A: 0,17 g de subnitrato de bismuto + 2mL de ácidoacético + 8 mL de água. Solução B: 4 g de KI em 10 ml de água. Solução de uso: 0,5 mL da solução A + 0,5 mL da solução B + 2 mL de ácido acético + 10 m\l de água.
2) Procedimentos:
a) Preparação da amostra: Triturar um comprimido e pesar 0,1g. Transferir esta quantidade para um tubo de ensaio e adicionar 0,5 mL de metanol. Agitar vigorosamente por 01 minuto. Centrifugar 05 minutos. Transferir o sobrenadante para um tubo limpo.
b) Análise cromatográfica: - Ativar a placa de sílica a 110°C durante 10 minutos. Dividir a placa em 04 colunas. A seguir aplicar, com o auxilio de capilares, as soluções dos padrões e da amostra. - Preparar a fase móvel e transferir para uma cuba cromatográfica (saturar a cuba). - Desenvolver o cromatograma.
- Retirar a placa da cuba, secar com secador de cabelos, revelar com solução de cloreto férrico e aquecer a 110°C por 10 minutos. - Marcar a posição das manchas reveladas e a seguir, revelar com solução de Dragendorff. - Com base nos valores de Rf e nas cores das manchas, identificar os fármacos presentes nos comprimidos analgésicos.
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