UREASE RELATORIO

8/11/2019 UREASE RELATORIO

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INSTITUTO FEDERAL DE ENSINO, CINCIA E TECNOLOGIA DO PIAU

DEPARTAMENTO DE FORMAO DE PROFESSORES, LETRAS E CINCIAS

CURSO SUPERIOR DE LICENCIATURA EM QUMICA

MDULO: VII

DISCIPLINA: BIOQUMICA

PROFESSOR: DR. JOAQUIM SOARES DA COSTA JNIOR

TESTE COM ENZIMA, PROPRIEDADES DA UREASE

VALTER OLIVEIRA SOUSA

TERESINA, MAIO DE 2014


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RESUMO

Nesse experimento foi realizado 5 testes, sendo que os mesmos mostraram as

propriedades da Urease, que hidrolisa a uria em CO2 e 2NH3.

1. INTRODUO

As enzimas so um grupo de substncias orgnicas de natureza normalmente

protica (existem tambm enzimas constitudas de RNA, as ribozimas), com atividade

intra ou extracelular que tm funes catalisadoras, catalisando reaes qumicas que,

sem a sua presena, dificilmente aconteceriam. Isso conseguido atravs do

abaixamento da energia de ativao necessria para que se d uma reao qumica,

resultando no aumento da velocidade da reao e possibilitando o metabolismo dosseres vivos. A capacidade cataltica das enzimas torna-as adequadas para aplicaes

industriais, como na indstria farmacutica ou na alimentar. Praticamente todas as

reaes no organismo so mediadas por enzimas sem sofrerem alteraes no processo

global. Dentre as muitas reaes biolgicas energeticamente possveis, de forma

seletiva, as enzimas canalizam reagentes (os substratos) para rotas teis. Logo as

enzimas comandam todos os eventos metablicos (CHAMPE, 2006).

Em sistemas vivos, a maioria das reaes bioqumicas d-se em vias metablicas,

que so sequncias de reaes em que o produto de uma reao utilizado como

reagente na reao seguinte. Diferentes enzimas catalisam diferentes passos de vias

metablicas, agindo de forma concertada de modo a no interromper o fluxo nessas

vias. Cada enzima pode sofrer regulao da sua atividade, aumentando-a, diminuindo-a

ou mesmo interrompendo-a, de modo a modular o fluxo da via metablica em que se

insere. O ramo da Bioqumica que trata do estudo das reaes enzimticas a

Enzimologia. (VOET, 2006).

As enzimas convertem uma substncia, chamada de substrato, em outra

denominada produto, e so extremamente especficas para a reao que catalisam. Isso

significa que, em geral, uma enzima catalisa um e s um tipo de reao qumica.

Consequentemente, o tipo de enzimas encontradas numa clula determina o tipo de

metabolismo que a clula efetua. O aceleramento da reao pode ser da ordem dos

milhes de vezes: por exemplo, a enzima orotidina-5-fosfato descarboxilase diminui o

tempo da reao por ela catalisada de 78 milhes de anos para 25 milissegundos. Como

so catalisadores, as enzimas no so consumidas na reao e no alteram o equilbrio


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qumico dela. A atividade enzimtica pode depender da presena de determinadas

molculas, genericamente chamadas cofatores. A natureza qumica dos cofatores

muito varivel, podendo ser, por exemplo, um ou mais ons metlicos (Fe), ou uma

molcula orgnica (como a vitamina B12). Estes cofatores podem participar ou no

diretamente na reao enzimtica (DIAS DE SOUZA)

A urase uma enzima que catalisa a hidrlise da uria em dixido de carbono e

amnia. A reao a seguinte:

(NH2)2CO + H2O CO2 + 2NH3

Em 1926 James Summer mostrou que a urase era uma protena. A urase pode

ser encontrada em bactrias, leveduras e vrias plantas superiores. At 1926, James

Summer cristalizou a urease de feijo-soja, a qual catalisa a hidrlise de uria e forma

NH3 e CO2, e demonstrou que tais cristais eram constitudos de protenas. Desde ento,

os estudos em Enzimologia tm amplamente demonstrado que as enzimas em sua

maioria so protenas. (VOET, 2006).

Objetivo:Reconhecer as propriedades da urase e confirmar como a mesma atua

sobre a uria, sua identificao com o biureto, desnaturao e especificidade.

2. MATERIAIS E MTODOS

MATERIAIS

Tubos de ensaio;

Pipetas graduadas;

Banho-maria;

gua destilada;

Soluo de Urase;

Soluo de Biureto; Soluo de Uria 0.4 M pH 7.0;

Soluo de Tiouria 0.4 M pH 7.0;

Soluo de HgCl25%.

MTODO

Reao da urease com o Biureto

Prepararam-se os tubos seguintes:

Tubo A: 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de soluo de ureaseTubo B: 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de gua destilada


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Teste da atividade

Prepararam-se os seguinte tubos:

Tubo A: 1 mL do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0 contendo o indicador

vermelho de fenol) + 3 gotas da soluo de urease

Tubo B: 1 mL do substrato + 3 gotas de gua destilada. Misturou-se Aguardou-se cerca

de 2 min.

Teste da especificidade

Colocou-se em um tubo de ensaio, 1 mL da soluo de tiouria 0,4 M pH 7,0

(contendo vermelho de fenol como indicador) + 3 gotas da soluo de urease. Misturou-

se e aguardou-se 2 min.

Desnaturao pelo calor

Colocou-se num tubo de ensaio 1 mL de gua destilada + 3 gotas da soluo de

urease. Ferver usando a chama do bico de Bunsen, durante 2 minutos. Adicionou-se em

outro tubo de ensaio 1 mL da soluo do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0

contendo o indicador vermelho de fenol) e acrescentar 0,5 mL da soluo de urease

fervida. Misturou-se e aguardou-se 2 min.

Inibio por sais de mercrio

Prepararam-se os seguintes tubos:

Tubo A: 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada

Tubo B: 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada + 5 gotas da soluo de

cloreto de mercrio 5 %. Misturou-se e adicionou-se 1 mL do substrato (sol. de uria

0,4 M pH 7,0 contendo o indicador vermelho de fenol) a cada um dos tubos.

3. RESULTADOS E DISCUSSO

Reao da urease com o Biureto

No presente teste foi possvel se verificar que no tubo A aconteceu uma reao,

onde se pde notar a presena de uma colorao violeta. Isso aconteceu porque a urease

constituda de aminocidos, que formam protenas. Sendo assim, aconteceu a

formao de complexos de Cu2+ pois as mesmas reagiram com o sulfato de cobre.


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Teste da atividade

Nesse teste foi possvel observar uma colorao amarelada, isso aconteceu porque

houve hidrlise da uria catalisada pela urease em pH 7.0. A reao que aconteceu

apresentada a seguir:

(NH2)2CO + H2O CO2 + 2NH3

Teste da especificidade

Em relao ao teste de especificidade, observou-se que o tubo que tinha a tiouria

apresentou uma cor rsea. Notou-se que no aconteceu reao porque a urease

especifica para a uria e, dessa forma, no houve a quebra das ligaes de enxofre,

conforme se pode verificar abaixo com a reao:

C(NH2)2S + H2O No aconteceu

Desnaturao pelo calor

Atravs desse teste, foi possvel observar que quando a urase aquecida em

banho-maria, a mesma tem suas cadeias de peptdeos desnaturadas.

Inibio por sais de mercrio

Nesse teste, verificou-se que a inibio da atividade de enzimas ocasionada por

sais de mercrio ocorreu na forma de complexo. Isso porque o mercrio ligou-se aos

grupos sulfidrilicos, que so como o centro ativo da enzima urase. Dessa forma,

tornou-a inativa. O tubo com gotas de HgCl2ficou turvo com suspenso possivelmente

contendo HgS2.A equao que se segue procura mostrar a reao que aconteceu:

2 SH-+ HgCl2 HgS2+ HCl

4. CONCLUSO

Nesta prtica, os cinco testes realizados, mostraram que a urease apresentaalgumas propriedades, e uma dessas propriedades hidrolisar a uria em CO 2e 2NH3.

Tendo em vista que toda enzima tem sua especificidade, testou-se a urase com

derivados de uria (tiouria).Pode-se concluir que enzimas possuem ao completa na

presena do substrato especifico. Neste experimento, a urease (Enzima) e a uria

(substrato). Pde-se notar que a enzima em considerao constituda de cadeias de

peptdeos (protenas) e que esta sofreu desnaturao quando foi aquecida, bem como se

tornou inativa na reao com HgCl2.


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5. REFERNCIAS

CHAMPE, P. C., HARVEY, R. A.Bioqumica Ilustrada. 2. Ed. Porto Alegre: ArtesMdicas, 2006.

DIAS DE SOUZA, Karina A. Freitas, NEVES, Valdir A.Experimentos de Bioqumica,um guia eletrnico. Disponvel em:. So Paulo:UNESP, 2009.

VOET, D., VOET, J. G.Fundamentos de Bioqumica. 3. Ed. Porto Alegre: Artmed,2006.

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