Os adipócitos: como funcionam as células que acumulam gordura?
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Ana Rita Alter Mónica Ferreira Grupo: Alexandra Gonçalves, Joana Salgado, Patrícia Marques, Vera Cortez e Cláudia Cavadas
Transcript of Os adipócitos: como funcionam as células que acumulam gordura?
Ana Rita Alter
Mónica Ferreira
Grupo: Alexandra Gonçalves, Joana
Salgado, Patrícia Marques, Vera
Cortez e Cláudia Cavadas
Introdução
Adipócitos: são células que armazenam lípidos e
regulam a temperatura corporal.
Os adipócitos brancos, quando
totalmente desenvolvidos, ou seja,
maduros, armazenam gordura
numa única e grande gota lipídica
que ocupa o centro da célula. A
função destes adipócitos é:
•fornecer proteção mecânica,
suavizando o impacto de choques,
•isolante térmico
•segregar hormonas. Os adipócitos castanhos têm como principal característica regular a produção de calor e consequentemente a temperatura corporal. Ao contrário do adipócito branco, o adipócito castanho é menor, possui várias gotículas de triglicerídeos de diferentes tamanhos, citoplasma relativamente abundante e numerosas mitocôndrias.
Adipócito maduro
capacidade
de acumular
gotas
lipídicas
Pré-adipócito capacidade de
proliferar
Objetivo
Testar fármacos, tais como Ehna;
Analisar a acumulação de lípidos nos
adipócitos;
Estudar os níveis de PPARgama nos
adipócitos.
Tipos de culturas de
células
Culturas primárias
Linhas celulares (3T3-L1)
Culturas primárias
Culturas feitas diretamente a partir de tecidos
animais (incluindo humanos) e vegetais. Tem um
tempo de vida e proliferação limitados.
Linhas celulares
Células que foram retiradas de tecidos animais, e
que foram modificadas de modo a poderem
proliferar indefinidamente.
Materiais e métodos
Técnicas laboratoriais para o estudo da
diferenciação dos pré-adipócitos em adipócitos.
Cultura celular
Oil red
Imunocitoquímica
Western blotting
Extração proteica;
Determinação da proteína (Método do BCA)
Western blot
Cultura celular
1. Passagem de células
2. Proliferação de pré-adipócitos
3. Diferenciação dos adipócitos
1. Passagem de células
Objetivo: Manter as células vivas
Promover a separação das células;
Reduzir o número de células em cada poço;
Impedir o stress celular e diferenciação;
Oil red
O oil red é um corante que quando adicionado
às culturas de células de adipócitos nos vai
ajudar a identificar quais as que já se encontram
diferenciadas, pois este corante vai tingir de
vermelho os lípidos que se encontrarem nas
células.
3T3-L1 não diferenciadas 3T3-L1 diferenciadas
Imunocitoquímica
Western Blotting
1. Extração proteica
2. Determinação da proteína (método BCA)
3. Western blot
1. Extração proteica
Aspirar
o meio
Tampão
RIPA
Raspar células e
juntar os 3 poços
da mesma
condição
2. Determinação da proteína
Método BCA
É utilizado como forma de comparação das
amostras com a curva padrão de uma proteína
conhecida, a Albumina (BSA)
y = 0,0728x + 0,1089 R² = 0,9881
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
0,45
0 1 2 3 4 5
Ab
s
Proteina
Padrao Quantificação de proteina
3. Western Blot
Resultado 1: aprendemos a pipetar!
y = 0,0728x + 0,1089 R² = 0,9881
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
0,45
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5
Ab
s
Proteina
Padrao Quantificação de proteina
Nota 20!!
Resultado 2: sabemos tirar fotografias
Agora a sério!!!!
Resultado 3: uns utilizam a balança, nós utilizamos
oil red!!!
O que aprendemos
O fármaco é eficaz se:
A quantidade de proteína PPARgama
diminuir com a adição do fármaco.
A acumulação de lípidos nos adipócitos
diminuir.
Nota: Estas condições não são suficientes para
testar a eficácia de um fármaco.
O chocolate encolhe-te a roupa, o ehna
alarga-a!!! Faz a tua escolha!!
