O EFEITO in vitro DOS COMPOSTOS ÁCIDO ALFA-LIPOICO E … · antioxidant activity in installed...

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAacute

INSTITUTO DE CIEcircNCIAS DA SAUacuteDE

PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM CIEcircNCIAS FARMACEcircUTICAS

O EFEITO in vitro DOS COMPOSTOS AacuteCIDO ALFA-LIPOICO E

RESVERATROL EM PARAcircMETROS DO ESTRESSE OXIDATIVO

DURANTE O USO DA POLIQUIMIOTERAPIA PARA HANSENIacuteASE

MARIELY CRISTINE AMADOR PESSOcircA

BELEacuteM - PA

2014

2







Aluno Mariely Cristine Amador Pessocirca

Orientador Profordf Drordf Marta Chagas Monteiro

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Farmacecircuticas

aacuterea de concentraccedilatildeo Faacutermacos e Medicamentos do Instituto de Ciecircncias da Sauacutede

da Universidade Federal do Paraacute como requisito para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre

em Ciecircncias Farmacecircuticas

BELEacuteM - PA

2014

3

Dados Internacionais de Catalogaccedilatildeo-na-Publicaccedilatildeo (CIP)

Biblioteca do Instituto de Ciecircncias da Sauacutede ndash UFPA

Pessocirca Mariely Cristine Amador 1989-

O efeito in vitro dos compostos aacutecido alfa-lipoico e resveratrol em paracircmetros do estresse

oxidativo durante o uso da poliquimioterapia para hanseniacutease Mariely Cristine Amador Pessocirca

orientador Marta Chagas Monteiro mdash 2014

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) - Universidade Federal do Paraacute Instituto de Ciecircncias da Sauacutede (ICS)

Programa de Poacutes- Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Farmacecircuticas Beleacutem 2014

Inclui bibliografias

1 Hanseniacutease 2 Poliquimioterapia 3 Dapsona 4 Estresse oxidativo 5 Antioxidantes I

Tiacutetulo

CDD 22 ed 616998

4

FOLHA DE APROVACcedilAtildeO


ldquoO EFEITO in vitro DOS COMPOSTOS AacuteCIDO ALFA-LIPOICO E RESVERATROL

EM PARAcircMETROS DO ESTRESSE OXIDATIVO DURANTE O USO DA

POLIQUIMIOTERAPIA PARA HANSENIacuteASErdquo

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias

Farmacecircuticas do Instituto de Ciecircncias da Sauacutede da Universidade

Federal do Paraacute como requisito para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em

Ciecircncias Farmacecircuticas

Aacuterea de concentraccedilatildeo Faacutermacos e Medicamentos

Aprovado em ____________

BANCA EXAMINADORA

_______________________________________________________

Profordf Drordf Marta Chagas Monteiro PPGCFUFPA

(Orientadora)

_________________________________________________________

Profordf Drordf Lilian Lund Amado

PPGEAPUFPA

_________________________________________________________

Profordf Drordf Maacutercia Cristina Furtado Nascimento

PPGNMTUFPA

5

AGRADECIMENTOS

Ao Onipotente

Agrave Universidade Federal do Paraacute e ao Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias

FarmacecircuticasPPGCF-UFPA por fornecerem as ferramentas necessaacuterias para a conclusatildeo

dessa etapa

Agrave Profordf Dra Marta Chagas Monteiro pela confianccedila pelo conhecimento repassado e pelos

conselhos em boa hora

Agraves instituiccedilotildees de sauacutede que me permitiram realizar essa pesquisa UBS Pedreira e URE Dr

Marcello Candia assim como aos enfermeiros e teacutecnicos de enfermagem responsaacuteveis pelo

setor da PQT

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Anaacutelises Cliacutenicas do Hospital Geral de Beleacutem pelo auxiacutelio na

leitura dos exames hematoloacutegicos

Ao laboratoacuterio de Controle de Qualidade na pessoa da Profordf Dra Roseane Ribeiro Costa por

contribuir para a realizaccedilatildeo dos experimentos

Agrave famiacutelia pelo incentivo para seguir adiante e por cada vitoacuteria conquistada

Aos inuacutemeros amigos por compreenderem as ausecircncias pelas palavras amigas e risadas

compartilhadas

Aos integrantes do Laboratoacuterio de Microbiologia e Imunologia em nome dos momentos de

descontraccedilatildeo em meio aos experimentos de todo santo dia

Ao meu amor pela paciecircncia infindaacutevel companheirismo e mensagens de apoio

E natildeo menos importante a todos os que contribuiacuteram para a realizaccedilatildeo desse estudo

6

ldquoHaacute uma forccedila motriz mais poderosa que o vapor a eletricidade e a energia atocircmica a

vontaderdquo

(Albert Einstein)

7

RESUMO




A hanseniacutease eacute uma doenccedila infecciosa que ainda representa uma preocupaccedilatildeo na sauacutede

puacuteblica mundial no seacuteculo XXI A poliquimioterapia preconizada pela Organizaccedilatildeo Mundial

de Sauacutede (OMS) apesar de ser a barreira mais eficaz no combate ao Mycobacterium leprae eacute

um dos responsaacuteveis pela produccedilatildeo de EROs e desenvolvimento de metemoglobinemia e

anemia hemoliacutetica nos pacientes em tratamento Nesse sentido o objetivo desse trabalho foi

verificar os possiacuteveis danos oxidativos em pacientes hansenianos em uso de poliquimioterapia

(PQT) ao avaliar paracircmetros hematoloacutegicos e o perfil oxidativo em eritroacutecitos e detectar os

efeitos do tratamento in vitro com os antioxidantes resveratrol (RSV) e aacutecido alfa-lipoico

(ALA) na prevenccedilatildeo da metemoglobinemia e na atividade de enzimas antioxidantes Os

resultados obtidos demonstraram diminuiccedilatildeo dos valores de hemaacutecias e reticulocitose nos

pacientes entre o quarto e o seacutetimo mecircs de tratamento com PQT comparados aos valores

encontrados no grupo controle A formaccedilatildeo de metemoglobina (MetHb) aumentou a partir do

5ordm mecircs de tratamento com PQT e a utilizaccedilatildeo de RSV e ALA na concentraccedilatildeo de 100 microM

manteve o percentual de MetHb somente em amostras de pacientes que estavam entre o 4ordm e

6ordm mecircs de uso de PQT Observou-se nos pacientes hansenianos uma atividade de SOD similar

ao controle e uma decrescida atividade de CAT o que possivelmente implica maior produccedilatildeo

de H2O2 O tratamento com RSV e ALA nas concentraccedilotildees de 100 e 500 microM elevou em duas

vezes a atividade de SOD em amostras de pacientes na 4ordf dose de PQT no entanto natildeo

alterou a atividade enzimaacutetica de CAT e SOD observada nos pacientes com hanseniacutease Dessa

forma os resultados descritos sugerem que os antioxidantes RSV e ALA nas concentraccedilotildees

testadas in vitro natildeo mostram atividade antioxidante quando utilizados em situaccedilotildees de

estresse oxidativo previamente estabelecidas poreacutem estudos posteriores satildeo necessaacuterios para

verificar os efeitos dose e tempo-dependentes de RSV e ALA como prevenccedilatildeo de danos

oxidativos nas doenccedilas infecciosas crocircnicas

PALAVRAS-CHAVE hanseniacutease poliquimioterapia dapsona estresse oxidativo

antioxidantes aacutecido α-lipoico resveratrol suplementaccedilatildeo

8

ABSTRACT

The leprosy is an infectious disease that represents a major preoccupation in global public

health in 21st century The treatment with Multi Drug Therapy (MDT) approved by the World

Health Organization (WHO) is the best treatment to Mycobacterim leprae infection however

is one of the factors of increasing Reactive Oxygen Species (ROS) production and the

development of methemoglobinemia and hemolytic anemia in these patients The aim of this

study was to verify the oxidative damage in leprosy patients receiving MDT by evaluation of

hematological and oxidative stress biomarkers and identify the effects of in vitro treatment

with antioxidants alpha-lipoic acid (ALA) and resveratrol (RSV) in antioxidant enzymes

activity and prevention of methemoglobinemia The results revealed a decrease in RBC count

and reticulocytosis in patients receiving MDT during the 4th and 7th month of treatment The

percentual of methemoglobin increased since the fifth month of treatment with MDT and the

treatment with 100 microM RSV-treated and ALA-treated preserved the values similar to control

group only in 4th

to 6th

month of MDT samples The leprosy patients presented values of SOD

activity similar to the control group and a decreased CAT activity leading to an inbalance in

the ratio of both enzymes and possibly resulting in an over-producing of H2O2 The treatment

with RSV and ALA in 100 microM and 500 microM concentrations increases twice the SOD activity

in 4th

month patient samples however these concentrations did not change CAT and SOD

activities found in leprosy patients Such results demonstrate that RSV and ALA did not show

antioxidant activity in installed oxidative stress and subsequent studies are necessary to

evaluate dose-dependent and time-dependent concentrations of RSV and ALA to prevent

oxidative damage in chronic infectious diseases

KEYWORDS leprosy Multi Drug Therapy dapsone oxidative stress antioxidants alpha-

lipoic acid resveratrol supplementation

9

LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES

Figura 1 Prevalecircncia da hanseniacutease no Brasil no ano de 2013 20

Figura 2 Estrutura quiacutemica da dapsona 21

Figura 3 Biotransformaccedilatildeo da dapsona e monoacetildapsona 22

Figura 4 Mecanismos de reduccedilatildeo da metemoglobina 24

Figura 5 Estrutura quiacutemica do aacutecido alfa-lipoico 29

Figura 6 Estrutura quiacutemica dos isocircmeros trans-resveratrol e cis-resveratrol 30

Figura 7 Delineamento da pesquisa 34

Figura 8 Procedimento para determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina 37

Figura 9 Procedimento para a determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica da superoacutexido dismutase 38

Figura 10 Procedimento para determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica da catalase 39

Figura 11 Procedimento da determinaccedilatildeo de malondialdeiacutedo 40

Figura 12 Procedimento da determinaccedilatildeo de nitritos 40

Figura 13 Determinaccedilatildeo de nitritos em pacientes hansenianos em uso de PQT 44

Figura 14 Determinaccedilatildeo de MDA em pacientes hansenianos em uso de PQT 44

Figura 15 Determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina em pacientes hansenianos em uso de

PQT 45

Figura 16 Percentual de metemoglobina em eritroacutecitos de pacientes hansenianos em uso de PQT

em comparaccedilatildeo aos tratamento in vitro com RSV 100 microM e 500 microM 46


em comparaccedilatildeo ao tratamento in vitro com ALA 100 microM 47

Figura 18 Atividade enzimaacutetica de SOD em eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em uso de PQT

em comparaccedilatildeo aos tratamentos in vitro com RSV 100 microM e 500 microM 49


em comparaccedilatildeo aos tratamentos in vitro com ALA 100 microM e 500 microM 50

Figura 20 Atividade enzimaacutetica de CAT em eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em uso de PQT

em comparaccedilatildeo ao tratamento in vitro com RSV 100 microM 51

10





11

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Dados epidemioloacutegicos dos participantes do estudo 42

Tabela 2 Valores de iacutendices hematimeacutetricos de hansenianos em uso de poliquimioterapia 43

12

LISTA DE ABREVIATURAS SIGLAS E SIacuteMBOLOS

ALA Aacutecido alfa-lipoico

ALT Alanina aminotransferase

AST Aspartato aminotransferase

ATP Adenosina trifosfato

CAT Catalase

CFZ Clofazimina

CHCM concentraccedilatildeo hemoglobiacutenica corpuscular meacutedia

Cu2+

Iacuteon cuacuteprico

DADS Diacetildiaminosulfona

DATASUS Departamento de Informaacutetica do SUS

DDS Dapsona

DDS-NOH Dapsona hidroxilamina

DHLA Aacutecido dihidrolipoico

D4 Paciente hanseniano em uso da 4ordf dose da poliquimioterapia para hanseniacutease




EDTA Aacutecido etilenodiamino tetra-aceacutetico

ERO Espeacutecies reativas de oxigecircnio

ERN Espeacutecies reativas de nnitrogecircnio

Fe2+

Iacuteon ferroso

Fesup3+ Iacuteon feacuterrico

G-6-PD Glicose-6-fosfato desidrogenase

GPx Glutationa peroxidase

13

GR Glutationa redutase

GSH Glutationa reduzida

GSSG Glutationa oxidada

H+ Iacuteon hidrogecircnio

HCM Hemoglobina corpuscular meacutedia

HO Radical hidroxila

IB Iacutendice baciloscoacutepico

κ Kappa

MADDS Monoacetildapsona

MDA Malondialdeiacutedo

MADDS-NOH Monoacetildapsona hidroxilamina

MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar

NADH nicotinamida adenosina dinucleotiacutedeo reduzida

NADPH nicotinamida adenosina fosfato reduzida

NAT N-acetiltransferase

NaCl Cloreto de soacutedio

NO2- Nitrito

O2- Radical acircnion superoacutexido

OMS Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede

PABA Aacutecido para-amino-benzoico

Prx Peroxiredoxina

PQT poliquimioterapia

RO Radical alcoxila

RO2 Radical peroxila

14

RMP Rifampicina

Rpm Rotaccedilatildeo por minuto

SINAN Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SOD Superoacutexido dismutase

TBA Aacutecido tiobarbituacuterico

TBARS Substacircncias reativas ao aacutecido tiobarbituacuterico

TCA Aacutecido tricloroaceacutetico

15

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 17

2 REFERENCIAL TEOacuteRICO 19

21 Hanseniacutease e poliquimioterapia 19

22 Dapsona 21

23 Metemoglobinemia e oxidaccedilatildeo em eritroacutecitos 23

24 Eritroacutecitos como biomarcadores de estresse oxidativo 25

25 Antioxidantes terapia complementar na prevenccedilatildeo do estresse oxidativo 28

251 Aacutecido alfa-lipoico 29

252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32

32 Especiacuteficos 32

5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34

52 Anaacutelise Hematoloacutegica 35

53 Tratamento in vitro com RSV e ALA 35

531 DETERMINACcedilAtildeO DO PERCENTUAL DE METEMOGLOBINA 36

532 DETERMINACcedilAtildeO DA ATIVIDADE ENZIMAacuteTICA DA SUPEROacuteXIDO DISMUTASE (SOD) 37

533 DETERMINACcedilAtildeO DA ATIVIDADE ENZIMAacuteTICA DA CATALASE (CAT) 38

534 DETERMINACcedilAtildeO DE PROTEIacuteNAS TOTAIS 39

54 Determinaccedilatildeo de Malondialdeiacutedo (MDA) 39

55 Determinaccedilatildeo de Nitritos (NO2-) 40

56 Anaacutelise estatiacutestica 41

6 RESULTADOS 42

61 Anaacutelise hematoloacutegica 43

16

62 Determinaccedilatildeo de nitritos e malondialdeiacutedo em pacientes hansenianos em uso de PQT 43

63 Determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina e efeitos do tratamento in vitro com ALA e

RSV 45

65 Determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica de SOD e efeitos do tratamento in vitro com ALA e RSV

48

66 Determinaccedilatildeo de atividade enzimaacutetica de CAT e efeitos do tratamento in vitro com ALA e RSV

51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17

1 INTRODUCcedilAtildeO

A hanseniacutease eacute uma doenccedila infecciosa causada pelo bacilo Mycobacterim leprae e

ainda eacute considerada problema de sauacutede puacuteblica no seacuteculo XXI O tratamento preconizado pela

OMS consiste na administraccedilatildeo da poliquimioterapia composta por dapsona (DDS)

ripampicina (RMP) e clofazimina (CFZ) sendo o tempo estabelecido conforme a

classificaccedilatildeo operacional da doenccedila (paucibacilar ou multibacilar) Embora o esquema

terapecircutico seja a barreira mais eficaz no combate ao bacilo a poliquimioterapia eacute

responsaacutevel por inuacutemeros efeitos colaterais A dapsona eacute apontada na literatura como

causadora dos seguintes efeitos cefaleia nefrites confusatildeo mental siacutendrome sulfocircnica e

dentre os mais graves metemoglobinemia e hemoacutelise (GOULART et al 2002 GREBOGI

2009)

Dentre as ceacutelulas mais afetadas os eritroacutecitos tecircm risco aumentado ao estresse

oxidativo visto que transportam oxigecircnio em altas concentraccedilotildees e estatildeo continuamente

expostos aos radicais livres inclusive aos xenobioacuteticos oxidantes absorvidos pelo organismo

(OGA 2008) Com isso a administraccedilatildeo de dapsona pode levar a vaacuterios danos nessas ceacutelulas

promovendo lipoperoxidaccedilatildeo e formaccedilatildeo de radicais livres com consequente depleccedilatildeo de

enzimas responsaacuteveis pelo equiliacutebrio redox induzindo assim metemoglobinemia nesses

pacientes (COLEMAM e HOLDEN 2004 VEGGI et al 2008)

Nesse sentido novas alternativas satildeo avaliadas para minimizar os danos oxidativos

tais como o uso de antioxidantes naturais e sinteacuteticos Os estudos com aacutecido α-lipoico (ALA)

na uacuteltima deacutecada relatam atividades contra intoxicaccedilatildeo por metais pesados danos causados

por isquemia-reperfusatildeo doenccedilas neurodegenerativas e em siacutendromes metaboacutelicas satildeo

relatadas na literatura a capacidade de regeneraccedilatildeo de agentes antioxidantes incluindo

vitaminas C E e glutationa (GSH) inibiccedilatildeo de danos ao DNA mediados por peroxinitritos e

remoccedilatildeo de espeacutecies reativas de nitrogecircnio (BRANDAtildeO 2008 SHAY et al 2009 ABDEL-

ZAHER et al 2011 GOLBIDI et al 2011) O resveratrol eacute um polifenol encontrado em uvas

vinho tinto e algumas espeacutecies de plantas cujas funccedilotildees variam desde a accedilatildeo sequestradora de

radicais livres agrave atuaccedilatildeo no sistema cardiovascular na inibiccedilatildeo da agregaccedilatildeo plaquetaacuteria e

prevenccedilatildeo da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica (RICE-EVANS et al 1997 FREacuteMONT 2000 SPANIER

18

et al 2009) Portanto o presente estudo propotildee verificar a accedilatildeo dos antioxidantes RSV e ALA

frente ao quadro de estresse oxidativo apresentado por pacientes hansenianos submetidos agrave

poliquimioterapia visando a implementaccedilatildeo de terapias suplementares com antioxidantes na

prevenccedilatildeo de danos oxidativos e melhoria da qualidade de vida nesses pacientes

19

2 REFERENCIAL TEOacuteRICO

21 Hanseniacutease e poliquimioterapia

Nos dias atuais a hanseniacutease ainda se configura como agravo de sauacutede puacuteblica

mundial Os esforccedilos para melhor enfrentar a doenccedila como a detecccedilatildeo precoce e o tratamento

com a poliquimioterapia satildeo metas da Estrateacutegia Global para Maior Reduccedilatildeo da Carga da

Hanseniacutease ndash Anos 2006-2015 onde o alvo eacute a reduccedilatildeo de novos casos com incapacidade

grau 2 por 100 mil habitantes em ateacute 35 (WHO 2013)

O Brasil figura entre os 10 paiacuteses com maiores taxas de detecccedilatildeo (WHO 2013) e no

ano de 2013 os casos concentraram-se nos estados de Mato Grosso Tocantins Maranhatildeo

Paraacute e Rondocircnia (DATASUS 2014 Fig 1) No mesmo ano os municiacutepios paraenses que

apresentaram maior nuacutemero de notificaccedilotildees foram Beleacutem Ruroacutepolis Parauapebas Marabaacute

Altamira Redenccedilatildeo e Oriximinaacute

A hanseniacutease eacute causada pelo bacilo Mycobacterium leprae pertencente agrave ordem

Actinomycelalis e agrave famiacutelia Mycobacteriaceae o gecircnero Mycobacterium tem como

particularidades a membrana rica em aacutecido micoacutelico o que a torna resistente agraves coloraccedilotildees

usuais o crescimento lento e ser hospedeiro intracelular obrigatoacuterio O bacilo eacute transmitido

pelas vias aeacutereas e uma vez no organismo humano ndash o qual eacute seu principal hospedeiro -

apresenta tropismo por nervos perifeacutericos ceacutelulas de Schwann e macroacutefagos Os sintomas

aparecem entre 2 a 5 anos apoacutes a exposiccedilatildeo ao patoacutegeno e manifestam-se como manchas

esbranquiccediladas acastanhadas ou avermelhadas com alteraccedilotildees de sensibilidade

espessamento dos nervos perifeacutericos e diminuiccedilatildeo ou perda de forccedila nos muacutesculos inervados

por esses nervos (BRASIL 2008)

Desde 1981 o tratamento terapecircutico preconizado pela OMS consiste em esquemas

poliquimioteraacutepicos na finalidade de reduzir a resistecircncia bacteriana (AMADOR 2004

BRASIL 2008 SUZUKI et al 2012) apresentando diferenciaccedilotildees dependendo da

20

Figura 1 Prevalecircncia da hanseniacutease no Brasil no ano de 2013 Fonte DATASUS - Ministeacuterio da Sauacutede (2014)

classificaccedilatildeo operacional da doenccedila em paucibacilar (PB) ou multibacilar (MB) As

recomendaccedilotildees da OMS quanto aos tratamentos satildeo

a) O esquema PB combina os faacutermacos dapsona e rifampicina nesta forma seis

doses mensais supervisionadas de 600 mg de rifampicina e doses diaacuterias

autoadministradas de 100 mg de dapsona

b) O esquema MB combina os faacutermacos dapsona clofazimina e rifampicina nesta

forma rifampicina em 12 doses mensais supervisionadas de 600 mg

clofazimina em 12 doses mensais supervisionadas de 300 mg e doses diaacuterias

autoadministradas de 50 mg e doses diaacuterias autoadministradas de 100 mg

de dapsona

A adesatildeo agrave poliquimioterapia constitui-se como etapa primordial para a quebra da

transmissatildeo da doenccedila a primeira dose elimina cerca de 90 da carga bacteriana

(OPROMOLLA 2000) e a associaccedilatildeo entre faacutermacos bactericidas (rifampicina e

clofazimina) e bacteriostaacuteticos (dapsona) minimiza o desenvolvimento de resistecircncia e reduz a

duraccedilatildeo de tratamento (BRUNTON et al 2010) comparados aos riscos da monoterapia

21

As reaccedilotildees adversas mais frequentes durante o tratamento variam entre eventos

dermatoloacutegicos como a dermatite esfoliativa e eritrodermia hepaacuteticos como a hepatite

medicamentosa e hematoloacutegicos como a trombocitopenia agranulocitose

metemoglobinemia e anemia hemoliacutetica (BRASIL 2008)

22 Dapsona

Utilizada inicialmente como monoterapia para o tratamento da hanseniacutease a dapsona

(44rsquo-diaminodifenilsulfona) apresenta-se como um poacute cristalino levemente amarelado

inodoro pouco soluacutevel em aacutegua fotossensiacutevel e de foacutermula molecular C12H12N2O2S (Fig 2)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da dapsona Fonte GREBOGI 2009

Seu mecanismo de accedilatildeo frente ao M leprae eacute bacteriostaacutetico inibindo a siacutentese

proteica de aacutecido foacutelico por competiccedilatildeo com o aacutecido para-aminobenzoico (PABA

GREBOGI 2009) Aleacutem disso eacute droga de escolha no tratamento de dermatites artrite

reumatoide infecccedilotildees por Pneumocystis carinii e Toxoplasma gondii e em casos de malaacuteria

por P falciparum resistente agrave cloroquina (BRASIL 2006 REIS NETO et al 2006)

Quando administrada oralmente a dapsona apresenta absorccedilatildeo quase completa pelo

trato gastrintestinal ndash entre 80 a 90 - e difunde-se por todos os tecidos concentrando-se

preferencialmente em pele muacutesculos fiacutegado e rins (REIS NETO et al 2006 BRAGHETTO

2007 WOZEL e BLAZUM 2014) e permanecendo nesses oacutergatildeos ateacute 3 semanas apoacutes a

interrupccedilatildeo do tratamento O pico plasmaacutetico eacute alcanccedilado entre 2 a 8h e apoacutes a ingestatildeo de

uma dose de 50 ndash 300 mg de dapsona a concentraccedilatildeo plasmaacutetica maacutexima varia entre 063

22

mgL a 482 mgL em doses de 100 mg do faacutermaco as concentraccedilotildees seacutericas variam entre

326 mgL a 195 mgL apoacutes 24h (WOZEL e BLAZUM 2014)

Apoacutes a absorccedilatildeo a dapsona eacute biotransformada por processos de acetilaccedilatildeo e

hidroxilaccedilatildeo (Fig 3) o primeiro mecanismo origina o composto monoacetildapsona

(MADDS) cuja ligaccedilatildeo agraves proteiacutenas plasmaacuteticas eacute superior a 90 por sua vez o segundo

mecanismo produz os metaboacutelitos dapsona hidroxilamina (DDS-NOH) e monoacetildapsona

hidroxilamina (MADDS-NOH) responsaacuteveis pelos efeitos hematotoacutexicos do faacutermaco

(BRAGUETTO 2007)

Figura 3 Biotransformaccedilatildeo da dapsona e monoacetildapsona NAT= N-acetiltransferase CE= Carboxiesterase P450= citocromo P450 DDS= dapsona DDS-NOH= dapsona hidroxilamina MADDS= monoacetildapsona MADDS-NOH= monoacetildapsona hidroxilamina Fonte BRAGHETTO 2007

Por sofrer recirculaccedilatildeo enterohepaacutetica a meia-vida da dapsona varia de 24 a 36 horas

Sua excreccedilatildeo eacute biliar sob a forma de conjugados com aacutecido glicurocircnico (MELLO 2005

23

GREBOGI 2009) e em pequenas quantidades na saliva e no leite materno (CARRAZZA

1998)

Satildeo relatados inuacutemeros efeitos adversos da administraccedilatildeo de dapsona embora os de

ordem hematoloacutegica possuam maior gravidade

23 Metemoglobinemia e oxidaccedilatildeo em eritroacutecitos

Denomina-se metemoglobinemia o estado cliacutenico onde mais de 1 da hemoglobina do

eritroacutecito tem o iacuteon Fe2+

convertido para a forma Fesup3+ a qual natildeo eacute capaz de ligar-se

reversivelmente ao oxigecircnio (MELLO 2005)

A hemoglobina (Hb) eacute um tetracircmetro formado por duas cadeias α-globiacutenicas e duas

cadeias β-globiacutenicas Cada globina possui um radical heme como grupo prosteacutetico o qual eacute

composto por um aacutetomo de ferro ndash na conformaccedilatildeo ferrosa ndash coordenado a quatro aneis

pirroacutelicos Uma ligaccedilatildeo covalente eacute formada com um resiacuteduo de histidina da cadeia globiacutenica

a sexta ligaccedilatildeo eacute realizada com ligantes exoacutegenos a exemplo do oxigecircnio e gaacutes carbocircnico

(MELLO 2005 KANIAS e ACKER 2010)

No eritroacutecito a auto-oxidaccedilatildeo da hemoglobina ocorre continuadamente gerando

radical acircnion superoacutexido

HbFe(II)O2 auto-oxidaccedilatildeo

HbFe(III) + O2-

(1)

e a forma predominante de reduccedilatildeo endoacutegena ocorre por meio do sistema NADH

desidrogenase ou diaforase I a metemoglobina formada eacute reduzida pelo citocromo-b5 por

accedilatildeo de NADH e indiretamente a hemoglobina tem o iacuteon Fe3+

convertido em Fe2+

Existe

uma segunda via de reduccedilatildeo e dependente de NADPH denominada NADPH-metemoglobina

redutase ou diaforase II onde este cofator eacute associado ao sistema glicosendash6- fosfato

desidrogenase (G-6-PD MARTINS 1995 OGA 2008 BREGHETTO 2007 Fig 4) essa

via eacute expressa na presenccedila de azul de metileno o qual eacute utilizado na praacutetica cliacutenica em casos

de metemoglobinemia sintomaacutetica

24

Figura 4 Mecanismos de reduccedilatildeo da metemoglobina ATP= trifosfato de adenosina G6PD= Glicose 6-Fosfato

Desidrogenase MHb= metemoglobina NAD= nicotiamida adenosina dinucleotiacutedeo NADP= nicotiamida

adenosina dinucleotiacutedeo fosfato Fonte OGA 2008

A partir dos produtos O2- e H2O2 oriundos de processos metaboacutelicos normais haacute

formaccedilatildeo de inuacutemeras espeacutecies lesivas aos eritroacutecitos por reaccedilotildees espontacircneas ou com a

presenccedila de metais como cofatores caracteriacutestica das reaccedilotildees de Fenton e Haber-Weiss

(CcedilIMEN 2008 KANIAS e ACKER 2010 VAN ZWIETEN et al 2014)

O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO

- + HO (reaccedilatildeo de Haber-Weiss) (3)

Fe2+

+ H2O2 Fe3+

+ HO- + HO (reaccedilatildeo de Fenton) (4)

25

A exposiccedilatildeo do eritroacutecito aos metaboacutelitos hidroxilados da dapsona DDS-NOH e

MADDS-NOH desencadeia eventos diversos que finalizam com a morte celular

clinicamente diagnosticada como anemia hemoliacutetica Aleacutem dos eventos colocados

anteriormente as reaccedilotildees entre a hemoglobina e produtos da dapsona geram O2- e compostos

nitrosos a exemplo da dapsona-nitrosobenzeno Esses uacuteltimos satildeo detoxificados pelo sistema

NADH metemoglobina redutase eritrocitaacuterio ou pelo complexo GSH-GPx agrave hidroxilamina

formando um ciacuterculo vicioso agrave medida que a hidroxilamina eacute regenerada haacute novos ataques agraves

moleacuteculas de hemoglobina formando novos radicais (COLEMAN 1995 COLEMAN e

HOLDEN 2004 BREGHETTO 2007 VEGGI et al 2008) Ao esgotar as reservas de

glutationa os compostos nitrosos satildeo livres para reagir com agrupamentos tiois ou outras

regiotildees da membrana (COLEMAN 1995)

Os danos agrave membrana celular culminam nos eventos de peroxidaccedilatildeo lipiacutedica e

formaccedilatildeo de neoantiacutegenos O ferro livre eacute fator desencadeante de reaccedilotildees de oxidaccedilatildeo cujos

resultados se refletem na alteraccedilatildeo do citoesqueleto e na exposiccedilatildeo da porccedilatildeo lipiacutedica

intracelular e na consequente oxidaccedilatildeo de aacutecidos graxos pelo peroacutexido de hidrogecircnio

Adicionalmente os produtos da oxidaccedilatildeo do ferro acumulam-se na membrana eritrocitaacuteria e

ativam macroacutefagos (CcedilIMEN 2008 KANIAS e ACKER 2010) concluindo o processo de

remoccedilatildeo precoce dos eritroacutecitos

24 Eritroacutecitos como biomarcadores de estresse oxidativo

Os eritroacutecitos satildeo componentes majoritaacuterios do tecido sanguiacuteneo e a forma que o

conhecemos eacute o resultado de um longo processo de diferenciaccedilatildeo celular iniciado na medula

oacutessea originalmente como ceacutelulas-tronco passam a ser ceacutelulas nucleadas apoacutes a accedilatildeo de

fatores de crescimento sofrem processo de extrusatildeo dos nuacutecleos e satildeo lanccediladas agrave circulaccedilatildeo

como reticuloacutecitos uacuteltimo estaacutegio de maturaccedilatildeo (OLIVEIRA e SALDANHA 2010) Suas

caracteriacutesticas uacutenicas ndash capacidade biossinteacutetica limitada e o acuacutemulo de agressotildees fiacutesicas e

quiacutemicas ndash fazem do eritroacutecito o modelo experimental ideal pela facilidade de obtenccedilatildeo baixo

custo e sensibilidade aos testes

26

O eritroacutecito maduro eacute estruturalmente diferente das outras ceacutelulas do organismo eacute

anucleado possui citoplasma sem organelas e adquire forma de disco bicocircncavo medindo

8microm de diacircmetro Dada a importacircncia dos eritroacutecitos no bom funcionamento das demais

ceacutelulas no organismo esta ceacutelula eacute dotada de elementos e funccedilotildees que garantem a sobrevida

de 120 dias

a) Composiccedilatildeo da membrana A membrana eritrocitaacuteria eacute composta por 60 de lipiacutedios

essencialmente fosfatidilcolina fosfatidiletanolamina fosfatidilserina e

esfingomielina 30 de colesterol e 10 de glicolipiacutedios Ela eacute didaticamente dividida

em dois domiacutenios o primeiro domiacutenio corresponde a uma dupla camada lipiacutedica

atravessada por proteiacutenas transportadoras e estruturais onde as concentraccedilotildees de

esfingomielina e fosfatidilcolina localizadas na porccedilatildeo exterior da membrana e o

colesterol satildeo determinantes para a deformabilidade celular o segundo domiacutenio

corresponde ao citoesqueleto onde a associaccedilatildeo entre filamentos de espectrina e

actina forma redes que cobrem toda a superfiacutecie interna do eritroacutecito Logo a

manutenccedilatildeo da superfiacutecie celular eacute definida pelas interaccedilotildees entre os dois domiacutenios

interaccedilotildees mediadas por multicomplexos proteicos (SMITH 1987 OLIVEIRA e

SALDANHA 2010 PANTALEO et al 2010 MANKELOW et al 2012)

b) Metabolismo do eritroacutecito A ausecircncia de nuacutecleo e mitococircndrias torna inviaacutevel a

geraccedilatildeo de energia pelo ciclo de Krebs portanto o eritroacutecito lanccedila matildeo de vias

diferenciadas para obtenccedilatildeo de energia A via anaeroacutebia ou via de Embdem-

Meyerhof eacute responsaacutevel por 90 do metabolismo eritrocitaacuterio e produz 2 mols de

adenosina trifosfato (ATP) a via das hexoses-monofosfato ou shunt de Rapaport-

Luebering regula a afinidade da hemoglobina por oxigecircnio ao produzir 23-

difosfoglicerato (23-DPG) e se configura como a uacutenica fonte de produccedilatildeo de

nicotinamida adenosina fosfato (NADPH)NADP na ceacutelula (MARTINS 1995 VAN

WIJK e VAN SOLINGE 2005)

c) Defesa antioxidante Os eventos de oxi-reduccedilatildeo satildeo intriacutensecos agrave manutenccedilatildeo da vida

aeroacutebia e nesse contexto haacute um constante equiliacutebrio entre espeacutecies reativas de

oxigecircnio (EROs) e moleacuteculas antioxidantes As EROs satildeo resultantes da reduccedilatildeo

monoeletrocircnica de O2 agrave H2O e podem ser natildeo-radicalares como o peroacutexido de

hidrogecircnio (H2O2) ou radicalares como os radicais acircnion superoacutexido (O2-) hidroxila

(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO

) Quando produzidas em proporccedilotildees menores

integram mecanismos endoacutegenos (inflamaccedilatildeo fagocitose sinalizaccedilatildeo intracelular e

27

reparo tecidual) e em condiccedilotildees patoloacutegicas satildeo mediadoras de danos em estruturas

celulares DNA lipiacutedios e proteiacutenas (VALKO et al 2007 CcedilIMEN 2008)

Nesse contexto os eritroacutecitos tornam-se mais suscetiacuteveis ao ataque de EROs

que os demais tecidos A exposiccedilatildeo a altas concentraccedilotildees de oxigecircnio o transporte de

xenobioacuteticos oxidantes absorvidos pelo organismo a ameaccedila constante de oxidaccedilatildeo da

hemoglobina e o acuacutemulo de agressotildees fiacutesicas e quiacutemicas sem capacidade de

reparaccedilatildeo reduzem a sobrevida da ceacutelula tal situaccedilatildeo exige um sistema antioxidante

capaz de conter os danos provocados e conferir proteccedilatildeo ao eritroacutecito (MARTINS

1995 OGA 2008) Dentre as enzimas fundamentais nesse processo figuram a

superoacutexido dismutase (SOD) catalase (CAT) e o sistema glutationa-glutationa

peroxidase (GSH-GPx)

A SOD compreende uma famiacutelia de enzimas onde a principal caracteriacutestica eacute a

presenccedila de metais em sua constituiccedilatildeo em humanos as isoformas existentes satildeo Mn-

SOD (mitocondrial) CuZn-SOD (citosoacutelica) e a SOD extracelular (RATMAN et al

2006 CcedilIMEN 2008) A forma citosoacutelica eacute abundante em eritroacutecitos onde converte

O2- em H2O2 e O2 em uma taxa de dismutaccedilatildeo de 2 x 10

9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)

O complexo GSH-GPx tem papel determinante na neutralizaccedilatildeo de espeacutecies

reativas A GSH eacute um tripeptiacutedeo abundante nos eritroacutecitos (na ordem de 2 ndash 10 mM)

e consegue detoxificar H2O2 em baixas concentraccedilotildees especialmente quando este eacute

produzido pela autooxidaccedilatildeo da hemoglobina Duas moleacuteculas de GSH agem como

doador de eleacutetrons gerando duas moleacuteculas de aacutegua e glutationa oxidada (GSSG) por

intermeacutedio da glutationa peroxidase (GPx CcedilIMEN 2008 ZWIETEN et al 2014)

como mostra a equaccedilatildeo

2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)

A CAT localiza-se nos peroxissomas e funciona como mecanismo adicional de

defesa dada a sua melhor atuaccedilatildeo quando o eritroacutecito eacute exposto a altas concentraccedilotildees

de H2O2 (CcedilIMEN 2008) Adicionalmente a enzima exerce accedilatildeo peroxidativa em

28

compostos toacutexicos como fenois formaldeiacutedo e aacutelcoois (RATMAN et al 2008) O

mecanismo cataliacutetico produz aacutegua e oxigecircnio sem produccedilatildeo de outros radicais e eacute

expresso na equaccedilatildeo abaixo

H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)

25 Antioxidantes terapia complementar na prevenccedilatildeo do estresse

oxidativo

Nos uacuteltimos anos os potenciais profilaacutetico e terapecircutico dos antioxidantes tecircm

ganhado importacircncia A descoberta do papel dos radicais livres na patogecircnese do cacircncer

diabetes doenccedilas cardiovasculares e doenccedilas neurodegenerativas direcionou as pesquisas para

novas alternativas de prevenccedilatildeo de danos oxidativos

Tradicionalmente a humanidade faz uso de frutas vegetais gratildeos e ervas com

notoacuterios efeitos antioxidantes Em sua maioria a funccedilatildeo antioxidante eacute atribuiacuteda agrave presenccedila de

compostos fenoacutelicos flavonoides carotenoides e compostos tioacutelicos os quais protegem o

meio celular de danos provocados pelo estresse oxidativo e reduzem o risco de desenvolver

doenccedilas crocircnicas (LUuml et al 2010)

Ainda que o organismo humano seja dotado de mecanismos antioxidantes endoacutegenos

nas doenccedilas crocircnicas a defesa antioxidante encontra-se diminuiacuteda ou depletada em razatildeo do

aumento de oxidantes Dessa forma a suplementaccedilatildeo externa com elementos antioxidantes se

faz essencial para contrabalancear os efeitos deleteacuterios provocados pelo estresse oxidativo

(RATNAM et al 2006)

Atualmente novas alternativas terapecircuticas satildeo estudadas no intuito de minimizar os

efeitos do estresse oxidativo em quadros de metemoglobinemia Segundo Lima et al (2007)

elementos com conhecido potencial antioxidante tais como vitaminas A C e E zinco

magneacutesio e selecircnio tecircm obtido bons resultados na diminuiccedilatildeo de MetHb estudos com

cimetidina (COLEMAN et al 1992) isossorbida (INAL e EGUumlZ 2004) N-acetilcisteiacutena

(MELLO 2005) e arginina (BRAGUETTO 2007) atestam que a busca por novos antiacutedotos eacute

vaacutelida e promissora

29

251 Aacutecido alfa-lipoico

O aacutecido alfa-lipoico (ALA aacutecido 12-ditiolano-3-pentanoico C8H14O2S2 Fig 5) eacute um

composto presente em eucariontes e procariontes e eacute produzido naturalmente a partir de aacutecido

octanoico e cisteiacutena (BRANDAtildeO 2008 GOLBIDI et al 2011) Nos alimentos pode ser

encontrado em carne vermelha (preferencialmente nos muacutesculos e coraccedilatildeo) fiacutegado rins e em

menor quantidade em frutas e hortaliccedilas (SHAY et al 2009)

Figura 5 Estrutura quiacutemica do aacutecido alfa-lipoico Fonte SZELAG et al 2011

No organismo o ALA aparece associado a resiacuteduos de lisina formando lipolisina e

atua indiretamente no metabolismo da glicose como cofator para enzimas dos complexos

piruvato desidrogenase e α-ceto-glutarato desidrogenase (BUSTAMANTE et al 1998 SHAY

et al 2009 GOLBIDI et al 2011)

As condiccedilotildees do trato gastrintestinal durante a administraccedilatildeo de ALA tornam sua

absorccedilatildeo variaacutevel (SHAY et al 2009) esse composto eacute extensivamente metabolizado no

fiacutegado e apenas 20-30 escapa da biotransformaccedilatildeo hepaacutetica (BRANDAtildeO 2008)

Intracelularmente ALA eacute reduzido em aacutecido diidrolipoico (DHLA) por accedilatildeo de enzimas

desidrogenases (KARAKOYUN et al 2009 SZELAG et al 2011) sua excreccedilatildeo eacute

predominantemente renal na forma de 46-bismetilmercapto-hexanoico

As formas oxidada e reduzida de ALA satildeo conhecidas por notoacuteria capacidade

antioxidante visto que a estrutura quiacutemica permite atuaccedilatildeo em fases aquosa e lipiacutedica ndash

diferentemente dos demais antioxidantes Dentre as propriedades do ALA estatildeo a capacidade

de quelar metais reter EROs e espeacutecies reativas de nitrogecircnio (ERNs) regenerar

30

antioxidantes endoacutegenos a exemplo da GSH e vitaminas C e E (PACKER et al 1995 SHAY


Nos uacuteltimos anos haacute estudos de utilizaccedilatildeo cliacutenica de ALA na intoxicaccedilatildeo por metais

em danos provocados por isquemia-reperfusatildeo doenccedilas neurodegenerativas e em siacutendromes

metaboacutelicas demonstrando que esse composto pode ser alternativa para o tratamento de

doenccedilas crocircnicas (KARAKOYUN et al 2009 TRIVEDI et al 2004 KUumlLKAMP et al 2009)

252 Resveratrol

O resveratrol (RSV 354-trihidroxiestilbeno Fig 6) eacute uma fitoalexina produzida em

plantas como Kojo-kon (Polygunun cuspidatum) Kashuwu (Polygunum multiflorum)

eucaliptos amora e amendoim em resposta a injuacuterias (SAUTTER et al 2005) O composto foi

detectado pela primeira vez em 1976 onde descobriu-se que o resveratrol era produzido em

folhas de parreira (Vitis viniacutefera) em resposta ao ataque pelo fungo Botrytis cinerea

(FREacuteMONT 2000)

Figura 6 Estrutura quiacutemica dos isocircmeros trans-resveratrol e cis-resveratrol Fonte SAUTTER et al 2005

RSV eacute sintetizado nas plantas sob as formas isocircmeras cis-resveratrol (cis-354rsquo-

trihidroxiestilbeno) e trans-resveratrol (trans-354rsquo-trihidroxiestilbeno) A forma trans eacute

majoritaacuteria e mais estaacutevel no ambiente natural e facilmente muda para a conformaccedilatildeo cis

quando eacute exposta agrave radiaccedilatildeo UV (DELMAS et al 2011)

A administraccedilatildeo oral de RSV tem boa absorccedilatildeo no trato gastrintestinal poreacutem com

baixa biodisponibilidade A facilidade do resveratrol em ligar-se agraves proteiacutenas plasmaacuteticas

31

especialmente agrave albumina e agrave hemoglobina e a recirculaccedilatildeo ecircntero-hepaacutetica de seus

metaboacutelitos contribui para a permanecircncia do antioxidante por maior tempo no organismo e

uma melhor distribuiccedilatildeo pelos tecidos As concentraccedilotildees do polifenol na circulaccedilatildeo sanguiacutenea

natildeo excedem 2 microM o RSV eacute rapidamente metabolizado e distribuiacutedo para os tecidos fiacutegado

rins coraccedilatildeo pulmotildees e ceacuterebro satildeo os oacutergatildeos nos quais o antioxidante apresenta altas

concentraccedilotildees Sua excreccedilatildeo ocorre na forma de sulfatos e derivados do aacutecido glicurocircnico na

urina (DELMAS et al 2011 SCHMATZ 2011)

A accedilatildeo antioxidante de RSV eacute atribuiacuteda agrave presenccedila de grupos hidroxila em sua

estrutura quiacutemica os quais satildeo potenciais doadores de iacuteons H+ Dessa forma RSV consegue

sequestrar iacuteons HOO- HO e O2

- e atuar como quelante de metais principalmente iacuteons Cu

2+ e

Fe3+

(RICE-EVANS et al 1997) Tambeacutem satildeo relatadas na literatura atividades bioloacutegicas

relacionadas agrave modulaccedilatildeo do metabolismo lipiacutedico e inibiccedilatildeo da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica inibiccedilatildeo

da agregaccedilatildeo plaquetaacuteria atividades antitumoral estrogecircnica vasodilatadora e anti-

inflamatoacuteria (FREacuteMONT 2000 SPANIER et al 2009)

Nesse contexto a utilizaccedilatildeo de antioxidantes como terapia suplementar ao tratamento

de diversas patologias tem como finalidades aumentar a resistecircncia ao estresse oxidativo e

melhorar a qualidade de vida dos indiviacuteduos que os consomem Assim com a anaacutelise dos

componentes do sangue de marcadores do estresse oxidativo e da atividade de enzimas

antioxidantes em pacientes hansenianos em uso de PQT pode-se estabelecer uma relaccedilatildeo entre

a administraccedilatildeo da poliquimioterapia e a ocorrecircncia de danos oxidativos nesses paracircmetros e

abrir possibilidades para terapias que visem minimizar esses eventos Ao realizar o tratamento

desses eritroacutecitos in vitro com RSV e ALA dois promissores antioxidantes estima-se

encontrar concentraccedilotildees para uso terapecircutico que possam aliar a remoccedilatildeo eficaz de EROs ao

estiacutemulo da atividade das enzimas SOD e CAT e dessa forma promover uma melhor

resposta antioxidante frente ao quadro de estresse oxidativo caracteriacutestico da hanseniacutease e

melhorar a qualidade de vida dos pacientes em uso de poliquimioterapia

32

3 OBJETIVOS

31 Geral

Avaliar os efeitos dos compotos aacutecido alfa-lipoico e resveratrol em paracircmetros do

estresse oxidativo e na prevenccedilatildeo de danos oxidativos em pacientes hansenianos em uso de

poliquimioterapia

32 Especiacuteficos

Avaliar alteraccedilotildees quantitativas em hemaacutecias hemoglobina plaquetas e reticuloacutecitos

em pacientes hansenianos durante o uso de PQT

Determinar as concentraccedilotildees de nitritos e malondialdeiacutedo em pacientes hansenianos

durante o uso de PQT

Determinar o percentual de metemoglobina em eritroacutecitos de pacientes hansenianos

durante o uso de PQT e apoacutes o tratamento in vitro com ALA e RSV nas

concentraccedilotildees de 100 e 500 microM

Determinar a atividade das enzimas CAT e SOD em eritroacutecitos de pacientes

hansenianos durante o uso de PQT e apoacutes o tratamento in vitro com ALA e RSV nas


33

5 METODOLOGIA

A pesquisa foi realizada a partir de coleta de amostras sanguiacuteneas de pacientes das

instituiccedilotildees de sauacutede Unidade de Referecircncia Especializada em Dermatologia Sanitaacuteria ldquoDr

Marcello Cacircndiardquo situada no municiacutepio de Marituba (PA) e na Unidade Baacutesica de Sauacutede da

Pedreira situada no municiacutepio de Beleacutem Tais instituiccedilotildees foram escolhidas por serem pontos

de diagnoacutestico e tratamento ambulatorial da hanseniacutease na regiatildeo metropolitana de Beleacutem

(ANEXOS 2 e 3)

O grupo de estudo compreendeu pacientes portadores de hanseniacutease em tratamento

regular do 4ordm ao 7ordm mecircs todos voluntaacuterios e com idade entre 18 e 65 anos Foram excluiacutedos da

pesquisa os pacientes com histoacuterico de etilismo tabagismo diabetes problemas cardiacuteacos e

coinfecccedilotildees que pudessem interferir nos paracircmetros avaliados A punccedilatildeo venosa era realizada

apoacutes a administraccedilatildeo das doses supervisionadas (D4 D5 D6 e D7) da poliquimioterapia

nesses pacientes

O grupo controle foi composto por voluntaacuterios saudaacuteveis e sem a doenccedila de mesma

faixa etaacuteria que o grupo de estudo e atendendo aos criteacuterios de exclusatildeo estabelecidos Ambos

os grupos foram esclarecidos das finalidades benefiacutecios e riscos da pesquisa assim como a

natildeo obrigatoriedade de adesatildeo por meio de Termo de Compromisso Livre e Esclarecido

conforme as diretrizes da Resoluccedilatildeo 19696 (ANEXO 4)

Da coleta de 10 mL de material venoso dos participantes do estudo 2 mL foram

conservados em EDTA dissoacutedico para a investigaccedilatildeo de alteraccedilotildees hematoloacutegicas e 8 mL

foram conservados em heparina para a obtenccedilatildeo de plasma e demais procedimentos (Fig 7)

Ressalta-se que o projeto para realizaccedilatildeo desta pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de

Eacutetica do Instituto de Ciecircncias da Sauacutede da Universidade Federal do Paraacute e estaacute de acordo com

as diretrizes da Resoluccedilatildeo 19696 do Conselho Nacional de Sauacutede A aprovaccedilatildeo foi registrada

sob o parecer nordm 157263 e CAAE 07763212700000018 (ANEXO 1)

34

Figura 7 Delineamento da pesquisa

51 Materiais

A pesagem de reagentes foi realizada em balanccedila semi-analiacutetica Celtac (modelo

FA2104N) O pH dos tampotildees utilizados nos procedimentos foi aferido em pHmetro Gehaka

(PG-1800) As amostras sanguiacuteneas foram centrifugadas em centriacutefuga cliacutenica de acircngulo fixo

(CentriBio) As leituras de absorvacircncia dos testes foram realizadas no espectrofotocircmetro

Spectrum (SP-2000 UV) e no leitor de placa de ELISA TP Reader (Thermoplate) Na

necessidade de agitaccedilatildeo vigorosa ou de aquecimento das amostras utilizaram-se vortex

Certomat e banho-maria Sieger respectivamente

Para o teste de determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina foram utilizados

ferricianeto de potaacutessio e cianeto de soacutedio PA (Dinacircmica) e Triton-X (Sigma) No teste de

determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica de SOD foram utilizados Hypoxanthine (minimum

99 Sigma) Xanthine Oxidase from bovine milk (Sigma) e Cytochrome C from bovine

heart (95 Sigma) Para determinar a atividade enzimaacutetica de CAT foram utilizados Tris

(hidroximetil) aminometano (TRIS) e peroacutexido de hidrogecircnio ambos da Dinacircmicareg Os

testes de determinaccedilatildeo de nitritos utilizaram N-(1-naphthyl)-ethylenediamine-dihydrochloride

35

(Sigma) e Sulfanilamide (minimum 99 Sigma) O tratamento in vitro dos eritroacutecitos foi

realizado com os compostos Resveratrol e Aacutecido α-(plusmn) lipoico ambos daSigmareg

52 Anaacutelise Hematoloacutegica

A amostra conservada em EDTA dissoacutedico foi utilizada para a investigaccedilatildeo de

possiacuteveis alteraccedilotildees hematoloacutegicas Para tanto as anaacutelises foram realizadas no Laboratoacuterio de

Anaacutelises Cliacutenicas do Hospital Geral de Beleacutem (HGEBE) utilizando o contador automaacutetico XT

4000i (Sysmex) Para o presente estudo foram avaliados contagem de hemaacutecias

hemoglobina contagem de plaquetas e percentual de reticuloacutecitos

53 Tratamento in vitro com RSV e ALA

Para o tratamento in vitro foram preparadas soluccedilotildees-matildee dos antioxidantes aacutecido

alfa-lipoico (ALA) e resveratrol (RSV) em tampatildeo fosfato de soacutedio 05 M na concentraccedilatildeo de

1 mgmL A partir de resultados de estudos anteriores de nosso grupo foram escolhidas as

concentraccedilotildees de 100 microM e 500 microM para as soluccedilotildees-trabalho de RSV e ALA deste estudo as

quais foram obtidas pela diluiccedilatildeo em tampatildeo fosfato de soacutedio 05 M

A amostra heparinizada foi centrifugada a 3000 rpm por 15 minutos para a separaccedilatildeo

de plasma e eritroacutecitos A porccedilatildeo de plasma foi armazenada em tubos cocircnicos tipo Eppendorf

(capacidade de 2 mL) para as determinaccedilotildees de peroxidaccedilatildeo lipiacutedica e nitritos Os eritroacutecitos

foram lavados com soluccedilatildeo de NaCl a 09 por trecircs vezes com rotaccedilatildeo de 3000 rpm por 5

minutos Ao final do processo preparou-se uma suspensatildeo de eritroacutecitos a 50 para cada

material colhido

Os experimentos foram realizados em duplicata e cada suspensatildeo de eritroacutecitos a 50

obtida foi submetida a cinco condiccedilotildees experimentais diferentes totalizando 10 grupos para

cada participante Em tubos de ensaio uma aliacutequota de 400 microL foi retirada de cada suspensatildeo

36

e foi adicionada a 200 microL do antioxidante avaliado As condiccedilotildees experimentais impostas

foram

a) Amostra sem tratamento com antioxidante (controle)

b) Amostra tratada com 200 microL de soluccedilatildeo de ALA 100 microM

c) Amostra tratada com 200 microL de soluccedilatildeo de ALA 500 microM

d) Amostra tratada com 200 microL de soluccedilatildeo de RSV 100 microM

e) Amostra tratada com 200 microL de soluccedilatildeo de RSV 100 microM

Esses grupos foram incubados por uma hora em temperatura ambiente a ao abrigo da

luz Apoacutes o tempo determinado foram separadas em tubos de ensaio as seguintes aliacutequotas

a) 100 microL para as determinaccedilotildees de atividade enzimaacutetica de CAT

b) 50 microL para as determinaccedilotildees de atividade enzimaacutetica da SOD

c) 200 microL para a determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina

531 DETERMINACcedilAtildeO DO PERCENTUAL DE METEMOGLOBINA

A metodologia seguida foi adaptada de Hegesh (1970) O teste consiste na leitura de

absorvacircncias de oximetahemoglobina e MetHb naturalmente presentes nos eritroacutecitos com a

adiccedilatildeo de ferricianeto de potaacutessio (agente metemoglobinizante) e apoacutes a utilizaccedilatildeo de um

agente neutralizador como eacute apresentado na Figura 8

As leituras foram realizadas em duplicata em leitor de ELISA (TP Reader)

Determinou-se a porcentagem de metemoglobina utilizando os valores de absorbacircncia

anotados e empregados na foacutermula

MetHb= x 100 (1)

onde

A1 representa a MetHb encontrada no sangue

A2 representa a transformaccedilatildeo de oxihemoglobina em MetHb

A3 representa a transformaccedilatildeo de MetHb em cianometemoglobina

A4 representa a transformaccedilatildeo de MetHb em cianohemoglobina

37

Figura 8 Procedimento para determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina

532 DETERMINACcedilAtildeO DA ATIVIDADE ENZIMAacuteTICA DA SUPEROacuteXIDO

DISMUTASE (SOD)

Foi utilizada a metodologia de Mc Cord e Fridowich (1969) com adaptaccedilotildees O teste

mensura a atividade da enzima de forma indireta ao verificar a inibiccedilatildeo da reduccedilatildeo do

citocromo C mediado pela SOD no sistema enzimaacutetico xantinaxantina oxidase em pH 78 a

25degC

Apoacutes a separaccedilatildeo de aliacutequotas para os testes descrita no item 53 obteve-se um

hemolisado a partir dos 50 microL da suspensatildeo de eritroacutecitos de cada grupo estudado Uma

aliacutequota deste hemolisado foi adicionada a uma mistura de tampatildeo citocromo C 0075mM

hipoxantina 15 mM e xantina oxidase 56 mM A soluccedilatildeo resultante foi incubada agrave

temperatura ambiente e ao abrigo da luz e apoacutes 15 min foi realizada uma uacutenica leitura na

38

faixa de 550 nm em espectrofotocircmetro UV-1800 (Shimatzu) O procedimento se encontra

esquematizado na figura abaixo (Fig9)

Figura 9 Procedimento para a determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica da superoacutexido dismutase

Os valores de absorbacircncia foram aplicados em curva padratildeo de citocromo C para

determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica expressa em Unidade SODmg proteiacutena uma unidade

de SOD eacute a quantidade de enzima necessaacuteria para inibir em 50 a velocidade de reduccedilatildeo do

citocromo C a 550 nm

533 DETERMINACcedilAtildeO DA ATIVIDADE ENZIMAacuteTICA DA CATALASE (CAT)

Foi realizada conforme metodologia proposta por Beutler (1975) onde eacute observada a

reaccedilatildeo cineacutetica de consumo de H2O2 pela enzima em um minuto


hemolisado a partir dos 100 microL da suspensatildeo de eritroacutecitos de cada grupo estudado Apoacutes a

adiccedilatildeo de TRIS a 8 microL do hemolisado 100 microL da nova soluccedilatildeo foi adicionada agrave soluccedilatildeo de

reaccedilatildeo de H2O2 e lida em espectrofotocircmetro UV-1800 (Shimatzu) por um minuto na faixa de

240 nm em ambiente escuro

Foram anotados os valores de absorbacircncia nos tempos zero (T0) e apoacutes um minuto (T1)

para caacutelculo de atividade enzimaacutetica Os valores foram expressos em Unidade CATmg

proteiacutena onde uma unidade da enzima corresponde ao consumo de 1 microMol de H2O2 em um

minuto em pH 8 e agrave temperatura de 25degC O procedimento encontra-se esquematizado na Fig

10

39

Figura 10 Procedimento para determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica da catalase

534 DETERMINACcedilAtildeO DE PROTEIacuteNAS TOTAIS

Para a mensuraccedilatildeo das atividades enzimaacuteticas foi realizada a determinaccedilatildeo de

proteiacutenas totais utilizando-se o kit Proteiacutenas Totais (Doles) Agrave uma soluccedilatildeo de biureto foram

adicionados 25 microL da amostra e duas gotas de NaOH 6M e apoacutes 5 min foi realizada leitura em

leitor de ELISA (TP Reader) na faixa de 550 nm Foi utilizado como padratildeo albumina bovina

a 4 mg dL

54 Determinaccedilatildeo de Malondialdeiacutedo (MDA)

Foi utilizada a metodologia adaptada de Ohkawa et al (1979) O teste quantifica a

presenccedila de hidroperoacutexidos (primeiro estaacutegio de degradaccedilatildeo de lipiacutedios) em amostras a partir

da adiccedilatildeo de aacutecido tiobarbituacuterico a soluccedilatildeo levemente rosada eacute facilmente lida em

espectrofotocircmetro entre 525 nm a 545 nm

Adicionou-se uma aliacutequota de 100 microL de plasma agraves soluccedilotildees de aacutecido tricloroaceacutetico a

10 pv e aacutecido tiobarbituacuterico a 1 pv e a mistura foi levada a banho-maria por 1h a 90degC

Apoacutes centrifugaccedilatildeo o sobrenadante foi lido em espectrofotocircmetro SP-2000 (Spectrum) na

faixa de 530 nm O procedimento encontra-se esquematizado na Figura 11

40

Figura 11 Procedimento da determinaccedilatildeo de malondialdeiacutedo

Os valores de absorbacircncia foram aplicados em curva padratildeo de malondialdeiacutedo para

determinaccedilatildeo das concentraccedilotildees do analito Os resultados foram expressos em nmol

MDAmL de plasma

55 Determinaccedilatildeo de Nitritos (NO2-)

Foi realizada conforme o meacutetodo de Granger (1999) O meacutetodo avalia

quantitativamente a produccedilatildeo de metaboacutelitos oriundos do oacutexido niacutetrico (NO) o qual estaacute

relacionado indiretamente com o status imunoloacutegico do indiviacuteduo

O plasma utilizado foi adicionado ao reagente de Griess em proporccedilatildeo 11 incubado

por 10 min e lido em leitor de ELISA (TP Reader) na faixa de 540 nm Os valores de

absorbacircncia foram aplicados em curva padratildeo de nitrito e os resultados expressos em mMol

NO2-mL de plasma O procedimento encontra-se esquematizado na ilustraccedilatildeo abaixo (Fig

12)

Figura 12 Procedimento da determinaccedilatildeo de nitritos

41

56 Anaacutelise estatiacutestica

Os resultados foram expressos como meacutedia plusmn erro padratildeo da meacutedia e submetidos aos

testes ANOVA-one way para determinar diferenccedilas entre as doses trabalhadas e teste T para

anaacutelise de tratamentos Foi utilizado o teste Bonferroni para identificaccedilatildeo de diferenccedilas entre

doses estudadas Valores de plt005 foram considerados significativos

42

6 RESULTADOS

A coleta das amostras de pacientes em tratamento para hanseniacutease e voluntaacuterios sadios

ocorreu no periacuteodo de janeiro de 2013 a maio de 2014 A pouca adesatildeo dos pacientes agrave

pesquisa e ajustes na metodologia do preparo de suspensotildees de eritroacutecitos reduziram o

nuacutemero total de participantes do estudo totalizando 13 pacientes em uso de

poliquimioterapia 3 pacientes que receberam a 4ordf dose de PQT (D4) 3 pacientes que

receberam a 5ordf dose (D5) 4 pacientes na 6ordf dose (D6) e 3 pacientes na 7ordf dose (D7) O grupo

controle foi composto por 7 voluntaacuterios saudaacuteveis nas faixas etaacuterias e criteacuterios de exclusatildeo

semelhantes aos pacientes com hanseniacutease A tabela 1 resume as caracteriacutesticas dos pacientes

participantes do estudo

Tabela 1 Dados epidemioloacutegicos dos participantes do estudo

(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica

Paucibacilar 308 (n=4)

Multibacilar 692 (n=9)

IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)

Natildeo relatado 152 (n=2)

IB iacutendice baciloscoacutepico

43

61 Anaacutelise hematoloacutegica

O perfil hematoloacutegico dos pacientes em tratamento para hanseniacutease fornece dados que

podem justificar possiacuteveis intervenccedilotildees na poliquimioterapia visto que satildeo relatados pela

literatura quadros de anemia decorrentes de tratamento terapecircutico com drogas oxidantes a

exemplo da dapsona

Na Tabela 2 eacute possiacutevel observar que todos os pacientes com hanseniacutease em uso de

PQT apresentaram diminuiccedilatildeo nos valores de hemaacutecias e aumento de reticuloacutecitos em relaccedilatildeo

aos indiviacuteduos sadios (controle) Aleacutem disso os pacientes que estavam na 7ordm dose de PQT

(grupo D7) tambeacutem apresentaram diminuiccedilatildeo nos valores de plaquetas quando comparado ao

controle e as demais doses terapecircuticas de PQT

Tabela 2 Valores de iacutendices hematimeacutetricos de hansenianos em uso de poliquimioterapia

Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)

488plusmn047 55plusmn07 394plusmn024 408plusmn062 394plusmn041 332plusmn02

Hb (gdL) 1447plusmn137 1467plusmn114 12plusmn082 13plusmn217 1265plusmn126 107plusmn075

Plaquetas (Ummsup3)

2215plusmn742 265 22033plusmn395 18367plusmn528 187plusmn326 16733plusmn1102

Reticuloacutecito ()


Lit valores baseados em resultados de Ranawaka et al 2008 Deps et al 2012 e Al-Sieni et al 2013

plt005 em relaccedilatildeo ao grupo controle


62 Determinaccedilatildeo de nitritos e malondialdeiacutedo em pacientes

hansenianos em uso de PQT

Atraveacutes das determinaccedilotildees de nitritos e MDA nos pacientes com hanseniacutease sob

tratamento com PQT pode-se mensurar a extensatildeo dos danos provocados pelo tratamento

poliquimioteraacutepico Observou-se que os pacientes hansenianos em uso de PQT natildeo

apresentaram alteraccedilatildeo significativa nesses paracircmetros (Fig 13 e Fig 14) durante os meses de

44

tratamento com PQT quando comparado aos indiviacuteduos saudaacuteveis (NO2- 446 micromolmL plusmn

38 MDA 314 nmolmL plusmn 006)

Figura 13 Determinaccedilatildeo de nitritos em pacientes hansenianos em uso de PQT D4 paciente no 4ordm mecircs de PQT D5 paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 paciente no 6ordm mecircs de PQT D7 paciente no 7ordm mecircs de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (ANOVA) plt005 comparado ao grupo controle

Figura 14 Determinaccedilatildeo de MDA em pacientes hansenianos em uso de PQT D4 paciente no 4ordm mecircs de PQT D5 paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 paciente no 6ordm mecircs de PQT D7 paciente no 7ordm mecircs de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (ANOVA) plt005 comparado ao grupo controle

45

63 Determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina e efeitos do

tratamento in vitro com ALA e RSV

A determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina avalia a proporccedilatildeo entre os estados

de oxidaccedilatildeoreduccedilatildeo do ferro contido no grupamento heme Notou-se que os pacientes

hansenianos a partir da quinta dose de PQT apresentaram aumento significativo do percentual

de metemoglobina com valores acima de 5 quando comparados a indiviacuteduos sem a doenccedila

(148 plusmn 133) como mostra a Figura 15

Figura 15 Determinaccedilatildeo do percentual de metemoglobina em pacientes hansenianos em uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (ANOVA) plt005 comparado ao grupo controle

Apoacutes uma hora do tratamento in vitro com o composto RSV a concentraccedilatildeo de 100

microM reduziu o percentual de MetHb somente em amostras de pacientes em uso da 5ordf dose do

tratamento com PQT (22 plusmn 12) em relaccedilatildeo agraves amostras sem RSV (51 plusmn 19) Por outro

lado RSV potencializou significativamente o aumento do percentual de MetHb nas amostras

de pacientes em uso da 7ordf dose de PQT (118 plusmn 25) e em indiviacuteduos sem a doenccedila (54 plusmn

26) em relaccedilatildeo a esses mesmos grupos sem o tratamento in vitro (31 plusmn 06 e 15 plusmn 13

respectivamente)

46

Com exceccedilatildeo do grupo em uso da 5ordf dose de PQT o tratamento in vitro com 500 microM

de RSV foi capaz de potencializar o aumento dos percentuais de MetHb em todas as amostras

de pacientes em uso de PQT elevando principalmente o percentual de metemoglobina

(aproximadamente 5 vezes maior que o controle) das amostras de pacientes em uso da 7ordf dose

de PQT (Fig 16)

Figura 16 Percentual de metemoglobina em eritroacutecitos de pacientes hansenianos em uso de PQT em comparaccedilatildeo aos tratamento in vitro com RSV 100 microM e 500 microM S indiviacuteduos sem a doenccedila D4 amostra de paciente no 4ordm mecircs de uso de PQT D5 amostra de paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 amostra de paciente no 6ordm mecircs de uso de PQT D7 amostra de paciente no 7ordm mecircs de uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (Teste T) plt005 comparado ao respectivo grupo controle plt001 comparado ao respectivo grupo controle

47

O tratamento com eritroacutecitos com ALA na concentraccedilatildeo de 100 microM natildeo alterou o

percentual de metemoglobina nos grupos correspondentes agrave quarta quinta e sexta doses de

PQT em comparaccedilatildeo aos mesmos grupos sem tratamento in vitro e somente potencializou o

aumento de MetHb no grupo correspondente agrave 7ordf dose do tratamento com PQT A incubaccedilatildeo

com 500 microM do antioxidante por sua vez aumentou a formaccedilatildeo de MetHb na amostra

referente agrave 7ordf dose de PQT e em indiviacuteduos sem a doenccedila ao passo que natildeo provocou

diferenccedilas nas amostras correspondentes agraves demais doses de PQT (Fig 17)

Figura 17 Percentual de metemoglobina em eritroacutecitos de pacientes hansenianos em uso de PQT em comparaccedilatildeo ao tratamento in vitro com ALA 100 microM S indiviacuteduos sem a doenccedila D4 amostra de paciente no 4ordm mecircs de uso de PQT D5 amostra de paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 amostra de paciente no 6ordm mecircs de uso de PQT D7 amostra de paciente no 7ordm mecircs de uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (Teste T) plt005 comparado ao respectivo grupo controle plt001 comparado ao respectivo grupo controle

48

65 Determinaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica de SOD e efeitos do


A avaliaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica de SOD em pacientes hansenianos em uso de

PQT mostrou que o tratamento com o poliquimioteraacutepico natildeo alterou a atividade enzimaacutetica

da enzima (D4 1997 Umg proteiacutena plusmn 17 D5 197 Umg proteiacutena plusmn 37 D6 1973 Umg

proteiacutena plusmn 87 D7 2005 Umg proteiacutena plusmn 38) apresentando valores semelhantes aos

encontrados nos voluntaacuterios saudaacuteveis (1965 Umg proteiacutena plusmn 117)

O tratamento in vitro dos eritroacutecitos de pacientes em uso de PQT com o composto

RSV nas concentraccedilotildees de 100 e 500 microM natildeo modificou o desempenho enzimaacutetico de SOD

ao comparar com os resultados obtidos nos respectivos controles Os dados mostram que

somente as amostras de pacientes no 4ordm mecircs de uso de PQT apresentaram aumento

significativo de atividade da SOD em relaccedilatildeo ao mesmo grupo sem o antioxidante Esse

resultado foi visto tanto no tratamento com a concentraccedilatildeo de 100 microM de RSV (2091 Umg

proteiacutena plusmn 63) quanto com a concentraccedilatildeo de 500 microM (209 Umg proteiacutena plusmn 46) como visto

na Figura 18

49

Figura 18 Atividade enzimaacutetica de SOD em eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em uso de PQT em comparaccedilatildeo aos tratamentos in vitro com RSV 100 microM e 500 microM D4 amostra de paciente no 4ordm mecircs de uso de PQT D5 amostra de paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 amostra de paciente no 6ordm mecircs de uso de PQT D7 amostra de paciente no 7ordm mecircs de uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (Teste T) plt005 comparado ao respectivo grupo controle plt001 comparado ao respectivo grupo controle

A respeito do tratamento in vitro com ALA as concentraccedilotildees de 100 e 500 microM natildeo

alteraram o desempenho enzimaacutetico de SOD nos eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em

uso de PQT visto que os resultados obtidos com a incubaccedilatildeo com o antioxidante

50

assemelharam-se aos valores obtidos sem a adiccedilatildeo de ALA em todos os grupos estudados

(Figura 19)

Figura 19 Atividade enzimaacutetica de SOD em eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em uso de PQT em comparaccedilatildeo aos tratamentos in vitro com ALA 100 microM e 500 microM D4 amostra de paciente no 4ordm mecircs de uso de PQT D5 amostra de paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 amostra de paciente no 6ordm mecircs de uso de PQT D7 amostra de paciente no 7ordm mecircs de uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (Teste T) plt005 comparado ao respectivo grupo controle plt001 comparado ao respectivo grupo controle

51

66 Determinaccedilatildeo de atividade enzimaacutetica de CAT e efeitos do


Sobre a atividade da enzima catalase (CAT) os hansenianos em uso de PQT

apresentaram diminuiccedilatildeo significativa da atividade de CAT a partir do quarto mecircs de

tratamento em comparaccedilatildeo aos indiviacuteduos sem a doenccedila No entanto as concentraccedilotildees de

100 microM e 500 microM de RSV natildeo foram capazes de aumentar a atividade de CAT nos eritroacutecitos

de pacientes em uso de PQT apoacutes o tratamento in vitro (Figuras 20 e 21)

Figura 20 Atividade enzimaacutetica de CAT em eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em uso de PQT em comparaccedilatildeo ao tratamento in vitro com RSV 100 microM D4 amostra de paciente no 4ordm mecircs de uso de PQT D5 amostra de paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 amostra de paciente no 6ordm mecircs de uso de PQT D7 amostra de paciente no 7ordm mecircs de uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (Teste T) plt005 comparado ao respectivo grupo controle plt001 comparado ao respectivo grupo controle

52


Quanto ao tratamento de eritroacutecitos in vitro com ALA os resultados foram

semelhantes aos encontrados com o tratamento com RSV em todos os grupos analisados as

concentraccedilotildees de 100 e 500 microM natildeo alteraram a atividade de CAT em comparaccedilatildeo aos

mesmos grupos sem a adiccedilatildeo do antioxidante (Figura 22)

53

Figura 22 Atividade enzimaacutetica de CAT em eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease em uso de PQT em comparaccedilatildeo aos tratamentos in vitro com ALA 100 microM e 500 microM D4 amostra de paciente no 4ordm mecircs de uso de PQT D5 amostra de paciente no 5ordm mecircs de PQT D6 amostra de paciente no 6ordm mecircs de uso de PQT D7 amostra de paciente no 7ordm mecircs de uso de PQT Resultados expressos em meacutedia plusmn erro padratildeo (Teste T) plt005 comparado ao respectivo grupo controle plt001 comparado ao respectivo grupo controle

54

7 DISCUSSAtildeO

A investigaccedilatildeo de efeitos hemoliacuteticos decorrentes do tratamento para hanseniacutease eacute um

passo importante para a identificaccedilatildeo de possiacuteveis disfunccedilotildees hematoloacutegicas hereditaacuterias e

adoccedilatildeo de terapecircuticas que possam prevenir esses danos e trazer qualidade de vida aos

pacientes

Dois dos efeitos adversos da poliquimioterapia conhecidos por sua gravidade satildeo a

anemia hemoliacutetica e a metemoglobinemia Tais efeitos estatildeo relacionados com a dapsona

bacteriostaacutetico que integra o esquema de tratamento que em doses terapecircuticas produz os

compostos DDS-NOH e MADDS-NOH (CARRAZZA 1995) estes metaboacutelitos satildeo

conhecidos na literatura por sua hematoxicidade pois ao ligar-se agrave membrana eritrocitaacuteria

formam siacutetios antigecircnicos e ativam o sistema imunoloacutegico favorecendo a retirada precoce

dessas ceacutelulas por macroacutefagos e levando o indiviacuteduo a um quadro de anemia (COLEMAN

1995 BRADSHAW et al 1997 REILLY et al 1999 COLEMAN e HOLDEN 2004

BORDIN et al 2010) Consequentemente a anemia hemoliacutetica encontrada nesses pacientes eacute

caracterizada pela reticulocitose - resposta normal do organismo agrave perda de hemaacutecias no

sangue perifeacuterico ndash e diminuiccedilatildeo dos niacuteveis de hemoglobina e dos iacutendices hematimeacutetricos

HCM e CHCM (DHALIWAL et al 2002)

Nesse sentido o presente estudo mostrou que os pacientes com hanseniacutease em uso de

PQT a partir da 4ordf ateacute a 7ordf dose apresentaram diminuiccedilatildeo do nuacutemero de hemaacutecias e aumento

de reticuloacutecitos em ateacute trecircs vezes em comparaccedilatildeo aos indiviacuteduos sadios Dados da literatura

sugerem que esses efeitos hematoloacutegicos estatildeo associados ao tratamento com PQT visto que

pacientes com hanseniacutease sem tratamento apresentaram valores normais do nuacutemero de

hemaacutecias e reticuloacutecitos quando comparado aos indiviacuteduos saudaacuteveis (RANAWAKA et al

2008 DEPS et al 2012 AL-SIENI et al 2013)

A metemoglobinemia por sua vez estaacute ligada agrave incapacidade de transporte do

oxigecircnio pela hemoglobina quando o iacuteon ferro estaacute na forma oxidada Nesse estudo foi

observado que os pacientes em tratamento para hanseniacutease apresentaram percentual de

metemoglobina com valores proacuteximos de 5 a partir do quinto mecircs de uso da PQT iacutendice

que se manteve ateacute o seacutetimo mecircs de tratamento mostrando que a poliquimioterapia induziu

metemoglobinemia nesses pacientes Outros trabalhos desenvolvidos por nosso grupo como

os de Schalcher et al (2013) e Schalcher et al (2014) encontraram valores de metemoglobina

55

de pacientes hansenianos similares aos valores de indiviacuteduos sem a doenccedila e em estudo

posterior observaram o aumento da produccedilatildeo de MetHb em pacientes hansenianos apoacutes o

iniacutecio do tratamento com PQT sustentando a ideia de que o tratamento com a

poliquimioterapia induz o quadro de metemoglobinemia Segundo Oga (2008) com valores

de metemoglobina inferiores a 10 similar a este estudo o paciente pode apresentar sinais e

sintomas como cansaccedilo cefaleia e dores nos membros inferiores Os niacuteveis de metemoglobina

superiores a 30 satildeo acompanhados de sintomas como vertigem cefaleia ansiedade e

taquicardia e niacuteveis acima de 70 levam a convulsotildees arritmias e morte Esses sintomas

podem se intensificar quando haacute deficiecircncia de G-6-PD condiccedilatildeo essa jaacute relatada na literatura

(GROSSMAN et al 1995 RANAWAKA et al 2008)

Aleacutem das alteraccedilotildees hematoloacutegicas citadas o paciente hanseniano eacute acometido por

danos provocados pelo sistema imunoloacutegico em resposta agrave infecccedilatildeo As alteraccedilotildees na resposta

imune estatildeo associadas agraves distintas formas cliacutenicas apresentadas a presenccedila da resposta

celular define a forma cliacutenica mais branda da doenccedila (tuberculoide) e a ausecircncia desta a

forma mais severa (virchowiana MENDONCcedilA et al 2008) Os macroacutefagos primeira linha de

ceacutelulas atuantes no combate agrave infecccedilatildeo satildeo ativados e produzem oacutexido niacutetrico (NO) e outros

intermediaacuterios que reagem entre si para formar reativos mais toacutexicos no entanto NO eacute

rapidamente convertido em nitritos (NO2) e nitratos (NO3 MOHANTY et al 2007) Neste

trabalho natildeo houve diferenccedila na concentraccedilatildeo de nitritos encontrados em pacientes em

tratamento para hanseniacutease e a encontrada no grupo de indiviacuteduos saudaacuteveis indicando que a

PQT natildeo influencia a produccedilatildeo desse mediador

As concentraccedilotildees de NO e seus derivados tambeacutem estatildeo associadas ao aparecimento

de reaccedilotildees hansecircnicas tipo 1 e 2 em pacientes com hanseniacutease As reaccedilotildees hansecircnicas ou

estado reacionais satildeo descritas como fenocircmenos inflamatoacuterios agudos que podem ser

localizados ou sistecircmicos e que ocorrem antes durante ou apoacutes o tratamento da hanseniacutease

(MENDONCcedilA et al 2008) Nesse sentido Schoumln et al (1999) verificaram niacuteveis elevados dos

metaboacutelitos do NO em pacientes hansenianos reacionais tipo 1 em comparaccedilatildeo aos pacientes

hansenianos sem episoacutedios reacionais e indiviacuteduos sadios e Mohanty et al (2007) que

encontraram altos niacuteveis de metaboacutelitos de NO na urina de pacientes hansenianos

multibacilares reacionais tipo 2 antes da terapia com corticosteroides quando comparado aos

pacientes hansenianos sem estados reacionais e pacientes reacionais sem uso de corticoides

Esse elevado niacutevel do NO em pacientes reacionais sem uso de corticoide pode ser explicado

pela elevada carga bacilar (IB maior que 3) visto que vaacuterios estudos incluindo o divulgado

56

por nosso grupo jaacute relataram que o M leprae pode levar ao aumento de NO e que esse

mediador pode estar envolvidos nos danos neurais observados nos pacientes com hanseniacutease

(SCHALCHER et al 2013 SCHALCHER et al 2014) Corroborando com os resultados

apontados por Schoumln et al (1999) e Mohanty et al (2007) os baixos niacuteveis de NO encontrados

nos pacientes de nosso estudo podem estar associados a vaacuterios aspectos tais como a baixa

carga bacilar encontrada nesses pacientes (IB entre 0 e 1) em sua maioria e sem histoacuterico de

estados reacionais assim como o pequeno nuacutemero de amostra dos grupos em tratamento e a

baixa sensibilidade da teacutecnica usada para detecccedilatildeo desse radical

A produccedilatildeo de EROs com potencial antimicrobiano para o M leprae pode se difundir

para aleacutem dos locais de infecccedilatildeo e afetar os constituintes lipiacutedicos de membrana em especial

os aacutecidos graxos poli-insaturados que satildeo degradados e formam malondialdeiacutedo (MDA

TRIMBAKE et al 2013) Quando a defesa antioxidante eacute baixa haacute maior propensatildeo agrave

instalaccedilatildeo da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica nestas condiccedilotildees o MDA constitui um dos principais

indicadores de danos celulares provocados pela accedilatildeo de EROs

Os pacientes multibacilares tendem a apresentar maior dano celular em oacutergatildeos e

tecidos como evidenciado nos trabalhos de Vijayaraghavan et al (2009) que identificou

niacuteveis de MDA semelhantes em pacientes MB sem tratamento e em uso de PQT e de Abdel-

Hafez et al (2010) no qual os pacientes MB apresentaram niacuteveis seacutericos de MDA mais

elevados que os pacientes PB Esses resultados se contrapotildeem aos encontrados por nosso

grupo que relatou recentemente que os niacuteveis de MDA em pacientes hansenianos natildeo satildeo

alterados com o uso da PQT (SCHALCHER et al 2013 SCHALCHER et al 2014) No

presente estudo o nuacutemero amostral reduzido e pouca sensibilidade do meacutetodo resultaram em

baixos niacuteveis de MDA nos pacientes hansenianos dando falsa sugestatildeo que o PQT natildeo induz

dano a membrana celular e natildeo eleva a peroxidaccedilatildeo lipiacutedica em oacutergatildeos e tecidos

Para conter o avanccedilo de EROs e seus efeitos deleteacuterios em macromoleacuteculas o

organismo dispotildee de um elaborado sistema antioxidante formado por componentes

enzimaacuteticos e natildeo-enzimaacuteticos estes elementos conseguem promover o balanccedilo redox quando

o sistema se expotildee temporariamente agraves EROs e ERNs Dentre outros componentes o sistema

natildeo-enzimaacutetico compreende elementos hidrossoluacuteveis (por exemplo ascorbato urato

flavonoides e glutationa) e componentes lipossoluacuteveis (como os tocoferois carotenoides e

ubiquinol) e o sistema enzimaacutetico conta com as defesas primaacuterias (SOD CAT GPx) e

secundaacuterias a exemplo da GR e da G-6-PD (RATNAM et al 2006)

57

A SOD compreende uma famiacutelia de enzimas com capacidade de dismutar O2- em

H2O2 e oxigecircnio e a presenccedila das formas mitocondrial citosoacutelica e extracelular de SOD no

organismo amplia a capacidade de captaccedilatildeo desse radical e evita possiacuteveis danos teciduais

No presente estudo a atividade dessa enzima natildeo apresentou alteraccedilatildeo nos pacientes

hansenianos em uso de PQT durante o periacuteodo de quatro meses e nem em comparaccedilatildeo com

indiviacuteduos sadios

A reduccedilatildeo das taxas de H2O2 produzidas nos processos endoacutegenos envolve a accedilatildeo de

uma terceira enzima aleacutem do complexo GSH-GPx e da CAT As peroxiredoxinas (Prx) satildeo a

terceira classe de enzimas mais abundantes nos eritroacutecitos apresentam sensibilidade a

pequenas quantidades de H2O2 e protegem a Hb da oxidaccedilatildeo endoacutegena aleacutem de promover a

retirada de hidroperoacutexidos presentes na membrana eritrocitaacuteria (LOW et al 2007) Estudos

apontam que a ausecircncia de Prx2 em ratos promoveu o desenvolvimento de anemia hemoliacutetica

com danos oxidativos em eritroacutecitos (LEE et al 2003) e que o metabolismo de peroacutexidos no

organismo natildeo eacute exclusivo de CAT e Gpx mas requer accedilatildeo de Prx (LOW et al 2003

JOHNSON et al 2005) O baixo niacutevel de atividade de CAT verificado nesse estudo pode estar

relacionado agrave maior accedilatildeo de Prx uma vez que a accedilatildeo de CAT eacute dependente das concentraccedilotildees

de H2O2 Aleacutem disso fatores ligados agrave proacutepria doenccedila e a falta de uma dieta alimentar

adequada podem reduzir elementos essenciais para a manutenccedilatildeo da defesa antioxidante

assim como diminuir a funccedilatildeo enzimaacutetica como verificado por Vijayaraghavan et al (2005) e

Vijayaraghavan e Paneerselvam (2011)

Nesse sentido as buscas por antioxidantes mais potentes tecircm norteado as pesquisas

nas uacuteltimas deacutecadas assim como desvendar seus complexos mecanismos de accedilatildeo De maneira

geral os antioxidantes podem reduzir o dano oxidativo diretamente reagindo com espeacutecies

reativas radicalares e natildeo radicalares ou de forma indireta por duas formas inibiccedilatildeo da

atividade ou de expressatildeo de enzimas geradoras de EROs e com a ativaccedilatildeo da atividade de

enzimas antioxidantes intracelulares ou elevaccedilatildeo da atividade enzimaacutetica destas (LUuml et al

2012)

O RSV eacute um polifenol encontrado em uvas amoras e vinho tinto que tem despertado a

atenccedilatildeo de pesquisadores pelos inuacutemeros benefiacutecios aos organismos vivos desde plantas a

mamiacuteferos Relata-se que esse composto atua na inibiccedilatildeo da agregaccedilatildeo plaquetaacuteria na

modulaccedilatildeo do metabolismo lipiacutedico na inibiccedilatildeo da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica e na vasodilataccedilatildeo

aleacutem de ter atividades antitumoral e estrogecircnica Como antioxidante o RSV tem reduzida

accedilatildeo direta sobre radicais superoacutexido hidroxila e na formaccedilatildeo de radicais induzida por

58

metais no entanto os efeitos protetores deste satildeo atribuiacutedos agrave regulaccedilatildeo positiva da expressatildeo

dos antioxidantes endoacutegenos (FREacuteMONT 2000 SPANIER et al 2009) Por sua vez ALA eacute

encontrado no organismo de eucariontes e participa como cofator no metabolismo da glicose

reduz compostos antioxidantes em sua forma oxidados (como a GSH e as vitaminas C e E) e

vaacuterios estudos comprovam a capacidade de sequestro dos radicais hidroxila aacutecido

hipocloroso e oxigecircnio singlete (PACKER et al 1995)

A accedilatildeo de antioxidantes sobre o Fe2+

ligado agrave hemoglobina assim como na sua forma

livre na circulaccedilatildeo sanguiacutenea eacute de fundamental importacircncia para a quebra do ciclo vicioso

Hb-MetHb-Hb com depleccedilatildeo de antioxidantes endoacutegenos e para impedir a formaccedilatildeo de

metemoglobina e de outros elementos mais toacutexicos atraveacutes das reaccedilotildees de Fenton e Haber-

Weiss nas quais os metais exercem funccedilatildeo de catalisadores Nesse sentido o presente

trabalho mostrou que somente houve accedilatildeo antioxidante de RSV e ALA frente ao Fe3+

quando

utilizados na concentraccedilatildeo de 100 microM e em um seleto grupo de amostras

Os mecanismos de accedilatildeo dos antioxidantes utilizados frente a metais de transiccedilatildeo

diferem entre si como os polifenois que tem na sua estrutura quiacutemica a presenccedila de muitos

grupos hidroxila que apresentam facilidade de doar H+ aos iacuteons HOO

- HO e O2

-

inativando-os (SCHMATZ 2011) Mecanismo semelhante eacute visto em fenocircmenos apoptoacuteticos

induzidos pelo RSV onde se formam complexos ternaacuterios DNA-RSV-Cu2+

que facilitam a

clivagem do DNA No entanto alguns trabalhos apontam que o RSV natildeo atua sobre iacuteons Fe3+

restringindo a accedilatildeo antioxidante do RSV somente a iacuteons Cu2+

(RICE-EVANS et al 1997

FREacuteMONT 2000 LASTRA e VILLEGAS 2007 MIURA et al 2008) Por outro lado os

efeitos quelantes de ALA e DHLA satildeo controversos visto que ambos formam complexos

estaacuteveis com metais permitindo uma faacutecil eliminaccedilatildeo de metais pesados dos sistemas

bioloacutegicos Enquanto ALA tem afinidade para quelar Mn2+

Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma

reduzida desempenha funccedilotildees quelanteredutor frente aos iacuteons Co2+

Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+

aleacutem de formar complexos mais estaacuteveis com Fe3+

que os formados com Fe2+

(BIEWENGA et al 1997 NAVARI-IZZO et al 2002)

Alguns estudos levantam a hipoacutetese de que ALA e DHLA tecircm accedilatildeo reduzida em

situaccedilotildees onde haacute preacutevia formaccedilatildeo de metemoglobina e que o preacute-tratamento com

antioxidantes pode prevenir o estresse oxidativo causado por agentes oxidantes O estudo de

Coleman e Walker (2000) verificou que a utilizaccedilatildeo de ALA 1 mM favoreceu a formaccedilatildeo de

MetHb in vitro em eritroacutecitos de pacientes diabeacuteticos - os quais satildeo propensos a formar

metemoglobina - expostos ao metaboacutelito MADDS-NOH 01 mM por 5 10 e 15 min mesmo

59

com preacutevia incubaccedilatildeo do antioxidante por uma hora Em outro trabalho envolvendo a reduccedilatildeo

da formaccedilatildeo de MetHb in vitro com o uso de antioxidantes em tempos de 30 60 e 120 min de

incubaccedilatildeo Coleman e Taylor (2003) observaram que ALA 1mM somente conseguiu reduzir a

formaccedilatildeo de MetHb in vitro apoacutes o preacute-tratamento de eritroacutecitos e apoacutes a administraccedilatildeo

simultacircnea com DDS 015 mM no tempo de 120 min no entanto os mesmos autores

relataram que DHLA na mesma concentraccedilatildeo de 1 mM apresentou maior efeito redutor que

seu precursor no preacute-tratamento de eritroacutecitos e na administraccedilatildeo simultacircnea com DDS 015

mM nos trecircs tempos observados

Em situaccedilotildees de desequiliacutebrio redox o balanccedilo na atividade de SOD e CAT se faz

essencial na regulaccedilatildeo dos niacuteveis dos radicais superoacutexido e H2O2 nas ceacutelulas visto que

detoxificam estes reativos e evitam a formaccedilatildeo e acuacutemulo de radical hidroxila extremamente

deleteacuterio para macromoleacuteculas O presente trabalho mostrou que em relaccedilatildeo agrave SOD as

concentraccedilotildees de 100 microM e 500 microM de RSV aumentaram a atividade enzimaacutetica de SOD

somente em amostras de indiviacuteduos sem a doenccedila e em amostras de pacientes no 4ordm mecircs de

tratamento para hanseniacutease enquanto a atividade foi mantida nas demais doses terapecircuticas

ALA 100 microM estimulou a atividade enzimaacutetica em amostras de indiviacuteduos sadios e em

amostras de pacientes na 4ordf dose de PQT para hanseniacutease e a concentraccedilatildeo de 500 microM

aumentou a atividade de SOD em amostras de pacientes hansenianos no 5ordm mecircs de tratamento

poliquimioteraacutepico aleacutem dos grupos estimulados com ALA 100 microM Ao avaliar a atividade

de CAT os antioxidantes RSV e ALA diminuiacuteram a funccedilatildeo enzimaacutetica em amostras de

indiviacuteduos sadios nas duas concentraccedilotildees utilizadas no entanto as concentraccedilotildees de 100 microM

e 500 microM de ambos os antioxidantes mantiveram a atividade de CAT nos pacientes em

tratamento para hanseniacutease

Estudos mostram que o up-regulation da atividade enzimaacutetica de enzimas

antioxidantes pode auxiliar na profilaxia ou tratamento de distuacuterbios metaboacutelicos que tenham

como ponto de partida a elevaccedilatildeo de EROs aleacutem de facilitar a remoccedilatildeo de radicais lesivos

conferir resistecircncia ao estresse oxidativo e aumentar a sobrevida de indiviacuteduos (MOKNI et al

2007) Haacute relatos de que os antioxidantes RSV e ALA possam atuar indiretamente na

regulaccedilatildeo da expressatildeo gecircnica ao interagir com o fator nuclear NF-κB o qual eacute relacionado

com a expressatildeo de inuacutemeros mecanismos antioxidantes (PACKER 1995) Contudo a

regulaccedilatildeo positiva ou negativa desses antioxidantes eacute dependente dos tipos celulares da

concentraccedilatildeo utilizada e do tempo de exposiccedilatildeo Neste trabalho as particularidades do estudo

in vitro natildeo permitem avaliar de fato a atividade de regulaccedilatildeo enzimaacutetica de RSV e ALA

60

visto que eritroacutecitos natildeo apresentam capacidade biossinteacutetica e um estudo in vivo certamente

permitiria essa avaliaccedilatildeo com maior clareza

Visto que os antioxidantes estudados satildeo sugestatildeo de terapecircutica para minimizar os

danos toacutexicos causados pelo tratamento vigente para o combate da hanseniacutease e pela produccedilatildeo

de reativos toacutexicos causados pela doenccedila per se estudos posteriores satildeo necessaacuterios no intuito

de avaliar modelos experimentais que reproduzam melhor as condiccedilotildees in vivo e verificar

accedilotildees antioxidantes de RSV e ALA tempo-dependentes nas doenccedilas infecciosas crocircnicas

61

CONCLUSAtildeO

A partir dos resultados pode-se concluir que

Os pacientes que fazem uso de poliquimioterapia para hanseniacutease apresentaram

alteraccedilotildees nos paracircmetros hematoloacutegicos como diminuiccedilatildeo nos valores de hemaacutecias e

aumento na porcentagem de reticuloacutecitos o que reforccedila os efeitos hemoliacuteticos da

administraccedilatildeo do tratamento poliquimioteraacutepico

O reduzido nuacutemero amostral da pesquisa e a baixa sensibilidade das teacutecnicas para

determinaccedilatildeo de MDA e nitritos resultaram em valores subestimados desses analitos

nos pacientes estudados

O percentual de metemoglobina aumentou nos pacientes hansenianos durante os meses

de tratamento com PQT O tratamento com RSV e ALA nas concentraccedilotildees de 100 microM

e 500 microM natildeo alterou o percentual de MetHb em amostras de pacientes que estavam

entre o 4ordm e 6ordm mecircs de uso de PQT no entanto potencializou a formaccedilatildeo de MetHb nas

amostras referentes agrave 7ordf dose de tratamento com PQT

Observou-se nos pacientes hansenianos uma atividade de SOD similar ao controle e

uma decrescida atividade de CAT esta possivelmente diminuiacuteda pela accedilatildeo de enzimas

secundaacuterias como a Prx

O tratamento com RSV na concentraccedilatildeo de 100 microM elevou em duas vezes a atividade

de SOD somente em amostras de pacientes na 4ordf dose de PQT a concentraccedilatildeo de 500

microM de RSV assim como as concentraccedilotildees de ALA natildeo alteraram a atividade

enzimaacutetica de CAT e SOD nos eritroacutecitos de pacientes com hanseniacutease

62

PERSPECTIVAS

A poliquimioterapia para hanseniacutease eacute a barreira mais eficaz contra o avanccedilo da

infecccedilatildeo pelo Mycobacterium leprae apesar de ser conhecida pelos diversos efeitos colaterais

causados ao longo do tratamento (alteraccedilatildeo da pigmentaccedilatildeo da pele distuacuterbios

gastrintestinais hepatite medicamentosa hipersensibilidade agrave dapsona metemoglobinemia

anemia) e por muitas vezes vista pelos pacientes como causa das complicaccedilotildees decorrentes da

doenccedila No entanto os eventos que ocorrem na hanseniacutease e durante a poliquimioterapia satildeo

eventos multifatoriais envolvendo mecanismos de resistecircncia do bacilo a resposta imune do

hospedeiro e a accedilatildeo da poliquimioterapia no combate ao patoacutegeno Desta forma vale ressaltar

a importacircncia de estudos com novas alternativas terapecircuticas com menor toxicidade e que

possam melhorar a vida do paciente principalmente com diminuiccedilatildeo dos efeitos adversos e

das complicaccedilotildees neuro-imunoloacutegicas ocasionadas pela patologia e pela poliquimioterapia

63

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70

ANEXOS

ANEXO 1 Parecer de autorizaccedilatildeo para desenvolvimento da pesquisa emitido pelo Comitecirc de

Eacutetica em Pesquisa em Seres Humanos ndash Instituto de Ciecircncias da Sauacutede da

Universidade Federal do Paraacute

71

ANEXO 2Autorizaccedilatildeo para desenvolvimento da pesquisa emitido pela Unidade de

Referecircncia Especializada ldquoDr Marcello Cacircndiardquo

72

ANEXO 3 Autorizaccedilatildeo para desenvolvimento de pesquisa na UBS Pedreira emitido pela

Secretaria de Sauacutede do Estado do Paraacute- SESPA

73

ANEXO 3Termo de Consentimento Livre e Esclarecido utilizado com pacientes participantes

do estudo

2







Aluno Mariely Cristine Amador Pessocirca

Orientador Profordf Drordf Marta Chagas Monteiro

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Farmacecircuticas

aacuterea de concentraccedilatildeo Faacutermacos e Medicamentos do Instituto de Ciecircncias da Sauacutede

da Universidade Federal do Paraacute como requisito para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre

em Ciecircncias Farmacecircuticas

BELEacuteM - PA

2014

3











Tiacutetulo

CDD 22 ed 616998

4












BANCA EXAMINADORA

_______________________________________________________


(Orientadora)

_________________________________________________________


PPGEAPUFPA

_________________________________________________________


PPGNMTUFPA

5

AGRADECIMENTOS

Ao Onipotente



dessa etapa





setor da PQT







compartilhadas





6


vontaderdquo

(Albert Einstein)

7

RESUMO






























8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

3











Tiacutetulo

CDD 22 ed 616998

4












BANCA EXAMINADORA

_______________________________________________________


(Orientadora)

_________________________________________________________


PPGEAPUFPA

_________________________________________________________


PPGNMTUFPA

5

AGRADECIMENTOS

Ao Onipotente



dessa etapa





setor da PQT







compartilhadas





6


vontaderdquo

(Albert Einstein)

7

RESUMO






























8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

4












BANCA EXAMINADORA

_______________________________________________________


(Orientadora)

_________________________________________________________


PPGEAPUFPA

_________________________________________________________


PPGNMTUFPA

5

AGRADECIMENTOS

Ao Onipotente



dessa etapa





setor da PQT







compartilhadas





6


vontaderdquo

(Albert Einstein)

7

RESUMO






























8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

5

AGRADECIMENTOS

Ao Onipotente



dessa etapa





setor da PQT







compartilhadas





6


vontaderdquo

(Albert Einstein)

7

RESUMO






























8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

6


vontaderdquo

(Albert Einstein)

7

RESUMO






























8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

7

RESUMO






























8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

8

ABSTRACT













group only in 4th

to 6th





in 4th








9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

9

















PQT 45











10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

10





11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

11

LISTA DE TABELAS



12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

12






CAT Catalase

CFZ Clofazimina


Cu2+




DDS Dapsona










Fe2+

Iacuteon ferroso




13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

13








κ Kappa




MetHb Metemoglobina

mL mililitro

microL microlitro

microM milimolar





NO2- Nitrito




Prx Peroxiredoxina


RO Radical alcoxila


14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

14

RMP Rifampicina







15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

15

SUMAacuteRIO




22 Dapsona 21





252 Resveratrol 30

3 OBJETIVOS 32

31 Geral 32


5 METODOLOGIA 33

51 Materiais 34










6 RESULTADOS 42


16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

16



RSV 45


48


51

7 DISCUSSAtildeO 54

CONCLUSAtildeO 61

PERSPECTIVAS 62

REFEREcircNCIAS 63

ANEXOS 70

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

17











2009)



















18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



72



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do estudo

18





19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



72



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do estudo

19


























20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

20











de dapsona






21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





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(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































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2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




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82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

21





22 Dapsona
















22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






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6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









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na Figura 18

49





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(Figura 19)


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































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2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

22








(BRAGUETTO 2007)




23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















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252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











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5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









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na Figura 18

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(Figura 19)


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53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

23


1998)

















HbFe(III) + O2-

(1)




convertido em Fe2+

Existe






24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



72



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do estudo

24








O2- + O2

- + 2H

+ H2O2 + O2 (2)

O2- + H2O2 O2 + HO


Fe2+

+ H2O2 Fe3+


25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





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(Figura 19)


51









52






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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


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2003




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82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

25




























26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































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61

CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




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82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















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24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

26





de 120 dias



























(HO) peroxila (RO2

) e alcoxila (RO



27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






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6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




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82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

27

















9 M

-1 s

-1 representado no

mecanismo abaixo

2 O2- + 2 H

+

SOD H2O2 + O2 (5)








2 GSH + H2O2 GPx

2 H2O + GSSG (6)




28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




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82 pp 47-95 2002


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1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



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do estudo

28




H2O2 CAT

2 H2O + O2 (7)


oxidativo














(RATNAM et al 2006)








29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






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6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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1992



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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



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1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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Quagliato 2000






















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226-229 2013








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306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

29






















30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

30







252 Resveratrol






(FREacuteMONT 2000)








31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

31












2+ e

Fe3+

















32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

32

3 OBJETIVOS

31 Geral



poliquimioterapia

32 Especiacuteficos











33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




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82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

33

5 METODOLOGIA






(ANEXOS 2 e 3)






nesses pacientes













34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



72



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do estudo

34


51 Materiais















35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

35




















material colhido




36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



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do estudo

36


foram



















MetHb= x 100 (1)

onde





37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



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73


do estudo

37



DISMUTASE (SOD)




25degC






38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































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2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















62

PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











64

















390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







66









Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






70

ANEXOS




71



72



73


do estudo

38




















10

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


54

7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































57



























2012)







58














quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








61

CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












63

REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




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82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















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24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









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ANEXOS




71



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do estudo

39







a 4 mg dL










40




MDAmL de plasma









12)


41






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6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





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(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































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2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










59


































60








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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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REFEREcircNCIAS
























1199 2010











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390 pp 1-11 2008




249 1992


26 n 7 pp 1461-1467 1995




2003




2004





82 pp 47-95 2002


65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















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24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








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428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




71



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do estudo

40




MDAmL de plasma









12)


41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









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na Figura 18

49





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(Figura 19)


51









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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























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2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

Hg2+










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60








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CONCLUSAtildeO





















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PERSPECTIVAS












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65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



208 2000




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pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















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24 pp 471-476 1987





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ANEXOS




71



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do estudo

41






42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





50


(Figura 19)


51









52






53


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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























55


































56

































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2012)







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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



840ndash860 2010






1-10 2012



6055 Nov1969






350 2008



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Quagliato 2000






















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24 pp 471-476 1987





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ANEXOS




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do estudo

42

6 RESULTADOS











(n=13)

Gecircnero

Masculino 538 (n=7)

Feminino 462 (n=6)

Faixa etaacuteria

18-40 77 (n=1)

41-65 923 (n=12)

Forma cliacutenica



IB

0-1 616 (n=8)

1-2 -

+ de 3 232 (n=3)



43





exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





45















respectivamente)

46





de PQT (Fig 16)


47









48















na Figura 18

49





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(Figura 19)


51









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7 DISCUSSAtildeO




pacientes



























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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



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do estudo

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exemplo da dapsona







Controle

(n=7)

D0Lit D4 (n=3) D5 (n=3) D6 (n=4) D7 (n=3)

Hemaacutecias (x10

6mL)



Plaquetas (Ummsup3)













44





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de PQT (Fig 16)


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pacientes



























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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

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do estudo

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pacientes



























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quando





- HO e O2

-



que facilitam a








Cu2+

Zn2+

e Pb2+

sua forma


Ni2+

Cu2+

Zn2+

Pb2+

e

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REFEREcircNCIAS
























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- HO e O2

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que facilitam a








Cu2+

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e Pb2+

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Ni2+

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- HO e O2

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Cu2+

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e Pb2+

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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



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6055 Nov1969






350 2008



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- HO e O2

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Cu2+

Zn2+

e Pb2+

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Ni2+

Cu2+

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e

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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



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do estudo

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- HO e O2

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Cu2+

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840ndash860 2010






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6055 Nov1969






350 2008



208 2000




67






pp 463-470 2002








Quagliato 2000






















68









24 pp 471-476 1987





pp 111-116 2009









226-229 2013








2014








69




428-439 2009


306 pp 103-124 2014






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ANEXOS




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do estudo

65


















1992



133 2004








February 2009







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Beleacutem 2008



Blood v 109 pp 2611-2617 2007



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O EFEITO in vitro DOS COMPOSTOS ÁCIDO ALFA-LIPOICO E … · antioxidant activity in installed...

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