Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.
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Meios de cultivo utilizados Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínicana Bacteriologia Clínica
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Introdução à Microbiologia Clínica
O exame microbiológico deve responder às seguintes perguntas:- Há bactérias presentes na amostra? - Qual?- Quais medicamentos devem ser utilizados?
Exame bacterioscópico
CulturaProvas de identificação
Teste de sensibilidade aos antimicrobianos
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Cultura de bactérias – Aspectos Gerais
Coleta da amostra:
Uso de antibióticos? Evitar contaminação da amostra Quantidade de amostra suficiente Transporte da amostra Qual o sítio anatômico da coleta Correta identificação da amostra Em que momento deve ser feita a coleta?
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Cultura de bactérias – Aspectos Gerais
Semeadura: Quais meios de cultura semear? Como semear?
Incubação: Qual temperatura? Quanto tempo? Qual concentração de CO2?
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Semeadura - Técnicas
Técnicas de isolamento de microrganismos:
técnica de esgotamento
técnica de semeadura em superfície
método de pour-plate
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Semeadura por esgotamento
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Semeadura em superfície
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Semeadura – Qual meio utilizar?
MacConkey: seletivo e diferencial (lactose) para Gram negativos
Sangue: enriquecimento e diferencial (hemólise)
Tioglicolato: enriquecimento, cultura de anaeróbios estritos
SS: seletivo e diferencial (lactose).
Thayer-Martin: enriquecimento e seletivo
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Meios de cultura e amostras biológicas
Ferida cirúrgica: Ferida cirúrgica: AS, MC, LJ e SABAS, MC, LJ e SABCoprocultura:Coprocultura: MC e SSMC e SSEscarro:Escarro: AS e MCAS e MCEscarro-tuberculose:Escarro-tuberculose: LJLJSecreção nasal:Secreção nasal: AS e MCAS e MCPonta de cateter:Ponta de cateter: ASASUrina:Urina: CLED e MCCLED e MC
AS: agar sangueAS: agar sangue LJ: Lowenstein-JensenLJ: Lowenstein-JensenMC: MacConkeyMC: MacConkey SAB: SabouraudSAB: Sabouraud
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Condições de crescimentoOxigênio
Aeróbicos estritos
Anaeróbicos facultativos
Anaeróbios obrigatórios
Anaeróbios aerotolerantes
Microaerófilas
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Incubação
EstufaEstufa
Jarra de anaerobioseJarra de anaerobiose
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Meios de CulturaAspectos gerais
Cultivar e manter microrganismos viáveis no laboratório
Substâncias essenciais para o crescimento das bactérias
Crescimento seletivo Demonstração de propriedades biológicas Isolamento
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Meio de CulturaPrincipais produtos e compostos utilizados
Hidrolizados de proteínas Carboidratos Tampões Enriquecimento Inibidores
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Meio de CulturaPrincipais produtos e compostos utilizados
Indicadores de pH Outros indicadores Ágar Substratos para a ação de enzimas
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ClassificaçãoFormulação
Sólidos (ágar) 1 a 2,0 %
Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 %
Caldos Ativação das culturas, repiques de micro-
organismos, provas bioquímicas
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FinalidadeMeios de pré-enriquecimento
Microrganismos injuriados Ex: Água peptonada,, Caldo lactosado
Caldo lactosadoCaldo lactosado
Caldo lactosado
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Finalidade Meios de Enriquecimento
Ideal para quando há poucos micro-organismos, crescimento lento, exigentes e fastidiosos.
Ex: infusão de cérebro e coração (BHI), Caldo Tioglicolato
Caldo tioglicolato
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FinalidadeDiferenciais
Identifica micro-organismos parecidosEx: Ágar Sangue, Ágar MacConkey
Ágar MacConkey
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FinalidadeSeletivos
Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros
Ex: Ágar Salmonella-Shigella (SS) - Isolamento Salmonella e Shigella sp
Ágar Salmonella-Shigella (SS)
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FinalidadeIdentificação
Realização de provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas de organismos
Ex: Ágar Citrato, Ágar Bile-Esculina
Ágar bile-esculina
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FinalidadeIdentificação
Avaliam determinadas atividades metabólicas permitindo caracterização e identificação Ex: Uréia, Ágar TSI (Tríplice açucar ferro)
Ágar TSI (tríplice açúcar ferro)
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Meios de Transporte e Conservação
Meio Stuart
Cary Blair
Salina Tamponada
Ágar Nutriente
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Meios de Transporte e ConservaçãoMeio Stuart
Impede a multiplicação do microrganismos e garante apenas sua sobrevivência. Cor original do meio: Branco opalescente. Não há evidência de crescimento bacteriano.
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Meios para Crescimento e Meios para Crescimento e IsolamentoIsolamento
Ágar Chocolate
Meio rico e não seletivo Microrganismos exigentes Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho
em temperatura alta (hemina e hematina)
Haemophilus sp., Neisseria sp.,
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Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Chocolate
Haemophilus sp.
Neisseria sp.
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Meios para Crescimento e Isolamento
Thayer MartinÁgar Chocolate com Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f)
e Trimetoprim
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Meio rico e não seletivo Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores)
e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)
Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar Sangue
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S. aureus - colônias -hemolíticas
Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Sangue
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Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar MacConkey
Isolamento de bacilos Gram negativos (seletivo) Inibe bactérias Gram positivas
Utilização de lactose (diferencial) Lactose positiva – coloração avermelhada Lactose negativa – coloração inalterada
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Salmonella. E.coli
Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar MacConkey
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Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar MacConkey
Klebsiella sp
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Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Salmonella-Shigella (SS)
Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio)
Tiossulfato de sódio e o citrato férrico
Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella.
Colônias incolores: suspeita de Shigella spp
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Salmonella e Shigella
Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Salmonella-Shigella (SS)
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Utilizado para semear amostras de urina Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos,
Gram negativos e leveduras.
Cor original do meio: azul claro. Colônias lactose positiva: cor amarela. Colônias lactose negativa: cor azul.
Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar CLED – cystine lactose electrolyte
deficient
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Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar CLED – cystine lactose electrolyte deficient
![Page 37: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/37.jpg)
Meios para Crescimento e Isolamento
Löwenstein Jensen
Base formada por ovos integrais Isolamento primário de micobactérias.
Cor original do meio: verde claro Positivo: Crescimento de colônias
amarelas/vermelhas Negativo: ausência de crescimento
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Meios para Crescimento e IsolamentoLöwenstein Jensen
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esverdeado
Identificação e ClassificaçãoÁgar Sangue
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S. aureus - colônias -hemolíticas
Alpha-hemólise (Streptococcus pneumoniae)
Beta-hemólise (Streptococcus pyogenes)
Gama-hemólise (Enterococcus faecalis)
Identificação e ClassificaçãoÁgar Sangue
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Provas de IdentificaçãoÁgar DNAseÁgar DNAse
![Page 42: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/42.jpg)
Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos
Ágar Mueller Hinton
Ágar Sangue
![Page 43: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/43.jpg)
Kirby e Bauer e pelo CLSI - condições de crescimento das principais bactérias.
Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp.
Sensibilidade aos AntimicrobianosÁgar Mueller Hinton
![Page 44: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/44.jpg)
Teste de Sensibilidade aos AntimicrobianosÁgar Mueller Hinton
Sensível a novobiocina
S. Saprophyticus Resistente
S. epidermidis
![Page 45: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/45.jpg)
Resistente e sensível à oxacilina MRSA
Teste de Sensibilidade aos AntimicrobianosÁgar Mueller Hinton
![Page 46: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/46.jpg)
Resumo dos tipos de meio e quais micro-organismos costumam crescer
![Page 47: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/47.jpg)
Meios de cultura para fungos
Ágar Sabouraud (meio sólido)
BHI (meio líquido)
Semeadura: em superfície
Incubação: temperatura de 25 a 30 graus por até 4 semanas.
![Page 48: Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica.](https://reader031.fdocumentos.tips/reader031/viewer/2022020107/570638651a28abb8239022a8/html5/thumbnails/48.jpg)
Agar Sabouraud