Imunologia PRINCÍPIOS

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CapÌtulo†1ImunologiaImunologiaImunologiaImunologiaImunologia

AntÙnio†TevaJosÈ†Carlos†Couto†Fernandez

Valmir†Laurentino†Silva

1.† IntroduÁ„o† ‡† Imunologia1.† IntroduÁ„o† ‡† Imunologia1.† IntroduÁ„o† ‡† Imunologia1.† IntroduÁ„o† ‡† Imunologia1.† IntroduÁ„o† ‡† Imunologia

A†imunologia†È†uma†ciÍncia†recente.†Sua†origem†È†atribuÌda,†por†algunsautores,†a†Edward†Jenner,†que,†em†1796,†verificou†proteÁ„o†induzida†pelocowpox†(vÌrus†da†varÌola†bovina)†contra†a†varÌola†humana,†nomeando†tal†pro-cesso†da†vacinaÁ„o.†No†entanto,†È†sabido†que,†na†antiguidade,†os†chineses†j·inalavam†o†pÛ†das† crostas† secas†das†p˙stulas†de† varÌola†ou† as† inseriam†empequenos†cortes†na†pele,†em†busca†de†proteÁ„o.

O†sistema†imune†È†o†conjunto†de†cÈlulas,†tecidos,†Ûrg„os†e†molÈculasque†os†humanos†e†outros†seres†vivos†usam†para†a†eliminaÁ„o†de†agentes†oumolÈculas† estranhas,† inclusive† o† c‚ncer,† com† a† finalidade† de† se† manter† ahomeostasia†do†organismo.†Os†mecanismos†fisiolÛgicos†do†sistema†imune†con-sistem†numa†resposta†coordenada†dessas†cÈlulas†e†molÈculas†diante†dos†orga-nismos†infecciosos†e†dos†demais†ativadores,†o†que†leva†ao†aparecimento†derespostas†especÌficas†e†seletivas,†inclusive†com†memÛria†imunit·ria,†que†tambÈm

20†| Conceitos†e†MÈtodos†para†a†FormaÁ„o†de†Profissionais†em†LaboratÛrios†de†Sa˙de

pode†ser†criada†artificialmente,†atravÈs†das†vacinas.†Na†ausÍncia†de†um†sistemaimune†funcional,†infecÁıes†leves†podem†sobrepujar†o†hospedeiro†e†lev·-lo†‡morte.†PorÈm,†mesmo†com†um†sistema†imune†funcional,†o†homem,†por†exem-plo,†pode†adquirir†uma†doenÁa†infecciosa†ou†um†c‚ncer,†pois†a†resposta†imuneespecÌfica,†diante†de†um†agente†agressor,†leva†tempo†para†se†desenvolver†e,alÈm†disso,†tanto†organismos†estranhos,†como†cÈlulas†neopl·sicas,†desenvol-vem†mecanismos†de†evas„o†para†fugir†da†resposta†imune.

Neste†capÌtulo,†ser„o†abordados†conceitos†b·sicos†dos†principais†com-ponentes† do† sistema† imune,† os†mecanismos† de† resposta† especÌfica† ante† osdiversos†agentes†infectoparasit·rios,†como†tambÈm†a†investigaÁ„o†dos†vestÌgiosda†passagem†desses†agentes,†por†meio†de†mÈtodos†laboratoriais†para†pesquisade†antÌgenos†e†anticorpos†especÌficos,†principal†propÛsito†desse†texto,†umavez†que†se†destina†a†alunos†de†escolas†tÈcnicas†de†nÌvel†mÈdio.

2.† ”rg„os,† tecidos† e† cÈlulas2.† ”rg„os,† tecidos† e† cÈlulas2.† ”rg„os,† tecidos† e† cÈlulas2.† ”rg„os,† tecidos† e† cÈlulas2.† ”rg„os,† tecidos† e† cÈlulasenvolvidos† na† resposta† imunit·riaenvolvidos† na† resposta† imunit·riaenvolvidos† na† resposta† imunit·riaenvolvidos† na† resposta† imunit·riaenvolvidos† na† resposta† imunit·ria

2.1.†CÈlulas†que†participam†do†sistema†imunit·rio

As†respostas†imunes†s„o†mediadas†por†uma†variedade†de†cÈlulas†e†pormolÈculas†que†estas†cÈlulas†expressam†(Figura†1).†Os†leucÛcitos†s„o†as†cÈlulasque†desempenham†as†principais†aÁıes,†mas†outras†cÈlulas,†que†se†encontramnos†tecidos,†tambÈm†participam†da†resposta†imunit·ria,†enviando†sinais†e†rece-bendo†estÌmulos†dos†leucÛcitos.†As†cÈlulas†que†participam†do†sistema†imunit·riose†originam†na†medula†Ûssea,†onde†muitas†evoluem†para†a†fase†adulta.†A†partirda†medula,†e†por†meio†de†vasos†sanguÌneos,†elas†migram†junto†com†todos†oselementos†celulares†do†sangue.†Inclusive†as†hem·cias,†que†transportam†o†oxigÍ-nio,†e†as†plaquetas†que†participam†da†coagulaÁ„o,†uma†vez†que†estes†elemen-tos† se†originam†das† cÈlulas-tronco†progenitoras†da†medula.†As† cÈlulas†quederivam† do† progenitor† mieloide† e† do† progenitor† linfoide† s„o† as† que† mais

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interessam†para†o†entendimento†das†aÁıes†do† sistema† imunit·rio,†de†modoque,†neste†texto,†n„o†ser„o†considerados†os†megacariÛcitos†e†os†eritrÛcitos.

O† progenitor† mieloide† È† o† precursor† dos† granulÛcitos,† fagÛcitosmononucleares†(macrÛfagos),†cÈlulas†dendrÌticas†e†mastÛcitos†do†sistema†imu-ne.†Os†macrÛfagos†s„o†as†cÈlulas†fagocit·rias†mais†relevantes.†Estas†cÈlulas†s„oa†forma†diferenciada†dos†monÛcitos†sanguÌneos,†que†se†encontram†estrategica-mente†distribuÌdos†em†v·rios†tecidos†para†dar†origem†ao†sistema†fagocit·riomononuclear.†Os†microgliÛcitos†s„o†os†macrÛfagos†do†cÈrebro,†as†cÈlulas†deKupffer†s„o†os†macrÛfagos†do†fÌgado,†os†macrÛfagos†alveolares†fazem†parte†dotecido†pulmonar,†entre†outros†macrÛfagos†residentes†em†diferentes†tecidos.†AsfunÁıes†dos†macrÛfagos†se†caracterizam†pela†neutralizaÁ„o,†ingest„o†e†destrui-Á„o†de†partÌculas,†incluindo†os†biopatÛgenos,†alÈm†de†processar†e†apresentarantÌgenos†para†os†linfÛcitos†T.†Neste†contexto,†s„o†as†cÈlulas†dendrÌticas†asmais†especializadas†na†captura†e†na†apresentaÁ„o†de†antÌgenos†para†os†linfÛcitosT.†As†cÈlulas†dendrÌticas†imaturas†migram†do†sangue†para†residirem†nos†tecidose†realizam†tanto†a†fagocitose†quanto†a†micropinocitose.†ApÛs†o†encontro†comum†patÛgeno,†maturam†rapidamente†e†migram†para†os†nÛdulos†linf·ticos,†ondeencontram†o†ambiente†adequado†para†a†apresentaÁ„o†de†antÌgenos.

Os†granulÛcitos†recebem†essa†denominaÁ„o†por†possuÌrem†gr‚nulos†emseu†citoplasma†que†se†coram†densamente†por†corantes†hematolÛgicos†tradicio-nais.†S„o†tambÈm†chamados†de†leucÛcitos†polimorfonucleares,†devido†‡s†formasde†seus†n˙cleos.†Existem†trÍs†tipos†de†granulÛcitos,†sendo†eles†os†neutrÛfilos,†oseosinÛfilos†e†os†basÛfilos;†todos†com†um†tempo†de†vida†relativamente†curto†eproduzidos†em†grande†n˙mero†durante†as†respostas†inflamatÛrias.

Os†neutrÛfilos,†assim†como†os†macrÛfagos†e†as†cÈlulas†dendrÌticas,†s„orepresentantes†do† grupo†de† cÈlulas† fagocit·rias† do† sistema† imunit·rio,†mas,diferentemente†destas†cÈlulas,†n„o†apresentam†antÌgenos†para†os†linfÛcitos†T.Os†neutrÛfilos†s„o†os†elementos†celulares†mais†numerosos†e† importantes†daresposta†inata.

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Os† eosinÛfilos† parecem† ser† importantes,† principalmente† na† respostadiante† de† infecÁıes† parasit·rias† ou† processos† alÈrgicos,† j·† que† seu† n˙meroaumenta†no†curso†destas†reaÁıes.

A†funÁ„o†dos†basÛfilos†provavelmente†È†similar†e†complementar†‡†doseosinÛfilos†e†mastÛcitos.

Os†mastÛcitos,† cujo† precursor† parece† ser† comum† aos† basÛfilos,devido†a†semelhanÁas†funcionais,†tambÈm†se†diferenciam†ao†chegar†aostecidos† onde† residem.† Eles† se† localizam† principalmente† ‡†margem† dosvasos†sanguÌneos†e†liberam†mediadores†que†agem†nas†paredes†vascularesquando†ativados.

Figura†1.†CÈlulas†que†participam†do†sistema†inunit·rio

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O†progenitor†linfoide†comum†d·†origem†aos†linfÛcitos.†Os†linfÛcitos†s„oas†cÈlulas†que†reconhecem,†especificamente,†os†antÌgenos.†Sua†morfologia†tÌpicaconsiste†em†uma†pequena†cÈlula†redonda†com†n˙cleo†esfÈrico.†Apesar†da†aparÍn-cia†uniforme†‡†microscopia†Ûtica,†v·rios†tipos†de†linfÛcitos†podem†ser†distinguidoscom†base†nas†suas†propriedades†funcionais†e†proteÌnas†especÌficas†que†expressam.A†distinÁ„o†mais† fundamental†consiste†na†classificaÁ„o†destas†cÈlulas†em†duaslinhagens†principais,†conhecidas†como†linfÛcitos†B†e†linfÛcitos†T.

Os†linfÛcitos†B,†tambÈm†chamados†de†cÈlulas†B†(de†bursa†ou†bolsa†deFabricius,† nas† aves,† e†derivadas†da†medula† Ûssea,† nos†mamÌferos),† quandoativados,†proliferam†e†se†diferenciam†em†cÈlulas†plasm·ticas†ou†plasmÛcitos,que†s„o†as†cÈlulas†efetoras†da†linhagem†B,†cuja†funÁ„o†principal†È†a†secreÁ„o†deanticorpos.†Os†linfÛcitos†T,†ou†cÈlulas†T†(derivados†do†timo),†se†apresentamem†duas†classes†principais.†Uma†se†diferencia,†quando†ativada,†em†cÈlulas†TCD8+†ou†citotÛxicas,†que†matam†as†cÈlulas†infectadas,†ao†passo†que†a†outraclasse†de†cÈlulas†T,†chamadas†de†cÈlulas†T†CD4+†ou†auxiliares,†atuam†naativaÁ„o†de†outras† cÈlulas,† como†os† linfÛcitos†B† e†os†macrÛfagos,† alÈm†decoordenar†a†resposta†imunit·ria.

O†receptor†de†antÌgeno†da†cÈlula†B†(BCR)†(Figura†2)†È†uma†forma†deanticorpo†ligada†‡†membrana†que†a†cÈlula†B†passa†a†produzir,†apÛs†sua†ativaÁ„oe†diferenciaÁ„o†em†cÈlula†plasm·tica.†Os†anticorpos†s„o†molÈculas†agrupadasem†uma†classe†de†subst‚ncias†denominadas†imunoglobulinas,†e†o†receptor†deantÌgeno†do†linfÛcito†B†È†tambÈm†conhecido†como†imunoglobulina†de†mem-brana.†A† imunidade† humoral† È† a† principal† funÁ„o† das† cÈlulas† B† e† dosplasmÛcitos,†e†consiste†em†secretar†anticorpos†no†sangue†e†em†outros†lÌquidosorg‚nicos,†resultando†efeitos†protetores,†mediados†por†lÌquidos†teciduais.

O†receptor†de†antÌgeno†da†cÈlula†T†(TCR)†(Figura†2)†constitui†umaclasse†heterogÍnea†de†proteÌnas†de†membrana†que,†embora†estejam†relaciona-das†evolutivamente†com†as†imunoglobulinas,†s„o†diferentes†delas,†j·†que†est„o

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adaptadas† para† detectar† antÌgenos† derivados† de† proteÌnas† estranhas† oupatÛgenos†que†entram†nas†cÈlulas†hospedeiras.†Todavia,†em†contraste†com†asimunoglobulinas,†os†TCRs†nunca†s„o†secretados,†de†modo†que†a†cÈlula†Tprecisa†migrar†atÈ†as†·reas†de†les„o†para†exercer†seus†efeitos†protetores,†pormeio†de†contato†direto†com†a†cÈlula†alvo†ou†para†influenciar†as†atividades†deoutras† cÈlulas† do† sistema† imunit·rio.† Juntamente† com† os† macrÛfagos,† ascÈlulas†T†desenvolvem†uma†categoria†de†resposta†imune†denominada†imuni-dade†mediada†por†cÈlulas.

Figura†2.†Estruturas†b·sicas†do†receptor†de†superfÌcie†da†cÈlula†B†e†do†receptor†T.

A†maioria†dos† linfÛcitos† virgens†possui† uma† sobrevida†muito† curta,sendo†programada†para†morrer†em†poucos†dias†apÛs†ter†saÌdo†da†medulaÛssea†ou†do†timo.†No†entanto,†se†uma†dessas†cÈlulas†receber†sinais†indican-do†a†presenÁa†de†um†imunÛgeno†(antÌgeno†que†estimula†uma†resposta†imuneespecÌfica),† ela† poder·† responder† por† meio† de† um† fenÙmeno† conhecidocomo†ativaÁ„o,†durante†o†qual†pode†sofrer†v·rios†ciclos†de†divis„o†celular.

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Algumas†das†cÈlulas-filhas†retomam†ao†estado†de†repouso,†tornando-se†cÈlu-las†de†memÛria,†que†podem†sobreviver†por†v·rios†anos.†Estes†linfÛcitos†dememÛria†representam†uma†grande†proporÁ„o†das†cÈlulas†do†sistema†imunit·rio.A†outra†progÍnie†do†linfÛcito†virgem†ativado†diferencia-se†em†cÈlulas†efetoras,que†sobrevivem†apenas†alguns†dias,†mas†que,†durante†este†perÌodo,†executamatividade†que†resultam†em†defesa.

Outra†classe†de†cÈlulas†linfoides,†chamada†de†cÈlulas†matadoras†natu-rais† ou† cÈlulas† natural† killer† (NK),† È† desprovida† de† receptores† antÌgeno-especÌficos,† sendo†parte† do† sistema† imune† inato.† Essas† cÈlulas† circulam† nosangue† como† grandes† linfÛcitos,† com†diferentes† gr‚nulos† citotÛxicos,† e† s„ocapazes†de† reconhecer† e†matar† algumas† cÈlulas† anormais,† tais† como† cÈlulastumorais†e†cÈlulas†infectadas†por†vÌrus.†E†parecem†ser†importantes†na†defesacontra†biopatÛgenos†intracelulares†na†imunidade†inata.

2.2.†Os†Ûrg„os†linfoides†e†a†rede†linf·tica

Os†Ûrg„os†linfoides†(Figura†3)†s„o†tecidos†organizados†que†contÍmgrandes†quantidades†de†linfÛcitos†em†um†ambiente†de†cÈlulas†n„o†linfoides.Nesses†Ûrg„os,†as†interaÁıes†que†os†linfÛcitos†tÍm†com†as†cÈlulas†n„o†linfoidess„o†importantes,†tanto†para†o†desenvolvimento†dos†linfÛcitos†e†o†inÌcio†daresposta†imune†adaptativa,†como†para†a†manutenÁ„o†dos†mesmos.†Tais†Ûr-g„os†podem†ser†divididos†em†Ûrg„os†linfoides†centrais†ou†prim·rios,†produ-tores†de†linfÛcitos,†e†Ûrg„os†linfoides†perifÈricos†ou†secund·rios,†que†de-sempenham† a† funÁ„o† de† maximizar† o† encontro† entre† os† linfÛcitos† e† osprodutos†processados†pelas†cÈlulas†apresentadoras†de†antÌgenos,†dando†inÌ-cio† ‡† resposta† imune.†Os† Ûrg„os† linfoides† centrais† s„o† a†medula† Ûsseavermelha†e†o†timo,†um†grande†Ûrg„o†localizado†na†porÁ„o†superior†do†tÛrax.Tanto†os†linfÛcitos†B†como†as†cÈlulas†T†surgem†na†medula†Ûssea,†mas†apenasos†linfÛcitos†B†ali†se†diferenciam.†Os†linfÛcitos†T†migram†para†o†timo†parasofrer† seu†processo†de†diferenciaÁ„o.†Uma†vez† completada† sua†maturaÁ„o

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celular,†os†dois†tipos†de†linfÛcitos†entram†na†corrente†sanguÌnea,†migrandopara†os†Ûrg„os†linfoides†perifÈricos.†Durante†a†vida†intrauterina,†o†fÌgadofetal†desempenha†o†papel†que†a†medula†Ûssea†vermelha†passa†a†desenvol-ver†plenamente†apÛs†o†nascimento.

Os† Ûrg„os† linfoides† perifÈricos† s„o† especializados† na† captura† doantÌgeno†para†possibilitar†o† inÌcio†das† respostas† imunes† adaptativas.†Osmicrorganismos† patogÍnicos† podem† penetrar† no† hospedeiro† por† muitasportas†de†entrada,†instalando†o†processo†infeccioso†em†qualquer†sÌtio,†maso†encontro†do†antÌgeno†com†os†linfÛcitos†acontecer·†nos†Ûrg„os†linfoidesperifÈricos:†os†nÛdulos†linf·ticos,†o†baÁo†e†v·rios†tecidos†linfoides†associa-dos†‡s†superfÌcies†das†mucosas.†Os†linfÛcitos†est„o†em†contÌnua†recirculaÁ„oentre†esses†tecidos,†para†os†quais†o†antÌgeno†tambÈm†È†carreado,†vindo†detodos†os†locais†de†infecÁ„o,†primariamente†dentro†de†macrÛfagos†e†cÈlulasdendrÌticas.†Dentro†dos†Ûrg„os†linfoides,†cÈlulas†especializadas,†como†ascÈlulas†dendrÌticas†maduras,†apresentam†o†antÌgeno†para†os†linfÛcitos.

A† rede† linf·tica† consiste† em† um† extenso† sistema† de† vasos† quecoletam† o† lÌquido† intersticial,† fazendo-o† retornar† para† o† sangue.† EsselÌquido†intersticial†È†produzido†continuamente†pela†passagem†de†·gua†esolutos†de†baixo†peso†molecular†atravÈs†das†paredes†vasculares†que†pe-netram†no†espaÁo† intersticial,†pela†secreÁ„o†celular†e†outros† fatores†deexcreÁ„o.†Ao†ser†parcialmente†drenado†para†os†vasos†linf·ticos,†passa†aser†chamado†de†linfa.†A†linfa†flui†lentamente†pelos†vasos†linf·ticos†prim·-rios,†des·gua†em†vasos†linf·ticos†de†calibre†progressivamente†maior,†queconvergem†para†o†ducto† tor·cico,†e†desemboca†na†veia†cava†superior,que,†por†sua†vez,†devolve†todo†o†volume†para†a†corrente†sanguÌnea,†numfenÙmeno†denominado† recirculaÁ„o.

Localizados†em†pontos†de†convergÍncia†da†rede†vascular,†os†nÛdu-los†linf·ticos†constituem†uma†sÈrie†de†Ûrg„os†encapsulados†em†forma†deìcaroÁo†de†feij„oî,†que†se†distribuem†ao†longo†dos†vasos†linf·ticos.†Os

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vasos†linf·ticos†aferentes†drenam†o†fluido†dos†tecidos†e†carregam†antÌgenose†cÈlulas†infectadas†aos†seios†dos†nÛdulos†linf·ticos,†onde†os†antÌgenos†s„ocapturados.†Os†seios†s„o†revestidos†por†orifÌcios†min˙sculos,†que†permi-tem†a†linfa†e†seu†conte˙do†atravessarem†o†nÛdulo†linf·tico†e†entrarem†emcontato†com†os†linfÛcitos.†Nos†nÛdulos†linf·ticos,†os†linfÛcitos†B†se†locali-zam† em† folÌculos† nas† ·reas† corticais,† tambÈm† denominadas† ·reas† timo-independentes;†as†cÈlulas†T†s„o†mais†difusamente†distribuÌdas†em†torno†das·reas†paracorticais,†tambÈm†conhecidas†como†zonas†de†cÈlulas†T†ou†·reastimo-dependentes.†Alguns†dos†folÌculos†de†cÈlulas†B†contÍm†·reas†cen-trais,†denominadas†centros†germinativos,†onde†ocorre†intensa†proliferaÁ„odos†linfÛcitos†B,†apÛs†seu†encontro†com†o†antÌgeno†especÌfico†e†cÈlulas†Tauxiliares.†Por†fim,†a†linfa†sai†por†um†vaso†linf·tico†eferente†no†lado†opostodo†nÛdulo†linf·tico,†numa†regi„o†conhecida†como†hilo.

O†baÁo†encontra-se†situado†atr·s†do†estÙmago†e†filtra†o†sangue†damesma†forma†como†os†nÛdulos†linf·ticos†filtram†a†linfa†e†coletam†antÌgenos.TambÈm†captura†e† se†desfaz†de†cÈlulas† vermelhas† senescentes.†A†massaprincipal†deste†Ûrg„o†È†composta†pela†polpa†vermelha†e†os†linfÛcitos†cir-cundam†as†arterÌolas†que†o†penetram,†formando†·reas†da†polpa†branca,†cujaregi„o†mais†interna†È†dividida†em†uma†camada†linfoide†periarteriolar,†con-tendo†principalmente†cÈlulas†T†e†revestidas†por†uma†coroa†de†cÈlulas†B.

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Figura†3.†”rg„os,†tecidos†e†cÈlulas†envolvidos†na†resposta†imunit·ria.

2.3.Tecido†linfoide†associado†‡†mucosa

A†express„o†tecido†linfoide†associado†‡†mucosa†(MALT†=†mucosal-associated†lymphoid†tissue)†È†uma†descriÁ„o†geral†para†os†tecidos†linfoides†n„oencapsulados,†que†existem†nas†regiıes†subjacentes†‡s†mucosas.†Os†MALTs†sedistribuem†anatomicamente†e†seus†componentes†individuais†incluem:

• Anel† de†Waldeyer† -†Anel† de† estruturas† linfoides† que† circunda† afaringe.†…†formado†pelas†tonsilas†e†adenoides.

• Tecido†linfoide†associado†aos†brÙnquios†(BALT†=†bronchial-associatedlymphoid†tissue)†-†Agregados†linfocit·rios†semelhantes,†mas†organizadosdifusamente,†que†protegem†o†epitÈlio†respiratÛrio.

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• Tecidos†linfoides†associados†ao†intestino†(GALT†=†gut-associatedlymphoid†tissues)†-†Incluem†folÌculos†linfoides†isolados†e†o†apÍndicececal,†alÈm†de†estruturas†especializadas†do†intestino†delgado,†as†placasde†Peyer.

• Tecido†linf·tico†urogenital

• Entre†outros†MALTs†(Figura†3).

Coletivamente,† estima-se† que† o† sistema† imune† de† mucosa† contenhatantos†linfÛcitos†quanto†o†resto†do†corpo.†Esses†linfÛcitos†formam†um†grupoespecial†de†cÈlulas†que†seguem†leis†um†tanto†diferentes.†Embora†notavelmentediferentes†em†sua†aparÍncia,†os†nÛdulos†linf·ticos,†o†baÁo†e†os†tecidos†linfoidesassociados†‡†mucosa†demonstram†a†mesma†arquitetura†b·sica.†Cada†um†delesopera†segundo†o†mesmo†princÌpio,†capturando†o†antÌgeno†nos†locais†de†infec-Á„o†e†apresentando-o†a†pequenos†linfÛcitos†migratÛrios†para,†assim,†induziremas†respostas†imunes†adaptativas.†Os†tecidos†linfoides†perifÈricos†tambÈm†proveemsinais†de†sobrevivÍncia†aos†linfÛcitos†que†n„o†encontram†seu†antÌgeno†especÌfi-co.† Isto† È† importante† para† manter† o† n˙mero† correto† de† linfÛcitos† T† e† Bcirculantes,†e†assegura†que†somente†os†linfÛcitos†com†o†potencial†de†responderao†antÌgeno†estranho†sejam†mantidos.

2.4.†RecirculaÁ„o†de†linfÛcitos

Os†pequenos†linfÛcitos†T†e†B†que†se†diferenciaram†na†medula†Ûssea†eno† timo,†mas†que†ainda†n„o†se†encontraram†com†o†antÌgeno,† s„o† referidoscomo† linfÛcitos†virgens†ou†em†repouso.†Estes†elementos†circulam†continua-mente†do†sangue†para†os†tecidos†linfoides†perifÈricos,†nos†quais†penetram†pormeio† de† interaÁıes† adesivas† especiais† com† os† capilares† e† retornam† para† osangue† atravÈs† dos† vasos† linf·ticos† ou,† no† caso† do† baÁo,† diretamente† aosangue.†Na†presenÁa†de†uma†infecÁ„o,†os†linfÛcitos†que†reconhecem†o†agenteinfeccioso†s„o†retidos†no†tecido†linfoide,†onde†proliferam†e†se†diferenciam†emcÈlulas†efetoras,†capazes†de†controlar†a†infecÁ„o.

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Quando†ocorre†uma†infecÁ„o†tecidual,†os†antÌgenos†s„o†capturados†porcÈlulas†dendrÌticas,†que†se†deslocam†do†sÌtio†da†infecÁ„o†pelos†vasos†linf·ticosaferentes†para†os†nÛdulos†linf·ticos.†Nos†nÛdulos†linf·ticos,†essas†cÈlulas†pro-cessam†e†apresentam†o†antÌgeno†aos†linfÛcitos†T†que†est„o†recirculando,†osquais†elas†ajudam†a†ativar.†As†cÈlulas†B†que†encontram†o†antÌgeno,†‡†medidaque†migram†atravÈs†do†nÛdulo†linf·tico,†tambÈm†s„o†detidas†e†ativadas†com†oauxÌlio†de†algumas†cÈlulas†T†ativadas.†Uma†vez†que†esses†linfÛcitos†especÌficostenham†passado†por†um†perÌodo†de†proliferaÁ„o†e†diferenciaÁ„o,†eles†deixamos†nÛdulos†linf·ticos†como†cÈlulas†efetoras†atravÈs†dos†vasos†linf·ticos†eferentes.

3.† CÈlulas† T3.† CÈlulas† T3.† CÈlulas† T3.† CÈlulas† T3.† CÈlulas† T:† desenvolvimento,† diversidade† e† ativaÁ„o:† desenvolvimento,† diversidade† e† ativaÁ„o:† desenvolvimento,† diversidade† e† ativaÁ„o:† desenvolvimento,† diversidade† e† ativaÁ„o:† desenvolvimento,† diversidade† e† ativaÁ„o

Os†linfÛcitos†s„o†as†̇ nicas†cÈlulas†do†organismo†que†expressam†recepto-res†altamente†diversificados†para†o†antÌgeno,†o†que†permite†o†reconhecimentode†uma†grande†variedade†de†subst‚ncias†estranhas.†Essa†diversidade†È†geradadurante†o†processo†de†desenvolvimento†dos†linfÛcitos†T†e†B,†a†partir†de†cÈlulasprecursoras.†O†desenvolvimento†dos†linfÛcitos†T†alfa†beta†(ab)†e†gama†delta(gd)†segue†est·gios†sequenciais,†consistindo†na†recombinaÁ„o†som·tica†e†ex-press„o†dos†genes†do†TCR,†proliferaÁ„o†celular,†seleÁ„o†induzida†pelo†antÌgenoe†aquisiÁ„o†de†fenÛtipos†de†capacidade†funcional.†Essas†cÈlulas†se†originam†deprecursores†do†fÌgado†fetal†ou†da†medula†Ûssea†de†adultos†e†completam†o†seudesenvolvimento† no† timo.†As† cÈlulas† T† em† desenvolvimento† no† timo† s„ochamadas†de†timÛcitos.†A†maioria†dos†timÛcitos†imaturos†n„o†expressa†o†TCRou†os†correceptores†CD4†e†CD8†e†migram†atravÈs†do†cÛrtex,†onde†os†eventosde†maturaÁ„o†ocorrem†quando†expressam†pela†primeira†vez†o†TCR†e†iniciam†amaturaÁ„o†em†cÈlulas†CD4†ou†CD8.

Os†nÌveis†de†proliferaÁ„o†e†apoptose†s„o†extremamente†altos†nos†timÛcitoscorticais,†onde†cerca†de†95%†morrem†antes†de†chegar†‡†regi„o†medular†dotimo.†O†resultado†desse†processo†seletivo†È†a†restriÁ„o†ao†MHC†prÛprio†e†atoler‚ncia†a†muitos†autoantÌgenos.†A†diferenciaÁ„o†funcional†e†fenotÌpica†em

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cÈlulas†T†CD4†ou†CD8†ocorre†na†medula†tÌmica,†e†as†cÈlulas†T†maduras†s„oliberadas†para†a†circulaÁ„o.

3.1.†Receptores†de†antÌgenos†e†molÈculasacessÛrias†dos†linfÛcitos†T

Os†linfÛcitos†T†respondem†aos†antÌgenos†peptÌdicos,†que†s„o†expos-tos†pelas†cÈlulas†apresentadoras†de†antÌgenos†(APCs).†O†inÌcio†desta†res-posta† requer† o† reconhecimento† especÌfico† do† antÌgeno†pelas† cÈlulas† T,† aades„o†est·vel†das†cÈlulas†T†‡s†APCs†e†a†transduÁ„o†dos†sinais†ativadores.Cada†um†desses†eventos†È†mediado†por†molÈculas†distintas,†expressas†pelascÈlulas†T.†As†molÈculas†de†MHC†e†os†peptÌdeos†formam†um†complexo†namembrana†plasm·tica†das†APCs.†O†receptor†que†reconhece†esse†complexopeptÌdeo-MHC†È†o†TCR†(Figura†2),†que†È†distribuÌdo†clonalmente,†ouseja,†os†clones†de†linfÛcitos†que†apresentam†diferentes†especificidades†ex-pressam†distintos†TCRs.†Os†sinais†bioquÌmicos,†que†s„o†acionados†na†cÈlulaT†pelo†reconhecimento†do†antÌgeno,†n„o†s„o†transduzidos†pelo†TCR,†maspor†proteÌnas†n„o†vari·veis†chamadas†CD3†e†dzeta†(z),†que†est„o†ligadas†deforma†n„o†covalente†ao†receptor†do†antÌgeno†para†formar†o†complexo†TCR.Portanto,†nas†cÈlulas†T,†o†reconhecimento†do†antÌgeno†È†basicamente†realiza-do†por†dois†grupos†de†molÈculas:†um†receptor†para†o†antÌgeno†altamentevari·vel,†o†TCR,†e†proteÌnas†sinalizadoras†n„o†vari·veis†(CD3†e†cadeia†z).Outras†molÈculas†acessÛrias†funcionam†como†molÈculas†de†ades„o†para†esta-bilizar†a†ligaÁ„o†das†cÈlulas†T†‡s†APCs,†permitindo†que†o†TCR†mantenhaÌntimo†contato†com†o†antÌgeno†durante†o†tempo†suficiente†para†a†transduÁ„odos†sinais†necess·rios†‡†ativaÁ„o†dessas†cÈlulas.

As† cÈlulas† T† que† expressam† o† TCR†°d† pertencem† a† uma† linhagemdistinta†das†cÈlulas†T†restritas†ao†MHC.†A†percentagem†das†cÈlulas†T†°d†Èmuito†vari·vel†nos†diferentes†tecidos†das†diferentes†espÈcies,†normalmente†n„oexcedendo†mais†do†que†5%.†Elas†n„o†reconhecem†os†antÌgenos†peptÌdeos

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associados†‡s†molÈculas†MHC†e†n„o†s„o†restritas†ao†MHC.†Alguns†clonesdessas†cÈlulas†reconhecem†uma†pequena†molÈcula†que†pode†ser†apresentadapor†molÈculas†similares†‡s†da†classe†I†do†MHC,†ou†seja,†uma†apresentaÁ„o†n„ocl·ssica†de†molÈculas†normalmente†encontradas†nas†microbactÈrias†e†em†outrosmicrorganismos.†A†diversidade†limitada†das†cÈlulas†°d†sugere†que†os†ligantesdesses†receptores†s„o†bem†conservados.†Elas†podem†iniciar†a†resposta†imunecontra†um†pequeno†n˙mero†de†microrganismos†antes†mesmo†do†recrutamentodas†cÈlulas†T†antÌgeno-especÌficas†ab.

AlÈm†dos†componentes†do†complexo†TCR,†as†cÈlulas†T†apresentamv·rias†proteÌnas†de†membrana,†as†quais†exercem†papel†crucial†na†respostadestas†cÈlulas†no†reconhecimento†do†antÌgeno.†Essas†molÈculas†presentesna†membrana†de†linfÛcitos†ligam-se†especificamente†a†outras†molÈculas†damembrana† de† outras† cÈlulas,† como† as† APCs,† cÈlulas† do† endotÈlio† devasos† e† da† matriz† extracelular.† Essas† molÈculas† n„o† apresentam† regiıesvari·veis,† n„o† s„o†polimÛrficas,† s„o† idÍnticas† em† todas† as† cÈlulas† T† detodos† os† indivÌduos† de† uma† mesma† espÈcie,† e† s„o† respons·veis† pelatransduÁ„o†de†sinais†bioquÌmicos†para†o†interior†das†cÈlulas†T.†Essa†propri-edade†assegura†que†as†cÈlulas†T†e†as†APCs†permaneÁam†ligadas†o†temposuficiente†para†permitir†aos†TCRs†a†oportunidade†de†localizar,†reconhecere†responder†ao†complexo†peptÌdeo-MHC†na†APC.

3.2.†Correceptores†CD4†e†CD8:†Receptores†envolvidos†naativaÁ„o

As†molÈculas†CD4†e†CD8†s„o†proteÌnas†das†cÈlulas†T†que†se†ligam†‡sregiıes†n„o†polimÛrficas†das†molÈculas†de†MHC†e†transduzem†os†sinais†que,juntamente†com†os†sinais†liberados†pelo†complexo†TCR,†iniciam†a†ativaÁ„o†dascÈlulas†T.†Normalmente,†as†cÈlulas†T†ab†maduras†expressam†CD4†ou†CD8,embora† existam† referÍncias† da† express„o† de† ambos† os† marcadores.† Essescorreceptores†interagem†com†as†molÈculas†de†MHC,†quando†o†TCR†reconhe-

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ce†de†forma†especÌfica†o†complexo†peptÌdeo-MHC†na†APC.†Cerca†de†65%das†cÈlulas†T†ab†maduras†do†sangue†e†dos†tecidos†expressam†o†correceptorCD4†e†35%†do†CD8.

4.† Natureza† dos† antÌgenos4.† Natureza† dos† antÌgenos4.† Natureza† dos† antÌgenos4.† Natureza† dos† antÌgenos4.† Natureza† dos† antÌgenos

O†antÌgeno†(do†grego†anti,contra†e†gen,†gerar)†È†qualquer†subst‚n-cia†sol˙vel,†celular†ou†particulada†que†pode†ser†especificamente†ligada†porum†anticorpo†ou†por†um†receptor†de†antÌgeno†de†cÈlula†T.†Os†antÌgenospossuem†duas†propriedades:†a†da†imunogenicidade,†que†È†a†capacidadede†induzir†uma†resposta†imune†especÌfica,†e†a†da†antigenicidade,†que†È†acapacidade†de†interagir†com†os†linfÛcitos†T†ou†linfÛcitos†B†j·†sensibilizados.Assim,†todas†as†subst‚ncias†imunogÍnicas†s„o†tambÈm†antigÍnicas.†As†mo-lÈculas†que†desencadeiam†a†resposta†imune†s„o†chamadas†de†imunÛgenos.Pequenas†subst‚ncias†quÌmicas†n„o†s„o†capazes†de†estimular†uma†respostae,†portanto,†recebem†o†nome†de†hapteno.†Para†ter†capacidade†de†induziruma† resposta† imune,† o† hapteno† È† ligado† a† uma† macromolÈcula,† que† Èchamada†de†carreadora.†O†complexo†hapteno-carreador,†ao†contr·rio†dohapteno†livre,†pode†atuar†como†um†imunÛgeno.

4.1.†Determinante†antigÍnico

Os†sÌtios†de†ligaÁ„o†dos†anticorpos†e†dos†TCRs†interagem†com†uma·rea†muito†pequena†das†macromolÈculas† antigÍnicas,†que†È† chamada†dedeterminante†antigÍnico†ou†epitopo.†Portanto,†È†a†menor†porÁ„o†da†mo-lÈcula†respons·vel†pela†ligaÁ„o†ao†linfÛcito†ou†anticorpo.†A†presenÁa†dev·rios†determinantes† iguais†È†chamada†de†polivalÍncia†ou†multivalÍncia†ecada†um†pode†ser†ligado†por†uma†molÈcula†com†regi„o†vari·vel.†As†super-fÌcies†celulares,†incluindo†os†microrganismos,†geralmente†possuem†uma†grandequantidade†de†determinantes†antigÍnicos.

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4.2.†RelaÁ„o†filogenÈtica†dos†antÌgenos

A†estimulaÁ„o†de†linfÛcitos†de†galinhas†com†proteÌna†de†pato†resulta†emuma† resposta† imune†muito†baixa.†Por†outro† lado,† se† inoculadas† em†galinhas,proteÌnas†de†coelho,†a†resposta†imune†È†bastante†elevada.†Isto†acontece†porquequanto†mais†prÛxima†for†a†relaÁ„o†filogenÈtica,†menor†ser·†o†estÌmulo†e†vice-versa.†Existe†pouca†diferenÁa† entre† as†proteÌnas†de†galinhas† e†patos† e†muitadiferenÁa† entre† as† proteÌnas† de† aves† e†mamÌferos.† Embora† este† conceito† darelaÁ„o†filogenÈtica†reflita†boa†parte†das†aplicaÁıes†imunolÛgicas,†n„o†pode†sertomado†como†regra.†A†induÁ„o†de†uma†resposta†imune†muito†especÌfica†È†funÁ„odireta†da†semelhanÁa†biolÛgica†entre†a†fonte†do†antÌgeno†e†o†animal†receptor,ainda†que†seja†menos†intensa.†Lebres†e†coelhos†pertencem†‡†mesma†famÌlia†e†s„obastante†semelhantes,†tanto†morfolÛgica†quanto†fisiologicamente.†Portanto,†ao†seinjetar†proteÌnas†de†coelho†em†lebre,†poder·†se†obter†anticorpos†muito†especÌfi-cos,†ou†seja,†anticorpos†que†sÛ†reagem†contra†proteÌna†de†coelho.

4.3.†Peso†molecular†e†complexidade†molecular

Na†maioria†dos†antÌgenos,†quanto†maior†for†a†molÈcula,†maior†ser·†on˙mero† de† epitopo;† e† quanto† maior† a† complexidade,† maior† ser·† aimunogenicidade.† Um† antÌgeno† complexo† contÈm† v·rios† determinantesantigÍnicos,†onde†alguns†dos†quais†s„o†mais†eficientes†na†induÁ„o†da†respostaimune†e†s„o†chamados†imunodominantes.

4.4.†ConfiguraÁ„o†espacial†e†acessibilidade

A†imunogenicidade†e†a†antigenicidade†de†uma†proteÌna†n„o†dependeapenas†de† sua† estrutura†prim·ria†(isto†È,†da† sequÍncia†de†amino·cido),†mastambÈm†das†estruturas†secund·rias,†terci·rias†e†atÈ†quatern·rias.†Assim,†se†tratar-mos†uma†proteÌna†pelo†calor,†ou†agentes†quÌmicos†desnaturantes,†e†inocularmosesta†em†um†animal,†poderemos†obter†a†formaÁ„o†de†anticorpos†com†especificidadediferente†do†que†se†inocul·ssemos†a†proteÌna†intacta.†A†configuraÁ„o†espacial†de

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diversos†epitopos†em†uma†˙nica†molÈcula†de†proteÌna†pode†influenciar†a†ligaÁ„odo†anticorpo†de†v·rias†formas†(Figura†4).†A†·rea†importante†para†a†imunogenicidadedeve†ficar†acessÌvel,†na†superfÌcie†da†molÈcula.

Figura† 4.† DistribuiÁ„o† dos† determinantes† antigÍnicos† sequenciais† e† n„osequenciais†em†uma†macromolÈcula†proteica

4.5.†Forma†de†administraÁ„o†e†adjuvantes

A†dose†do†antÌgeno,†a†via†e†o†esquema†de†imunizaÁ„o,†assim†como†ouso†de†adjuvantes,†s„o†fatores†atuantes†na†induÁ„o†da†resposta†imune.†Asvias†de†inoculaÁ„o†subcut‚nea,†intradÈrmica†e†intramuscular†levam†geralmenteos†imunÛgenos†para†os†nÛdulos†linf·ticos†regionais,†e,†mais†frequentemente,induzem†a†imunidade†celular.†Os†antÌgenos†inoculados†por†via†endovenosa†eintraperitonial†acumulam-se†predominantemente†no†baÁo,†e†mais†frequente-mente† induzem† a† uma† imunidade† humoral.† O† adjuvante† melhora† aimunogenicidade† de† compostos† com† ele† misturado,† sem† interferir† naespecificidade†da†resposta.†Em†medicina†preventiva,†s„o†muitas†vezes†adicio-nados†‡s†vacinas†para†reduzir†a†dose†e†a†frequÍncia†de†injeÁıes†dos†antÌgenosutilizados†para†a† imunoprofilaxia†de†doenÁas† infecciosas.†Normalmente,†oantÌgeno†È†aprisionado†por†ele,†formando†depÛsitos,†o†qual†È†liberado†aospoucos†por†perÌodo†de†tempo†mais†extenso.†Com†isso,†h·†o†aumento†dotempo†de†exposiÁ„o†do†antÌgeno†no†organismo†pelo†retardamento†de†sua

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destruiÁ„o,†estimulando,†assim,†a†migraÁ„o†de†cÈlulas†para†o†local†de†inoculaÁ„oe†aumentando†a†interaÁ„o†destas†cÈlulas†com†o†mesmo.†O†tipo†de†adjuvantemais†comumente†usado†em†estudos†experimentais†È†o†adjuvante†de†Freund,que† pode† ser† classificado† em† dois† tipos:†AIF† (Adjuvante† Incompleto† deFreund),†que†È†constituÌdo†por†Ûleo†mineral†neutro†e†lanolina†ou†Arlacel;†e†oACF†(Adjuvante†Completo†de†Freund),†que†alÈm†do†Ûleo†mineral†neutromais† lanolina,† È† adicionado† um† componente† bacteriano,† normalmente† oMycobacterium,†morto†pelo†calor.†AlÈm†desses,†outros†adjuvantes†s„o†utiliza-dos,†como†o†sulfato†de†alumÌnio,†o†hidrÛxido†de†alumÌnio,†a† IL-12,†entreoutros.†Dependendo†da†composiÁ„o,†adjuvantes†podem†ou†n„o†ser†usados†emseres†humanos.

Bases†quÌmicas†da†especificidade†antigÍnica

Anticorpos†formados†contra†determinadas†subst‚ncias†tÍm†uma†reaÁ„oforte†contra†elas,†principalmente†se†os†anticorpos†interagem†com†os†antÌgenosespecÌficos†que†induziram†a†sua†formaÁ„o†(antÌgenos†homÛlogos),†mas†podemreagir† com† a†mesma† ou†menor† intensidade† com† outros† antÌgenos,† que† s„ochamados†de†antÌgenos†heterÛlogos,†porÈm†com†estrutura†semelhante.†EssasreaÁıes†com†antÌgenos†heterÛlogos† s„o†denominadas† reaÁıes†cruzadas.†AsreaÁıes†cruzadas†podem†ocorrer†basicamente†em†funÁ„o†da†similaridade†entredois†diferentes†determinantes†antigÍnicos,†ou†ainda†pelo†fato†de†dois†antÌgenosdiferentes†apresentarem†o†mesmo†determinante†antigÍnico.

5.† Diversidade† das† imunogobulinas5.† Diversidade† das† imunogobulinas5.† Diversidade† das† imunogobulinas5.† Diversidade† das† imunogobulinas5.† Diversidade† das† imunogobulinas

Os†anticorpos†s„o†conceituados†como†glicoproteÌnas†globulares†comfunÁ„o†imunit·ria†e†pertencem†‡†superfamÌlia†das†imunoglobulinas.†S„o†sinte-tizados†por†linfÛcitos†B†e,†principalmente,†por†plasmÛcitos,†em†resposta†aoestÌmulo†imunogÍnico.†Interagem,†especificamente,†com†os†imunÛgenos,†queestimulam†sua†biossÌntese;†desencadeiam†v·rios†mecanismos†na†fase†efetora

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da† resposta† imune† que,† frequentemente,† resultam† em† anular† a† aÁ„o† debiopatÛgenos,†por†meio†da†ativaÁ„o†do†sistema†complemento,†opsonizaÁ„odos†antÌgenos†para†fagocitose,†citotoxicidade†celular†dependente†de†anticorpo(ADCC),†em†que†os†anticorpos†marcam†os†microrganismos†para†serem†destruÌdospelas†cÈlulas†do†sistema†imune†inato†e†reaÁıes†de†hipersensibilidades,†entreoutras†ocorrem.

Estas† funÁıes† s„o†estruturalmente† separadas†na†molÈcula†e†a† regi„o†deligaÁ„o†ao†antÌgeno†varia†amplamente,†sendo†conhecida†como†regi„o†vari·vel†ouregi„o†V.†A†regi„o†molecular†que†participa†da†funÁ„o†efetora†È†conhecida†comoregi„o†constante†ou†C,†e†n„o†varia†do†mesmo†modo,†embora†apresente†cincoformas†principais†que†se†especializaram†na†ativaÁ„o†de†diferentes†mecanismos.

A†not·vel†diversidade†das†molÈculas†dos†anticorpos†È†consequÍncia†deum†mecanismo†altamente†especializado,†pelos†quais†os†genes†expressos† s„oreunidos†por†rearranjos†de†DNA,†que†juntam†dois†ou†trÍs†diferentes†segui-mentos†para†formar†um†gene†de†regi„o†vari·vel†durante†o†desenvolvimento†dascÈlulas†B.†Subsequentes†rearranjos†nucleicos†podem†reunir†o†gene†compostoda† regi„o† vari·vel† e† qualquer† gene† da† regi„o† constante,† produzindo† assimanticorpos†de†cada†um†dos†5†isotipos.

Estruturalmente†(Figura†5),†a†imunoglobulina†È†formada†por†duas†cadeiasleves†(L-light-leve),†idÍnticas,†constituÌdas†de†polipeptÌdeos†de†cerca†de†25mil†Daltons†e†de†duas†cadeias†pesadas†(H-†heavy-†pesado),†tambÈm†idÍnticas,com†peso†molecular†de†50†mil†Daltons†ou†mais.†Cada†cadeia†leve†est·†ligada†auma†cadeia†pesada†por†pontes†dissulfÌdricas.†O†n˙mero†exato†e†as†posiÁıesdestas† pontes† entre† as† cadeias† diferem† entre† as† classes† e† subclasses† deImunoglobulinas.†AlÈm†disso,† ambas† as† cadeias,† leves† e†pesadas,†possuemuma†regi„o†vari·vel†e†outra†constante.†Portanto,†a†imunoglobulina†possui†nacadeia† leve†uma† regi„o†constante†(CL)†e†uma†vari·vel† (VL).†O†mesmo†nacadeia†pesada,†uma†regi„o†constante†(CH)†e†uma†vari·vel†(VH).†Existem†doistipos†de†cadeias†leves,†a†kappa†(k)†e†a†lambda†(l).†Em†humanos,†60%†das

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cadeias†leves†s„o†do†tipo†kappa,†e†40%†s„o†do†tipo†lambda.†Os†primeiros110,† ou†mais,† amino·cidos† da† regi„o† aminoterminal† das† cadeias† leves† oupesadas†variam†muito†entre†os†anticorpos†de†especificidade†diferentes†e†poristo†s„o†chamadas†de†regi„o†vari·vel.

A† molÈcula† de† imunoglobulina† pode† ser† digerida† por† enzimasproteolÌticas.†A†digest„o†pela†papaÌna†quebra†a†molÈcula†em†trÍs†fragmentos(Figura†5):†dois†fragmentos†chamados†Fab†(fragment†antingen†binding),†quese† liga†ao†antÌgeno†especÌfico,†e†um† fragmento†denominado†Fc†(fragmentcrystallizable,†fragmento†cristaliz·vel),†por†formar†cristais†quando†armazenadoem†locais†frios.†Os†fragmentos†Fab†s„o†os†que†contÍm†as†cadeias†leves†(L)completas,†emparelhadas†com†os†domÌnios†V†(vari·vel)†e†C†(constante)†dacadeia†pesada,†enquanto†o†Fc,†contÈm†apenas†o†domÌnio†C†(constante).†ApapaÌna†cliva†a†molÈcula†na†porÁ„o†aminoterminal†das†pontes†de†enxofre,permitindo†que†as†metades†carboxiterminais†da†Fc†permaneÁam†unidas,†dei-xando†o†fragmento†Fc† livre.†J·†a†pepsina,†cliva†na†mesma†regi„o,†mas†naporÁ„o†carboxiterminal†das†pontes†dissulfrÌdicas,†produzindo†o†(Fab)í2,†ondeos†dois†braÁos†dos†Ac†permanecem†unidos.

Figura†5.†Estrutrua†b·sica†de†uma†imunoglobina†e†a†formaÁ„o†dos†fragmentospela†digest„o†enzim·tica.

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5.1.†GeraÁ„o†da†diversidade†na†resposta†imunehumoral†e†maturaÁ„o†da†afinidade

Mesmo†a†resposta†a†um†Ag†simples†È†diversa,†com†muitas†molÈculas†deIgs,†cada†uma†com†afinidade†˙nica†e†especificidade†acurada.†Durante†a†organi-zaÁ„o†dos†diferentes†segmentos†genÈticos†necess·rios†para†produzir†uma†molÈ-cula†de†Ig,†combinaÁıes†ao†acaso†dos†diferentes†componentes†gÍnicos†produ-zem†uma†enorme†diversidade†potencial.

Durante†as†fases†iniciais†do†desenvolvimento†do†linfÛcito†B,†a†IgM†demembrana†È†produzida†como†receptor.†A†mudanÁa†de†isotipo†em†cÈlulas†Bocorre†ao†serem†estimuladas†pelo†antÌgeno.†Isto†assegura†a†manutenÁ„o†damesma†regi„o†vari·vel,†garantindo†a†especificidade†ao†Ag†correspondente,expressa†nos†diferentes†isotipos,†aos†quais†orientam†diferentes†funÁıes†efetoras.Uma†diferenÁa†b·sica†entre†o†Ac†produzido†na†resposta†prim·ria†e†na†res-posta†secund·ria†È†a†sua†afinidade.†O†Ac†da†classe†IgM,†produzido†para†umAg†na†resposta†prim·ria,†tende†a†ser†de†afinidade†relativamente†baixa†e†podecontar†com†uma†avidez†adicional,†causada†por†sua†estrutura†pentamÈrica,†paraligar-se†eficientemente†ao†Ag.†Entretanto,†a†IgG†e†outras†classes†produzidasna†resposta†secund·ria†tendem†a†ter†uma†afinidade†maior.†Vale†ressaltar†que†oaumento†gradual†da†afinidade†do†Ac†pelo†Ag†indutor,†que†È†observado†nocurso† de† uma† resposta,† acontece† no† nÛdulo† linf·tico.† Este† fenÙmeno(maturaÁ„o†da†afinidade)†È†a†consequÍncia†da†hipermutaÁ„o†som·tica†dosgenes†de†Ig†acoplada†com†a†seleÁ„o†das†cÈlulas†B†com†Ig†de†superfÌcie†dealta†afinidade.†A†maturaÁ„o†da†afinidade,†no†curso†de†uma†resposta†imune,pode†ser†encarada†como†um†processo†darwiniano,† requerendo†primeiro†ageraÁ„o† de† variabilidade† nos† receptores† de† cÈlulas† B† e† ent„o† a† seleÁ„odaqueles†com†maior†afinidade†pelo†Ag.†ApÛs†esse†processo,†as†cÈlulas†B,que†se†ligam†ao†Ag†de†modo†bem-sucedido†e†sobrevivem†‡†seleÁ„o,†saemdo† centro† germinativo† do† nÛdulo† linf·tico† para† tornarem-se† cÈlulas† B† dememÛria†ou†cÈlulas†plasm·ticas†secretoras†de†Ac.

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5.2.†DistribuiÁ„o†e†propriedades†dos†isotipos

Os†agentes†infectoparasit·rios†devem†achar†seus†caminhos†para†a†maiorparte†dos†locais†do†organismo†hospedeiro,†e†os†anticorpos†tambÈm†devem†seramplamente†distribuÌdos†para†contÍ-los.†Os†anticorpos†s„o†distribuÌdos†pordifus„o†atravÈs†de†mecanismos†especiais,†para†lev·-los,†por†exemplo,†para†ospulmıes†e†o†intestino.†Anticorpos†de†diferentes†isotipos†(Figura†6)†operamem†locais†diferentes.†Os†primeiros†anticorpos†a†serem†produzidos†numa†res-posta†imune†humoral†s„o†sempre†as†IgMs.†Estes†s„o†produzidos†antes†que†acÈlula†B†tenha†sofrido†hipermutaÁ„o†som·tica;†portanto,†tendem†a†ser†de†baixaafinidade,†como†visto†anteriormente.†Estas†molÈculas†formam†pent‚meros,†cujos10†sÌtios†de†ligaÁ„o†com†o†Ag†podem†se†unir†simultaneamente†a†antÌgenosmultivalentes,†tais†como†os†polissacarÌdeos†de†parede†celular†bacteriana.†Estaestrutura†pentamÈrica†tambÈm†torna†a†IgM†capaz†de†ativar†o†complemento†demaneira†mais†eficaz,†o†que†contribui†para†o†controle†mais†eficiente†de†umainfecÁ„o.†Quanto†‡†IgD,†n„o†se†conhece†muito†bem†a†sua†funÁ„o,†mas†pareceexercer† um† papel† na† diferenciaÁ„o† dos† linfÛcitos† B† induzida† pelo†Ag.†Oprincipal†isotipo†de†imunoglobulina†no†sangue†e†nos†fluidos†extracelulares†È†aIgG,†considerando†todas†as†subclasses†(IgG1,†IgG2,†IgG3†e†IgG4).†A†IgGtem†propriedades†diversas,†dentre†as†quais,†confere†proteÁ„o†ao†feto,†pois†È†a˙nica†classe†de†imunoglobulina†humana†que†pode†ser†transportada†atravÈs†daplacenta†diretamente†para†a†corrente†circulatÛria†do†feto.†A†IgG†tambÈm†atuana†neutralizaÁ„o†de†toxinas,†imobilizaÁ„o†de†bactÈrias,†sensibilizaÁ„o†para†NK,ativaÁ„o†do†complemento†e†opsonizaÁ„o.

A† IgA†È†a†principal† imunoglobulina†presente†em†secreÁıes†externas,como†saliva,†muco,†suor,†suco†g·strico†e†l·grimas.†AlÈm†disso,†È†a†principalimunoglobulina† contida† no† colostro† e† no† leite,† e† deve† ser† no† neonato† aprincipal†fonte†de†proteÁ„o†contra†patÛgenos†no†intestino.†A†IgA†se†divideem†duas†subclasses,†IgA1†e†IgA2.†A†IgA†presente†no†plasma†È†encontrada†naforma†monomÈrica†e†em†pequenas†concentraÁıes,†enquanto†a†forma†dimÈrica†È

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encontrada† em† grandes† concentraÁıes† nas† regiıes† mucosas† do† organismo.Estas†previnem†a†invas„o†de†bactÈrias†ou†a†penetraÁ„o†de†toxinas†nas†cÈlulasepiteliais.†A†IgE†est·†difundida†de†maneira†moderada†nos†espaÁos†extravascularese†tem†como†principal†propriedade†a†sensibilizaÁ„o†de†mastÛcitos†e†basÛfilos,promovendo†reaÁ„o†inflamatÛria,†atravÈs†da†liberaÁ„o†de†mediadores†quÌmicoscomo†a†histamina,†que,†por† sua† vez,†promove†vasodilataÁ„o,†permitindo†apassagem†de†Acs†do†vaso†para†a†·rea†lesada,†e†fatores†quimioatraentes†querecrutam†fagÛcitos†para†o†local†de†infecÁ„o.†AlÈm†disso,†podem†estar†envolvi-das†em†processos†alÈrgicos†e†na†ajuda†para†eliminaÁ„o†de†helmintos,†quandosensibilizam†eosinÛfilos.

Figura†6.†Estrutura†dos†cinco†principais†isotipos†de†imunoglobulinas†humanas

5.3.†Polimorfismo†das†imunoglobulinas

Quando†uma†Ig†È†usada†como†Ag,†ela†È†tratada†como†qualquer†outraproteÌna†estranha†e†faz†desencadear†uma†resposta†de†Ac.†Pode†ser†produzidoAc†anti-Ig†que†reconheÁa†amino·cidos†caracterÌsticos†do†isotipo†do†Ac†injeta-do.† TambÈm† È† possÌvel† gerar†Acs† que† reconhecem† diferenÁas† no†Ac† demembros†da†mesma†espÈcie†e†tal† fenÙmeno†se†deve†‡†variaÁ„o†genÈtica†oupolimorfismo.†Tais†variantes†alÈlicas†s„o†chamadas†de†alotipos†e†representam

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pequenas†diferenÁas†polimÛrficas†nos†loci,†que†codificam†as†regiıes†constantesdas†cadeias†leves†e†pesadas.†Contrastando†com†os†Acs†anti-isotipos,†os†Acsanti†alotipos†reconhecer„o†Ig†de†um†dado†isotipo†em†alguns†representantes†deuma†dada†espÈcie.†Finalmente,†as†variaÁıes†na†sequÍncia†dos†epitopos†de†umaIg†s„o†conhecidas†como†idiotipos†(Figura†7).

Para†a†produÁ„o†de†Acs†altamente†especÌficos,†a†clivagem†pela†papaÌna(Figura†5)†È†essencial,†pois†esta†enzima,†como†j·†foi†dito†anteriormente,†cortaa†molÈcula†antes†das†pontes†de†sulfeto,†o†que†mantÈm†a†porÁ„o†Fc†inteira,†e†aproduÁ„o†dos†Ac†ser„o†altamente†especÌficas†contra†a†regi„o†Fc†daquele†isotipo.Quando†se†deseja†uma†molÈcula†de†Ac†que†n„o†reaja†com†o†sistema†comple-mento†e†n„o†se†fixe†em†receptores†para†Fc†de†superfÌcie†celular,†cliva-se†a†Igcom†a†pepsina,†que† corta†depois†das†pontes†de† sulfeto,†o†que†mantÈm†afraÁ„o†(Fabí)2†Ìntegra,†permitindo†a†ligaÁ„o†especÌfica†com†o†alvo†desejado†eimpossibilitando†as†aÁıes†efetoras†caracterÌsticas†do†isotipo.

Figura† 7.† LocalizaÁ„o† das† variaÁıes† isotÌpicas,† alotÌpicas† na† molÈcula† deimunoglobina.

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5.4.†Anticorpos†monoclonais

Em†1975,†Georges†Kˆhler†e†Cesar†Milstein†planejaram†um†mÈtodo†para†apreparaÁ„o†do†anticorpo†monoclonal†(Ac†mo),†atravÈs†da†fus„o†da†cÈlula†B†ativadanormal†produtora†de†anticorpo†com†uma†cÈlula†do†mieloma†(uma†cÈlula†plasm·ticacancerosa).†Neste†evento,†produziram†uma†cÈlula†hÌbrida†(hibridoma),†que†possuÌaas†propriedades†de†crescimento†imortal†da†cÈlula†do†mieloma†e†secretava†o†Acproduzido†pela†cÈlula†B.

Os†clones†resultantes†das†cÈlulas†do†hibridoma†que†secretam†grandes†quanti-dades†de†Ac†mo†podem†ser†indefinidamente†cultivadas.†Os†hibridomas†de†cÈlulas†Bs„o†produzidos†utilizando†polietilenoglicol†(PEG)†para†fusionar†as†cÈlulas†do†mielomacom†as†cÈlulas†B†de†animais†que†foram†imunizados†com†o†Ag,†atravÈs†do†qual†sedeseja†produzir†os†anticorpos.†As†cÈlulas†do†mieloma†contribuem†para†o†crescimen-to† imortal† das† cÈlulas† fusionadas,† e† as† cÈlulas†B† contribuem† com† a† informaÁ„ogenÈtica†para†a†sÌntese†do†Ac†especÌfico†de†interesse.†As†condiÁıes†do†procedi-mento†devem†permitir†seletivamente†a†sobrevivÍncia†e†o†crescimento†somente†doshibridomas.†Para†tal,†È†utilizado†o†meio†HAT†(hipoxantina,†aminopterina†e†timidina).Neste†meio,†a†aminopterina†bloqueia†a†sÌntese†de†DNA†pela†via†de†novo.†NapresenÁa†de†aminopterina,†as†cÈlulas†devem†usar†a†via†de†salvamento,†onde†asenzimas†catalisadoras†s„o†a†fosforribosiltransferase†hipoxantina-guanina†(HGPRT)†oua†timidina†quinase†(TK),†para†produzir†o†DNA.†Uma†mutaÁ„o†em†qualquer†umadestas†duas†enzimas†bloqueia†a†habilidade†da†cÈlula†em†usar†a†via†de†salvamento.Portanto,†cÈlulas†do†mieloma†sozinhas†morrer„o,†pois†s„o†deficientes†para†as†enzimasHGPRT†ou†TK,†essenciais†para†a†via†de†salvamento.†Somente†as†hÌbridas† ir„osobreviver,†pois†a†cÈlula†B†contribui†com†a†enzima†que†falta†para†a†via†de†salvamento.Embora†as†cÈlulas†B†n„o†fusionadas†sejam†capazes†de†sobreviver†no†meio†HAT,estas†n„o†vivem†por†perÌodos†extensos†in†vitro†e†morrem.

ApÛs†a†obtenÁ„o†dos†hibridomas,†estes†devem†ser†diluÌdos†e†distribuÌdos†emplacas†de†cultura†apropriada†numa†concentraÁ„o†de†0,5†cÈlula†por† poÁo.† Talprocedimento†nos†dar·†a†certeza†de†que†o†Ac†produzido†seja†oriundo†de

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um†˙nico†clone,†pois†como†n„o†existe†meia†cÈlula,† teoricamente,† teremos†umpoÁo†vazio†e†outro†com†apenas†uma†cÈlula.†Feito†isso,†cada†hibridoma,†apÛsmultiplicaÁ„o†e†produÁ„o†de†Ac,†ser·†examinado†por†teste†sorolÛgico,†tendo†emvista†a†identificaÁ„o†dos†hibridomas†desejados,†ou†seja,†aqueles†que†sintetizam†oanticorpo†monoclonal†que†reaja†com†o†Ag†correspontente.†Uma†vez†identifica-dos,†os†hibridomas†s„o†induzidos†‡†proliferaÁ„o,†tornando-se†assim†uma†fonteinesgot·vel†de†anticorpos†altamente†especÌficos.

Os†Ac†mo†s„o†muito†˙teis†como†reagentes†para†diagnÛstico,†exames†deimagem†e†procedimentos†terapÍuticos†na†clÌnica†mÈdica.†Para†diagnÛstico,†podemser†utilizados†na†detecÁ„o†de†gravidez,†diagnÛstico†de†numerosos†microrganismospatogÍnicos,†medidas†de†nÌveis†sanguÌneos†de†v·rias†drogas,†tipagem†sanguÌnea,tipagem†de†antÌgenos†de†histocompatibilidade,†caracterizaÁ„o†fenotÌpica†de†diversostipos†celulares†e†detecÁ„o†de†antÌgenos†produzidos†por†determinados†tumores.†Porexemplo,†para†esse†propÛsito,†Ac†mo†radiomarcados†podem†ser†utilizados†in†vivona†detecÁ„o†ou†localizaÁ„o†de†antÌgenos†tumorais,†permitindo†diagnÛsticos†precocesde†alguns†tumores†prim·rios†ou†metast·ticos†nos†pacientes.†Na†imunoterapia,†o†Acmo†especÌfico†para†um†determinado†Ag†tumoral†de†superfÌcie,†acoplado†com†umquimio†ou†radioter·pico,†pode†ser†potente†agente†terapÍutico.

6.† Sistema† completo6.† Sistema† completo6.† Sistema† completo6.† Sistema† completo6.† Sistema† completo

O†nome†complemento†foi†originado†a†partir†da†atividade†complementar†deproteÌnas†na†aÁ„o†bactericida†de†alguns†Acs.†O†sistema†complemento†È†um†comple-xo†proteico†existente†no†plasma,†sob†a†forma†inativa,†constituÌdo†por†subst‚nciastermol·beis†e/ou†termoest·veis;†e†que†tem†como†funÁ„o†a†eliminaÁ„o†de†um†agenteestranho†pela†ativaÁ„o†de†mecanismos†inespecÌficos,†que†se†constitui†de:

• Fagocitose†-†quando†algumas†proteÌnas†ativadas†do†complemento†unem-sea†bactÈrias,† opsonizando-as†para† ingest„o†pelos† fagÛcitos†portadores†dereceptores†do†complemento;

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• ReaÁ„o†inflamatÛria†-†quando†os†pequenos†fragmentos†de†proteÌnaspromovem†eventos†vasculares†e†recrutam†fagÛcitos†ao†local†da†ativida-de†inflamatÛria.

• Lise†-†quando†uma†vez†desencadeada†a†cascata,†os†componentes†terminaisdo†complemento†lesam†certas†bactÈrias,†vÌrus†e†cÈlulas†com†a†formaÁ„o†deporos†na†membrana†celular.

AlÈm†dessas†trÍs†funÁıes,†o†sistema†complemento†tambÈm†È†respons·velpela†depuraÁ„o†imune,†que†consiste†na†remoÁ„o†de†complexos†imunes†da†circulaÁ„ono†baÁo†e†no†fÌgado.†Este†sistema,†com†cerca†de†30†proteÌnas†ou†mais,†interage†porativaÁ„o†enzim·tica.†O†complemento†pode†agir†sozinho†ou†com†Ac†e†s„o†conheci-das†3†vias,†a†cl·ssica,†a†alternativa†e†a†via†das†lectinas.†A†via†cl·ssica†È†ativada†porcomplexos† imunes,† enquanto† as† vias† alternativa† e†das† lectinas† s„o† ativadas†pormicrorganismos.†Todas†as†vias†de†ativaÁ„o†convergem†para†uma†etapa†final†de†reaÁ„oem†cadeia†denominada†sequÍncia†comum†(Figura†8).

Figura†8.†Vias†de†ativaÁ„o†do†sistema†complemento

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No†processo†de†ativaÁ„o,†que†envolve†uma†sÈrie†de†etapas†proteolÌticas,uma†proteÌna†precursora†inativa†È†clivada†para†fornecer†um†grande†fragmentoativo;†esta†se†une†‡†superfÌcie†celular†e†contribui†para†a†prÛxima†clivagem,†eum†pequeno†fragmento†peptÌdico†que†È†liberado†serve†como†mediador†deresposta†inflamatÛria.†Cada†uma†das†trÍs†vias†de†ativaÁ„o†gera†uma†convertasede†C3†por†um†caminho†diferente,†determinando†que†as†principais†molÈculasefetoras†e†os†eventos†tardios†sejam†os†mesmos†para†as†trÍs†vias.†…†importantelembrar†que†a†ativaÁ„o†inadequada†e†a†persistÍncia†dos†efeitos†inflamatÛrioss„o†potencialmente†prejudiciais†ao†organismo,†de†modo†que†a†sua†regulaÁ„oprecisa† ser† bem† rigorosa.† E† uma† das† maneiras† de† controle† se† resume† aopouquÌssimo†tempo†que†os†componentes-chaves†permanecem†ativos†(milÈsi-mos†de†segundos),†a†menos†que†se†liguem†a†uma†superfÌcie†celular.†AlÈm†dacurta†vida-mÈdia†dos†fragmentos†do†complemento,†existem†v·rios†pontos†navia†de†ativaÁ„o,†nos†quais†podem†atuar†proteÌnas†reguladoras,†o†que†previnea†ativaÁ„o†inadvertida†do†complemento†sobre†cÈlulas†do†hospedeiro†e†evita†ales„o†de†cÈlulas†do†organismo.

Quanto† ‡†nomenclatura,† todos†os† componentes†da† via† cl·ssica† s„odesignados†pela†letra†C,†seguida†por†uma†designaÁ„o†numÈrica†simples:†C1,C2.†Os†componentes† foram†numerados†pela†ordem†de†descoberta†e†n„osegundo†a†sequÍncia†de†reaÁıes†(C1,†4,†2,†3,†5,†6,†7,†8†e†9).†Quantoaos† produtos† de† clivagem,† s„o†designados† por† letras†min˙sculas,† onde† omaior†fragmento†recebe†a†letra†b†(exceto†o†fragmento†C2,†que†recebe†a†letraa)†e†o†menor,†a†letra†a.†Os†componentes†iniciais†da†via†alternativa,†em†vez†deserem†numerados,†s„o†indicados†pelas†letras†mai˙sculas†B†e†D,†e†seus†produ-tos†de†clivagem†tambÈm†s„o†designados†pelas† letras†b†e†a,†onde†o†maiorfragmento†È†Bb†e†o†menor,†Ba.†Quanto†aos†componentes†ativados,†recebemuma†linha†horizontal†superior,†por†exemplo,†Bb.

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6.1.†AtivaÁ„o†da†via†cl·ssica

O†componente†C1†È†um†complexo†formado†por†trÍs†proteÌnas†C1q,C1r†e†C1s.†Uma†vez†formado†o†complexo†Ag-Ac,†o†componente†C1q†seliga†na†regi„o†Fc†do†Ac,†dando†inÌcio†a†uma†reaÁ„o†em†cascata,†onde†C1qativa†duas†molÈculas†de†C1r†capazes†de†se† ligar†a†outras†duas†de†C1s,resultando† no† complexo† C1q-C1s-C1r-C1r-C1s,† que† È† uma† serinaprotease.†Desta†forma,†C1s†atua†em†C4†e†C2,†dissociando-as†em†C4a†eC4b,†C2a†e†C2b.†Nesta†etapa,†a†uni„o†de†C4b†a†C2b†(em†alguns†livros,C2a)†forma†a†C3†convertase.†ApÛs†a†formaÁ„o†da†C3†convertase,†estacliva†C3†em†C3a†e†C3b.†O†C3†È†a†fraÁ„o†mais†abundante†no†plasma†e†omais† importante† entre† os† componentes† do† complemento,† pois† in˙merasmolÈculas†de†C3b†podem†se† ligar†‡†superfÌcie†de†um†patÛgeno.†Algunsfragmentos†C3b†se†ligam†a†receptores†da†membrana†e†atuam†como†opsoninas,facilitando†a†fagocitose,†outros†fragmentos†de†C3b†se†ligam†a†C3†convertase,originando†a†C5†convertase†(C4bC2bC3b)†da†via†cl·ssica†(Figura†9),que†vai†atuar†em†C5†dissociando-o†em†C5a†e†C5b.†Com†a†dissociaÁ„o†deC5,†inicia-se†uma†etapa†comum†a†todas†as†vias†de†ativaÁ„o†do†complemen-to,†onde†a†fraÁ„o†C5b†interage†com†C6,†que†abre†um†sÌtio†de†ligaÁ„o†paraC7.†Por† sua† vez,† o† complexo†C5bC6C7†deposita-se† na† superfÌcie† damembrana†e†abre†o†sÌtio†de†ligaÁ„o†para†C8,†que†penetra†na†membrana†dacÈlula.†O†C8,†ent„o,†abre†um†sÌtio†para†C9,†que,†apÛs†a†ligaÁ„o†de†v·riosC9,† forma† um† canal† transmembr‚nico† ou† poro† hidrofÌlico,† chamado† decomplexo† de† ataque† ‡† membrana† (MAC),† ocasionando† lise† celular† edesequilÌbrio†osmÛtico.††…†importante†ressaltar†que†no†curso†da†cascata†dosistema† complemento,† os† fragmentos† menores† C4a,† C2a,† C3a† e† C5aliberados†no†interstÌcio,†s„o†potentes†mediadores†inflamatÛrios.

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Figura†9.†AtivaÁ„o†da†cascata†do†complemento†pela†via†cl·ssica.

6.2.†Via†das†Lectinas

A†via†das†lectinas†(Figura†10)†È†semelhante†‡†via†cl·ssica.†As†lectinas†s„oproteÌnas,†ou†glicoproteÌnas,†que†se†ligam†a†carboidratos†e†podem†ativar†a†viacl·ssica† do† complemento† na† ausÍncia† do† complexo† antÌgeno-anticorpo.†Aprincipal†lectina†È†a†proteÌna†ligadora†de†manose†(MBL),†que†faz†o†papel†deC1q† ao† se† ligar† ‡† resÌduos† de† carboidratos† da† superfÌcie† de† uma†bactÈriaativadora†ou†outras†subst‚ncias.†A†MBL†est·†associada†com†duas†prÛ-enzimasMASP-1†e†MASP-2†(Serina†Protease†Associada†a†MBL).†Quando†a†MBLse†liga†aos†grupamentos†manose†terminais†nos†carboidratos†bacterianos,†MASP-1†e†MASP-2†s„o†ativadas†e†continuam†a†ativar†a†via†cl·ssica.

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Figura†10.†AtivaÁ„o†da†cascata†do†complemento†pela†via†das†lectinas

6.3.†Via†Alternativa

Com†exceÁ„o†da†etapa†inicial,†os†eventos†da†via†alternativa†(Figura†11)s„o†homÛlogos†aos†da†via†cl·ssica†e†das†lectinas.†A†via†alternativa†È†constante-mente†ativada,†em†taxa†muito†reduzida,†a†qual†aumenta†drasticamente†na†pre-senÁa†de†superfÌcies†ativadoras†adequadas,†como†as†membranas†celulares†demicrorganismos.†Esta†via†pode†ser†ativada†pela†ligaÁ„o†do†C3b†ou†de†umaforma†hidrolizada†espontaneamente,†conhecida†como†iC3b,†‡†superfÌcie†dopatÛgeno.†Este†se†liga†ao†fator†B,†formando†C3bB,†componente†suscestÌvelao†fator†D,†uma†protease†do†plasma.†O†fator†D†cliva†o†componente†B†em†Bae†Bb,†onde†Bb†permanece†ligado†ao†C3b,†formando†a†molÈcula†C3bBb†queÈ†a†C3†convertase†da†via†alternada.†A†C3†convertase†da†via†alternativa†produ-zir·†mais†C3b,†tornando†o†sistema†mais†ativo,†pois†muitos†fagÛcitos†possuemreceptores†para†este†componente.†A†C3†convertase†da†via†alternativa†È†extre-mamente†inst·vel†e,†por†isso,†costuma†sofrer†r·pida†dissociaÁ„o.†No†entanto,uma†proteÌna†plasm·tica†denominada†properdina†se†liga†a†esta†convertase†e†aestabiliza,†diminuindo†sua†degradaÁ„o†e†permitindo†a†continuaÁ„o†da†cascata.

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Nesta†via,†alguns†C3b†se†ligam†ao†C3bBb†e†formam†a†C5†convertase†da†viaalternada†C3b2Bb†ou†C3bBbC3b.†Este†complexo†cliva†C5†em†C5a†e†C5b,dando†inÌcio†a†sequÍncia†comum,†onde†C5b†inicia†o†complexo†de†ataque†‡membrana,†ligando-se†a†C6,†C7,†C8†e†C9†(Figura†12).

Figura†11.†AtivaÁ„o†da†cascata†do†complemento†pela†via†alternativa.

Figura†12.†SequÍncia†final†da†cascata†do†complemento†comum†a†todas†as†viasde†ativaÁ„o,†onde†C5b†inicia†o†complexo†de†ataque†‡†membrana,†ligando-se†aC6,†C7,†C8†e†C9.

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7.† Complexo† principal† de† histocompatibilidade7.† Complexo† principal† de† histocompatibilidade7.† Complexo† principal† de† histocompatibilidade7.† Complexo† principal† de† histocompatibilidade7.† Complexo† principal† de† histocompatibilidade

Todo†organismo†multicelular†possui†algum†sistema†de†defesa†que†distin-gue†agentes† infectoparasit·rios†e†elimina-os†do†hospedeiro.†Mais†ainda,†osgrandes†vertebrados†tÍm†um†sistema†imune†mais†evoluÌdo†que†pode†discriminaro†que†È†estranho†e†fazer†uma†resposta†seletiva†para†o†mesmo.†A†vantagem†detal†imunidade†especÌfica†È†a†r·pida†adaptaÁ„o†do†sistema†imune†aos†agentespatogÍnicos†que†s„o†mais†frequentemente†encontrados†no†meio†ambiente†lo-cal.† Esta† capacidade† È† conseguida† atravÈs† do† complexo† principal† dehistocompatibilidade,†cujos†produtos†desempenham†um†papel†no†reconheci-mento†intercelular†e†na†discriminaÁ„o†entre†o†prÛprio†e†n„o†prÛprio.†A†identi-ficaÁ„o†das†molÈculas†do†complexo†principal†de†histocompatibilidade†(MHC)aconteceu†pela†investigaÁ„o†da†sua†funÁ„o†na†resposta†imunolÛgica†aos†tumo-res,†na†rejeiÁ„o†de†transplantes†de†pele†e†no†controle†da†resposta†imune.

7.1.†Estrutura†das†molÈculas†do†MHC

Os†genes†que†codificam†as†molÈculas†do†MHC†est„o†localizados†nocromossomo†6†humano†e†no†17†em†camundongos,†denominados†antÌgenosleucocit·rios†humanos†(HLA)†e†de†histocompatibilidade†(H-2),†respectiva-mente.†O†MHC†pode† ser†dividido†em†quatro† subconjuntos†de† genes†ouclasses:†classes†I,†II,†III†e†IV,†sendo†os†de†classe†I†e†II†ligados†ao†processamentoe†apresentaÁ„o†de†antÌgenos,†enquanto†os†genes†que†compıem†as†classes†III†eIV†codificam†para†outras†proteÌnas,†estando†algumas†relacionadas†com†a†res-posta†imune,†tais†como†componentes†do†sistema†complemento,†algumas†citocinas,etc.†Em†humanos,†existem†trÍs†loci†que†codificam†as†molÈculas†de†classe†I,†osquais†s„o†denominados†HLA-A,†HLA-B†e†HLA-C,†e†trÍs†loci†gÍnicos†doMHC†de†classe†II,†que†s„o†denominados†HLA-DP,†HLA-DQ†e†HLA-DR.Normalmente,†um†indivÌduo†herda†duas†cÛpias†de†cada†locus†gÍnico†(um†decada†progenitor).†Assim,†em†humanos,†temos†seis†loci†de†classe†I†e†seis†loci†declasse† II.† Todos† esses† loci† apresentam† alto† grau† de† polimorfismo,† ou† seja,

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apresentam†m˙ltiplos†alelos†na†populaÁ„o.†As†molÈculas†do†MHC†de†classe†I,que†est„o†presentes†na†maioria†das†cÈlulas†nucleadas,†s„o†reconhecidas†princi-palmente†pelo†TCR†de†linfÛcitos†T†CD8,†ao†passo†que†as†molÈculas†de†classeII,†presentes†principalmente†na†superfÌcie†das†cÈlulas†apresentadoras†de†antÌgenosprofissionais,†s„o†reconhecidas†pelo†TCR†dos†linfÛcitos†T†CD4.

7.2.†MHC†de†classe†I

As†molÈculas†do†MHC†de†classe†I†s„o†expressas†na†membrana†celularda†maioria†das†cÈlulas†nucleadas†dos†vertebrados.†Sua†estrutura†È†constituÌdapor†uma†cadeia†a†(alfa)†de†aproximadamente†45kDa,†que†atravessa†a†membra-na†plasm·tica.†A†outra†È†a†b2-†microglobulina†de†12kDa†que†se†encontrafracamente†ligada†‡†membrana.†Os†genes†que†codificam†a†cadeia†a†(vari·vel)est„o†localizados†dentro†da†regi„o†genÙmica†do†MHC,†enquanto†os†genesque†codificam†a†b2-microglobulina†(invari·vel)†est„o†localizados†fora†da†regi„odo†MHC† no† cromossomo† 15† humano.†A† cadeia†a† È† formada† por† trÍssegmentos†a1,†a2†e†a3.†A†regi„o†em†que†o†peptÌdeo†se†liga†corresponde†‡regi„o†amino-terminal†e†È†composta†pelos†segmentos†a1†e†a2,†que†formamuma†fenda†ou†bolsa†onde†ele†se†encaixa.†O†tamanho†dessa†fenda†permite†ligarpeptÌdeos†de†8†a†11†amino·cidos†e†corresponde†‡†regi„o†do†MHC†de†classeI†que†interage†com†o†TCR†do†linfÛcito†T.†Por†essa†raz„o,†os†antÌgenos†proteicosprecisam†ser†processados†para†gerar†peptÌdeos,†pequenos†o†suficiente†para†seligarem†‡†molÈcula†do†MHC.†A†regi„o†invari·vel,†que†corresponde†ao†seg-mento†a3,†se†liga†ao†correceptor†CD8†do†linfÛcito†T.†Essa†ligaÁ„o†confere†aespecificidade†da†molÈcula†de†classe†I†com†a†cÈlula†T†CD8.†O†domÌnio†a,tambÈm†se†liga†de†forma†n„o†covalente†‡†molÈcula†b2-microglobulina,†sendoesse†complexo†estabilizado†pelo†peptÌdeo†processado†que†se†liga†nos†domÌ-nios†a1†e†a2†(Figura†13).†Somente† nessa† forma† est·vel† a†molÈcula†doMHC†de†classe†I†È†expressa†na†superfÌcie†das†cÈlulas.

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7.3.†MHC†de†classe†II

As†molÈculas†do†MHC†de†classe†II†tambÈm†s„o†expressas†na†membranacelular.†Mas†estas†s„o†expressas†na†superfÌcie†de†cÈlulas†apresentadoras†de†antÌgenosprofissionais.†Essas†cÈlulas†incluem†as†cÈlulas†dendrÌticas,†os†macrÛfagos†e†os†linfÛcitosB.†A†molÈcula†de†classe†II†È†formada†por†uma†cadeia†a†e†uma†b.†A†cadeia†a†tem32-34kDa,†enquanto†a†cadeia†b†tem†29-32kDa†(Figura†13).†As†duas†cadeias†doMHC†de†classe†II†s„o†codificadas†dentro†da†regi„o†genÙmica†do†MHC†e†ambass„o†polimÛrficas,†ou†seja,†s„o†vari·veis.†As†cadeias†a†e†b,†na†porÁ„o†extracelular,possuem†domÌnios†a1†e†a2†e†b1†e†b2,†onde†a†porÁ„o†vari·vel†das†duas†cadeiass„o†os†segmentos†a1†e†b1,†conforme†pode†ser†visto†na†Figura†13.†Os†domÌniosa1†e†b1†interagem†para†formar†a†fenda†de†ligaÁ„o†ao†peptÌdeo,†que†estruturalmen-te†È†bastante†similar†‡†molÈcula†do†MHC†de†classe†I.†Esta†fenda,†ou†bolsa†È†ondese†encaixa†o†peptÌdeo†a†ser†apresentado†‡†cÈlula†T.†Assim,†como†È†de†se†esperar,esta†tambÈm†È†a†regi„o†da†molÈcula†do†MHC†de†classe†II†que†apresenta†maiorvariabilidade.†Na†molÈcula†de†classe†II,†as†extremidades†da†fenda†de†ligaÁ„o†dopeptÌdeo†s„o†abertas,†o†que†permite†a†ligaÁ„o†de†peptÌdeos†de†10-30†amino·cidos,mas† pode†ocorrer† ligaÁ„o†de†peptÌdeos†maiores,† o†que† n„o† acontece† com† amolÈcula†de†classe†I†que†tem†as†extremidades†fechadas.

Figura†13.†As† trÍs†classes†de†genes†no†MHC†humano†e†a†express„o†dosprodutos†de†classe†I†e†II.

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7.4.†Processamento†e†apresentaÁ„o†de†antÌgenos†‡s†cÈlulas†T†CD8

AntÌgenos†apresentados†pelas†molÈculas†de†MHC†de†classe†I†s„o,†namaioria†das†vezes,†gerados†dentro†da†mesma†cÈlula†que†produziu†a†molÈculade†classe†I.†Os†peptÌdeos†gerados†s„o†derivados†de†proteÌnas†que†se†encon-tram†no†citosol†da†cÈlula,†que†podem†ser†da†prÛpria†cÈlula,†de†origem†viral†oude†outros†microrganismos†intracelulares†e†antÌgenos†tumorais.†Os†antÌgenos,†emgeral†proteÌnas†presentes†no†citoplasma,†s„o†degradados†em†peptÌdeos†por†umcomplexo†multiproteolÌtico†denominado†proteassoma.†Esses†peptÌdeos†s„o†trans-portados†do†citoplasma†para†o†retÌculo†endoplasm·tico†rugoso†por†intermÈdiode†uma†proteÌna†transportadora†de†antÌgeno†(TAP).†Os†peptÌdeos†transporta-dos†pela†TAP†para†dentro†do†retÌculo†endoplasm·tico†se† ligam†‡†molÈculanascente†do†MHC†classe†I,†tornando-a†est·vel.†Assim,†o†complexo†resultante,MHC†classe†I†e†peptÌdeo,†deixam†o†retÌculo†endoplasm·tico†e†movem-se†parao†complexo†de†Golgi,†do†qual†È†transportado†para†a†superfÌcie†da†cÈlula†ondeÈ†reconhecido†pela†cÈlula†T†CD8.

7.5.†Processamento†e†apresentaÁ„o†de†antÌgenos†‡s†cÈlulas†T†CD4

As†molÈculas† do†MHC†de† classe† II† tambÈm† se† ligam† a† peptÌdeosoriginados†da†degradaÁ„o†proteica,†mas,†geralmente,†os†peptÌdeos†resultam†daproteÛlise†de†molÈculas†endocitadas†ou†partÌculas†fagocitadas†pelas†APC.†AspartÌculas†s„o†internalizadas†em†vesÌculas†intracelulares,†denominadas†endossomas,que† se† fundem†com† lisossomas,†contendo†enzimas†proteolÌticas.†A†vesÌcularesultante†dessa†fus„o†È†chamada†fagolisossoma.†O†processo†de†degradaÁ„odo†antÌgeno†ocorre†em†condiÁıes†·cidas,†que†È†o†pH†Ûtimo†para†a†aÁ„o†dasenzimas†proteolÌticas,†e†os†peptÌdeos†originados†da†degradaÁ„o†se†ligam†nafenda†da†molÈcula†do†MHC†de†classe†II.†Quando†recÈm-sintetizada†no†retÌculoendoplasm·tico,†a†molÈcula†do†MHC†de†classe†II†tem†a†fenda†protegida†poruma†proteÌna†denominada† cadeia† invariante† (Ii).†Desse†modo,† a† fenda†doMHC† classe† II† n„o† pode† acomodar† peptÌdeos† presentes† no† retÌculo

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endoplasm·tico.† Essa† molÈcula† de† classe† II† È,† ent„o,† direcionada† para† osfagolisossomas,† onde† se† encontram† os† peptÌdeos† exÛgenos† resultantes† daproteÛlise†dos†antÌgenos.†Nos†fagolisossomas,†as†enzimas†proteolÌticas†digerema†cadeia†II;†porÈm,†n„o†totalmente,†restando†o†fragmento†chamado†peptÌdeode†classe†II,†associado†‡†cadeia†invariante†(CLIP†=†class†II†associated†invariantchain†peptide).†Com†a†remoÁ„o†do†CLIP,†por†meio†da†molÈcula†HLA-DM,o†peptÌdeo†processado†pode†se†ligar†‡†fenda†da†molÈcula†de†classe†II†e†serreconhecido†especificamente†pelos†linfÛcitos†T†CD4.

8.† Resposta† celular† e† resposta† humoral8.† Resposta† celular† e† resposta† humoral8.† Resposta† celular† e† resposta† humoral8.† Resposta† celular† e† resposta† humoral8.† Resposta† celular† e† resposta† humoral

Se† a† resposta† inata† for† suficiente† para† anular† a† aÁ„o† de† um† agenteinfectoparasit·rio,†n„o†ocorrer·†ativaÁ„o†da†resposta†imune†adaptativa†e,†por-tanto,†n„o†formar·†memÛria†imunit·ria.†Por†outro†lado,†caso†ocorra†persistÍnciada†infecÁ„o,†devido†aos†mecanismos†de†escape†desse†agente,†haver·†a†neces-sidade†da†ativaÁ„o†da†resposta†imune†adaptativa.†Em†funÁ„o†da†natureza†doagente†infectoparasit·rio†e†da†forma†com†que†seus†antÌgenos†s„o†processados,a†resposta†imune†adaptativa†pode†seguir†dois†caminhos†distintos,†que†levam†‡proliferaÁ„o†de†cÈlulas†CD8+†(resposta†celular†predominantemente†Th1)†e†‡secreÁ„o†de†anticorpos†por†cÈlulas†B†e†plasmÛcitos†(resposta†humoral†predomi-nantemente†Th2)†(Figura†14).†Th1†e†Th2†n„o†s„o†sinÙnimos†de† respostacelular†e†humoral.†Existe†predomÌnio,†mas†cÈlulas†Th2†s„o†funcionais,†e†existemanticorpos†IgG†ligados†ao†Th1.

A† imunidade† mediada† por† cÈlulas† se† desenvolve† por† uma† rede† deinteraÁıes†que†resulta†em†defesa†contra†microrganismos†que†sobrevivem†dentrode†fagÛcitos†ou†de†outras†cÈlulas.†Os†antÌgenos†de†patÛgenos†processados†nocitosol,†fora†de†vesÌculas†·cidas,†s„o†conduzidos†atÈ†a†superfÌcie†celular†pelamolÈcula†de†classe†I†e†apresentados†para†as†cÈlulas†T†CD8+†que†eliminamdiretamente†a†cÈlula†infectada,†enquanto†os†antÌgenos†de†patÛgenos†processa-dos†em†vesÌculas†·cidas†s„o†apresentados†pelas†molÈculas†de†classe†II†‡s†cÈlulas

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T†CD4+,†que†podem†se†diferenciar†em†dois†tipos:†CD4+Th1,†que†ativamcÈlulas†mononucleares†(macrÛfagos†e†linfÛcitos)†e†CD4+Th2,†que†induzem†aproliferaÁ„o† e† diferenciaÁ„o† das† cÈlulas† B† em† plasmÛcitos† produtores† deanticorpos.

Figura†14.†Esquema†geral†da†resposta†celular†e†humoral

8.1.†Resposta†celular†e†o†mecanismo†de†aÁ„o†das†cÈlulas†T†CD8+

Os†linfÛcitos†T†CD8+†ativados†se†diferenciam†em†cÈlulas†T†citolÌticas(CTL),†que†destroem†somente†as†cÈlulas†portadoras†do†antÌgeno†associado†aprodutos†de†classe†I†do†MHC,†n„o†danificando†a†cÈlula†vizinha†durante†oevento.†O†mecanismo†de†aÁ„o†pode†ocorrer†pela†lise†direta†atravÈs†das†enzimasperforinas†e†granzimas,†como†tambÈm†pela†induÁ„o†de†apoptose.†No†primei-ro†processo,†apÛs†a†ligaÁ„o†do†TCR/CD3†com†o†antÌgeno†via†MHC†I,†osmicrot˙bulos†da†cÈlula†CD8+†se†movem†para†a†·rea†de†contato†com†a†cÈlulaalvo,†e†os†gr‚nulos†contendo†as†enzimas†citolÌticas†tambÈm†se†aglomeram†nestaregi„o.†Neste†contato,†as†proteÌnas†formadoras†de†poros†(perforinas)†entramem† contato† com† concentraÁıes† de† Ca++† e† sofrem† polimerizaÁ„o.† Esta

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polimerizaÁ„o† forma†um†canal†perme·vel†a† Ìons†na†membrana†plasm·tica†dacÈlula†alvo,†levando†a†um†desequilÌbrio†osmÛtico†e†lise†(Figura†15).†AlÈm†delise†direta,†as†cÈlulas†CD8+†CTL†produzem†IFN-g,†que†estimula†a†atividadefagocit·ria†de†macrÛfagos,†inibe†diretamente†a†replicaÁ„o†de†vÌrus†e†induz†aexpress„o†de†molÈculas†de†classe†I.†O†segundo†mecanismo†de†destruiÁ„o†decÈlula-alvo†envolve†a†interaÁ„o†da†molÈcula†ligante†de†Fas,†denominada†Fas-L†epresente†no†CTL,†com†a†molÈcula†Fas†(CD95),†presente†na†cÈlula†alvo.†EssainteraÁ„o†leva†a†cÈlula-alvo†‡†apoptose,†que†tambÈm†pode†ser†induzida†pelaaÁ„o†das†granzimas.†Neste†evento,†as†cÈlulas†acometidas†condensam†o†citoplasmae†a†cromatina,†formando†os†corpos†apoptÛticos,†que†ser„o†fagocitados†rapida-mente†por†cÈlulas†vizinhas†sem†a† formaÁ„o†de† reaÁ„o† inflamatÛria†adjacente(Figura†15).†Um†efeito†adicional†da†apoptose†È†a†ativaÁ„o†de†enzimas†celularesque†degradam†genomas†virais†em†atÈ†200†pares†de†bases†e†seus†m˙ltiplos.

Figura†15.†Necrose†e†apoptose†induzidas†por†cÈlulas†T†citotÛxicas

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8.2.†Mecanismo†de†aÁ„o†das†cÈlulas†CD4+†Th1†e†CD4+†Th2

Alguns† microrganismos† como†Mycobacterium† spp† s„o† patÛgenosintracelulares†que†crescem†em†vesÌculas,†onde†s„o†parcialmente†protegidos†daaÁ„o†dos†anticorpos†e†das† cÈlulas†CD8†CTL.†Estes†normalmente† inibem†afus„o†destas† vesÌculas† com†o† lisossomo,†prevenindo† sua†destruiÁ„o.†Diantedisso,†esses†microrganismos†s„o†eliminados†normalmente†quando†estas†cÈlulass„o†ativadas†atravÈs†de†citocinas†inflamatÛrias,†como†o†IFN-g,†produzido†pelascÈlulas†CD4+Th1.

O†processo†de†ativaÁ„o,†atravÈs†do†contato†dos†macrÛfagos†com†ascÈlulas†CD4+Th1,†gera†uma†sÈrie†de†aÁıes†bioquÌmicas†que†convertem†omacrÛfago†numa†potente†cÈlula†anti†bacteriana.†Estas†reaÁıes†s„o:†fus„o†dofagossomo† com† o† lisossomo,† expondo† as† bactÈrias† ‡s† enzimas† lisossomais;aumento†da†express„o†de†MHC†de†classe†I†e†classe†II;†express„o†de†receptorde†TNF-a†e†secreÁ„o†de†TNF-a,†que†junto†com†o†IFN-†g,†sinergiza†para†oaumento†da†aÁ„o†bactericida,†resultando†na†produÁ„o†de†Ûxido†nÌtrico†(NO)e†oxigÍnio†reativo†(O2);†secreÁ„o†de†IL-12,†que†orienta†a†diferenciaÁ„o†decÈlulas†Th0†para†Th1;†e†secreÁ„o†de†IL-10,†que†inibe†a†produÁ„o†de†IFN-g†eserve†para†amortecer†os†efeitos†lesivos†da†ativaÁ„o†exacerbada†de†macrÛfagosnos†tecidos.†Quando†um†patÛgeno†resiste†aos†efeitos†iniciais†da†resposta†imunecelular,†pode-se†evoluir†para†uma†inflamaÁ„o†crÙnica,†consistindo†intenso†infiltradomononuclear† e† proliferaÁ„o† de† tecido† conjuntivo† caracterÌstico† de† inflamaÁ„oinespecÌfica† ou† por† um† padr„o† de† inflamaÁ„o† crÙnica† que† se† distingue† pelaformaÁ„o†de†granuloma†que†se†caracteriza†por†agregados†de†macrÛfagos†ativados,os†quais†assumem†uma†aparÍncia†epitelioide†circundados†por†linfÛcitos†T.†Fre-quentemente,†mas†n„o† invariavelmente,†cÈlulas†gigantes†multinucleadas,†quederivam†da†fus„o†de†v·rios†macrÛfagos,†s„o†encontradas†em†granulomas†maisantigos.†As†cÈlulas†CD4†Th1†e†Th2†participam†regulando†tais†granulomas†comproduÁ„o†de†citocinas†inflamatÛrias†e†anti-inflamatÛrias,†prevenindo†a†dissemi-naÁ„o†dos†patÛgenos†e†lesıes†tissulares.

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8.3.†Resposta†humoral

Muitas†bactÈrias†importantes†nas†doenÁas†infecciosas†humanas†se†mul-tiplicam† nos† espaÁos† extracelulares† do† organismo,† e† a† maior† parte† dospatÛgenos†intracelulares†se†dissemina†de†uma†cÈlula†para†outra†atravÈs†dosfluÌdos†extracelulares.†A†resposta†imune†humoral†conduz†‡†destruiÁ„o†dosmicrorganismos† extracelulares† e† seus† produtos,† como,† por† exemplo,† astoxinas;†alÈm†de†tambÈm†prevenir†ou†diminuir†a†disseminaÁ„o†das†infecÁıesintracelulares,†atravÈs†da†neutralizaÁ„o†desses†agentes.†Os†anticorpos†tam-bÈm†facilitam†o†reconhecimento†de†microrganismos†por†cÈlulas†fagocit·rias,permitindo†que†assim†sejam†ingeridos†e†digeridos,†como†ativam†o†sistemacomplemento,†potencializando†a†opsonizaÁ„o,†recrutando†cÈlulas†inflama-tÛrias†para†o†local†da†infecÁ„o†e†lisando†certos†microrganismos†pela†forma-Á„o†dos†poros†em†suas†membranas†(Figura†16).

Figura†16.†Alguns†mecanismos†efetores†da†resposta†mediada†por†anticorpos

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Nesta† resposta,† a† ativaÁ„o†das† cÈlulas†B† e† sua†diferenciaÁ„o† em† cÈlulasplasm·ticas†secretoras†de†imunoglobulinas†È†deflagrada†pelo†antÌgeno†especÌfico†erequer†a†participaÁ„o†de†cÈlulas†CD4†Th2†(Figura†14),†que†tambÈm†controlam†amudanÁa†de†isotipo†e†desempenham†papel†importante†na†hipermutaÁ„o†som·tica,†oque†È†necess·rio†para†a†maturaÁ„o†da†afinidade†dos†anticorpos,†que†ocorre†no†cursoda†resposta†humoral.†A†imunoglobulina†de†superfÌcie†funciona†como†receptor†deantÌgenos,†ou†BCR,†e†realiza†dois†papÈis†na†ativaÁ„o:†a†transduÁ„o†de†sinal†diretopara†o†interior†da†cÈlula,†quando†se†une†ao†antÌgeno†e†a†conduÁ„o†desses†antÌgenosaos†sÌtios†intracelulares,†para†ser†degradado†e†levado†‡†superfÌcie†do†linfÛcito†B,onde,†por†sua†vez,†s„o†reconhecidos†por†CD4†Th2†antÌgenos†especÌficos.†Estaresposta†dependente†da†cÈlula†T†È†chamada†de†timo-dependente†(TD).†PorÈm,alguns†antÌgenos,†como†os† lipopolissacarÌdeos†(LPS)†bacterianos,†podem†ativardiretamente†linfÛcitos†B,†e†tal†resposta†È†chamada†de†timo-independente†(TI).

Anticorpos†de†alta†afinidade†neutralizam†toxinas,†vÌrus†e†bactÈrias.†Mas,podem†n„o†resolver†o†problema,†pois†muitos†agentes†n„o†s„o†neutralizados†pelosanticorpos†e†devem†ser†removidos†por†outros†meios.†Assim,†o†papel†dos†anticorposnestas† situaÁıes†È†ativar†outras†cÈlulas†(cÈlulas†efetoras†acessÛrias),†que† tenhamreceptores†para†Fc†de†Imunoglobulina.†Dentre†essas,†podemos†citar†macrÛfagos†eneutrÛfilos,†que†ingerem†bactÈrias†recobertas†por†IgG;†assim†como†as†NK,†quelisam†diretamente†parasitos†recobertos†por†IgG;†e†ainda†cÈlulas†infectadas†com†vÌrus,recobertas†tambÈm†com†IgG.†Tal†fenÙmeno†acontece†por†um†mecanismo†denomi-nado†citotoxidade†celular,†dependente†de†anticorpo†(ADCC).†AlÈm†da†ADCC,via†IgG,†exercida†pela†NK,†o†mesmo†fenÙmeno†pode†ser†observado†por†meio†daIgE,†onde†as†cÈlulas†citotÛxicas†s„o†os†eosinÛfilos,†e†a†import‚ncia†da†ADCC†viaIgE† se†deve† ao† fato†de†que† alguns†parasitos† n„o† s„o†mortos†diretamente†porfagocitose,† somente† atravÈs†dos†mediadores† liberados†por† estas† cÈlulas.†A† IgEtambÈm†participa†na†sensibilizaÁ„o†e†ativaÁ„o†de†mastÛcitos†promovendo†liberaÁ„ode†subst‚ncias†que†dilatam†vasos†sanguÌneos†e†recrutam†cÈlulas†inflamatÛrias.

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9.† Resposta† imune† aos† agentes† infectoparasit·rios9.† Resposta† imune† aos† agentes† infectoparasit·rios9.† Resposta† imune† aos† agentes† infectoparasit·rios9.† Resposta† imune† aos† agentes† infectoparasit·rios9.† Resposta† imune† aos† agentes† infectoparasit·rios

O†ambiente† em† que† vivemos† È† povoado† por† muitas† espÈcies† demicrorganismos† onde† uma†pequena†parcela† tem† a† capacidade†de† causardoenÁas.†O† sistema† imune† evoluiu† no† sentido† de† promover† aÁıes† queresultem†na†defesa†contra†estes†microrganismos,†contribuindo†para†a†recu-peraÁ„o†e†manutenÁ„o†da†homeostase.†Os†agentes†infectoparasit·rios†dife-rem† em† sua† patogenicidade† e† virulÍncia.† A† patogenicidade† refere-se† ‡capacidade†de†um†organismo†causar†doenÁa,†e†a†virulÍncia†È†o†grau†depatogenicidade.†Portanto,†a†patogenicidade†depende†das†caracterÌsticas†doagente,† do† estado† imunit·rio† do† hospedeiro† e† dos† determinantessocioambientais.†Em†indivÌduos†com†sistema†imunit·rio†normal,†os†agentesinfectoparasit·rios†devem†ser†suficientemente†virulentos†para†se†estabelecere†causar†infecÁ„o.†Por†outro†lado,†indivÌduos†com†sistema†imunit·rio†debili-tado,† agentes† pouco† virulentos,† tais† como†os† comensais,† podem† causarlesıes†graves.†Neste†tÛpico†ser„o†abordados†os†principais†mecanismos†deresposta†‡s†aÁıes†dos†vÌrus,†bactÈrias,†protozo·rios†e†helmintos†que†parasitamo†organismo†humano.

Os†vÌrus†s„o†microrganismos†intracelulares†obrigatÛrios,†que†se†repli-cam†no†interior†das†cÈlulas†e†podem†causar†les„o†tecidual†e†doenÁa,†porv·rios†mecanismos†(Figura†17).†A†replicaÁ„o†viral†interfere†com†a†sÌntese†ecom†as†funÁıes†normais†das†proteÌnas†celulares,†levando†‡†les„o†da†cÈlulainfectada†e†‡†morte.†Este†È†o†efeito†citop·tico,†e†se†diz†que†a†infecÁ„o†ÈlÌtica.†VÌrus†n„o†citop·ticos†podem†causar† infecÁıes† latentes,†durante†asquais†residem†nas†cÈlulas†do†hospedeiro†e†produzem†proteÌnas†estranhas†aomesmo†tempo†em†que†estimulam†a†imunidade†especÌfica.†Em†decorrÍncia,as† cÈlulas† infectadas† s„o† reconhecidas† e† mortas† pelas† cÈlulas† CTL.†AsproteÌnas†virais†tambÈm†podem†estimular†as†reaÁıes†de†hipersensibilidadetardia†(DTH),†e†a†les„o†celular†È†uma†consequÍncia†direta†das†respostasimunes†fisiolÛgicas†contra†os†vÌrus.

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Figura†17.†Mecanismos†pelos†quais†os†vÌrus†lesionam†as†cÈlulas

Os† principais† mecanismos† de† imunidade† inata† aos† vÌrus† envolvem† aestimulaÁ„o†direta†de†IFN†a/b†pelas†cÈlulas†infectadas,†que†funcionam†inibindoa†replicaÁ„o†viral†e†lise†das†cÈlulas†infectadas†pelas†cÈlulas†NK.†AlÈm†dessesmecanismos,†a†ativaÁ„o†do†sistema†complemento†e†a†fagocitose†servem†paraeliminar†vÌrus†de†locais†extracelulares.†Na†imunidade†especÌfica,†combina-se†aresposta†celular†com†a†resposta†humoral.†Os†anticorpos†especÌficos†se†ligam†‡sproteÌnas†do†envelope†ou†do†capsÌdeo,†impedindo†a†fixaÁ„o†do†vÌrus†na†cÈlulahospedeira† e,† consequentemente,† impedindo† sua† penetraÁ„o† (Figura† 16).AlÈm†disso,†os†anticorpos†IgG†opsonizantes†tambÈm†podem†potencializar†aremoÁ„o†pela†fagocitose†(Figura†16)†ou†destruiÁ„o†das†cÈlulas†infectadas†atra-vÈs†da†ADCC†via†cÈlulas†NK.†Embora†os†anticorpos†sejam†importantes†naimunidade†contra†vÌrus,†eles†n„o†s„o†suficientes†para†eliminar†infecÁıes†virais.

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Contudo,†o†principal†mecanismo†contra†uma†infecÁ„o†viral†estabelecida†È†atra-vÈs†de†uma†resposta†celular†via†CD8+†citolÌticos†especÌficos,†que†destroem†ascÈlulas†infectadas,†estimulam†a†aÁ„o†de†enzimas†intracelulares†que†degradamgenomas†virais†e†secretam†citocinas†com†aÁ„o†de†interferon.

As†bactÈrias†extracelulares†causam†doenÁa†de†duas†maneiras:†induzindoreaÁ„o†inflamatÛria†que†resulta†na†destruiÁ„o†tecidual†no†local†da†infecÁ„o†eproduzindo†toxinas,†que†possuem†diversos†efeitos†patolÛgicos.†Estas†podemser†endotoxinas†(componentes†da†parede†celular†bacteriana)†ou†exotoxinas(ativamente†secretadas†pelas†bactÈrias).†Portanto,†as†respostas†imunes†contrabactÈrias†extracelulares†visam†eliminar†a†bactÈria†e†o†efeito†de†suas†toxinas.

O†principal†mecanismo†de†imunidade†inata†È†a†fagocitose†por†neutrÛfilos,monÛcitos†e†macrÛfagos,†mas†a†resistÍncia†destas†bactÈrias†‡†fagocitose†e†a†suadigest„o†È†um†determinante†na†virulÍncia.†A†ativaÁ„o†do†sistema†complementona†ausÍncia†do†anticorpo†È†importante,†pois†a†produÁ„o†de†C3b†opsoniza†abactÈria†e†favorece†a†fagocitose.†O†MAC†lisa†diretamente†a†bactÈria†e†ossubprodutos†do†complemento†(fragmentos†menores),†que†participam†da†res-posta†inflamatÛria†recrutando†e†ativando†leucÛcitos.†A†imunidade†humoral†es-pecÌfica†È†a†principal†resposta†protetora†contra†essas†bactÈrias†e†consiste†doreconhecimento†de†antÌgenos†proteicos†por†cÈlulas†CD4+†Th2,†apresentadosvia†MHC†de†classe†II.†Os†anticorpos†especÌficos,†alÈm†de†neutralizarem†bactÈ-rias†e†suas† toxinas,† impedindo†sua† ligaÁ„o†‡s†cÈlulas†alvo,†ativam†o†sistemacomplemento†potencializando†suas†aÁıes.

Quanto†‡s†bactÈrias†que†sobrevivem†no†interior†de†cÈlulas†hospedeiras,as†mais†patogÍnicas†s„o†aquelas†que†sobrevivem†no†interior†dos†macrÛfagos,como†as†microbactÈrias.†Por†serem†praticamente†inacessÌveis†aos†anticorpos,†suaeliminaÁ„o†requer†mecanismos†diferentes†daqueles†observados†para†bactÈriasextracelulares.†O†principal†mecanismo†de†imunidade†inata†contra†essas†bactÈriasÈ†atravÈs†da†fagocitose,†mas†estas†podem†ativar†diretamente†ou†indiretamentecÈlulas†NK,†que†promovem†uma†defesa†precoce†contra†bactÈrias†intracelulares

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antes†da†resposta†especÌfica.†A†principal†resposta†especÌfica†contra†essas†bactÈ-rias†È†a†resposta†celular,†com†atuaÁ„o†de†cÈlulas†Th1†(CD4+†e/ou†CD8+)que†estimulam†os†macrÛfagos†a†produzirem†diversas†subst‚ncias†bactericidas.Desta†maneira,†as†cÈlulas†CD4+†Th1†e†CD8+†Th1†atuam†em†conjunto†naresposta†celular†contra†bactÈrias†intracelulares†e†o†mecanismo†exercido†por†umapode† complementar† o† da† outra.† …† importante† salientar† que† a† ativaÁ„o† demacrÛfagos†tambÈm†pode†causar† les„o†tecidual,†manifestada†pela†reaÁ„o†dehipersensibilidade†tardia†(DTH†ou†HT),†assim†como†as†observadas†nas†infec-Áıes†virais†e†em†outros†agentes†infectoparasit·rios.

Em†termos†muito†genÈricos,†os†anticorpos†s„o†mais†eficazes†contra†osparasitos†extracelulares†e†os†CTLs,†contra†os†intracelulares.†Em†outras†pala-vras,†as†citocinas†produzidas†pelas†cÈlulas†T†CD4+†podem†ser†importantesna†determinaÁ„o†do†resultado†da†infecÁ„o,†uma†vez†que†as†cÈlulas†Th1†eTh2† possuem† um† perfil† de† citocinas† contrastante† e† de† contrarregulaÁ„o,mostrando†que†o†papel†das†cÈlulas†Th1†e†Th2†na†determinaÁ„o†do†resultadoda† infecÁ„o† sugere† que† as† respostas† das† cÈlulas† Th1† levem† ‡†morte† dospatÛgenos† intracelulares† e† que† as† respostas† das† cÈlulas† Th2† eliminem† ospatÛgenos†extracelulares.†Todavia,†isto†È†muito†mais†uma†simplificaÁ„o†did·-tica†do†que†o†quadro†real.

O†tipo†de†resposta†que†conferir·†maior†proteÁ„o†depende†da†naturezae† da† fase† evolutiva† do† parasito.† Por† exemplo,† o† anticorpo† por† si† sÛ,† oucombinado†com†o†complemento,†pode†danificar†alguns†parasitos†extracelulares,mas†ser·†sempre†melhor†quando†atuando†com†uma†cÈlula†efetora.†Diferentesmecanismos†efetores†atuar„o†em†uma†̇ nica†infecÁ„o†contra†os†diferentes†est·gi-os†do†ciclo†de†vida†do†parasito.†Assim,†na†mal·ria,†os†anticorpos†contra†asformas† livres† bloqueiam† sua† capacidade† para† invadir† novas† cÈlulas,† mas† asrespostas†mediadas†por†cÈlulas†impedem†o†desenvolvimento†da†fase†hep·ticanos†hepatÛcitos.†A†imunidade†protetora†na†mal·ria†n„o†se†correlaciona†simples-mente†com†os†nÌveis†de†anticorpos†e†pode†atÈ†ser†induzida†na†ausÍncia†deles.

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O†parasito†precisa†superar†os†mecanismos†de†defesa†preexistentes†nohospedeiro,†para†que†possa†se†estabelecer†com†sucesso†antes†da†iniciaÁ„o†daresposta†imune†especÌfica†do†hospedeiro.†O†complemento†exerce†um†papelnesta†fase,†uma†vez†que†v·rios†tipos†de†parasitos,†incluindo†os†vermes†adultose†as†larvas†infectantes,†possuem†molÈculas†em†sua†superfÌcie†de†revestimentoque†ativam†a†via†alternativa.†MacrÛfagos,†neutrÛfilos,†eosinÛfilos†e†plaquetasconstituem† a† primeira† linha† de† defesa.†Anticorpos† e† citocinas,† produzidosespecificamente†em†resposta†aos†antÌgenos†parasit·rios,†potencializam†as†ativi-dades†antiparasit·rias†de†todas†estas†cÈlulas†efetoras.†Entretanto,†os†macrÛfagosteciduais,†monÛcitos†e†granulÛcitos†possuem†alguma†atividade†intrÌnseca†antesmesmo†da†potencializaÁ„o.

Os†tripanossomos†e†os†parasitos†da†mal·ria†(plasmÛdios)†que†penetramno†sangue†s„o†removidos†da†circulaÁ„o†por†cÈlulas†fagocÌticas†no†fÌgado†e†nobaÁo.†Antes†de†agirem†como†cÈlulas†apresentadoras†de†antÌgenos†na†iniciaÁ„ode†uma†resposta†imune,†os†macrÛfagos†atuam†como†cÈlulas†efetoras†que†inibema†multiplicaÁ„o†dos†parasitos†ou†atÈ†mesmo†os†destroem.†Estas†cÈlulas†tambÈmsecretam†molÈculas†que†regulam†a†resposta†inflamatÛria†e†potencializam†a†imuni-dade†atravÈs†da†ativaÁ„o†de†outras†cÈlulas.†A† fagocitose†pelos†macrÛfagosfornece†uma†defesa†importante†contra†os†parasitos†menores;†entretanto,†estascÈlulas†tambÈm†secretam†muitos†fatores†tÛxicos†que†permitem†a†destruiÁ„o†dosparasitos†sem†a†internalizaÁ„o.†Quando†ativados†pelas†citocinas,†os†macrÛfagospodem†destruir†parasitos†extracelulares†relativamente†pequenos,†como†os†est·-gios† eritrocit·rios† do† plasmÛdio,† e† tambÈm† os† parasitos† maiores,† como† osest·gios†larvais†do†esquistossomo.†Os†macrÛfagos†tambÈm†atuam†como†cÈlulasexterminadoras†atravÈs†da†ADCC.

A†ativaÁ„o†dos†neutrÛfilos†e†macrÛfagos†È†uma†caracterÌstica†geral†dosest·gios† iniciais†da† infecÁ„o.†Todas†as† funÁıes†efetoras†dos†macrÛfagos† s„opotencializadas†logo†apÛs†a†infecÁ„o.†Embora†sua†ativaÁ„o†especÌfica†seja†induzidapor†citocinas†secretadas†pelas†cÈlulas†T,†como†IFNg,†GM-CSF,†IL-3†e†IL-4,

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mecanismos†T-independentes† tambÈm†podem†ativ·-los.†Neste† caso,† cÈlulasNK†secretam†IFNg†quando†estimuladas†pela†IL-12†produzida†pelos†macrÛfagos.

As†propriedades†efetoras†exibidas†pelos†macrÛfagos†tambÈm†podem†serapresentadas†pelos†neutrÛfilos.†Os†neutrÛfilos†s„o†cÈlulas†fagocÌticas†que†po-dem†destruir†os†agressores,† seja†por†mecanismos†dependentes†de†oxigÍnio,seja†por†independentes,†como†o†Ûxido†nÌtrico.†Os†neutrÛfilos†produzem†umaexplos„o†oxidativa†mais†intensa†do†que†os†macrÛfagos†e†seus†gr‚nulos†secretorescontÍm†proteÌnas†altamente†citotÛxicas.†A†destruiÁ„o†extracelular†pelos†neutrÛfilosÈ†mediada†por†H202,†enquanto†os†componentes†granulares†est„o†envolvidosna†destruiÁ„o†intracelular†dos†organismos†internalizados.†Os†neutrÛfilos†est„opresentes†nas†lesıes†inflamatÛrias†causadas†por†parasitos†e†provavelmente†atuandona†eliminaÁ„o†desses†parasitos†das†cÈlulas†rompidas.†Como†os†macrÛfagos,†osneutrÛfilos† possuem† receptores† para† Fc† e† receptores† para† complemento† epodem†participar†das†reaÁıes†citotÛxicas†dependentes†de†anticorpo,†a†fim†dedestruir† as† larvas† de† Schistosoma†mansoni,† por† exemplo.† Dessa† forma,† osneutrÛfilos†s„o†mais†destrutivos†do†que†os†eosinÛfilos†para†v·rias†espÈcies†denematÛdeos,†embora†a†efic·cia†relativa†dos†dois†tipos†celulares†possa†dependerdo†isÛtipo†e†da†especificidade†do†anticorpo.

Os†eosinÛfilos†est„o†associados†a†infecÁıes†helmÌnticas†e†se†encontramenvolvidos†especificamente†na†defesa†contra†os†est·gios†teciduais†de†helmintos,que†s„o†grandes†demais†para†serem†fagocitados.†A†reaÁ„o†do†mastÛcito†de-pendente†de†IgE†consta†primariamente†em†localizar†os†eosinÛfilos†prÛximos†aoparasito†e,†ent„o,†potencializar†suas†funÁıes†antiparasit·rias.

Os† eosinÛfilos† s„o† cÈlulas† de†menor† potencial† fagocÌtico† perante† osneutrÛfilos,†no†entanto,†sofrem†um†processo†de†desgranulaÁ„o†em†resposta†adist˙rbios†em†sua†membrana†celular,† liberando†o†conte˙do†granular† sobre†asuperfÌcie†dos†parasitos.†O†dano†aos†helmintos†pode†ser†causado†pela†proteÌnab·sica†principal†(MBP).†A†MBP†n„o†È†especÌfica†para†um†determinado†alvo,mas†o†dano†‡s†cÈlulas†do†hospedeiro†È†muito†pequeno,†uma†vez†que†a

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proteÌna†fica†confinada†a†um†espaÁo†diminuto†entre†o†eosinÛfilo†e†o†verme.Os†eosinÛfilos†e†os†mastÛcitos†podem†agir†em†conjunto†na†destruiÁ„o†daslarvas†de†helmintos,†onde†os†produtos†dos†mastÛcitos†potencializam†a†aÁ„odos†eosinÛfilos.†Desta†forma,†os†antÌgenos†liberados†provocam†desgranulaÁ„olocal†dos†mastÛcitos†dependentes†de†IgE†e†a†liberaÁ„o†de†mediadores,†queatraem†seletivamente†os†eosinÛfilos†para†o†local,†potencializando†ainda†maissuas†atividades†(Figura†18).

Figura†18.†Expuls„o†de†helmintos†parasitos†do†lume†intestinal

A†resposta†imune†contra†Trypanosoma†cruzi†depende†n„o†apenas†dascÈlulas†T†CD4+†e†CD8+,†mas†tambÈm†das†NK†e†da†produÁ„o†de†anticorpos.O†mesmo†È†verdadeiro†para†a†resposta†imune†contra†o†Toxoplasma†gondii.†AscÈlulas†NK,†estimuladas†pela†IL-12†secretadas†pelos†macrÛfagos,†constituemoutra†fonte†de†IFNg.†As†infecÁıes†crÙnicas†normalmente†est„o†associadas†comproduÁ„o†reduzida†de† IFNg†e†provavelmente†explicam†a†alta† incidÍncia†de

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tuberculose†e†toxoplasmose†em†pacientes†com†AIDS,†os†quais†possuem†n˙me-ros†reduzidos†de†cÈlulas†T†CD4+.

Em†algumas† infecÁıes†parasit·rias,† o† sistema† imunit·rio† n„o† consegueeliminar†o†parasito,†mas†reage†isolando†o†organismo†com†cÈlulas†inflamatÛrias.O†hospedeiro†reage†ao†antÌgeno†localmente,†o†que†estimula†a†liberaÁ„o†decitocinas,†que†por†sua†vez†recrutam†as†cÈlulas†de†defesa†para†o†local†afetado.Na†esquistossomose,†a†formaÁ„o†do†granuloma†È†outro†exemplo†da†reaÁ„o†dohospedeiro†contra†o†parasito.†Essa†reaÁ„o†È†uma†resposta†crÙnica†mediada†porcÈlulas†aos†antÌgenos†sol˙veis†liberados†pelos†ovos†do†parasito†no†fÌgado.†OsmacrÛfagos†se†acumulam†no†local†e†liberam†fatores†fibrogÍnicos†que†estimulama†formaÁ„o†do†tecido†granulomatoso.†Embora†essa†reaÁ„o†possa†ser†benÈficapara†o†hospedeiro,†no†sentido†que†isola†as†cÈlulas†hep·ticas†das†toxinas†secretadaspelos†ovos†dos†helmintos,†tambÈm†constitui†a†maior†fonte†de†dano,†provocan-do†alteraÁıes†irreversÌveis†no†fÌgado†e†perda†da†funÁ„o†hep·tica.

Em†muitas†infecÁıes†a†distinÁ„o†entre†uma†resposta†mediada†por†cÈlulasou†por†anticorpo†pode†ser†difÌcil,†dado†que†ambas†atuam†em†conjunto†contra†oparasito.†A†expuls„o†de†alguns†nematÛdeos†intestinais†ocorre†espontaneamen-te†poucas† semanas† apÛs† a† infecÁ„o†prim·ria.†Parece†haver†dois† est·gios† naexpuls„o,†alcanÁados†por†uma†combinaÁ„o†de†mecanismos†T-dependentes†e†T-independentes.†CÈlulas†T†(predominantemente†Th2)†respondem†aos†antÌgenosdo†parasito†e† induzem†a†produÁ„o†de†anticorpo†pelas†cÈlulas†que†sofreramproliferaÁ„o.†Ocorre†proliferaÁ„o†dos†mastÛcitos†da†mucosa†e†hiperplasia†dascÈlulas†caliciformes†secretoras†de†muco†no†epitÈlio†intestinal.†Os†vermes†s„odanificados†por†anticorpo†e†produtos†dos†mastÛcitos†sensibilizados†por†IgE,que†desgranulam†apÛs†o†contato†com†o†antÌgeno†e†liberam†a†histamina†que,por†sua†vez,†aumenta†a†permeabilidade†do†epitÈlio†intestinal†onde†o†verme†seencontra.†Esses†processos†n„o†s„o†suficientes†para†eliminar†os†vermes;†portan-to,†molÈculas†inflamatÛrias†inespecÌficas,†secretadas†pelos†macrÛfagos,†incluin-do† TNF† e† IL-1,† contribuem† para† a† proliferaÁ„o† das† cÈlulas† caliciformes† e

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provocam†aumento†na†secreÁ„o†de†muco.†O†muco†reveste†os†vermes†e†leva†‡sua†expuls„o.

Existem†in˙meros†exemplos†de†estratÈgias†fÌsicas†simples†e†protetoras†nosparasitos.†Os†nematÛdeos†possuem†uma†cutÌcula†extracelular†espessa†que†osprotege† da† agress„o† tÛxica.†O† tegumento† dos† esquistossomos† sofre† umespessamento†durante†a†maturaÁ„o,†oferecendo†uma†proteÁ„o†semelhante.†AsuperfÌcie†frouxa†de†revestimento†de†muitos†nematÛdeos†pode†se†desintegrarsob†o†ataque†imune.

A†maioria†dos†parasitos†interfere†na†resposta†imune†e†a†imunossupress„oÈ†uma†caracterÌstica†universal†da†infecÁ„o†parasit·ria,†comprometendo†tanto†asrespostas†mediadas†por†anticorpo†como†as†mediadas†por†cÈlulas.

Os† antÌgenos† sol˙veis† dos† parasitos,† quando† liberados† em† enormesquantidades,†podem†prejudicar†a† resposta†do†hospedeiro†por†um†processodenominado†ìdistraÁ„o†imuneî.†Assim,†os†antÌgenos†sol˙veis†de†v·rios†agentesinfectoparasit·rios†parecem†inativar†os†anticorpos†circulantes,†fornecendo†umaìcortina† de† fumaÁaî† e† desviando† o† anticorpo† do† parasito.†Muitos† destesantÌgenos†de†superfÌcie†liberados†s„o†formas†sol˙veis†de†molÈculas†inseridas†namembrana†do†biopatÛgeno.

AlÈm†dos†efeitos†destrutivos†diretos†de†alguns†parasitos†e†de†seus†produtosaos†tecidos†do†hospedeiro,†muitas†respostas†imunes,†por†si†sÛ,†possuem†efeitospatolÛgicos.†Na†mal·ria,†na†tripanossomose†e†na†leishmaniose†visceral,†o†n˙mero†e†aatividade†aumentados†dos†macrÛfagos†e†linfÛcitos,†no†fÌgado†e†no†baÁo,†levam†aoaumento†de†tamanho†destes†Ûrg„os.†Na†esquistossomose,†grande†parte†da†patolo-gia†resulta†dos†granulomas†dependentes†de†linfÛcitos†que†se†formam†ao†redor†dosovos†no†fÌgado.†As†alteraÁıes†significantes†que†ocorrem†nos†indivÌduos†com†elefantÌases„o†provavelmente†resultado†de†respostas†imunopatolÛgicas†‡s†larvas†adultas†noslinf·ticos.†A†formaÁ„o†de†complexos†imunes†È†comum,†eles†podem†ser†depositadosnos†rins,†como†na†sÌndrome†nefrÛtica†da†mal·ria,†e†podem†dar†origem†a†v·rias†outrasalteraÁıes†patolÛgicas.

Imunologia


A†IgE†das†infecÁıes†helmÌnticas†pode†promover†desde†efeitos†bran-dos†‡†reaÁıes†severas†no†hospedeiro,†por†meio†da†liberaÁ„o†de†mediado-res†pelos†mastÛcitos,† caracterizados†por†pruridos,† eritemas,†dificuldadesrespiratÛrias†ou†mesmo†choque†anafil·tico.

10.† AplicaÁ„o† e† import‚ncia† do† diagnÛstico10.† AplicaÁ„o† e† import‚ncia† do† diagnÛstico10.† AplicaÁ„o† e† import‚ncia† do† diagnÛstico10.† AplicaÁ„o† e† import‚ncia† do† diagnÛstico10.† AplicaÁ„o† e† import‚ncia† do† diagnÛsticoimunosorolÛgico† das† doenÁas† infecto† parasit·riasimunosorolÛgico† das† doenÁas† infecto† parasit·riasimunosorolÛgico† das† doenÁas† infecto† parasit·riasimunosorolÛgico† das† doenÁas† infecto† parasit·riasimunosorolÛgico† das† doenÁas† infecto† parasit·rias

O†diagnÛstico†sorolÛgico†das†doenÁas†transmissÌveis†consiste†na†in-vestigaÁ„o†da†infecÁ„o†no†indivÌduo†ou†na†populaÁ„o,†mediante†a†detecÁ„o,quantificaÁ„o† e† caracterizaÁ„o† de† vari·veis† (imunoglobulinas,† antÌgenos,citocinas)†presentes†no†plasma/soro†sanguÌneo†ou†em†outros†materiais†bio-lÛgicos,†tais†como†amostra†fecal,†urina,†saliva,†escarro†ou†tecidos.

O†desenvolvimento†de†novas†informaÁıes†cientÌficas†est·†relacionadocom†os†progressos†na†metodologia†pelo†desenvolvimento†de†novos†proce-dimentos,†novas†tÈcnicas†ou†instrumentos.†Os†primeiros†mÈtodos†de†iden-tificaÁ„o†e†medida†de†imunoglobulinas†foram†desenvolvidos†por†Von†Behring&†Kitasato,†influenciados†pelos†experimentos†de†Pasteur†sobre†a†Teoria†dosGermes,†ao†encontrarem†no†soro†de†animais†imunizados†contra†difteria†etÈtano,†subst‚ncias†neutralizantes†e†especÌficas†que†denominaram†anticorpos.As†pesquisas†desenvolvidas†por†v·rios†cientistas†se†voltaram†imediatamentepara†a†caracterizaÁ„o†bioquÌmica†dessas†subst‚ncias†neutralizantes†e†o†de-senvolvimento†de†tÈcnicas†capazes†de†induzir†a†formaÁ„o†de†elevadas†con-centraÁıes†de†anticorpos†em†animais†de† laboratÛrio.†Este† foi†o†perÌodofundador†do†diagnÛstico†sorolÛgico.

Neste† tÛpico,† as† tÈcnicas† sorolÛgicas† ser„o† abordadas,† principal-mente,†sob†o†ponto†de†vista†dos†profissionais†que†realizam†o†diagnÛsticosorolÛgico†das†doenÁas†infectoparasit·rias.

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10.1.†AplicaÁıes†dos†testes†sorolÛgicos

Os† testes† sorolÛgicos† vÍm† sendo† constantemente† empregados†paraauxiliar†na†confirmaÁ„o†diagnÛstica†das†suspeitas†clÌnicas†de†infecÁıes,†permi-tindo†a†obtenÁ„o†de†resultados†em†curto†espaÁo†de†tempo,†em†funÁ„o†dealgumas†caracterÌsticas†que†incluem†a†simplicidade†de†execuÁ„o,†baixo†custooperacional†e†a†possibilidade†de†automaÁ„o.†Suas†contribuiÁıes,†entretanto,s„o† inestim·veis,† principalmente† quando† o† patÛgeno,† ou† seus† produtos,dificilmente†podem†ser†demonstrados†nos†fluidos†biolÛgicos†ou†na†estruturahÌstica†do†hospedeiro.

Estes†mÈtodos†s„o†utilizados†na†qualificaÁ„o†e†quantificaÁ„o†de†diversoscomponentes,† incluindo† antÌgenos,† anticorpos,† imunocomplexos,† enzimas† ehormÙnios,†entre†outras†molÈculas†relacionadas†ao†processo†inflamatÛrio.†Oconhecimento†dos† fundamentos†gerais†para† adequada†aplicaÁ„o†e† criteriosainterpretaÁ„o†dos†resultados†exige†que†estas†tÈcnicas†sejam†realizadas†por†pro-fissionais†bem†treinados,†a†fim†de†se†prevenir†a†ocorrÍncia†dos†falsos†resulta-dos,†que†conduzem†para†o†diagnÛstico†e†tratamento†incorretos†dos†pacientes.

O†mÈtodo†sorolÛgico†pode†ser†qualitativo†ou†quantitativo.†O†mÈtodoqualitativo† indica†uma† resposta†do† tipo†ìou† tudo†ou†nadaî,†por†exemplo:aglutinou†ou†n„o†aglutinou,†infectado†ou†n„o†infectado.†O†ensaio†quantitativomede†a†concentraÁ„o†de†antÌgeno†ou†anticorpos,†podendo†ser†expressa†sob†aforma†de†cruzes,†titulaÁıes,†densidades†Ûticas†em†reaÁıes†fotocolorimÈtricas†ououtras†unidades†de†medida†que†se†aplicam.†A†express„o†do†resultado†sob†aforma†de†cruzes,†ou†por†titulaÁıes,†que†correspondem†a†maior†diluiÁ„o†em†queainda†se†observa†a†reaÁ„o†antÌgeno-anticorpo,†È†bastante†subjetiva,†por†retratara†intensidade†de†uma†reaÁ„o†determinada†visualmente†por†critÈrios†pessoais.†AutilizaÁ„o†de†aparelhos†que†realizam†a†leitura†autom·tica†das†reaÁıes†sorolÛgicastraduz†em†n˙meros†os†resultados†obtidos†de†maneira†visual,†reduzindo,†por†umlado,†a†probabilidade†dos†erros,†mas†por†outro,†elevando†(em†alguns†casos)†ocusto†do†exame†laboratorial.

Imunologia


10.2.†A†import‚ncia†do†diagnÛstico†individual

O†indivÌduo†sintom·tico†ou†assintom·tico†com†nÌveis†de†anticorposespecÌficos†detect·veis†È†denominado†soropositivo.†Aquele†que†n„o†pos-sui†anticorpos†detect·veis†È†o†soronegativo.†No†caso†do†indivÌduo†diag-nosticado†soronegativo†(em†uma†primeira†an·lise),†que†ao†reavaliar†a†pri-meira†amostra†junto†com†uma†segunda,†de†coleta†mais†recente†(processoconhecido†como†sorologia†pareada),†e†no†caso†de†resultado†da†primeiraamostra† se† repetir† e† a† segunda† resultar† positiva,† diz-se† que† ocorreusoroconvers„o.†O† diagnÛstico† individual† normalmente† se† realiza† com† afinalidade†de†elucidar†processos†patolÛgicos†com†sinais†e†sintomas†comunsa†v·rias†doenÁas,†procedimento†este†denominado†diagnÛstico†diferencial.Como† exemplos,† podem-se† distinguir† sorologicamente† doenÁas† como† aleishmaniose†tegumentar†difusa†e†a†hansenÌase†lepromatosa,†a†leishmaniosevisceral†e†a†hepatite†viral,†a†hepatite†B†e†a†hepatite†C,†a†toxoplasmose†e†arubÈola,†entre†outras.

Em†algumas†situaÁıes†torna-se†importante†determinar†a† fase†clÌnicada†doenÁa,†principalmente†aquelas†em†que†os†patÛgenos†possuem†habili-dade†para†atravessar†a†barreira†placent·ria†e†gerar†embriopatias†ou†fetopatias.A†presenÁa†de†anticorpos†especÌficos†È†uma†evidÍncia†da†exposiÁ„o†atualou†anterior†aos†agentes†infecciosos,†caracterizada†pela†diversidade†funcio-nal†das†v·rias†classes†de†imunoglobulinas†e†a†ordem†em†que†se†apresentamnos† fluidos†biolÛgicos.†Determinada†por† fatores†genÈticos,†a† IgM,† regrageral,†È†a†primeira†a†apresentar†nÌveis†que†possibilitam†a†detecÁ„o†apÛsestÌmulo†imunogÍnico†e†caracterizar†fase†inicial†na†maioria†das†infecÁıes.†Oseu†decrÈscimo†È†compensado†pelo†surgimento†da†IgG,†normalmente†en-contrada† ao† final†de†um†processo† agudo,†permanecendo†durante† a† fasecrÙnica,†e†podendo†ser†detectada†durante† longo†perÌodo†no†plasma†dohospedeiro,†mesmo†apÛs†a†cura,†como†imunoglobulina†de†memÛria.†Nor-

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malmente,†nas†solicitaÁıes†de†exame†laboratorial,†pedem-se†a†pesquisa†deIgM† e† IgG† especÌficas.† PorÈm,† em† infecÁıes† recentes† por† Toxoplasmagondii†ou†por†citomegalovÌrus,†a†IgM†e†IgG†podem†eventualmente†resultarnegativas,†mas†a†IgA†positiva†pode†corrigir†falhas†no†diagnÛstico.†Por†estasrazıes,†imunoglobulinas†como†a†IgE†e†a†IgA†especÌficas†tÍm†sido†pesquisadase†utilizadas†com†maior†precis„o†na†determinaÁ„o†de†fase†inicial†das†infec-Áıes,†uma†vez†que†possuem†vida†mÈdia†menor†e†permanecem†na†circulaÁ„oapÛs†o†inÌcio†do†processo†infeccioso,†por†um†perÌodo†ainda†mais†curto†queo†da†IgM.

Os†testes†sorolÛgicos†s„o†tambÈm†utilizados†para†verificaÁ„o†do†po-tencial†de†virulÍncia†e†de†invasividade†dos†enteroparasitos.†A†Entamoebahistolytica,†por†exemplo,†enquanto†parasita†o†lume†intestinal,†parece†n„oinduzir,†ou†pouco†induz,†a†formaÁ„o†de†anticorpos†especÌficos.†Por†outrolado,†a†ulceraÁ„o,†a†penetraÁ„o†tecidual†e†a†consequente†multiplicaÁ„o†edisseminaÁ„o†deste†parasito†no†hospedeiro,†pode†proporcionar†elevadostÌtulos†de†IgG†anti†ameba†no†plasma†sanguÌneo,†facilmente†detect·veis.

AlÈm†das† imunoglobulinas,† as†ProteÌnas† de† Fase†Aguda† (PFA),presentes†normalmente†em†baixas†concentraÁıes†no†plasma†sanguÌneo,†alte-ram-se†em†resposta†aos†estÌmulos†inflamatÛrios†apÛs†les„o†tecidual†ou†infec-Á„o.†Em†linhas†gerais,†as†PFA†constituem†um†vasto†n˙mero†de†proteÌnasplasm·ticas†de†origem†hep·tica,†cuja†sÌntese†aumenta†em†25%†ou†mais†epodem†ser†classificadas†em†funÁ„o†do†incremento†de†sua†produÁ„o†apÛsestÌmulo† inflamatÛrio†(Quadro†1).†Tradicionalmente,†a†quantificaÁ„o†daProteÌna†C†Reativa†(PCR)†na†pr·tica†clÌnica† tem†v·rios†objetivos,†entreeles,†a†avaliaÁ„o†da†extens„o†e†a†atividade†da†inflamaÁ„o,†o†que†permite†oacompanhamento†do†processo†patolÛgico,†diferenciaÁ„o†entre†doenÁa†in-flamatÛria†e†n„o†inflamatÛria†e†estimativa†de†seu†respectivo†prognÛstico.

Imunologia


Quadro†1.†CaracterÌsticas†cinÈticas†das†proteÌnas†de†fase†aguda

Os†testes†sorolÛgicos†tambÈm†s„o†utilizados†para†selecionar†doado-res† e† receptores† de† sangue† e† de† Ûrg„os,† n„o† sÛ† no† contexto† de†quemdesempenha† a† determinaÁ„o† de† grupos† sanguÌneos† ou† antÌgenos† dehistocompatibilidade,†como†tambÈm†para†quem†se†compromete†na†detecÁ„oe†prevenÁ„o†de†doenÁas†infecciosas†transmissÌveis†por†meio†da†transfus„osanguÌnea† e† hemoderivados,† como† tecidos† e†Ûrg„os† transplantados.†NoBrasil,†o†MinistÈrio†da†Sa˙de†estabeleceu†estratÈgias†de†controle†apoiadasna†triagem†clÌnica,†epidemiolÛgica†e†sorolÛgica†para†prevenÁ„o†das†doenÁastransfusionais,†que†incluem†a†doenÁa†de†Chagas,†a†sÌfilis,†as†hepatites†B†eC,†a†sÌndrome†de† imunodeficiÍncia†adquirida†(SIDA/AIDS),†o†vÌrus†daleucemia†T†do†adulto†(HTLV-I†e†II),†em†todo†o†territÛrio†nacional,†e†amal·ria,†em†regiıes†endÍmicas.†As†condiÁıes†que†constituem†contraindicaÁ„oabsoluta†para†doaÁ„o†de†Ûrg„os,†relacionadas†‡s†doenÁas†infecciosas,†alÈmdas†empregadas†na†prevenÁ„o†de†doenÁas†transmissÌveis†por†meio†da†transfu-

ProteÌnas†de†fase†aguda

Grupo†1:†aumenta†menos†de†uma†vez

CeruloplasminaC3C4

Grupo†II:†aumenta†de†duas†a†quatro†vezes

a-1-†glicoproteÌna†·cidaa-1†-†antitripsinaa-1†-†antiquimotripsinaHaptoglobinaFibrinogÍnio

Grupo†III:†aumenta†acima†de†cinco†mil†vezes

ProteÌna†C†reativaEncefalites†virÛticas,†citomegalia,herpes†sistÍmica†e†tuberculoseAmiloide†sÈrico†A

Tempo†de†resposta†entre†estÌmuloe†elevaÁ„o†dos†nÌveis†plasm·ticos

48-72†horas48-72†horas48-72†horas

24†horas10†horas10†horas24†horas24†horas

6-10†horas2-10†horas

Peso†molecular†(kDa)

132180206

41546886340

110180

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s„o†sanguÌnea†e†hemoderivados,†incluem†avaliaÁ„o†laboratorial†de†septice-mia†bacteriana†ou†f˙ngica,†ativa.

As†molÈculas† liberadas† pelo† parasito† e† os† anticorpos† correspondentesencontrados† no† hospedeiro† s„o† chamados†de†marcadores† sorolÛgicos.† Estesmarcadores†podem†ser†utilizados†para†avaliar†o†prognÛstico†de†doenÁas†e†algunsmarcadores†indicam†evoluÁ„o†para†cura,†enquanto†outro†agravamento.†Baseando-se†nestes†princÌpios,†pode-se†avaliar†a†efic·cia†terapÍutica.

Os† anticorpos†protetores,† induzidos†por†parasitos† em†processosinfecciosos† ou† por† vacinas,† podem† ser† pesquisados† e† utilizados† comomarcadores†para†avaliar†a†imunidade†especÌfica,†naturalmente†adquiridaou†artificialmente†induzida†por†vacinas.†Os†testes†sorolÛgicos†realizadosem†paciente†prÈ-natal† s„o†de† fundamental† import‚ncia† na†pesquisa†dedoenÁas†congÍnitas,†como†a†toxoplasmose,†a†sÌfilis,†a†citomegalia,†entreoutras;†e†na†avaliaÁ„o†da†imunidade†especÌfica,†principalmente†para†do-enÁas†imunoprevinÌveis†com†a†aplicaÁ„o†de†vacinas†(hepatite†B,†rubÈola,difteria,†tÈtano).

10.3.†A†import‚ncia†do†diagnÛstico†coletivo

A†aplicaÁ„o†dos† testes† sorolÛgicos†em† inquÈritos† epidemiolÛgicosdenomina-se† soroepidemiologia†e† serve†para†estimar† a† soroprevalÍncia,que†corresponde†ao†n˙mero†de† indivÌduos†positivos†em†um†perÌodo†detempo†determinado,†sem†distinguir†os†casos†novos†dos†antigos.†Como†asoroprevalÍncia†est·†intimamente†relacionada†com†a†taxa†de†infecÁ„o†e†apermanÍncia†dos†anticorpos†circulantes,†este†indicador†auxilia†nos†seguintespropÛsitos†em†relaÁ„o†‡s†doenÁas†infectoparasit·rias:†estabelecer†prevalÍnciasorolÛgica,†identificar†os†principais†problemas†sanit·rios,†estabelecer†priori-dades†de†vacinaÁ„o,†demarcar†a†distribuiÁ„o†e†verificar†a†erradicaÁ„o†dedoenÁas,†verificar†a†reintroduÁ„o†de†doenÁas†em†·reas†consolidadas,†deter-minar†a†periodicidade†das†epidemias,†avaliar†as†campanhas†de†vacinaÁ„o,

Imunologia


investigar†enfermidades†descobertas†recentemente†(doenÁas†emergentes)†eestimar†as†perdas†econÙmicas†atribuÌdas†‡†enfermidade.

Testes† sorolÛgicos† tambÈm† s„o† aplicados† na† an·lise† do† conte˙dointestinal†de†insetos†hematÛfagos,†para†identificaÁ„o†das†fontes†alimentaresdos†vetores†envolvidos†na†transmiss„o†de†doenÁas.†Estabelecer†o†padr„oalimentar†dos†insetos†hematÛfagos†È†de†grande†import‚ncia†para†o†entendi-mento†de†sua†biologia,†alÈm†de†possuir†valor† fundamental†para†a†Sa˙deP˙blica,† no† delineamento† de† estratÈgias† de† controle† de† v·rios† agravosgerados†por†esses†vetores.

11.†11.†11.†11.†11.† FFFFFundamentos† gerais† do† imunodiagnÛsticoundamentos† gerais† do† imunodiagnÛsticoundamentos† gerais† do† imunodiagnÛsticoundamentos† gerais† do† imunodiagnÛsticoundamentos† gerais† do† imunodiagnÛstico

A†pesquisa†laboratorial†da†resposta†imune†pode†ser†empregada†paraa† verificaÁ„o†da† resposta† humoral† e†da† resposta† celular.†A†pesquisa†daresposta†humoral†pode†ser†realizada†de†duas†maneiras.†Uma†dessas†manei-ras† refere-se† ao† emprego† de† anticorpos† especÌficos† para† identificar† umantÌgeno†parasit·rio†ou†outras†subst‚ncias†que†desempenham†o†papel†deantÌgenos† na† reaÁ„o,† tais† como† drogas,† hormÙnios,† ·cidos† nuclÈicos,citocinas,†receptores†de†cÈlulas,†etc.†Uma†outra†maneira†È†a†detecÁ„o†deanticorpos†especÌficos†na†amostra†a†ser†testada,†passÌvel†de†determinar†seum†indivÌduo†foi†exposto†a†um†organismo†especÌfico.†A†medida†das†interaÁıesentre† antÌgeno-anticorpo† com† o† propÛsito† de† diagnÛstico† È† conhecidacomo†imunosorologia.

† As† tÈcnicas† imunossorolÛgicas† fundamentam-se† na† natureza† dainteraÁ„o†antÌgeno-anticorpo,†nas†quais†podem†expressar-se†de†duas†formasdistintas,†em†decorrÍncia†da†utilizaÁ„o†de†imunorreagentes†livres†de†marca-Á„o† ou† de† reagentes† marcados.†As† tÈcnicas† em† que† n„o† se† empregammarcadores†demonstram-se†por†fenÙmenos†visÌveis.†Portanto,†ao†se†combi-nar† anticorpos† com† antÌgenos† sol˙veis,† os† complexos† resultantes† podem

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formar†precipitados†insol˙veis.†Se†os†antÌgenos†s„o†particulados†(bactÈrias,protozo·rios,†hem·cias),†os†anticorpos†os†aglutinam.†Se†o†anticorpo†podeativar†a†via†cl·ssica†do†sistema†complemento†e†o†antÌgeno†se†encontra†emuma† superfÌcie† celular,†o† resultado†pode† ser† a† citÛlise.†As† tÈcnicas†queempregam†imunorreagentes†marcados†caracterizam-se†pela†simples†combina-Á„o†do†antÌgeno†com†o†anticorpo,†necessitando†que†um†deles†esteja†marca-do†convenientemente.†O†imunorreagente†pode†ser†marcado†com†corantesfluorescentes† ou† quimioluminescentes,† radioisÛtopos,† enzimas,† ouro† ouprata†coloidais,†entre†outros†marcadores.

11.1†ReaÁıes†de†precipitaÁ„o

As†reaÁıes†de†precipitaÁ„o†ocorrem†entre†antÌgenos†sol˙veis†e†seusanticorpos†correspondentes,†com†formaÁ„o†de†agregados†insol˙veis†que†seprecipitam.†Os†determinantes†mais†importantes†das†reaÁıes†de†precipitaÁ„oconsistem†nas†concentraÁıes†relativas†de†antÌgeno†e†anticorpo.†Esta†relaÁ„oÈ†ilustrada†esquematicamente†na†Figura†19.†Ocorre†precipitaÁ„o†m·ximaquando†a†quantidade†se†antÌgenos†e†de†anticorpos†s„o†equivalentes†(zonade†equivalÍncia),†com†quantidades†decrescentes†nas†zonas†de†excesso†deantÌgeno†ou†excesso†de†anticorpo.†O†fenÙmeno†de†prozona† refere-se†‡precipitaÁ„o†subÛtima,†invisÌvel†aos†nossos†olhos,†que†ocorre†na†regi„o†deexcesso†de†anticorpo.†Portanto,†È†necess·rio†que†diluiÁıes†de†antissorosreajam†com†quantidades†fixas†de†antÌgeno†a†fim†de†obter†o†m·ximo†de†linhade†precipitaÁ„o.†O†fenÙmeno†de†prozona†pode†ser†respons·vel†pelo†apa-recimento†de†resultados†falso-negativos†em†outros†testes†sorolÛgicos,†alÈmdos† testes† de† precipitaÁ„o,† como† nas† reaÁıes† de† aglutinaÁ„o.† Existemv·rios†sistemas†disponÌveis†para†a†pr·tica†da†reaÁ„o†de†precipitaÁ„o,†dentreestes,†destacam-se†a†precipitaÁ„o†em†meios†lÌquidos,†meios†semissÛlidos,como†·gar†ou†agarose,†e†outros†suportes,†tais†como†o†acetato†de†celulose.

Imunologia


Figura†19.†Curva†de†formaÁ„o†de†imunocomplexos†visÌveis

11.2.†ReaÁ„o†de†precipitaÁ„o†em†meio†lÌquido

Conhecida†tambÈm†como†tÈcnica†da†precipitina†ou†tÈcnica†do†anel,a† reaÁ„o† de† precipitaÁ„o† em† meio† lÌquido† (Figura† 20)† consiste† em† secolocar†em†tubos†de†ensaio†ou†em†tubos†capilares†uma†soluÁ„o†de†anticorposconhecidos†(soro†hiperimune)†e†sobre†ela†se†adicionar,†cuidadosamente,†asoluÁ„o†antigÍnica†que†se†deseja†pesquisar,†de†modo†a†constituir-se†umainterface†entre†ambas.†As†molÈculas†da†soluÁ„o†antigÍnica†ir„o†difundir-seatravÈs† da† outra† soluÁ„o,† formando† um† gradiente† de† concentraÁ„o.†AonÌvel†em†que†a†equivalÍncia†antÌgeno/anticorpo†for†a†ideal,†se†formar·†umafaixa†de†precipitado†visÌvel†(um†anel†de†turvaÁ„o†branco†leitoso†na†interface).

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Figura†20.†Imunodifus„o†em†meio†lÌquido†(Teste†de†Precipitina)

11.3.†ReaÁ„o†de†imunodifus„o†simples†em†meio†semissÛlido

Neste†sistema,†tambÈm†chamado†imunodifus„o†unidirecional†ou†tÈcnicade†Oudin,†a†soluÁ„o†antigÍnica†È†sobreposta†a†uma†coluna†de†·gar,†em†umtubo†de†35†a†45†mm†de†altura†contendo†o†soro†hiperimune.†As†molÈculas†deantÌgeno†penetram†no†gel†e†se†difundem†com†velocidade†caracterÌstica†paracada†espÈcie†molecular†(coeficiente†de†difus„o)†influenciada†pela†concentraÁ„odo†gel.†Ao†final†de†certo†tempo†de†difus„o,†que†em†geral†È†de†uma†semana,cada†antÌgeno†ter·†formado,†com†o†seu†anticorpo†correspondente,†um†discoou†zona†de†precipitaÁ„o.

11.4.†ReaÁ„o†de†imunodifus„o†dupla(imunodifus„o†de†OUCHTERLONY)

Em†uma†delgada†camada†de†gel†sobre†uma†l‚mina†de†vidro†escavam-sepequenos† orifÌcios.† Em† um† deles,† coloca-se† soro† ou† plasma† e,† em† outroorifÌcio,†coloca-se†o†antÌgeno.†Um†difunde†em†direÁ„o†ao†outro,† formandoprecipitados† brancos† em† forma† de† linhas† ou† arcos,† tambÈm† chamados† de

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bandas†de†precipitaÁ„o†(Figura†21).†Quando†a†concentraÁ„o†de†antÌgenos†eanticorpos†È†muito†pequena,†as†bandas†n„o†s„o†visÌveis,†necessitando,†nessecaso,†que†se†use†soluÁ„o†corante†para†proteÌnas.†Quando†necess·rio,†corar†ogel†para†visualizar†as†bandas†deve-se†retirar†do†gel†os†imunorreagentes†que†n„oformaram†imunocomplexos†(imunorreagentes†sol˙veis)†por†processos†de†lava-gem† com† soluÁ„o† fisiolÛgica.†O† imunocomplexo† (agregado† insol˙vel),† emfunÁ„o† do† seu† tamanho† efetivo,† fica† retido† nas† malhas† do† gel,† onde,† emseguida,†È†submetido†ao†corante†adequado,†o†que†possibilita†a†visualizaÁ„odas†bandas†quando†formadas.†A†velocidade†de†difus„o†de†cada†imunorreagenteÈ†regida†pelas†leis†da†difus„o†e†depende†da†concentraÁ„o†e†do†tamanho†dosporos†do†gel,†da†temperatura,†da†concentraÁ„o†do†·gar†e†de†sua†pureza.

Figura† 21.† RepresentaÁ„o† esquem·tica† da† reaÁ„o† de† imunodifus„o† duplaOuchterlony.

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11.5.†ReaÁ„o†de†imunodifus„o†radial†simples(imunodifus„o†de†MANCINI)

Nesta†tÈcnica,†o†anticorpo†especÌfico†para†determinado†antÌgeno†È†in-corporado†ao†gel†e†distribuÌdo†sobre†uma†l‚mina†de†vidro†ou†placa†de†Petri.Em†posiÁıes†adequadas,†s„o†feitos†orifÌcios†onde†se†colocam†soluÁıes†antigÍnicasa†serem†testadas,†bem†como†soluÁıes†padr„o,†com†pelo†menos†trÍs†concentra-Áıes†conhecidas†do†antÌgeno.†A†partir†desse†momento,†ocorre†difus„o†radialdo†antÌgeno,†resultando†na†opacificaÁ„o†em†forma†circular†(halo†ou†anel)†emtorno†do†orifÌcio.†O†di‚metro†deste†anel†de†precipitaÁ„o†È†proporcional†‡concentraÁ„o†do†antÌgeno†e,†deste†modo,†a†quantidade†deste†pode†ser†deter-minada†por†comparaÁ„o†com†os†di‚metros†obtidos†por†padrıes†conhecidospor†meio†de†uma†curva†de†referÍncia.

11.6.†ReaÁ„o†de†imunoeletroforese†(mÈtodo†deGRABAR†e†WILLIAMS)

A†imunoeletroforese†È†uma†tÈcnica†de†imunoprecipitaÁ„o†em†meio†gela-tinoso†que†combina†a†eletroforese† com†a† imunodifus„o† radial.†A† tÈcnica†Èrealizada† em† duas† etapas:† na† primeira,† os† antÌgenos† s„o† fracionados† poreletroforese,† enquanto† na† segunda† etapa,† ocorre† a† difus„o† dos† antÌgenoscontra†o†antissoro†especÌfico,†presente†nas†canaletas†abertas†no†gel.†A†reaÁ„oantÌgeno-anticorpo†nesse† sistema†È†evidenciada†pela† formaÁ„o†de† linhas†oubandas†de†precipitaÁ„o†no†gel,†correspondendo†cada†banda†a†um†complexoimune†especÌfico.

11.7.†ReaÁ„o†de†imunoeletroforese†unidimensional†simples

TambÈm† conhecida† como† eletroforese† de† foguete† ou† tÈcnica† deLaurell,†a†imunoeletroforese†unidimensional†utiliza†antissoro†especÌfico†parao†antÌgeno,†ou†o†anticorpo†que†se†quer†quantificar,†incorporado†ao†gel†deagarose,†que†È†colocado†em†l‚minas†de†vidro.†Assim†como†na†tÈcnica†de

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Grabar†e†Williams,†o†pH†do†gel†È†determinado†de†modo†que†a†molÈcula†aser† analisada† fique† com† carga† negativa,†migre† para† o† polo† positivo† e† asubst‚ncia†incorporada†n„o†migre†ao†gel.†As†amostras†a†serem†quantificadas,bem†como†os†controles,†s„o†distribuÌdos†em†pequenos†orifÌcios†do†gel†esubmetidos†‡†eletroforese.†A†partir†dos†orifÌcios†de†aplicaÁ„o,†formam-secones†de†precipitaÁ„o,†cujas†extensıes†variam†de†acordo†com†as†concentra-Áıes†das†subst‚ncias†pesquisadas.†O†padr„o†de†precipitaÁ„o†se†assemelhaa† um† foguete,† por† se† formar† nas†margens† laterais† do† curso†da†migraÁ„oeletroforÈtica,† atÈ†que† se† esgote† a† subst‚ncia† em† an·lise,† resultando† naconvergÍncia†das†margens†laterais†em†forma†de†ponta.

11.8.†ReaÁ„o†de†contraimunoeletroforese

TambÈm†chamada†de†eletroimunodifus„o†dupla†unidimensional.†NestatÈcnica,†antÌgenos†e†anticorpos†migram†por†eletroforese,†simultaneamen-te,†em†direÁıes†opostas,†a†partir†de†orifÌcios†separados†do†gel,†no†mes-mo† eixo,† resultando† na† precipitaÁ„o† no† ponto† de† encontro† dosimunorreagentes† entre† os† orifÌcios.† Para† a† realizaÁ„o† deste† mÈtodo,antÌgenos† e† anticorpos† devem† apresentar† diferentes† mobilidadeseletroforÈticas.†Os†anticorpos†possuem†propriedades†de†migrar†para†opolo†negativo†(c·todo)†em†um†campo†elÈtrico,†enquanto†os†antÌgenosdevem†ser†previamente†tratados†com†soluÁ„o†tamp„o†de†pH†adequadopara†otimizar†os†efeitos†eletroendosmÛticos†que†orientem†sua†migraÁ„opara†o†polo†positivo†(‚nodo).†Este†fenÙmeno†pode†ser†induzido†com†ouso†de†tampıes†alcalinos†(Figura†22).†Este†mÈtodo†permite†a†realizaÁ„ode†v·rias†an·lises†em†uma†˙nica†l‚mina,†fornece†resultados†mais†r·pidos†emais†sensÌveis†que†a†imunodifus„o†convencional†e†pode†ser†realizado†emoutros†suportes,†como†o†acetato†de†celulose.

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Figura†22.†RepresentaÁ„o†esquem·tica†da†reaÁ„o†de†contraimunoeletroforese

11.9.†ReaÁıes†de†aglutinaÁ„o

A†aglutinaÁ„o†È†a† formaÁ„o†de†redes†de†cÈlulas†ou†partÌculas† inertes(l·tex†ou†gelatina),†interligadas†por†pontes†moleculares†de†anticorpos,†que†secombinam†simultaneamente†com†dois†determinantes†antigÍnicos†nas†superfÌciesde†cÈlulas†ou†partÌculas†adjacentes.

11.10.†ReaÁ„o†de†aglutinaÁ„o†direta

A†aglutinaÁ„o†direta†È†a†formaÁ„o†de†agregados†suficientemente†grandesque†ocorre†entre†partÌculas†insol˙veis,†em†sua†forma†Ìntegra†ou†fragmentada,contendo† antÌgenos† naturais† de† superfÌcie.†Hem·cias,† bactÈrias,† fungos† eprotozo·rios† podem† ser† aglutinados† diretamente† por† anticorpos,† os† quais,sendo†bivalentes,†formam†pontes,†ligando†determinantes†antigÍnicos†nas†super-fÌcies†de†partÌculas†vizinhas.†Para†se†detectar†anticorpos†especÌficos,†diluiÁıesseriadas†das†amostras†s„o†postas†para†reagir†junto†a†uma†quantidade†constan-te† de† antÌgeno.†ApÛs† um†perÌodo†de† incubaÁ„o,† a† reaÁ„o† se† concretiza

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(Figura†23)†e†o†resultado†È†geralmente†expresso†como†tÌtulo†da†amostra,†ouseja,†a†m·xima†diluiÁ„o†em†que†ocorre†aglutinaÁ„o.

Figura†23.†RepresentaÁ„o†esquem·tica†da†reaÁ„o†de†aglutinaÁ„o†direta

11.11.†ReaÁ„o†de†inibiÁ„o†da†aglutinaÁ„odireta†de†hem·cias†por†antÌgenos†virais

Diversos† antÌgenos† virais† encontram† receptores† na† superfÌcie† dehem·cias,†principalmente†hem·cias†avi·rias,†e†induzem†sua†aglutinaÁ„o.†Estapropriedade†particular†de†muitos†vÌrus†È†aproveitada†para†a†titulaÁ„o†deanticorpos†produzidos†contra†esses†antÌgenos†virais,†na†vigÍncia†dos†pro-cessos† infecciosos†ou†na†convalescenÁa,†para†fins†diagnÛsticos†e†de†seg-mento†evolutivo.

Todas†as†reaÁıes†de†inibiÁ„o†baseiam-se†na†competiÁ„o,†seja†de†doisdeterminantes†antigÍnicos†semelhantes†por†um†mesmo†sÌtio†de†combinaÁ„oou†de†dois†anticorpos†diferentes†por†um†mesmo†determinante†antigÍnico.A†reaÁ„o†se†efetua†entre†os†imunorreagentes†que†formam†o†composto†maisest·vel.†Neste†caso,†o†soro†do†paciente,†contendo†anticorpos†especÌficos,em†diluiÁ„o†seriada,†È†misturado†a†quantidades†fixas†de†antÌgeno†viral†pa-dronizado,†sendo†incubado†a†370C†e,†em†seguida,†as†hem·cias†s„o†adici-onadas†(Figura†24).†Verifica-se†atÈ†qual†diluiÁ„o†houve†neutralizaÁ„o,†ouseja,†inibiÁ„o†da†propriedade†aglutinante†para†hem·cia.

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Figura†24.†RepresentaÁ„o†da†inibiÁ„o†da†aglutinaÁ„o†viral†das†hem·cias

11.12.†ReaÁ„o†de†aglutinaÁ„o†passiva†dehem·cias†e†suportes†inertes

A†reaÁ„o†se†baseia†na†aglutinaÁ„o†de†hem·cias†ou†de†partÌculas†inertes(l·tex,†gelatina)†que† funcionam†como† suporte,† recobertas†por†um†antÌgenoespecÌfico†sol˙vel,†em†presenÁa†de†amostra†de†soro†ou†plasma†contendo†osanticorpos†correspondentes.†A† formaÁ„o†de†pontes†de†anticorpos†entre†aspartÌculas†adjacentes†indica†a†ocorrÍncia†da†reaÁ„o†(Figura†25).

Figura†25.†Esquema†da†reaÁ„o†de†aglutinaÁ„o†passiva†de†hem·cias†e†suportes†inertes

11.13.†ReaÁ„o†de†inibiÁ„o†passiva†de†partÌculas†inertes†(l·tex)

PartÌculas†de†l·tex†tendo†antÌgenos†ancorados†‡†sua†superfÌcie†podemser†aglutinadas†pela†formaÁ„o†de†ponte†anticÛrpica,†do†mesmo†modo†que†aaglutinaÁ„o†direta†de†hem·cias,†como†j·†foi†exposto.†No†entanto,†ao†se

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misturar†antÌgenos†sol˙veis†aos†soros†contendo†anticorpos,†haver·†bloqueiodos† sÌtios† de† combinaÁ„o† das† molÈculas† de† anticorpo† e† inibiÁ„o† daaglutinaÁ„o.

11.14.†ReaÁ„o†de†fixaÁ„o†do†complemento

A† fixaÁ„o† do† complemento† ocorre† apÛs† a† interaÁ„o† antÌgeno-anticorpo.†O†consumo†de†complemento†in†vitro†pode†ser†utilizado†comoum†teste†para†detectar†e†medir†concentraÁıes†de†anticorpos†e†antÌgenos.†AreaÁ„o†se†manifesta†em†trÍs†momentos:†no†primeiro,†o†antÌgeno†se†combinacom†o†anticorpo.†No†segundo,†se†os†imunocomplexos†estiverem†presen-tes,†os†componentes†do†sistema†complemento†ligam-se,†sendo†assim†con-sumidos.†Finalmente,†adiciona-se†o†sistema†revelador†que†consiste†de†hem·ciasde†carneiro†sensibilizadas†com†hemolisina†(anticorpo†antieritrocit·rio).†ApÛsum†perÌodo†de†incubaÁ„o,†observa-se†se†ocorreu†ou†n„o†lise†das†hem·ciassensibilizadas†e†a†atividade†hemolÌtica†pode†ent„o†ser†medida,†a†fim†de†sedeterminar†a†quantidade†do†imunorreagente†pesquisado†(Figura†26).

Ao†se†pesquisar†a†presenÁa†de†anticorpos†em†fluÌdos†biolÛgicos,†aausÍncia†de†lise†do†sistema†hemolÌtico†indica†a†sua†presenÁa†na†amostra,pois† como† os† principais† componentes† do† sistema† complemento† foramconsumidos† na† lise† do† imunocomplexo† inicial,† n„o† estar„o† disponÌveispara†a†lise†do†sistema†hemolÌtico†e†a†reaÁ„o†ser·†positiva.

Tanto†os†anticorpos†como†os†antÌgenos†devem†ser†destituÌdos†deatividade†anti-complementar†para†n„o†ativar†o† complemento,† indepen-dentemente†do†imunocomplexo.†O†complemento†È†obtido†de†soro†decobaia,†colhido†e†estocado†de†maneira†apropriada†para†preservar†a†ativi-dade†hemolÌtica.

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Figura†26.†RepresentaÁ„o†da†reaÁ„o†de†fixaÁ„o†de†complemento

11.15.†ReaÁıes†de†imunofluorescÍncia

A†tÈcnica†de†imunofluorescÍncia†foi†descrita†pela†primeira†vez†porAlbert†H.†Coons†e†seus†colaboradores,†em†1941.†Estes†pesquisadoresobjetivavam† empregar† corantes† em† tÈcnicas† sorolÛgicas† e† utilizaram†paraisso,†alÈm†dos†corantes†comuns,†radicais†fluorescentes.

Neste†perÌodo,†j·†era†conhecida†a†capacidade†dos†anticorpos†de†seligarem†a†radicais†quÌmicos†sem†perder†sua†caracterÌstica†de†reconhecimentoe†ligaÁ„o†aos†antÌgenos.†J·†haviam†sido†descritos†trabalhos†utilizando†con-jugados†de†anticorpos†e†corantes†em†tÈcnicas†de†aglutinaÁ„o.†O†produtoresultante†desta†conjugaÁ„o†n„o†sÛ†mantinha†suas†propriedades†aglutinantesoriginais†como†ainda†coloria†os†grumos†aglutinados.†PorÈm,†esta†coloraÁ„ofoi† considerada†de† fraca† intensidade,†o†que† levou†Coons†a†optar†peloscorantes†fluorescentes.

Uma†das†grandes†vantagens†da†tÈcnica†È†a†intensa†luminosidade†emi-tida†por†quantidades†muito†pequenas†de†corantes†fluorescentes,†permitin-

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do†identificar†estruturas†fluorescentes†entre†v·rias†outras†estruturas†presen-tes†em†cortes†de†tecidos†ou†esfregaÁos.

A† tÈcnica† de† imunofluorescÍncia† representou† um† grande† avanÁo† noimunodiagnÛstico,†principalmente†no†que†diz†respeito†‡†sorologia.†AtÈ†a†elabo-raÁ„o†deste†mÈtodo,†as†reaÁıes†ocorridas†entre†antÌgeno†e†anticorpo†sÛ†podiamser† evidenciadas† atravÈs† de† reaÁıes† secund·rias,† como† a† precipitaÁ„o† ou† aaglutinaÁ„o,†que†geram†fenÙmenos†decorrentes†da†formaÁ„o†de†imunocomplexosem†grande†quantidade†ou†utilizando†partÌculas†relativamente†grandes.†Uma†dasvantagens†da† imunofluorescÍncia† foi†o† fato†de† ter†maior† sensibilidade†que†osmÈtodos†existentes†na†ocasi„o,†permitindo†distinguir†uma†˙nica†cÈlula†bacterianacorada†por†fluoresceÌna†entre†107†bactÈrias†n„o†coradas.

SÛ† foi† possÌvel† o† desenvolvimento† da† tÈcnica† de† imunofluorescÍnciadevido†a†caracterÌsticas†especiais†que†algumas†subst‚ncias†possuem†de†armaze-nar†energia†luminosa†e†liber·-la†mais†tarde.†A†este†fenÙmeno†foi†dado†o†nomede†luminescÍncia.†Se†a†subst‚ncia†È†capaz†de†armazenar†e†emitir†luminescÍnciapor†perÌodos†mais† longos,†chama-se†ent„o† fosforescÍncia;†se†o†perÌodo†deemiss„o†da†luminosidade†È†mais†curto,†chama-se†a†isso†fluorescÍncia.†Entre†oscorantes†fluorescentes†mais†utilizados†destacam-se†a†rodamina†(isotiocianato†detetrametil†rodamina†ñ†TRICT)†e†a†fluoresceÌna†(isotiocianato†de†fluoresceÌna†ñFITC),†esta†˙ltima†supera†a†primeira†por†possuir†maior†eficiÍncia†qu‚ntica,†ouseja,†maior†capacidade†de†absorÁ„o†e†de†emiss„o†de†luminosidade.†PorÈm,com†a†modernizaÁ„o†dos†equipamentos,†n„o†sÛ†de†microscÛpios†como†tam-bÈm†de†citÙmetros,†foram†feitas†modificaÁıes†para†aumentar†a†eficiÍncia†qu‚nticados†demais†corantes†para†utiliz·-los†em†testes†que†buscam†mais†de†um†marcadorem†superfÌcies†celulares.

A†intensidade†da†luz†emitida†por†este†corante†sofre†grande†interferÍnciado†meio†em†que†ele†se†encontra.†O†pH†È†um†dos†fatores†que†mais†interfere,pois†h·†um†mÌnimo†de†fluorescÍncia†em†pH†·cido†e†m·xima†fluorescÍncia†em

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pH†alcalino,†por† isso†o†material†deve†ser†montado†em†glicerina†tamponadaalcalina†antes†da†observaÁ„o†em†microscÛpio†de†fluorescÍncia.

Para† se† obter† bons† resultados† com† as† tÈcnicas† imunofluorescentes,† Èfundamental†a†utilizaÁ„o†de†um†bom†microscÛpio†Ûtico†equipado†com†acessÛ-rios† e† filtros†que†permitam†a†boa† visualizaÁ„o†e† captaÁ„o†da† fluorescÍncia.Atualmente,†existem†v·rios†modelos†de†variadas†procedÍncias.†Para†a†escolhado†equipamento†que†mais†se†adapte†‡s†necessidades†do†laboratÛrio,†deve-seter†em†mente†qual†o†objetivo†do†teste,†que†tipo†de†material† ser·†utilizadocomo†antÌgeno†ou†como†amostra†(para†que†seja†feita†a†escolha†das†objetivas†eoculares),†qual†o†corante†ou†corantes†que†ser„o†utilizados†(para†que†sejamdefinidos† os† filtros† do† equipamento),† quantos† exames† ser„o† realizados† emmÈdia†e†quantas†vezes†por†semana,†uma†vez†que†tal†escolha†ir·†interferir†na†vida˙til†e†escolha†da†l‚mpada†a†ser†utilizada,†entre†outros†fatores.

A†ligaÁ„o†quÌmica†de†anticorpos†a†corantes†d·†origem†a†um†compostochamado†conjugado,†que†associa†a†capacidade†de†reconhecimento†e†ligaÁ„odo†primeiro†‡s†propriedades†corantes†do†segundo,†sem†que†ocorra†nenhumtipo†de†prejuÌzo†para†ambos.†Apesar†de†processo†de†conjugaÁ„o†ser†relativa-mente†simples,†h·†uma†sÈrie†de†cuidados†que†precisam†ser†seguidos†devido†‡svariaÁıes†que†podem†ocorrer†em†cada†um†dos†reagentes†a†cada†associaÁ„o.Um†dos†cuidados†principais†È†a†imunizaÁ„o†dos†animais†com†os†antÌgenos†maispurificados†possÌveis†para†evitar†a†reatividade†cruzada†com†outros†antÌgenos.Atualmente†existem†no†mercado†compostos†conjugados†de†extrema†pureza†ealta†especificidade,†direcionados†contra†os†mais†variados†antÌgenos†e†que†aten-dem†perfeitamente†‡s†necessidades†da†grande†maioria†dos†laboratÛrios.

A†partir†do†mÈtodo†descrito†por†Coons†e†seus†colaboradores,†sugiramnumerosas†variaÁıes,†das†quais,†a†imunofluorescÍncia†direta†foi†a†mais†simplese†a†primeira†a†ser†descrita.†Nesta†tÈcnica,†o†conjugado†reage†diretamente†comantÌgenos†presentes†na†superfÌcie†de†cÈlulas†(Figura†27).†Como†esta†tÈcnica†sepresta†‡†pesquisa†de†subst‚ncias†que†atuam†como†antÌgenos†para†o†conjugado,

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torna-se†necess·ria,†a†cada†procura†de†um†antÌgeno†diferente,†a†produÁ„o†deum†conjugado†diferente.†AlÈm†disso,†de†todas†as†variaÁıes†da†imunofluorescÍncia,esta†È†a†menos†especÌfica,† j·†que†principalmente†em†tecidos†ou†esfregaÁos,devido†‡†grande†quantidade†de†material†na†amostra,†pode†ocorrer†a†presenÁade†antÌgenos†homÛlogos†ao†que†se†est·†pesquisando.†Quando†se† trata†decÈlulas†Ìntegras,†h·†certa†facilidade†no†reconhecimento,†porÈm†em†fragmentoscelulares†ou†estruturas†muito†pequenas†È†necess·rio†grande†conhecimento†eintenso†treinamento†para†diminuir†a†inespecificidade.

Esta†variaÁ„o†do†mÈtodo†ainda†È†bastante†aplicada†no†diagnÛstico†deinfecÁıes†por†Chlamydia†trachomatis†em†esfregaÁos†cervicais†e†uretrais.†EstemÈtodo† tambÈm† foi† largamente† utilizado† na† identificaÁ„o† de† antÌgenos† doMHC†e†na†tipagem†de†linfÛcitos†B†e†linfÛcitos†T.

Figura†27.†Esquema†da†reaÁ„o†de†imunofluorescÍncia†direita

Outra†variedade†do†mÈtodo†È†a† imunofluorescÍncia† indireta.†Nestamodalidade,†pode-se†realizar†a†pesquisa†de†anticorpos†contra†os†mais†variadosantÌgenos.†O† conjugado† È† uma† imunoglobulina† que† reconhece† a† outra

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imunoglobulina†como†antÌgeno,†ou†seja,†È†uma†anti-imunoglobulina†ou†anticorposecund·rio†(Figura.28).†A†vantagem†deste†mÈtodo†È†que†o†anticorpo†podeestar†ancorado†‡†superfÌcie†de†qualquer†antÌgeno†e†ainda†assim†ser·†reconheci-do†pelo†conjugado.†Assim,†um†̇ nico†conjugado†pode†ser†utilizado†na†pesqui-sa†de†anticorpos†contra†v·rias†infecÁıes†diferentes,†tornando†o†mÈtodo†maisbarato.†Uma†vez†que†o†reconhecimento†de†uma†imunoglobulina†por†outra†sed·† pela† regi„o† est·vel† do† fragmento† cristaliz·vel† (porÁ„o† Fc),† a† ligaÁ„o† ÈespÈcie†especÌfica,†conferindo†ao†mÈtodo†grande†especificidade.†Ele†tambÈmÈ†mais†sensÌvel†do†que†o†mÈtodo†direto,†porque†existem†normalmente†maisepitopos†na†imunoglobulina†para†o†conjugado†se†ligar.†Quanto†maior†a†quanti-dade†de†conjugado†maior†ser·†a†emiss„o†de†fluorescÍncia.

Figura†28.†Esquema†da†reaÁ„o†de†imunofluorescÍncia

Esta†modalidade†do†mÈtodo†auxilia†o†diagnÛstico†de†v·rias†doenÁas†epermite† a† pesquisa† de† diferentes† isotipos† de† imunoglobulinas,† sendo† que,neste† caso,† h·† a† necessidade† de† utilizar† um† conjugado† para† cada† um† dosisotipos.†Desta†forma,†o†mÈtodo†È†utilizado†no†acompanhamento†da†doenÁa†e,em†alguns†casos,†pode†ser†tambÈm†utilizado†como†critÈrio†de†cura.

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De†uma†maneira†geral,†a†tÈcnica†de†imunofluorescÍncia†apresenta†nÌveisde†sensibilidade†que†variam†de†70%†a†90%,†e†especificidade†que†varia†de85%†a†99%.†Por† ser†um†mÈtodo†com†perfil†mais†especÌfico,†este†È†maisutilizado† em† confirmaÁıes† sorolÛgicas.† Deve-se† utilizar† o† mÈtodo† deimunofluorescÍncia†sempre†aliado†a†outro†mÈtodo†mais†sensÌvel†para†a†realiza-Á„o†da†triagem†e†fornecer†os†dois†resultados†em†combinaÁ„o.†A†sua†utilizaÁ„opesquisando†IgM†e†IgG†sÈricas†pode†aumentar†a†sensibilidade,†uma†vez†que†aprimeira†aparece†mais†precocemente.

11.16.†Ensaios†imunoenzim·ticos†-†Enzyme-linkedimmunosorbent†assay†-†ELISA

Os†estudos†preliminares†que†tornaram†passÌveis†de†execuÁ„o†os†mÈto-dos†imunoenzim·ticos†foram†realizados,†simultaneamente,†em†1966,†por†Nakanee†Pierce,†nos†Estados†Unidos,† e†por†Avrameas†e†Uriel,† na†FranÁa,† com†autilizaÁ„o†da†peroxidase†(horseradish†peroxidase†-†HRP)†para†a†confecÁ„o†deconjugados† proteicos,† tendo† como† precursor† o† processo† de† marcaÁ„o† deproteÌnas†com†corantes†fluorescentes,†criado†por†Coons,†em†1941.

Em†1971,†dois†grupos†de†pesquisadores,†um†holandÍs,†formado†porVan†Weemen†e†Schurs,†e†um†sueco,†formado†por†Engvall†e†Perlmann,†idealiza-ram†e†introduziram,†pioneiramente,†o†mÈtodo†imunoenzim·tico†para†detecÁ„oe†quantificaÁ„o†de†antÌgenos†ou†anticorpos†especÌficos.†Estes†grupos†observa-ram† que† proteÌnas† poderiam† ser† imobilizadas† em† uma† superfÌcie† sÛlida† depoliestireno†e†a†reaÁ„o†imune,†ser†revelada†pela†formaÁ„o†de†produtos†colori-dos†da†reaÁ„o†enzima-substrato,†na†presenÁa†de†um†componente†doador†deelÈtrons,†denominado†cromÛgeno.

O†mÈtodo†ELISA,†quando†efetuado†em†Ûtimas†condiÁıes†(enzimasaltamente†ativas,†antÌgenos†puros,†substratos†de†alta†qualidade,†anticorpo†econjugado),†apresenta†sensibilidade†semelhante†ao†radioimunoensaio,†com†avantagem†de†n„o†ser†necess·rio†utilizar†material† radioativo.†Entretanto,†esse

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mÈtodo†apresenta†algumas†desvantagens,†pois†alguns†substratos†usados†nessasreaÁıes†s„o†teratogÍnicos†e†a†presenÁa†de†enzimas†endÛgenas†interferem†nosresultados†quando†se†usa†cÈlulas†inteiras†como†antÌgenos.

A† reaÁ„o† È† desenvolvida† frequentemente† em† placas† pl·sticas† demicrodiluiÁ„o†(suporte),†contendo†sÈries†de†orifÌcios,†onde†s„o†depositados†osimunorreagentes,†antÌgenos†ou†anticorpos,†dependendo†do†objetivo†do†mÈto-do.†O†processo†de†revestimento†da†placa†com†o†imunorreagente†adequadodenomina-se† sensibilizaÁ„o.† Para† sensibilizar† a† placa† deve-se† tratar† oimunorreagente†com†soluÁ„o†alcalina,†deixando-o†com†carga†efetiva†negativa,†eassim†promover,†passivamente,†a†adsorÁ„o†‡†placa†por†interaÁıes†eletrost·ticas(forÁas† coulÙmbicas),† as†quais†ocorrem†em†virtude†das† cargas†positivas†dopoliestireno†ou†polivinil†(polyvinyl†chloride†-†PVC)†utilizado†para†confeccion·-las.†AlÈm†das†placas†de†microdiluiÁ„o†de†96†cavidades,†tambÈm†s„o†utilizadosoutros†suportes,†entre†os†quais,†esferas†de†sefarose,†esferas†de†poliestireno†oude†PVC,†ou† tubos† de†poliestireno† ou†PVC,†que†possibilitam† a† adsorÁ„oadequada†da†maioria†dos†imunorreagentes.

As†etapas†de†lavagem†das†placas†de†microdiluiÁ„o†interpıem-se†‡s†demaisetapas†de†execuÁ„o†do†mÈtodo†e†servem†para†retirar†excessos†de†imunorreagentesn„o†ligados.†Podem†ser†usados†procedimentos†manuais†ou†autom·ticos,†que†v„odesde†o†uso†de†jorradeiras†contendo†a†soluÁ„o†de†lavagem,†ou†de†pente†multicanaladaptado†a†um†sistema†de†v·cuo†(lavadora†semiautom·tica),†atÈ†a†utilizaÁ„o†delavadoras†de†placas†autom·ticas,†que†reduzem†o†tempo†de†realizaÁ„o†do†teste†eproporcionam†maior†uniformidade†ao†processo.

O†revestimento†da†superfÌcie†interna†da†placa†de†ELISA,†pelo†menosno†plano†teÛrico,†n„o†È†absoluto†e,†portanto,†algumas†regiıes†permanecemlivres†de†ligaÁ„o.†Estes†espaÁos†devem†ser†ocupados†com†qualquer†molÈculaalheia†ao†sistema†reacional,†no†sentido†de†reduzir,†ou†mesmo†evitar,†a†ligaÁ„oinespecÌfica,†n„o†imune,†de†componentes†da†amostra,†geradores†de†reaÁıesindesej·veis†que†possibilitam†falsas†interpretaÁıes.†A†cobertura†destes†espaÁos

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vazios†È†chamada†de†bloqueio.†Entre†as†proteÌnas†mais†empregadas†nesta†etapadestacam-se†a†soro†albumina†bovina†(BSA),†a†ovalbumina†e†a†caseÌna,†alÈm†deum†complexo†proteico,†como†o†soro†de†cobaia.

Dependendo†do†material†a†ser†pesquisado,†pode-se†conjugar†antÌgenoscom†enzimas†(Ag-E)†e†anticorpos†ou†anti†anticorpos†com†enzimas†(Ac-E).Enzimas†s„o†macromolÈculas†de†natureza†proteica,†com†funÁ„o†biolÛgicade†alto†poder†catalÌtico†de†reaÁıes†quÌmicas†e†elevada†especificidade†aosubstrato† correspondente.†As†mais† usadas† nestes† testes† s„o† a† fosfatasealcalina†e†a†peroxidase.

Para†revelar†a†presenÁa†da†enzima†no†complexo†formado,†utiliza-se†umasoluÁ„o†reveladora,†que†consiste†em†um†tamp„o†adequado,†onde†se†adicionamo†substrato†correspondente†‡†enzima†conjugada†e†um†componente†doador†deelÈtrons†(cromÛgeno).†A†enzima†conjugada†quebra†o†substrato†e†seus†produ-tos†atuam†no†cromÛgeno,†alterando†a†coloraÁ„o†do†sistema†(Figura†29).

Figura†29.†Esquema†do†ensaio†imunoenzim·tico†ELISA†indireto,para†pesquisade†anticorpos†especÌficos

A†leitura†da†reaÁ„o†em†condiÁıes†de†trabalho†de†campo†pode†ser†feitade†forma†visual,†simplesmente†pela†observaÁ„o†da†alteraÁ„o†da†coloraÁ„o.†EmcondiÁ„o†laboratorial†utiliza-se†espectrofotÙmetro†apropriado†para†leitura†dos

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orifÌcios†das†placas,†que†transforma†a†intensidade†de†cor†em†n˙meros.†Quantomaior† a† leitura,† maior† ser·† a† concentraÁ„o† de† enzima† conjugada† e,consequentemente,†maior† ser·†a†concentraÁ„o†da†subst‚ncia†pesquisada†emtÈcnicas†n„o†competitivas.

O†mÈtodo†ELISA†pode†ser†classificado†de†acordo†com†sua†atividadede†amplificaÁ„o,†ou†seja,†por†mÈtodos†diretos†n„o†competitivos,†ou†baseadosem†sua†atividade†moduladora,†que†s„o†mÈtodos†competitivos.

O†ELISA†direto†È†mais†usado†em†imuno-histoquÌmica.†Seu†fundamentoconsiste†na†utilizaÁ„o†de†anticorpos†prim·rios†marcados†com†enzima,†que†secombinam†especificamente†aos†antÌgenos†presentes†em†cortes†histolÛgicos.†AaplicaÁ„o†da†soluÁ„o†reveladora†destaca†o†material†pesquisado.

O†ELISA†indireto†È†empregado†para†a†pesquisa†de†anticorpos,†ondeamostras†de†soro†ou†plasma†s„o†colocadas†para†reagir†com†antÌgenos†imobiliza-dos†em†uma†fase†sÛlida†(placas†de†ELISA).†Posteriormente,†s„o†revelados†comauxÌlio†de†conjugado†enzim·tico†especÌfico†levando†a†formaÁ„o†de†um†produtocorado† ao† agir† sobre† substratos† cromogÍnicos.† Para† pesquisa† de† antÌgenospresentes†em†material†biolÛgico,†a†amostra†È†posta†para†reagir†com†anticorposespecÌficos†imobilizados†na†fase†sÛlida.

†O†ELISA† competitivo† consiste† na† pesquisa† de† antÌgeno,† onde† oanticorpo†È†mobilizado†na†fase†sÛlida†e†o†antÌgeno†correspondente†competecom†uma†quantidade†padronizada†e†marcado†para†sÌtios†de†combinaÁ„o†dispo-nÌvel.†Nesse†caso,†a†reduÁ„o†da†reaÁ„o†indica†maior†quantidade†de†antÌgenona†soluÁ„o.†Para†pesquisar†anticorpos,†o†antÌgeno†È†imobilizado†e†poder·†seligar† ao† anticorpo† da† amostra† ou† ao† j·† conhecido† e† marcado† (conjugadoenzim·tico),†para,†assim,†decrescer†a†intensidade†de†coloraÁ„o†da†reaÁ„o.†Emambos†os†mÈtodos†competitivos†(Figura†30),†dois†procedimentos†podem†serseguidos:† a† competiÁ„o† simult‚nea,† cujo† antÌgeno† ou† anticorpo†marcado† Èadicionado†junto†com†a†amostra;†ou†a†saturaÁ„o†sequencial,†onde†o†antÌgeno

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ou† anticorpo† È† adicionado† primeiro,† seguido† de† uma† incubaÁ„o† com† oimunorreagente†marcado.

Figura†30.†Modelo†de†mÈtodo†competitivo,†onde†antÌgenos†marcados†e†antÌgenosn„o†marcados††de†uma†amostra†competem†pelos†sÌtios†de†ligaÁ„o†dos†anticorposimobilizados†em†um†suporte

11.17.†Western†blotting†-†WB

A†tÈcnica†de†Western†Blotting,†tambÈm†chamada†de†immunoblottingou† imunoeletrotransferÍncia,† È† uma† ferramenta† de† grande† utilidade† para† acaracterizaÁ„o†de†antÌgenos,†ou†para†pesquisa†de†anticorpos†especÌficos†paraum†determinado†componente†antigÍnico.

A†tÈcnica†de†WB†baseia-se†numa†combinaÁ„o†de†trÍs†mÈtodos†muitoaplicados†em†biologia†molecular:†a†separaÁ„o†de†macromolÈculas†atravÈs†deeletroforese† em† gel† de† poliacrilamida,† na† presenÁa† de† duodecil-sulfato† de

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sÛdio†(SDS-PAGE);††sua†transferÍncia†eletrolÌtica†para†membranas†(geralmentede†nitrocelulose);†e†o†ensaio†de†revelaÁ„o,†utilizando†anticorpos†ou†proteÌnaA,†marcados†por†enzimas,†radionuclÌdeos,†fluorocrÙmos,†metais†coloidais†oucomplexo†biotinina-avidina-peroxidase.

Assim,†as†proteÌnas†de†um†dado†antÌgeno†s„o†separadas,†transferidaseletroliticamente†para†membranas†de†nitrocelulose†e†postas†a†reagir†com†anticorposmarcados.†No† final,† a† reaÁ„o† antÌgeno-anticorpo† È† revelada† por† meio† deimunocomplexos†formados†com†proteÌnas†definidas,†e†facilmente†identificadaspelos†seus†pesos†moleculares†caracterÌsticos.

A†origem†do†nome†Western†Blotting†partiu†de†uma†brincadeira†acadÍmi-ca†baseada†no†nome†Southern,†do†autor†de†um†mÈtodo†de†eletrotransferÍnciade†fragmentos†de†·cidos†nucleicos†(DNA),†que†recebeu†o†nome†de†SouthernBlot.†Pouco†tempo†mais†tarde,†Alwine†e†cols†conseguiram†fazer†uma†adequa-Á„o†na†tÈcnica†de†Southern†Blotting,†que†se†consistiu†na†eletrotransferÍncia†de·cido† ribonucleico† (RNA),† o† qual,† por† sua† vez,† foi† analisado† atravÈs† desondas†de†DNA.†Assim,†seguindo†o†princÌpio†da†brincadeira†inicial,†resolveu-se†chamar†a†nova†tÈcnica†de†Northern†Blotting.†Pouco†mais†tarde,†em†1979,Towbin,†Staehelin†e†Gordon†desenvolveram†o†mÈtodo†de†eletrotransferÍnciade†proteÌnas.†Para†seguir†a†j·†ent„o†tradicional†forma†de†referir-se†ao†mÈtodoresolveu-se†batizar†a†nova†tÈcnica†de†Western†Blotting.

A†raz„o†para†transferirem-se†proteÌnas,†a†partir†de†um†gel†de†poliacrilamidapara†uma†membrana†sintÈtica,†est·†na†possibilidade†de†manuseio†contÌnuo†domaterial†para†an·lise,†alÈm†de†se†poder†trabalhar†com†v·rios†reveladores†aomesmo†tempo,†ou†com†sondas†de†elevado†peso†molecular,†uma†vez†que†apoliacrilamida†n„o†È†um†material†muito†adequado†para†que†molÈculas†de†gran-de†tamanho†sejam†difundidas.

As† membranas† mais† utilizadas† para† o† blotting† s„o† derivadas† danitrocelulose.†Apesar†disso,†elas†s„o†fr·geis†e†apresentam†uma†baixa†capacida-de†de†ligaÁ„o†‡s†macromolÈculas†eletrotransferidas.†As†membranas†de†nylon

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s„o†muito†mais† resistentes† e† ligam-se† muito† fortemente† ‡s† proteÌnas.† Suacapacidade†de†ligaÁ„o†È†seis†vezes†maior†que†a†das†membranas†de†nitrocelulose.Sua†limitaÁ„o†est·†relacionada†a†n„o†impregnaÁ„o†por†corantes,†comumenteempregados† na† revelaÁ„o† de† proteÌnas† (azul† de† Comanssie† e† negro† deamido),†e†‡†grande†quantidade†de†reaÁıes†inespecÌficas,†requerendo,†assim,um† bloqueio† muito† bem† feito† antes† de† se† desenvolver† o† ensaioimunoenzim·tico†para†a†revelaÁ„o†do†Western†Blotting.†Outro†aspecto†muitoimportante† È† a† porosidade† da† membrana.† Recomenda-se† a† utilizaÁ„o† demembranas† com†0,45mm†para†o† uso† genÈrico† e† com†di‚metros†bastantemenores†(0,2mm)†para†estruturas†proteicas,†com†pesos†moleculares†inferio-res†a†20†kDa.†As†melhores†membranas,†embora†sendo†bastante†caras,†s„o†asde†difluoreto†de†polivinilideno†(PVDF).†Elas†combinam†a†excelente†capaci-dade†ligante†e†a†resistÍncia†mec‚nica†‡†manipulaÁ„o†necess·ria†para†a†elabo-raÁ„o†das†fitas,†contendo†proteÌnas†eletrotransferidas.

11.18.†Teste†imunocromatogr·fico

O†dispositivo†de† imunocromatografia†È†composto†de†uma†membranaporosa†de†celulose†modificada†e†membranas†absorventes†acessÛrias†de†fibra†devidro,†contendo†os†elementos†de†reaÁ„o,†ajustadas†em†um†invÛlucro†pl·sticoapropriado†com†uma†janela†para†se†acrescentar†a†amostra†de†teste†e†outra†paraleitura† do† resultado† da† reaÁ„o.†O† princÌpio† de† funcionamento† do† testeimunocromatogr·fico†baseia-se† na† reaÁ„o† especÌfica† antÌgeno-anticorpo†e† seconstitui†por†uma† fase† sÛlida†(membrana†porosa),†onde†est„o† imobilizadoselementos†de†captura,†e†por†uma†fase†mÛvel,†onde†est„o†suspensos†o†conjuga-do†(que†pode†ser†a†proteÌna†A,†ligada†ao†ouro†coloidal†ou†outros†conjugadosdisponÌveis)†e†a†molÈcula†alvo†da†amostra.

A† fase† mÛvel† migra† sobre† a† fase† sÛlida† por† efeito† de† capilaridade,conduzindo†o†complexo†formado†entre†a†molÈcula†alvo†e†o†conjugado,†que,por† sua† vez,† ser·† retido† na† linha† de† captura† da† fase† sÛlida,† formando† um

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complexo†macromolecular†colorido†visÌvel†ao†olho†humano.†Caso†a†amostran„o† contenha† a† molÈcula† alvo,† esta† linha† de† reaÁ„o† n„o† se† formar·.†Umasegunda†linha†de†reaÁ„o,†denominada†linha†de†controle,†se†forma†pela†capturado†conjugado† livre,†que†permite† a† confirmaÁ„o†da†migraÁ„o†da† fase†mÛvel(Figura†31).

Figura†31.†PrincÌpio†doTeste†Imunocromatogr·fico

11.19.†Imuno-histoquÌmica

A†imuno-histoquÌmica†(IHQ)†re˙ne†a†interaÁ„o†antÌgeno†anticorpo†invitro,† tÈcnicas†histolÛgicas†e† reaÁıes†quÌmicas,†em†um†mÈtodo†que†permitedetectar†diferentes†estruturas†de†tecidos,†revelados†por†diversos†tipos†de†pro-cessos†de†visualizaÁ„o.†…†utilizada†no†diagnÛstico†anatomopatolÛgico†de†v·riasdoenÁas†degenerativas†ou†parasit·rias,†bem†como†na†identificaÁ„o†de†estruturasnormais†em†estudos†de†histologia†b·sica.†As† tÈcnicas†de† IHQ†permitem†alocalizaÁ„o†de†proteÌnas†nas†cÈlulas†de†uma†seÁ„o†de†tecido,†fixados†em†formolou†incluÌdo†em†blocos†de†parafina.†Existe,†atualmente,†a†disponibilidade†de†umn˙mero†crescente†de†anticorpos†para†uso†em†IHQ,†o†que†vem†possibilitadouma†maior†precis„o†diagnÛstica.

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Existem†dois†tipos†de†tÈcnicas†de†imuno-histoquÌmica:

• TÈcnica†direta†ñ†Os†anticorpos†prim·rios†s„o†ligados†a†um†marcadorapropriado,†e†o†corte†de†tecido,†que†contÈm†antÌgenos†especÌficos,È†incubado†com†o†anticorpo†durante†algum†tempo.†ApÛs†a†interaÁ„oentre†os†anticorpos†e†as†proteÌnas,†os†anticorpos†que†n„o†se†ligarams„o†removidos†por†lavagem.†Dependendo†do†marcador†utilizado,†aleitura† da† reaÁ„o† ser·† realizada† pela† microscopia† adequada;† paramarcadores† fluorescentes,† por† exemplo,† o† corte† È† observado†pormicroscopia†de†imunofluorescÍncia,†enquanto†para†outros†marcadores,utiliza-se†a†microscopia†Ûtica†convencional.

• TÈcnica†indireta†ñ†Nesta†tÈcnica,†se†utiliza†o†anticorpo†prim·rioespecÌfico†para†uma†determinada†proteÌna†e†para†o†anticorpo†se-cund·rio,† uma† anti-imunoglobulina† marcada† que† reconhece† oanticorpo†prim·rio.†O†corte†de†tecido†È†incubado†com†o†anticorpoespecÌfico†para†determinada†proteÌna.†Depois†de†lavado,†È†incuba-do†com†o†imunoconjugado,†que†se†vai†ligar†ao†anticorpo†prim·rio.Em†seguida,†h·†a†observaÁ„o†por†microscopia†adequada,†depen-dendo†do†marcador†utilizado.

A† tÈcnica† de† IHQ†pode† tambÈm† estar† associada† a† um†processoenzim·tico† de† coloraÁ„o,† como† ao† complexo† avidina-biotina-enzima-cromÛgeno† (Figura† 32).†O† complexo† È† formado† pela† ligaÁ„o† de† umamolÈcula†de†estreptavidina†com†v·rias†de†biotina†associadas†a†uma†enzima(peroxidase†ou†fosfatase†alcalina),†que†tem†como†funÁ„o†a†convers„o†deum†cromÛgeno†incolor†em†um†produto†final†colorido.†O†cromÛgeno†maisutilizado†È†o†DAB†(diaminobenzidina),†que†confere†cor†marrom-ferruginosaao†precipitado†permanente.

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Figura†32.†AmplificaÁ„o†de†sinal†devido†ao†maior†n˙mero†de†molÈculas†deenzimas†biotinaladas†ligadas†‡†avidina

O†anticorpo†marcado†com†a†peroxidase†pode†se†ligar†a†sÌtios†teciduaisinespecÌficos,†prejudicando†a†resultado†do†exame.†A†utilizaÁ„o†de†proteÌnasinertes†alheias†ao†sistema†reacional,†tais†como†soro†fetal†bovino,†soro†albuminabovina† ou† caseÌna,† ao† competirem† com† os† sÌtios† de† ligaÁ„o† inespecÌficos,reduzem†a†reaÁ„o†inespecÌfica.†A†peroxidase†endÛgena,†encontrada†em†dife-rentes† tecidos,† tambÈm†pode†mascarar† uma† reaÁ„o†e†deve† ser† inibida†pelaincubaÁ„o†prÈvia†do†corte†com†perÛxido†de†hidrogÍnio.†A†fosfatase†alcalinaest·† amplamente† distribuÌda† nos† tecidos† humanos† e† È† encontrada† em† altasconcentraÁıes† na†mucosa† intestinal† e† nos† t˙bulos† proximais† dos† rins,† entreoutros†tecidos.†A†biotina†endÛgena,†assim†como†as†outras†proteÌnas†utilizadasna†IHQ,†tambÈm†È†encontrada†em†tecidos,†particularmente†no†fÌgado,†pul-m„o,†baÁo,†tecido†adiposo,†gl‚ndula†mam·ria,†rim†e†cÈrebro.†A†atividade†dabiotina†pode†ser†suprimida†pelo†uso†de†tampıes†alcalinos,†pela†prÈ-incubaÁ„ocom†avidina†ou†com†leite†desnatado.

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A†avidina†È†uma†glicoproteÌna†b·sica†com†PM†de†aproximadamente68†mil,†obtida†a†partir†da†clara†do†ovo†de†v·rias†espÈcies†de†aves.†A†molÈculade†avidina†È†quadrivalente†e†simÈtrica,†onde†cada†lado†da†molÈcula†contÈm†umpar†de†receptores†para†a†biotina.†A†estreptavidina,†obtida†a†partir†do†Streptomycesavidinii,†possui†ponto†isoelÈtrico†prÛximo†ao†neutro†e†mantÈm†as†propriedadesde†ligaÁ„o†da†avidina†sem†apresentar†prejuÌzos†ao†resultado†final.†O†sistemaavidina-biotina†permite†a†amplificaÁ„o†de†sinal,†pois†muitas†molÈculas†de†biotinapodem†se†ligar†a†um†anticorpo.†E†a†adiÁ„o†da†avidina†marcada†com†corantesfluorescentes,†ou†com†enzimas,†resultam†em†uma†amplificaÁ„o†da†reaÁ„o,†facili-tando†a†visualizaÁ„o†do†corte†corado.

11.20.†Citometria†de†fluxo

A†citometria†de†fluxo†È†uma†tÈcnica†utilizada†para†contar,†examinar†eclassificar†partÌculas†microscÛpicas†suspensas,†em†fluxo,†em†um†meio†lÌquido.Permite†a†an·lise†de†v·rios†par‚metros†simultaneamente,†sendo†conhecida†tam-bÈm†por†ìcitometria†de†fluxo†multiparamÈtricaî.†A†vers„o†mais†aplicada†dacitometria†de†fluxo†È†denominada†FACS†(fluorescence-activated†cell†sorter,separador†de†cÈlula†ativado†por†fluorescÍncia),†que†foi†projetada†para†automatizara†an·lise†e†a† separaÁ„o†das†cÈlulas†coradas†com†anticorpo† fluorescente.†OFACS†utiliza†um†feixe†de† laser†e†um†detector†de†luz†para†contar†as†cÈlulasintactas†˙nicas†em† suspenÁ„o.†AtravÈs†de†um†aparelho†de†detecÁ„o†Ûtico-eletrÙnico†s„o†possÌveis†an·lises†de†caracterÌsticas†fÌsicas†e/ou†quÌmicas†de†umasimples†cÈlula.

Em†sistemas†celulares,†as†principais†propriedades†analisadas†s„o†o†tama-nho†relativo,†a†granulosidade†relativa,†a†complexidade†interna†das†partÌculas†e†aintensidade†relativa†da†fluorescÍncia.†Essas†caracterÌsticas†s„o†determinadas†pormeio†de†um†sistema†de†acoplamento†Ûptico-eletrÙnico†que† registra†a† formacomo† a† cÈlula,† ou† partÌcula,† dispersa† a† luz† do† laser† incidente,† emitindofluorescÍncia†(Figura†33).

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Figura†33.†DetecÁ„o†de†linfÛticos†B†fluorescente,†por†citometria†de†fluxo

O†fundamendo†da†citometria†de†fluxo†consiste†na†emiss„o†de†um†feixede†luz†(normalmente†laser),†de†̇ nico†comprimento†de†onda†(cor),†direccionadoa†um†meio† lÌquido†em†fluxo.†Um†n˙mero†de†dectores†È†apontado†ao† localonde†o†fluxo†passa†atravÈs†do†feixe†de†luz.†Um†na†linha†do†feixe†(ForwardScatter†ou†FSC)†e†v·rios†perpendiculares†a†este†(Side†Scatter†ou†SSC),†alÈmde†um†ou†mais†detectores† fluorescentes.†Cada†partÌcula† suspensa†passandoatravÈs†do†feixe†dispersa†a†luz†de†uma†forma,†e†os†corantes†quÌmicos†fluores-centes†encontrados†na†partÌcula,†ou†juntos†‡†partÌcula,†podem†ser†excitados,emitindo†luz†de†menor†frequÍncia†do†que†o†da†fonte†de†luz.

Esta† combinaÁ„o† de† luz† dispersa† e† fluorescente† È† melhorada† pelosdectetores†e,†analisando†as†flutuaÁıes†de†brilho†de†cada†detector†(uma†paracada†pico†de†emiss„o†fluorescente),†È†possÌvel†explorar†v·rios†tipos†de†infor-maÁ„o†sobre†a†estrutura†fÌsica†e†quÌmica†de†cada†partÌcula,†individualmente.FSC†correlaciona-se†com†o†volume†celular†e†SSC†depende†da†complexidadeinterna†da†partÌcula†(Ex:† forma†do†n˙cleo,†quantidade†e† tipo†dos†gr‚nuloscitoplasm·ticos†e†rugosidade†da†membrana).†Atualmente,†alguns†citÙmetros†de

Imunologia


fluxo†tÍm†eliminado†a†necessidade†da†fluorescÍncia†e†usado†somente†dispers„ode†luz†para†sua†mediÁ„o.†Outros†citÙmetros†de†fluxo†formam†imagens†de†cadafluorescÍncia†da†cÈlula,†dispers„o†de†luz†e†transmiss„o†de†luz.

O†citÙmetro†de†fluxo†È†dividido†fundamentalmente†em†cinco†sistemas:

• Sistema†fluido†ñ†Local†onde†ocorrer·†a†introduÁ„o†e†o†alinhamentodas†cÈlulas†por†diferenÁa†de†press„o,†e†que†ser„o†interceptadas†pelaluz†do†laser.

• Sistema†Ûptico†ñ†ContÈm†a†fonte†de†luz†do†laser.†Normalmentes„o†usadas† l‚mpadas†de†merc˙rio†ou†xenon,† lasers†de†alto†poder(argÙnio,† kripton),† lasers† de† poder† baixo† (argÙnio-488nm,† red-HeNe-633nm,†green-HeNe†e†HeCd-UV)†e† lasers†diodo†(azul,verde,†vermelho†e†violeta).

• Sistema†eletrÙnico†ñ†Respons·vel†por†converter†os†sinais†Ûticosdetectados†em†sinais†eletrÙnicos†proporcionais,†atravÈs†de†um†sistemaanalÛgico†para†digital†(ADC),†gerando†FSC†e†SSC,†assim†comosinais†fluorescentes.

• Sistema†de† amplificaÁ„o† ñ†Codifica† e† processa† as† informaÁıesrecebidas†em†escala†linear†ou†escala†logarÌtimica.

• Sistema†computacional†ñ†Respons·vel†pela†an·lise,†processamentodos†sinais†e†emiss„o†do†resultado,†utilizando†softwares†especÌficos.Existe†ainda†um†filtro†e†um†sistema†detector†que†capta†a†luz†proveni-ente†das†cÈlulas.†A†emiss„o†de†luz†frontal†mede†o†tamanho†da†cÈlulae†a†luz†lateral†avalia†a†sua†granulosidade†e†complexidade†interna.

Modernos†citÙmetros†de†fluxo†s„o†capazes†de†analisar†v·rias†partÌcu-las†em†cada†segundo,†em†ìtempo†realî,†e†podem†separar†e†isolar†partÌculascom†propriedades†especÌficas.†Os†par‚metros†possÌveis†de†medir†s„o:†vo-lume†e†complexidade†morfolÛgica†das†cÈlulas,†pigmentos†celulares†(como†a

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clorofila),†DNA,†RNA,†an·lise†e†classificaÁ„o†de†cromossomas,†prote-Ìnas,† antÌgenos† ‡† superfÌcie† celular† (marcadores† CD)† e† antÌgenosintracelulares,†entre†outras†molÈculas.

A†hematologia†foi†uma†das†primeiras†modalidades†biomÈdicas†a†sebeneficiar†das†aplicaÁıes†clÌnicas†da†citometria†de†fluxo.†Algumas†destasaplicaÁıes†s„o†utilizadas†regularmente†para†o†diagnÛstico†ou†o†acompanha-mento†terapÍutico†de†diferentes†afecÁıes.†Em†cancerologia,†a†detecÁ„o†dacÈlula† tumoral† È† a† aplicaÁ„o† mais† desenvolvida.† Esta† detecÁ„o† repousaessencialmente†sobre†a†mediÁ„o†de†conte˙do†anormal†de†DNA†no†n˙cleoda†cÈlula†tumoral†e†da†express„o†proteica†dos†antÌgenos†tumorais.

Atualmente,†a†imunologia,†a†biologia†molecular†e†as†an·lises†clÌnicass„o†as†·reas†da†ciÍncia†que†mais†utilizam†a†citometria†de†fluxo†para†a†detecÁ„oou†identificaÁ„o†de†subtipos†de†cÈlulas†implicadas†na†imunidade.†A†contagemde†linfÛcitos†T†consiste†em†classificar†e†quantificar†as†subpopulaÁıes†desseslinfÛcitos,†pela†pesquisa†imunofenotÌpica†dos†CDs,†por†meio†de†conjugadosfluorescentes†especÌficos.†Dependendo†dos† fluorocromos†que†estar„o† liga-dos†aos†anticorpos†monoclonais,†as†fluorescÍncias†emitidas†por†eles,†quandoexcitados† pelo† laser,† ter„o† comprimentos† de† ondas† diferentes† e,consequentemente,† cores† diferentes.†H·† diversos† tipos† de† fluorocromos,como†o†isotiocianato†de†fluoresceÌna†(FITC),†a†ficoeritrina†(PE),†a†proteÌnaClorofil†peridinina†(PerCP)†e†o†Texas†Red.

Os†sinais†eletrÙnicos†s„o†usados†para†analisar†as†cÈlulas†de†acordocom†seus†marcadores†de†superfÌcie,†e†esta†an·lise†È†interpretada†atravÈs†deum†gr·fico†de†separaÁ„o†dividido†em†janelas†(gates)†(Figura†34).†O†citÙmetrofornece†o†n˙mero†absoluto†de†linfÛcitos,†por†exemplo,†linfÛcitos†T†CD3+/CD4+†e†de†linfÛcitos†T†CD3+/CD8+,†porque†em†cada†tubo†de†amos-tra†existe†um†n˙mero†conhecido†de†partÌculas†de†referÍncia†conjugadas†comfluorocromos†(valor†padr„o).

Imunologia


Figura†34.†An·lise†do†linfÛtico†feita†pelo†CitÙmetro†de†Fluxo†mostrando†osGates†e†as†populaÁıes†marcadascom†FITC,†PE†e†PerCP

11.21.†Testes†de†hipersensibilidade†celular†cut‚nea†tardia

Embora†existam†mÈtodos†in†vitro†para†o†exame†da†imunidade†celular,como,†por†exemplo,†a†linfoproliferaÁ„o†e†a†citometria†de†fluxo,†a†respostacelular† tambÈm† pode† ser† verificada† in† vivo† por† meio† de† testes† dehipersensibilidade†celular†cut‚nea†tardia.†Estes†testes†s„o†muito†simples†epodem†ser†empregados†na†avaliaÁ„o†geral†da†imunidade†celular†em†estudosde†deficiÍncia† imunolÛgica† e† na† verificaÁ„o†da† exposiÁ„o† a† determinadosagentes†infectoparasit·rios†individuais†ou†em†inquÈritos†epidemiolÛgicos.†…importante† ressaltar†que†um† teste†positivo†para†um†agente† infeccioso†n„osignifica†necessariamente†diagnÛstico†de†doenÁa†ativa†ou†infecÁ„o†por†esteagente,†mas†apenas†a†presenÁa†de†cÈlulas†Th1†de†memÛria,†cuja†origem†foiinduzida†por†uma†infecÁ„o†prim·ria†assintom·tica†ou†de†uma†doenÁa†curada.O†teste†negativo†indica†que†o†indivÌduo†n„o†deve†ter†tido†contato†com†oagente†que†se†investiga.

†| 107

Estes† testes,† alÈm†de† representarem†o†principal† exame† complementarpara† o† diagnÛstico† e† acompanhamento† do† curso† de† v·rias† enfermidadesinfectoparasit·rias,†s„o†indicados†tambÈm†para†a†avaliaÁ„o†da†diminuiÁ„o†daimunidade†celular†Th1,†ou†anergia,†que†se†configura†pela†ausÍncia†de†respostaa† uma† bateria† de† antÌgenos† comuns,† determinada† por† fatores† genÈticos† ouambientais.†Como†ocorre,†por†exemplo,†em†indivÌduos†com†infecÁıes†recor-rentes,†com†infecÁıes†causadas†por†microrganismos†que†normalmente†n„o†s„opatogÍnicos,† indivÌduos† em† uso† de† imunossupressores,† indivÌduos† comimunodeficiÍncias†prim·rias††ou†com†doenÁas†que† levam†‡† imunodeficiÍnciasecund·ria,†como†a†AIDS,†neoplasias,†doenÁas†autoimunes,†etc.†Na†suspeitade† anergia,† È† feita† a† aplicaÁ„o† na† pele,† de† certos† produtos† quÌmicos† quereagem†com†proteÌnas†que†induzem†sensibilizaÁ„o†sistÍmica†a†v·rios†metabÛlitosdo†agente†sensibilizante.†O†dinitroclorobenzeno†(DNCB)†È†um†agente†quetem†sido†utilizado†desta†maneira,†com†a†finalidade†de†testar†a†imunidade†celularem†pacientes†com†suspeita†de†anergia.†Este†n„o†deve†ser†um†procedimento†derotina,†e†deve†ser†reservado†a†pacientes†que†apresentaram†ausÍncia†de†respostacelular†aos†antÌgenos†comumente†testados.

Dentre†os†antÌgenos†mais†utilizados,†para†a†avaliaÁ„o†da†resposta†celularde†hipersensibilidade†tardia,†figuram†os†seguintes:†a†tuberculina,†tambÈm†cha-mada†de†PPD†(derivado†proteico†purificado),†empregada†no†teste†de†Mantoux,que†È†utilizado†para†a†avaliaÁ„o†da†exposiÁ„o†ao†Mycobacterium†tuberculosis;a†lepromina,†ou†antÌgeno†de†Mitsuda†ou†mitsudina,†que†È†utilizada†diante†dasuspeita† de† hansenÌase;† o† extrato† de† Leishmania† contido† no† teste† deMontenegro,† utilizado† no† diagnÛstico† complementar† e† em† inquÈritosepidemiolÛgicos†de†leishmaniose†tegumentar;†os†antÌgenos†de†Candida†albicans,candidina†ou†oidiomicina,†empregados†diante†da† suspeita†de†candidÌase;† atricofitina,†para†as†dermatofitoses†causadas†por†fungos;†a†paracoccidioidina,utilizada†sob†a†forma†de†filtrado†de†cultura†na†avaliaÁ„o†da†resposta†celular†aoParacoccidioides†brasiliensis,†e†outros.

Imunologia


O†teste†se†procede†pelo†inÛculo,†apÛs†antissepsia†da†pele†com†·lcool,de†0,1†mL†de†antÌgeno†especÌfico,†por†via†intradÈmica†na†face†anterior†doantebraÁo,†usando†seringas†de†1†mL†com†agulhas†nG†8x0,25mm,†estÈreis†edescart·veis.† Como† controle,† deve-se† injetar† o† mesmo† volume† de† soluÁ„osalina†em†outro†ponto†do†antebraÁo.†A†formaÁ„o†de†uma†p·pula†pequena†euniforme†indica†injeÁ„o†correta.†A†injeÁ„o†subcut‚nea†leva†‡†diluiÁ„o†do†antÌgenoe†pode†gerar†resultados†falso-negativos.†A†leitura†È†realizada†por†mediÁ„o†dosmaiores†di‚metros†do†eritema†e†da†enduraÁ„o†apÛs†48-72†horas†na†maioriados†procedimentos.†EnduraÁ„o†maior†que†5†mm†de†di‚metro†geralmente†indicaresposta†positiva.

12.† Alguns† par‚metros† utilizados† no† controle12.† Alguns† par‚metros† utilizados† no† controle12.† Alguns† par‚metros† utilizados† no† controle12.† Alguns† par‚metros† utilizados† no† controle12.† Alguns† par‚metros† utilizados† no† controlede† qualidade† do† diagnÛstico† sorolÛgicode† qualidade† do† diagnÛstico† sorolÛgicode† qualidade† do† diagnÛstico† sorolÛgicode† qualidade† do† diagnÛstico† sorolÛgicode† qualidade† do† diagnÛstico† sorolÛgico

O†controle†de†qualidade†para†o†diagnÛstico†sorolÛgico†das†doenÁasinfectoparasit·rias,†da†mesma†maneira†que†para†todos†os†outros†procedimentoslaboratoriais,†deve†ser†criteriosa†em†todas†as†etapas†do†processo.†ComeÁandopela†fase†prÈ-analÌtica,†que†inclui†a†indicaÁ„o†e†solicitaÁ„o†corretas†do†testeadequado,†coleta†da†amostra†do†paciente†convenientemente†preparado,†alÈmdo†transporte†e†manuseio†da†amostra†em†condiÁıes†apropriadas†atÈ†o†laboratÛ-rio†de†an·lise.†A†fase†analÌtica†compreende†a†escolha†do†mÈtodo†adequado,a† realizaÁ„o†do† teste†de† acordo† com†as† recomendaÁıes†do† fabricante† e†oregistro†do†resultado†obtido.†A†fase†pÛs-analÌtica†inclui†os†eventuais†c·lculos†ea†apresentaÁ„o†do†resultado†em†forma†de†laudo†final.†A†partir†desta†fase,†deveser†feita†a†interpretaÁ„o†do†resultado,†em†conjunto†com†os†dados†clÌnicos†edemais†exames†laboratoriais,†para†que†seja†definida†a†melhor†conduta.

12.1.†ConstruÁ„o†de†banco†de†soros

O†banco†de†soros†È†uma†coleÁ„o†catalogada†de†amostras†representativasde†uma†populaÁ„o†que†se†mantÈm†para†preservar†suas†caracterÌsticas†imunolÛgicas.

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Para†a†adequada†constituiÁ„o,†È†necess·rio†a†inclus„o†de†amostras†proveni-entes†de†pessoas†infectadas†e†de†pessoas†n„o†infectadas.†As†amostras†depessoas†infectadas,†chamadas†controles†positivos,†devem†ser†pertencentes‡s†·reas†endÍmicas†(se†a†doenÁa†possuir†tal†caracterÌstica)†e†vir†com†diag-nÛstico†conclusivo†que†demonstre†o†parasito†ou†por†provas†que†deem†taisindicaÁıes,†como,†por†exemplo,†os†testes†intradÈrmicos†de†hipersensibilidadecelular,†reaÁ„o†de†hibridizaÁ„o†ou†a†reaÁ„o†polimer·sica†em†cadeia†(PolymeraseChain†Reaction†-†PCR).†As†amostras†de†indivÌduos†n„o†infectados,†consi-derados†ìnormaisî†e†chamados†de†controles†negativos,†s„o†selecionadasmediante†a†apresentaÁ„o†de†resultados†negativos†obtidos†com†as†mesmasprovas† utilizadas† para† seleÁ„o†das† amostras† positivas† e,† se† possÌvel† for,provenientes†de†·reas†n„o†endÍmicas†da†modalidade†estudada.†Se†houvera†inclus„o†de†soros†provenientes†de†indivÌduos†com†outras†doenÁas,†para†averificaÁ„o†de†respostas†cruzadas,†as†mesmas†provas†diagnÛsticas†de†certezadevem†ser†realizadas.†Todo†banco†de†amostras†necessita†da†aprovaÁ„o†decomiss„o†de†Ètica†em†pesquisa†envolvendo†seres†humanos,†bem†como†daaprovaÁ„o†de†comiss„o†de†Ètica†para†uso†de†animais†(CEUA),†quandoenvolve†amostras†n„o†humanas.

12.2.†AvaliaÁ„o†dos†mÈtodos†sorolÛgicos

Ao†analisar†o†comportamento†sorolÛgico†de†duas†populaÁıes,†ondeuma†delas†seja†constituÌda†por†amostras†provenientes†de†pessoas†infectadase†a†outra†de†pessoas†n„o†infectadas,†ao†se†comparar†os†resultados†sorolÛgicosobtidos†em†ambas,†com†frequÍncia†relativa†em†porcentagem,†encontram-seduas†curvas†gaussianas†bem†definidas†(Figura†35).

Imunologia


Figura†35.†DistribuiÁ„o†de†frequÍncias†dos†tÌtulos†sorolÛgicos†de†duas†popula-Áıes†hipotÈticas,†uma†normal†A†e†outra†infectada†B,†encontradas†com†um†testesorolÛgico†hipoteticamente†ideal

Entretanto,† estes† dados† hipotÈticos† ideais† n„o† refletem† o† que† seobserva†em†uma†rotina†de†diagnÛstico†sorolÛgico.†Os†resultados†dos†testessorolÛgicos†se†agrupam†em†quatro†categorias,†de†acordo†com†a†existÍnciaou†n„o†da†doenÁa†e†a†positividade†ou†n„o†do†teste.†Para†qualquer†infecÁ„oque†se†analise,†observa-se†sobreposiÁ„o†entre†as†curvas†de†distribuiÁ„o†dapopulaÁ„o†normal†(A)†e†a†de†infectados†(B),†como†se†mostra†na†Figura36,†onde†os†soros,†com†resultados†positivos†ao†teste†e†provenientes†depacientes†nos†quais†o†diagnÛstico†de†certeza†era†positivo,†denominam-severdadeiros-positivos.†Soros†com†resultados†negativos†obtidos†de†contro-les† normais† s„o† chamados† verdadeiros-negativos.† Soros† com† resultadosnegativos†provenientes†de†pacientes† infectados†s„o†denominados† falsos-negativos† e† aqueles† com† resultado† positivo† ao† teste† sorolÛgico,† porÈmobtidos†de†controles†normais,†s„o†os†falsos-positivos.

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Figura†36.†DistribuiÁ„o†de†frequÍncias†dos†tÌtulos†sorolÛgicos,†semelhantes†aoque†se†encontra†habitualmente:†uma†normal†A†e†outra†infectada†B,†obtidascom†um†teste†sorolÛgico†hipoteticamente†ideal

Neste†exemplo†hipotÈtico,†a†sobreposiÁ„o†das†curvas†È†simÈtrica†e†alinha†de†corte†(cut†off)†encontra-se†marcada†ao†centro,†fornecendo†assim,†igualquantidade†de†resultados†falsos-negativos†(C)†e†falsos-positivos†(D).†Os†da-dos†com†que†se†obtÍm†as†curvas†podem†ser†extraÌdos†de†um†quadro†de†duplaentrada,†como†apresentado††no†Quadro†2.

Quadro†2†ñ†DemonstraÁ„o†de†populaÁıes†de† indivÌduos† infectados†e†n„oinfectados,† onde:† a†=†Verdadeiros-positivos,† b†=† Falsos-positivos,† c†=Falsos-negativos,†d†=†Verdadeiros-negativos†e†P†=†PrevalÍncia.

TESTE

POSITIVO

NEGATIVO

TOTAL

INDIVÕDUOS

INFEC«]O

TOTAL

a†+†bc†+†d

n

PRESENTE††††††††††††††††††††AUSENTE

a†††††††††††††††††††††††††††††††††††††††b

c††††††††††††††††††††††††††††††††††††††d

a†+†c†(P)††††††††††††††††††††††b†+†d

Imunologia


Apesar†de†testes†sorolÛgicos†produzirem†muitos†resultados†verdadei-ros,† alguns† resultados† falsos,† como† j·†mencionado,†podem† ser† gerados,sejam†eles†positivos†ou†negativos;†e,†por†conseguinte,†È†comum†dizer†queos† testes† sorolÛgicos† s„o† presuntivos,† ou† seja,† de† valor† probabilÌstico.Estes†testes,†obrigatoriamente,†devem†ser†avaliados†para†definir†par‚metrosimportantes†quanto†‡s†suas†qualidades†fixas†(sensibilidade,†especificidade†eacur·cia),†uma†vez†que†estes†valores†independem†da†prevalÍncia†da†infec-Á„o†estudada†na†populaÁ„o.

Um†teste†de†triagem†sorolÛgica†ideal†deve†ser†capaz†de†identificartodos†os†indivÌduos†com†a†condiÁ„o†estudada†e†de†excluir†todos†os†indivÌ-duos†que†n„o†apresentem†esta†condiÁ„o.†A†probabilidade†do† teste†emidentificar†corretamente,†em†uma†populaÁ„o,†os†indivÌduos†que†apresentema†infecÁ„o,†denomina-se†sensibilidade†(S)†e†pode,†tambÈm,†ser†conceitu-ada†como†a†capacidade†de†um† teste† sorolÛgico†proporcionar† resultadospositivos†nos†indivÌduos†infectados†ou,†ainda,†como†a†capacidade†do†mÈ-todo†sorolÛgico†em†detectar†quantidades†mÌnimas†do†material†desejado.Calcula-se†a†sensibilidade†com†a†seguinte†relaÁ„o:

Sensibilidade†=†a†:†(a†+†c)

De†acordo†com†os†dados†do†quadro†3

Sensibilidade†=†300†:†400†=†0,75†ou†75%

Os†resultados†podem†ser†apresentados†em†uma†escala†de†0†a†1,†masnormalmente†s„o†expressos†em†porcentagem.

A†capacidade†do†teste†para†excluir†aqueles†que†n„o†s„o†afetados†Èchamada†especificidade† (E),†que† tambÈm†pode† ser† conceituada† como† aqualidade†que†um†teste†apresenta†em†distinguir†molÈculas†diferentes,†porÈm,com†elevado†grau†de†homologia.†Aproveitando†os†dados†do†Quadro†3,†aespecificidade†calcula-se†por:

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Especificidade†=†d†:†(b†+†d†)†onde Especificidade†=†540†:†600†=†0,9†ou†90%

Quadro†3†ñ†Resultados†sorolÛgicos†hipotÈticos†encontrados†em†duas†popula-Áıes†de†indivÌduos†infectados†e†n„o†infectados

A†acur·cia†(A),†tambÈm†chamada†de†confiabilidade†ou†eficiÍncia†doteste,†refere-se†ao†somatÛrio†dos†resultados†verdadeiros†positivos†e†negativosem†relaÁ„o†‡†populaÁ„o†estudada.

Acur·cia†=†(a†+†d)†:†n onde Acur·cia†=†(300†+†540)†:†1000†=†0,84†ou†84%

O†coeficiente†de†prevalÍncia†(P)†pode†ser†conceituado†como†a†por-centagem†de†indivÌduos†infectados,†parasitologicamente†comprovados†em†umapopulaÁ„o.†Esse† conceito†difere†da† soroprevalÍncia,† (SP)†que†considera† aporcentagem†de†indivÌduos†soropositivos†na†populaÁ„o†estudada.

PrevalÍncia†=†(a†+†c)†:†n††††††††††††onde†PrevalÍncia†=†400†:†1.000†=†40%

SoroprevalÍncia†=†(a†+†b)†:†n †onde SoroprevalÍncia†=†360†:†1.000†=†36%

A†determinaÁ„o†das†qualidades†fixas†de†um†teste†sorolÛgico,†por†si†sÛ,n„o† satisfaz† suficientemente† ‡s† necessidades† do† controle† sob† os† resultadossorolÛgicos,†uma†vez†que†a†ocorrÍncia†de†resultados†falsos†pode†alterar,†emfunÁ„o†da†prevalÍncia†de†infecÁ„o.†Como†as†tÈcnicas†sorolÛgicas†s„o†utilizadasem† diversos† lugares† do† mundo† em† ·reas† com† diferentes† coeficientes† de

TESTE

POSITIVO

NEGATIVO

TOTAL

INDIVIDUOS

INFEC«eO

TOTAL

360††a†+†b640††c†+†d

1000†††n

†††PRESENTE††††††††††††††††††AUSENTE

300†a††††††††††††††††††††††60†††††b

100†c††††††††††††††††††††540†††d

400††a†+†c†(P)††††††††600†††††b†+†d

Imunologia


prevalÍncia,†È†importante†conhecer†a†probabilidade†de†que†os†resultadospositivos† segundo† a† tÈcnica† empregada† sejam† realmente† positivos,† bemcomo†os†resultados†negativos†sejam†realmente†negativos.†Estas†probabilida-des†s„o†os†valores†de†prediÁ„o†(VP)†da†tÈcnica.†O†par‚metro†mais†fre-quentemente†utilizado†È†o†valor†de†prediÁ„o†de†positividade†(VPP),†quepermite† identificar†os†doentes†em†um†grupo†de† indivÌduos† consideradossoropositivos.†O†valor†de†prediÁ„o†de†negatividade†(VPN)†È†conceituadocomo†a†probabilidade†de†que†a†doenÁa†estudada†n„o†exista†em†um†grupode† indivÌduos† considerados† como† soronegativos.†Disto† deduz-se† que† ovalor†de†prediÁ„o†pode†ser†dado†pelo†teorema†de†Bayes:

VPP†=†(P†x†S)†:†(P†x†S)†+†(1†-†P)†x†(1†-†E)

VPN†=†E†x†(1†-†P)†:†E†x†(1†-†P)†+†(1†-†S)†x†P

Por† outro† lado,† os† c·lculos† podem† expressar-se† de† uma† forma†maissimples,†mediante†os†valores†do†Quadro†3†apresentado†anteriormente:

VPP†=†a†:†(a†+†b) onde†VPP†=†300†:†360†=†0,83†(83%)††††††††VPN†=†d†:†(c†+†d) onde†VPN†=†540†:†640†=†0,84†(84%)

…†feita†a†aplicaÁ„o†do†mesmo†teste†sorolÛgico,†com†sensibilidade†eespecificidade†invari·veis,†em†duas†·reas†endÍmicas†para†uma†determinadadoenÁa,†onde†a†˙nica†diferenÁa†entre†estas†populaÁıes†seja†a†prevalÍnciade† infecÁ„o†encontrada,†representada†por†uma†populaÁ„o†(A)†de†baixaprevalÍncia†e†uma†(B)†de†alta†prevalÍncia.†A†alteraÁ„o†no†comportamentodo†teste†se†verifica†pela†modificaÁ„o†dos†valores†de†prediÁ„o†de†positividadee†de†negatividade.†A†partir†dos†valores†apresentados†no†quadro†4,†pode-se†verificar†tais†modificaÁıes.

†| 115

Quadro†4†-†Quadro†explicativo†para†os†c·lculos†do†valor†de†prediÁ„o†depositividade†em†duas†populaÁıes†hipotÈticas:†populaÁ„o†A†=†baixa†prevalÍnciae†populaÁ„o†B†=†alta†prevalÍncia,†para†uma†determinada†infecÁ„o.

Conforme†demonstrado,†embora†o†teste†sorolÛgico†tenha†sensibilidadee†especificidade†elevadas,†98%†e†99%†respectivamente,†sua†aplicaÁ„o†em·rea†de†baixa†prevalÍncia†gerou†valor†de†prediÁ„o†de†positividade†inferior†a50%.†Contrariamente,†em†·rea†de†alta†prevalÍncia†o†valor†de†prediÁ„o†depositividade†elevou-se†acima†de†90%.

O†Quadro†5†ilustra,†com†maiores†detalhes,†como†o†valor†de†prediÁ„ode†positividade†dos†testes†sorolÛgicos,†com†diferentes†nÌveis†de†sensibilidade†ede† especificidade,† sofrem† alteraÁıes† em† funÁ„o† dos† valores† crescentes† docoeficiente† de† prevalÍncia.†Via† de† regra,† o† teste† sorolÛgico† n„o† deve† serempregado†em†·reas†de†baixa†prevalÍncia†em†consequÍncia†da†geraÁ„o†denumerosos†resultados†falsos-positivos.

Em†tÈcnicas†parasitolÛgicas†dificilmente†ocorrem†resultados†falso-positi-vos,†como,†por†exemplo,†a†identificaÁ„o†de†hemoparasitos†em†exames†micros-cÛpicos†pela†extens„o†sanguÌnea†em† l‚mina,†ou†enteroparasitos†em†fezes,†Èdefinitivo†para†comprovar†uma†infecÁ„o.†Por†outro†lado,†n„o†podem†ser†utiliza-

Resultadodo†teste

Positivo†††††††980†††††††††††††††990†††††††††††††1970†††††9800†††††††††††††900††††††††††10700Negativo†††††††20†††††††††††98010††††††††††98030†††††††200††††††††††89100††††††††††89300

Total†††††††††1000†††††††††††99000††††††††100000††††10000††††††††90000††††††††100000

(A)†PrevalÍncia†de†infecÁ„o†=†1%

Infectados††N„o†infectados†††total

(B)†PrevalÍncia†de†infecÁ„o†=†10%

Infectados†N„o†infectados†††total

P†=†1%†††††††S†=†98%††††SP†=†99%

VPP†=†980†/†1970†X†100†=†49,7%

P†=†10%†††††††S†=†98%††††SP†=†99%

VPP†=†9800†/†10700†X†100†=†91,6%

Imunologia


dos†para†estimar†a†prevalÍncia†real†de†infecÁ„o,†por†apresentarem†resultadosfalso-negativos.

Quadro† 5† -† VPP† de† testes† com† diferentes† Ìndices† de† sensibilidade† eespecificidade†para†diversas†taxas†de†prevalÍncia

Os†resultados†dos†testes†sorolÛgicos†tambÈm†podem†ser†confrontadospara†a†verificaÁ„o†da†copositividade,†da†conegatividade†e†da†concord‚nciabruta.† Estes†par‚metros†podem† ser† obtidos† em† funÁ„o†da†distribuiÁ„o†dosresultados†dos†testes†sorolÛgicos,†como†representados†no†Quadro†6†de†ma-neira†semelhante†‡†sensibilidade,†especificidade†e†confiabilidade.†A†concor-d‚ncia†ajustada†Kappa†(K)†È†um†par‚metro†que†se†baseia†na†comparaÁ„o†doÌndice†de†concord‚ncia†esperada†com†o†Ìndice†de†concord‚ncia†observada.

VARIA«XO†DO†VALOR†DE†PREDI«XO†DE†POSITIVIDADE

PrevalÍncia†%

especificidade†=†99% sensibilidade†=†99%

sensibilidade††% especificidade††99%70†††80†††90†††95††99 70†††80†††90†††95††99

0,51,05,010,020,0

††2†††††2†††††5†††††9††33††3†††††5†††††9††††17†5015†††21†††34†††51††8427†††35†††52†††69††9245†††55†††71†††83††96

26†††29†††31†††22††3341†††45†††48†††49††5079†††81†††83†††83††8489†††90†††91†††91††9295†††95†††96†††96††96

Valores†de†prediÁ„o†de†positividade

†| 117

Quadro†6†-†Quadro†explicativo†para†os†c·lculos†da†Copositividade,†e†daConegatividade,†Concord‚ncia†bruta†e†Concord‚ncia†ajustada†ñ†Kappa†(K.)

Pode-se†utilizar†o†seguinte†critÈrio†para†conceituar†os†resultadosdo†controle†de†qualidade:†valores†£†40,0%†s„o†considerados†pobres,†de40,1†atÈ†79,9%†regulares,†valores†"†80,0†a†89,9%†s„o†considerados†bonse†"†90%†s„o†considerados†excelentes.

TESTE†2

POSITIVO

NEGATIVO

TOTAL

TESTE†1†(Teste†de†referÍncia)

TOTAL

a†+†b†(p1)c†+†d†(q1)

a†+†b†+†c†+†d

PRESENTE††††††††††††††††††††AUSENTE

a†††††††††††††††††††††††††††††††††††††††b

c††††††††††††††††††††††††††††††††††††††d

a†+†c†(p2)††††††††††††††††††b†+†d†(q2)

Copositividade†=†a†:†(a†+†c)Conegatividade†=†d†:†(b†+†d)

Concord‚ncia†bruta=†(a†+†d)†:†(†a†+†b†+†c†+d)Kappa†=†[2†(ad†+†bc)†:†(p1q2†+†p2q1)]

Imunologia


Resumo† do† capÌtuloResumo† do† capÌtuloResumo† do† capÌtuloResumo† do† capÌtuloResumo† do† capÌtulo

O†sistema† imunit·rio,† assim† como†os† demais† sistemas† do† organismo,possui†suas†prÛprias†cÈlulas,†tecidos,†Ûrg„os†e†molÈculas.†A†principal†cÈluladesse†sistema†È†o†linfÛcito.†Os†linfÛcitos†s„o†as†˙nicas†cÈlulas†do†organismoque† expressam† receptores† altamente† diversificados† para† o† antÌgeno,† o† quepermite†o†reconhecimento†de†uma†grande†variedade†de†subst‚ncias†estranhas.

A†ativaÁ„o†do†sistema†imune†adaptativo†depende†da†apresentaÁ„o†deantÌgenos.†Um†antÌgeno†È†qualquer†subst‚ncia†que†pode†ser†reconhecida†porum†anticorpo†ou†por†um†receptor†de†cÈlula†T.†Os†antÌgenos†possuem†duaspropriedades:†a†imunogenicidade†e†a†antigenicidade.†Os†que†n„o†s„o†capazesde† induzir† uma† resposta† imune† s„o† chamados† de† haptenos† e† precisam† seracoplados† ‡s† molÈculas† carreadoras† para† adquirirem† tal† capacidade.†Odeterminante† antigÍnico,† ou† epitopo,† È† a† menor† porÁ„o† da† molÈcula† e† Èrespons·vel†pela†propriedade†de†estimular†uma†resposta†imune.†As†superfÌciescelulares,†incluindo†os†microrganismos,†geralmente†possuem†uma†grande†quan-tidade†de†determinantes†antigÍnicos.

Os†anticorpos†atuam†na†resposta†imune†ligando-se†especificamente†aoagente† patogÍnico† ou† seu† subproduto,† ativando† o† sistema† complemento,opsonizando†para†aumentar†a† fagocitose†e†a†citotoxicidade†dependente†deanticorpo,†e†permitindo,†assim,†que†microrganismos†e†parasitos†sejam†destruÌdospelas†cÈlulas†do†sistema†imune.

Os†anticorpos†se†encontram†distribuÌdos†por†todo†o†organismo,†poisos†agentes†infecciosos†podem†vencer†as†diversas†barreiras†naturais†e†estabele-cer†uma†infecÁ„o†em†qualquer†parte†do†corpo.†Os†primeiros†anticorpos†aserem†produzidos†numa†resposta†imune†s„o†as†IgM†e†tendem†a†ser†de†baixaafinidade,†mas†s„o†muito†potentes†na†ativaÁ„o†do†sistema†complemento.†AIgG†È†o†principal†isotipo†no†sangue†e†fluidos†extracelulares,†e†È†transportadaatravÈs†da†placenta†diretamente†para†a†corrente†circulatÛria†do†feto†durante†avida†intrauterina.†A†IgA†tem†papel†importante†na†proteÁ„o†das†superfÌcies

†| 119

mucosas†contra†patÛgenos†ou†seus†subprodutos.†A†IgE†tem†como†principalfunÁ„o†o†recrutamento†de†cÈlulas†inflamatÛrias†atravÈs†da†ativaÁ„o†de†mastÛcitose†basÛfilos,†como†tambÈm†pode†estar†envolvida†na†eliminaÁ„o†de†parasitos†eprocessos†alÈrgicos.

Existem†v·rios†sistemas†proteicos†de†reaÁ„o†em†cadeia†no†plasma†sanguÌ-neo,† dentre† estes,† o† sistema† complemento,† que† † È† um† complexo† sistemaconstituÌdo†por†molÈculas†termol·beis†e†termoest·veis,†e†que†tem†como†funÁ„oa†eliminaÁ„o†de†um†agente†estranho,†facilitando†a†fagocitose,†quando†algumasproteÌnas†ativadas†do†complemento†opsonizam†a†superfÌcie†do†patÛgeno;†porreaÁ„o† InflamatÛria,†quando†os†pequenos† fragmentos†de†proteÌnas† recrutamfagÛcitos†ao†local†da†atividade†inflamatÛria;†ou†por†lise†direta,†quando,†umavez†desencadeada†a†cascata,†os†componentes†terminais†do†complemento†lesama†membrana†dos†microrganismos.

Todo†organismo†multicelular†possui†algum†sistema†de†defesa†que†distin-gue†os†patÛgenos†e†elimina-os†do†hospedeiro.†A†vantagem†de†tal†imunidadeespecÌfica†È†que†o†sistema†imune†pode†rapidamente†adaptar-se†‡queles†patÛgenosque†s„o†mais†frequentemente†encontrados†no†meio†ambiente†local.†Esta†capa-cidade†È†conseguida†atravÈs†do†complexo†principal†de†histocompatibilidade,cujos†produtos†desempenham†um†papel†no†reconhecimento†intercelular†e†nadiscriminaÁ„o†entre†o†prÛprio†e†o†n„o†prÛprio.

Didaticamente,†a†imunidade†adaptativa†se†organiza†em†imunidade†humorale†imunidade†celular.†A†imunidade†mediada†por†cÈlulas†se†desenvolve†por†umarede† de† interaÁıes† que† resulta† em† defesa† contra† microrganismos,† os† quaissobrevivem†dentro†de†fagÛcitos†ou†de†outras†cÈlulas.†A†resposta†È†iniciadapelo†reconhecimento†do†antÌgeno†de†microrganismos†intracelulares†por†cÈlulasT†atravÈs†do†complexo†principal†de†histocompatibilidade†(MHC).†Na†respos-ta†via†CD8,†somente†a†cÈlula†alvo†que†porte†o†antÌgeno†associado†‡†classe†Ipode†ser†lisada†ou†induzida†a†entrar†em†apoptose.†Em†outro†mecanismo†daresposta†celular,†as†cÈlulas†T†CD4+†Th1†ativam,†por†exemplo,†macrÛfagos

Imunologia


infectados†atravÈs†de†citocinas†como†o†IFN-g.†Quando†um†patÛgeno†resisteaos†efeitos†dos†macrÛfagos†ativados,†pode-se†desenvolver†uma†infecÁ„o†crÙni-ca.† J·† a† resposta† imune† humoral† conduz† ‡† destruiÁ„o† dos† microrganismosextracelulares†e†previne†ou†diminui†a†disseminaÁ„o†das†infecÁıes†intracelulares,por†meio†da†neutralizaÁ„o,†opsonizaÁ„o†e†ativaÁ„o†do†sistema†complemento.A† ativaÁ„o† das† cÈlulas† B† e† sua† diferenciaÁ„o† em† cÈlulas† secretoras† deimunoglobulinas†s„o†deflagradas†pelo†antÌgeno†especÌfico†e†requer†a†participa-Á„o†de†cÈlulas†CD4+†Th2,†que†tambÈm†controlam†a†mudanÁa†de†isotipo†edesempenham†papel†importante†na†hipermutaÁ„o†som·tica,†o†que†È†necess·riopara†a†maturaÁ„o†da†afinidade†dos†anticorpos.

Em† algumas† infecÁıes,† o† sistema† imunit·rio† n„o† consegue† eliminar† oparasito,† mas† reage† isolando† o† agente† com† cÈlulas† inflamatÛrias.† Naesquistossomose,†a†formaÁ„o†do†granuloma†È†um†exemplo†da†reaÁ„o†do†hos-pedeiro†contra†o†parasito.†A†maioria†dos†parasitos†desenvolve†mecanismos†deescape†do†sistema†imune†para†garantir†sua†sobrevivÍncia†e†alguns†comprometemtanto†as†respostas†mediadas†por†anticorpos†como†as†mediadas†por†cÈlulas.

A†medida†das†interaÁıes†entre†antÌgeno-anticorpo†com†o†propÛsito†dediagnÛstico†È†conhecida†como†imunossorologia.†As†tÈcnicas†imunossorolÛgicasfundamentam-se†na†natureza†da†interaÁ„o†antÌgeno-anticorpo†nas†quais†podemexpressar-se† em† duas† formas† distintas,† em† decorrÍncia† da† utilizaÁ„o† deimunorreagentes†livres†de†marcaÁ„o†ou†de†reagentes†marcados.†As†tÈcnicas†quen„o†empregam†marcadores†demonstram-se†por†fenÙmenos†visÌveis.†Portanto,ao†se†combinar†anticorpos†com†antÌgenos†sol˙veis,†os†complexos†resultantespodem†formar†precipitados†insol˙veis.†Se†os†antÌgenos†s„o†particulados†(bactÈ-rias,†protozo·rios,†hem·cias),†os†anticorpos†os†aglutinam.†Se†o†anticorpo†podeativar†a†via†cl·ssica†do†sistema†complemento†e†o†antÌgeno†se†encontra†em†umasuperfÌcie†celular,†o†resultado†pode†ser†a†citÛlise.†As†tÈcnicas†que†empregamimunorreagentes†marcados†caracterizam-se†pela†simples†combinaÁ„o†do†antÌgenocom†o†anticorpo,†necessitando†que†um†deles†esteja†marcado†convenientemente.

†| 121

O† imunorreagente† pode† ser† marcado† com† corantes† fluorescentes† ouquimioluminescentes,† radioisÛtopos,†enzimas,†ouro†ou†prata†coloidais,†entreoutros†marcadores.

Apesar†de†testes†sorolÛgicos†produzirem†muitos†resultados†verdadeiros,alguns†resultados†falsos†podem†ser†gerados,†sejam†eles†positivos†ou†negativose,†por†conseguinte,†È†comum†dizer†que†os†testes†sorolÛgicos†s„o†presuntivos,ou† seja,† de† valor† probabilÌstico.† Estes† testes,† obrigatoriamente,† devem† seravaliados†para†definir†par‚metros†importantes†quanto†‡s†suas†qualidades†fixas(sensibilidade,†especificidade†e†acur·cia),†uma†vez†que†estes†valores†independemda†prevalÍncia†da†infecÁ„o†estudada†na†populaÁ„o.

QuestıesQuestıesQuestıesQuestıesQuestıes

1)†Descreva†o†processo†de†maturaÁ„o†das†cÈlulas†T,†no†timo.

2)†Comente†sobre†a†import‚ncia†das†molÈculas†de†ades„o†na†resposta†imune.

3)†Defina†imunogenicidade†e†especificidade.

4)†Defina†adjuvante†e†sua†funÁ„o†na†resposta†imune.

5)†Descreva†as†principais†propriedades†das†cinco†classes†de†Imunoglobulinas.

6)†Como†vocÍ†prepararia†um†anticorpo†contra†IgG†humana?

7)†Descreva†o†processo†de†ativaÁ„o†da†via†cl·ssica†e†da†via†alternativa†docomplemento.

8)†Descreva†os†principais†mecanismos†de†atuaÁ„o†do†sistema†complemento†naeliminaÁ„o†de†patÛgenos.

9)† Descreva† o† processamento† e† apresentaÁ„o† de† um† antÌgeno† intracelularpresente†no†citoplasma†da†cÈlula.

Imunologia


10)†Descreva†o†processamento†e†apresentaÁ„o†de†um†antÌgeno,†oriundo†deuma†bactÈria†extracelular,†que†foi†ativamente†fagocitada†por†um†macrÛfago.

11)†Descreva†os†principais†mecanismos†de†atuaÁ„o†da†resposta†humoral.

12)†Descreva†os†mecanismos†de†aÁ„o†exercidos†pelas†cÈlulas†CD8†na†respostacelular.

13)†Descreva†os†principais†mecanismos†de†imunidade†inata†e†adaptativa†contravÌrus.

14)†Descreva†os†principais†mecanismos†de†imunidade†adaptativa†e†especÌficacontra†bactÈrias†extracelulares†e†bactÈrias†intracelulares.

15)†Como†os†helmintos†parasitas†do†lume†intestinal†s„o†expulsos†do†organis-mo?

16)†Sempre†que†encontramos†uma†reaÁ„o†imunolÛgica†positiva,†ela†determinaa†presenÁa†do†agente†etiolÛgico?†Justifique.

17)†O†que†È†convers„o†sorolÛgica?

18)†Explique†o†fenÙmeno†prozona†e†como†fazemos†sua†neutralizaÁ„o.

19)†O†que†causa†reaÁ„o†cruzada†em†provas†sorolÛgicas?†O†vocÍ†sugere†paraimpedir†esse†fenÙmeno?

20)†Quais†a†provas†sorolÛgicas†realizadas†em†banco†de†sangue†para†preven-Á„o†de†doenÁas†transmissÌveis?

21)†Quais†as†vantagens†e†desvantagens†do†uso†de†anticorpos†monoclonais†emprovas†sorolÛgicas?

22)†Como†se†processam†as†reaÁıes†de†aglutinaÁ„o†direta?†DÍ†um†exemplo†deteste†comumente†usado†para†fins†de†diagnÛsticos.

23)†Qual†o†fundamento†da†reaÁ„o†de†imunofluorescÍncia†indireta†(RIFI)?

24)†Fale†sobre†a†reaÁ„o†Imunoenzim·tica†(ELISA),†quanto†ao†seu†modo†deaÁ„o,†suas†vantagens†e†desvantagens.

†| 123

25)†Na† etapa† de† sensibilizaÁ„o† das† placas† pl·sticas† de†microdiluiÁ„o,† dareaÁ„o† imunoenzim·tica† ELISA,† utilizamos† tampıes† com†pH†elevado† (porvolta†de†9,6)†para†preparar†os†antÌgenos†proteicos.†Por†quÍ?

26)†Com†que†propÛsito†utilizamos†caseÌna†(proteÌna†do†leite)†no†desenvolvi-mento†do†ELISA?

27)†Fale†sobre†o†fundamento†do†teste†de†imunoeletrotransferÍncia†(Western-blotting).

28)†Conceitue:

a)†Sensibilidade;†b)†Especificidade

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Imunologia PRINCÍPIOS

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