FungosFungosMofos/bolores: deterioração alimentos e outros Mofos/bolores: deterioração alimentos e outros

materiaismateriais

Fungos do ambiente natural: importância na Fungos do ambiente natural: importância na degradação matéria orgânica (saprófitas)degradação matéria orgânica (saprófitas)

Fungos patogênicos: infecções superficiais (pele Fungos patogênicos: infecções superficiais (pele e mucosas) e sistêmicase mucosas) e sistêmicas

Fermentação: produção alimentos e Fermentação: produção alimentos e medicamentos (hormônios/antibióticos)medicamentos (hormônios/antibióticos)

FungosFungosAté 1969, os fungos eram considerados vegetais. Até 1969, os fungos eram considerados vegetais. Atualmente constituem o reino Atualmente constituem o reino FungiFungi, pois apresentam um conjunto , pois apresentam um conjunto

dedecaracterísticas próprias que permitem sua diferenciação das características próprias que permitem sua diferenciação das

plantas: plantas: não sintetizam clorofila, não tem celulose na parede celular.não sintetizam clorofila, não tem celulose na parede celular.

São eucariotos e heterotróficos, obtendo nutrientes e São eucariotos e heterotróficos, obtendo nutrientes e energia a partir da matéria orgânica:energia a partir da matéria orgânica:

inanimada (saprófitas) inanimada (saprófitas) proveniente de seres vivos (parasitas). proveniente de seres vivos (parasitas).

Podem ser pluricelulares ou unicelulares dependendo da Podem ser pluricelulares ou unicelulares dependendo da espécie e/ou condições de crescimento.espécie e/ou condições de crescimento.

As espécies saprófitas decompõem resíduos de animais As espécies saprófitas decompõem resíduos de animais e plantas, liberando compostos que auxiliam a e plantas, liberando compostos que auxiliam a fertilidade do solo.fertilidade do solo.

FungosFungosReprodução: sexuada e/ou assexuada, dependendo da espécie.

Habitat: Os fungos têm grande poder de adaptação às variações ambientais, são capazes de crescer em grandes concentrações de açúcar, em pHs de 2,0 a 9,0 e ampla faixa de temperatura (0ºC a 60ºC). Disseminados em ambientes naturais

FungosFungosOs fungos dividem-se em 2 grandes grupos:

1-Fungos filamentosos: também conhecidos como bolores, formam

HIFAS (conjunto de células), que agrupadas formam o corpo vegetativo ou MICÉLIO

e a porção reprodutiva (corpo de frutificação), onde se formam os ESPOROS.

FungosFungosParede celular constituída de hexoses e hexoaminas, que formam mananas, ducanas e galactanas (açúcares). Alguns fungos têm parede rica em quitina (N-acetil glicosamina), outros possuem complexos polissacarídios e proteínas, com predominância de cisteína.

FungosFungosCultivo: semelhante ao das bactérias heterotróficas

(pH mais ácido p/ tornar meio seletivo).Crescimento mais lento, principalmente dos fungos filamentosos (pluricelulares), que podem

levar 5 a 7 dias para crescer no meio de cultura

FungosFungosLeveduras: são fungos não filamentosos, que

permanecem na forma unicelular.Crescem mais rapidamente do que os fungos filamentososTem parede celular rígida e na coloração de Gram são vistos como G+ (não são classificados pelo Gram)

São amplamente distribuídos na natureza (grande número de espécies saprófitas e algumas parasitas- patogênicas).Reprodução assexuada por gemulação (maioria) ou por fissão binária (semelhante às bactérias).

LevedurasLeveduras

Fungos PatogênicosFungos PatogênicosPodem ser Filamentosos e/ou leveduriformes

Alguns fungos patogênicos são dimórficos, ou seja, crescem no ambiente na forma filamentosa (vida livre) e quando esporos deste tipo de fungo conseguem penetrar no organismo hospedeiro crescem na forma de levedura

Forma filamentosa- temperatura ambienteForma levedura – temperatura do hospedeiro 37ºC

Ex: Criptococcus neoformansParacoccidioides brasiliensis

Tipos de infecções FúngicasTipos de infecções FúngicasMicoses superficiais: resposta inflamatória mínima, Micoses superficiais: resposta inflamatória mínima,

fácil tratamento, consequências apenas estéticas. fácil tratamento, consequências apenas estéticas. Ex. tinea vesicolor (manchas brancas na pele)Ex. tinea vesicolor (manchas brancas na pele)

Micoses cutâneas: fungos dermatófitosMicoses cutâneas: fungos dermatófitosTratamento + difícilTratamento + difícilPodem ser agudas ou crônicasPodem ser agudas ou crônicas

Micoses subcutâneas: derme e tecido subcutâneoMicoses subcutâneas: derme e tecido subcutâneoProvocadas por espécies ambientais que penetram via Provocadas por espécies ambientais que penetram via

trauma. Semelhantes à infecções bacterianastrauma. Semelhantes à infecções bacterianasTratamento difícil, excisão cirúrgica do foco infeccioso.Tratamento difícil, excisão cirúrgica do foco infeccioso.

Tipos de infecções FúngicasTipos de infecções FúngicasMicoses sistêmicas: Micoses sistêmicas: a) patógenos primários, hospedeiro sadio, aspecto infecção a) patógenos primários, hospedeiro sadio, aspecto infecção

crônica , geralmente pulmonar (semelhante tuberculose), crônica , geralmente pulmonar (semelhante tuberculose), ex ex Histoplasma capsulatumHistoplasma capsulatum, cresce em fezes de morcego , cresce em fezes de morcego e aves, contaminação via inalação de esporose aves, contaminação via inalação de esporos

b) Fungos oportunistas, presentes no ambiente e/ou no b) Fungos oportunistas, presentes no ambiente e/ou no organismo e provoca infecção no hospedeiro debilitadoorganismo e provoca infecção no hospedeiro debilitado

Ex: Ex: C. albicansC. albicans

Os principais fungos envolvidos em infecções em humanos Os principais fungos envolvidos em infecções em humanos são de vida livre e a aquisição geralmente por contatos são de vida livre e a aquisição geralmente por contatos acidentais como inalação de esporos e traumas na pele.acidentais como inalação de esporos e traumas na pele.

Infecções fúngicasInfecções fúngicasNormalmente leves e autolimitadas mas dependem da Normalmente leves e autolimitadas mas dependem da

imunidade inata elevadaimunidade inata elevadaFatores de resistência do hospedeiro:Fatores de resistência do hospedeiro: Ressecamento e renovação epitélioRessecamento e renovação epitélio pH relativamente baixopH relativamente baixo Presença de ácidos graxosPresença de ácidos graxos Flora bacteriana competidoraFlora bacteriana competidora

Alterações na flora normal (ex: uso de antibióticos), Alterações na flora normal (ex: uso de antibióticos), permitem proliferação de fungos oportunistas.permitem proliferação de fungos oportunistas.

Traumas na pele e mucosas facilitam penetraçãoTraumas na pele e mucosas facilitam penetraçãoComo toda infecção, a evolução é determinada pela Como toda infecção, a evolução é determinada pela

virulência do agente, tamanho do inóculo e defesas virulência do agente, tamanho do inóculo e defesas hospedeirohospedeiro

Infecções FúngicasInfecções FúngicasNos tecidos do hospedeiro, os fungos são detidos por Nos tecidos do hospedeiro, os fungos são detidos por

mecanismos inespecíficos (ex: proteínas presentes mecanismos inespecíficos (ex: proteínas presentes no soro humano fixadoras de ferro, reduzem no soro humano fixadoras de ferro, reduzem disponibilidade deste nutriente p/ microrganismo)disponibilidade deste nutriente p/ microrganismo)

Reação inflamatória inespecífica importante p/ Reação inflamatória inespecífica importante p/ eliminação agente. Algumas espécies podem eliminação agente. Algumas espécies podem proliferar no interior de macrófagos (ex. proliferar no interior de macrófagos (ex. H. H. capsulatumcapsulatum).).

Indivíduos susceptíveis: portadores de AIDS, Indivíduos susceptíveis: portadores de AIDS, neoplasias, transplantados, grandes queimados, neoplasias, transplantados, grandes queimados, receptores de terapia bacteriana de amplo espectro, receptores de terapia bacteriana de amplo espectro, alterações imunológicas que facilitam infecção: alterações imunológicas que facilitam infecção: redução nº de neutrófilos ativos. redução nº de neutrófilos ativos.

Agentes: Agentes: C. albicansC. albicans (rins, pulmões, SNC) (rins, pulmões, SNC)Aspergillus fumigatusAspergillus fumigatus (pulmões) em imunossuprimidos (pulmões) em imunossuprimidos

Micoses sistêmicas Micoses sistêmicas primáriasprimárias

Histoplasmose/H. capsulatum/dimórfico/ pulmonarHistoplasmose/H. capsulatum/dimórfico/ pulmonar

Blastomicose/ Blastomyces dermatitidis/ Blastomicose/ Blastomyces dermatitidis/ dimorfico/pulmonar,osseo e cutâneo simultane/tedimorfico/pulmonar,osseo e cutâneo simultane/te

Coccidioidomicose/Coccidioidomicose/Coccidioides immintisCoccidioides immintis//dimórfico/ 60% assintomáticos e dimórfico/ 60% assintomáticos e

autorresolutivas/40% graves – meningitesautorresolutivas/40% graves – meningites

Paracocidioidomicose/ Paracocidioidomicose/ Paracoccidioides brasiliensisParacoccidioides brasiliensis/ / dimorfico/pulmonar/predominante sexo masculino dimorfico/pulmonar/predominante sexo masculino e ocupacional. Restrita a América central e do Sule ocupacional. Restrita a América central e do Sul

Micoses subcutâneasMicoses subcutâneasClimas tropicaisClimas tropicais

Risco ocupacional (contato com solo e vegetais em Risco ocupacional (contato com solo e vegetais em decomposição), penetração do fungo através de decomposição), penetração do fungo através de trauma peletrauma pele

Tratamento cirúrgicoTratamento cirúrgico

Micoses CutâneasMicoses CutâneasMais frequente em crianças, desaparecem Mais frequente em crianças, desaparecem

espontaneamente na puberdade.espontaneamente na puberdade.

Dermatófitos, presentes no solo, pelo/pele de Dermatófitos, presentes no solo, pelo/pele de animais e humanos.animais e humanos.

Tineas – cabeça/cabeloTineas – cabeça/cabelopé – (pé de atleta)pé – (pé de atleta)virilhavirilhaunhasunhas

Diagnóstico infecções Diagnóstico infecções fúngicasfúngicas

Microscopia: biópsia do tecido lesadoMicroscopia: biópsia do tecido lesadoou microscopia do fungo – microcultivo p/ fungos ou microscopia do fungo – microcultivo p/ fungos

filamentosos, para identificação por aspectos filamentosos, para identificação por aspectos morfológicos.morfológicos.

Cultura: usada + frequentemente no caso de Cultura: usada + frequentemente no caso de oportunistas (ex: Candidas), nem sempre útil, oportunistas (ex: Candidas), nem sempre útil, dependo do local infectado. dependo do local infectado.

Ex, isolar leveduras em hemocultura indica infecção Ex, isolar leveduras em hemocultura indica infecção grave, isolar em secreção vaginal, só tem significado grave, isolar em secreção vaginal, só tem significado se corresponder a sintomas típicos (fazem parte da se corresponder a sintomas típicos (fazem parte da flora vaginal)flora vaginal)

Boa para patógenos primários como Boa para patógenos primários como H. capsulatumH. capsulatumCrescimento lento – diagnóstico demorado Crescimento lento – diagnóstico demorado Sorologia:Sorologia: p/ micoses profundas p/ micoses profundas

Fungos – identificação Fungos – identificação espécies clínicasespécies clínicas

Fungos filamentosos:Baseada na morfologia do micélio vegetativo e corpo de frutificação (bolores).

Além dos aspectos macroscópicos da colônia crescida em placa de cultura contendo meios específicos para fungos, para observação dos aspectos microscópicos é necessário o cultivo em lâmina de microscopia para observação de estruturas – microcultivo a identificação das espécies é mais complicada (micologistas treinados)

Microcultivo FungosMicrocultivo Fungos

Semear o fungo em um pequeno bloco de ágar Semear o fungo em um pequeno bloco de ágar colocado sobre lâmina em uma câmara de cultivo colocado sobre lâmina em uma câmara de cultivo (placa de petri forrada com papel úmido e (placa de petri forrada com papel úmido e ambiente estéril)ambiente estéril)

Cultivar por 7 dias, corar e montar lâmina p/ Cultivar por 7 dias, corar e montar lâmina p/ observação.observação.

Permite observar estruturas intactas. Permite observar estruturas intactas.

Análise morfológicaAnálise morfológica

Cultivo em lâminaCultivo em lâmina

Fonte: Manual da Anvisa, 2005- Módulo 7

Fungos – identificação Fungos – identificação espécies clínicasespécies clínicas

Leveduras - CLASSIFICAÇÃO TAXONÔMICAÉ baseada no metabolismo de açúcares (denominada

zimologia ou zimograma) e aspectos morfológicos das células (microcultivo, à fresco e coradas)

As amostras clínicas dos s fungos Dimóficos, (espécies que dependendo da temperatura apresentam-se na forma de levedura ou na forma filamentosa), são cultivados a 37ºC e identificados como as leveduras

25ºC – estão na forma filamentosa

Diagnóstico LaboratorialDiagnóstico Laboratorial

Diagnóstico laboratorialDiagnóstico laboratorial• Exame direto: levedura ou fungo filamentoso ?Exame direto: levedura ou fungo filamentoso ?• Cultura: isolamento e identificaçãoCultura: isolamento e identificação

Condições Condições adequadasadequadas de incubação de incubação• Meio de cultivo Meio de cultivo • Temperatura Temperatura • TempoTempo

Diagnóstico LaboratorialDiagnóstico Laboratorial

Meios de cultivo mais utilizados em micologiaMeios de cultivo mais utilizados em micologia Agar Sabouraud com cloranfenicol (leveduras e Agar Sabouraud com cloranfenicol (leveduras e

fungos filamentosos)fungos filamentosos) Agar PDA (batata-dextrose) (fungos filamentosos)Agar PDA (batata-dextrose) (fungos filamentosos) Agar Mycobiotic=Mycosel= agar seletivo para Agar Mycobiotic=Mycosel= agar seletivo para

fungos patogênicos fungos patogênicos (uso restrito=inibe vários (uso restrito=inibe vários fungos sensíveis à cicloheximida, inclusive fungos sensíveis à cicloheximida, inclusive leveduras) leveduras)

Exame direto da amostraExame direto da amostra ““a fresco” entre lâmina e lamínulaa fresco” entre lâmina e lamínula após clarificação com KOH (10 a 20%)- filamentososapós clarificação com KOH (10 a 20%)- filamentosos com tinta da China (nanquim)com tinta da China (nanquim) coloração: . esfregaços (Gram, Giemsa e outras)coloração: . esfregaços (Gram, Giemsa e outras). cortes histológicos (. cortes histológicos (Mucicarmin de Mayer, Gomori-Grocott, H.E.Mucicarmin de Mayer, Gomori-Grocott, H.E.))Aspectos microscópicosAspectos microscópicos Leveduras Leveduras comcom filamentação (hifas) filamentação (hifas)

• abundante: abundante: Candida Candida spp.spp.• escassa: escassa: Candida Candida spp e outros de gêneros (p.ex. hifas spp e outros de gêneros (p.ex. hifas

curtas,curvas=curtas,curvas=MalasseziaMalassezia spp) spp) Leveduras Leveduras semsem filamentação e filamentação e sem cápsula: sem cápsula: Candida Candida spp spp

• capsuladas: capsuladas: Cryptococcus neoformansCryptococcus neoformans

Exame direto - LevedurasExame direto - Leveduras

Identificação LaboratorialIdentificação Laboratorial

Coloração de GRAMColoração de GRAM

Coloração de Gomori-GrocottColoração de Gomori-Grocott

Fonte: Laboratório de Micologia – IMT – LIM – HC/FMUSP

Identificação Identificação LaboratorialLaboratorial

Pureza das colôniasPureza das colônias• Detecção por exame diretoDetecção por exame direto• Sub-cultivoSub-cultivo• Técnica de esgotamentoTécnica de esgotamento• Meios seletivosMeios seletivos

Cloranfenicol: inibir bactériasCloranfenicol: inibir bactérias Cicloheximida: inibir fungos Cicloheximida: inibir fungos anemófilos (alergias)anemófilos (alergias)

Alternativa: meios Alternativa: meios cromogênicoscromogênicos

CHROMagar CHROMagar CandidaCandidaSugere espécie conformeSugere espécie conformecor da colônia:cor da colônia:Verde = Verde = C. albicansC. albicansAzul = Azul = C. tropicalisC. tropicalisRosa = Rosa = C. kruseiC. kruseiBranco = outras espéciesBranco = outras espécies e outros gênerose outros gêneros

Métodos clássicos de Métodos clássicos de identificação de levedurasidentificação de leveduras

Análise morfológica Análise morfológica • presença de cápsulapresença de cápsula• produção de tubo germinativo, em geral produção de tubo germinativo, em geral

leitura às 2hleitura às 2h• cultivo em lâmina (micromorfologia, cultivo em lâmina (micromorfologia,

filamentação e presença de filamentação e presença de clamidosporos- estruturas de resistência)clamidosporos- estruturas de resistência)

Tubo germinativoTubo germinativoIdentificação presuntiva e rápida de Identificação presuntiva e rápida de Candida Candida

albicansalbicansDescrito em 1960Descrito em 1960 Capacidade de formar filamentos na presença de Capacidade de formar filamentos na presença de

soro (1-3 h)soro (1-3 h)• Humano, fetal bovino ou cavaloHumano, fetal bovino ou cavalo

Técnica simplesTécnica simples94-97% de positividade para 94-97% de positividade para C. albicansC. albicans

Sidrim et al., 1999

Fonte: Manual da ANVISA, 2005-Módulo 7

Análise morfológicaAnálise morfológica Produção de tubo germinativoProdução de tubo germinativo

1 -1 - ausência de tubo germinativoausência de tubo germinativo 2 - presença de tubo germinativo2 - presença de tubo germinativo

11 22

Produção de tubo Produção de tubo germinativogerminativo

Cultivo em lâminaCultivo em lâmina

Espécies de

Candida spp

cápsulacápsula

Cultura positiva

Exame direto

Bactéria Levedura

Cultura Pura

Sim Não

Obter Colônia Pura por isolamento

Cápsula

+

Macromorfologia

Colônia bege: Criptococcus spColônia salmão/laranja:Rhodothorula sp

-

Tubo Germinativo

- +

C. albicans

Provas Bioquímicas e Cultivo em Lâmina

Fluxograma para Fluxograma para Identificação de Identificação de

Leveduras de Leveduras de Importância Importância

MédicaMédica

TratamentoTratamentoNem sempre necessário:Nem sempre necessário:Micoses superficiais são autolimitadasMicoses superficiais são autolimitadas

Agentes antifúgicos: geralmente tóxicos, pois não Agentes antifúgicos: geralmente tóxicos, pois não são totalmente seletivos (fungos são eucariotos) são totalmente seletivos (fungos são eucariotos) e tem valor terapêutico limitadoe tem valor terapêutico limitado

Os melhores antifungicos são os que afetam a Os melhores antifungicos são os que afetam a membrana celular do fungo (diferente da célula membrana celular do fungo (diferente da célula humana) e/ou interferem com metabolismo humana) e/ou interferem com metabolismo celular do fungo.celular do fungo.