Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

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UFRRJ INSTITUTO DE VETERINÁRIA CURSO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA PATOLOGIA E CIÊNCIAS CLÍNICAS DISSERTAÇÃO Avaliação Anatomopatológica de Rins, Fígado e Baço de Camundongos Submetidos ao Reparo de Ferida Cirúrgica em Parede Abdominal com Fragmentos de Pericárdio Bovino Conservado em Glicerina e Glutaraldeído Caroline Rodrigues Pereira Martins 2009

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UFRRJ

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA

VETERINAacuteRIA

PATOLOGIA E CIEcircNCIAS CLIacuteNICAS

DISSERTACcedilAtildeO

Avaliaccedilatildeo Anatomopatoloacutegica de Rins Fiacutegado e

Baccedilo de Camundongos Submetidos ao Reparo de

Ferida Ciruacutergica em Parede Abdominal com

Fragmentos de Pericaacuterdio Bovino Conservado em

Glicerina e Glutaraldeiacutedo

Caroline Rodrigues Pereira Martins

2009

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA VETERINAacuteRIA

PATOLOGIA E CIEcircNCIAS CLIacuteNICAS

AVALIACcedilAtildeO ANATOMOPATOLOacuteGICA DE RIM FIacuteGADO E

BACcedilO DE CAMUNDONGOS SUBMETIDOS AO REPARO DE

FERIDAS CIRUacuteRGICAS EM PAREDE ABDOMINAL COM

FRAGMENTOS DE PERICAacuteRDIO BOVINO CONSERVADO EM

GLICERINA E GLUTARALDEIacuteDO

CAROLINE RODRIGUES PEREIRA MARTINS

Sob a Orientaccedilatildeo da Professora

Marilene de Farias Brito Queiroz

e Co-orientaccedilatildeo da Professora

Marta Fernanda Albuquerque da Silva

Dissertaccedilatildeo submetida como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Medicina Veterinaacuteria no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Veterinaacuteria Aacuterea de Concentraccedilatildeo em Patologia e Ciecircncias Cliacutenicas

Seropeacutedica RJ

Outubro de 2009

61607 M379a

T

Martins Caroline Rodrigues Pereira

1982-

Avaliaccedilatildeo anatomopatoloacutegica de

rins fiacutegado baccedilo de camundongos

submetidos ao reparo de parede

abdominal com pericaacuterdio bovino

conservado em glicerina e

glutaraldeiacutedo Caroline Rodrigues

Pereira Martins ndash 2009

45 f il

Orientador Marilene de Farias

Brito Queiroz

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) ndash

Universidade Federal Rural do Rio

de Janeiro Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo

em Medicina Veterinaacuteria

Bibliografia f 38-45

1 Anatomia patoloacutegica - Teses

2 Materiais biomeacutedicos ndash Teses 3

Implantes artificiais - Teses I

Queiroz Marilene de Farias Brito

1960- II Universidade Federal

Rural do Rio de Janeiro Curso de

Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina

Veterinaacuteria III Tiacutetulo

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA VETERINAacuteRIA

CAROLINE RODRIGUES PEREIRA MARTINS

Dissertaccedilatildeo submetida como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em

Ciecircncias no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Veterinaacuteria Aacuterea de Concentraccedilatildeo

em Patologia e Ciecircncias Cliacutenicas

DISSERTACcedilAtildeO APROVADA EM 2009

_____________________________________________

Marilene de Farias Brito MV Dr UFRRJ

_____________________________________________

Alan Kardec da Silveira MV Dr UBM

____________________________________________

Elan Cardozo Paes de Almeida MV Dr UFF

AGRADECIMENTOS

A Deus por toda forccedila serenidade e oportunidades consedidas ao longo desses 2 anos pela minha famiacutelia e amigos que satildeo essenciais na minha jornada Agrave minha amada matildee Maria Leida Rodrigues Pereira que sempre me incentivou em todas as decisotildees Obrigada pelo amor apoio carinho cuidado e todos os ensinamentos ao longo da minha vida Agrave minha querida avoacute Lindinalva Rodrigues Pereira e tias maternas Ceacutelia Auxiliadora e Faacutetima por todo afeto confianccedila e dedicaccedilatildeo oferecidos Agrave minha irmatilde Amanda Rodrigues Pereira Martins pelo incentivo constante Ao meu amado noivo e melhor amigo Felipe Matias Nunes pelo amor atenccedilatildeo apoio carinho incentivo cuidado preocupaccedilatildeo paciecircncia e confianccedila ao longo de todos estes anos Agrave Professora Marilene de Farias Brito minha orientadora e patologista por todo o apoio e ensinamentos prestados na execuccedilatildeo deste trabalho Obrigada pela confianccedila oportunidade paciecircncia e pela dedicaccedilatildeo Sempre serei muito grata Agrave Professora Marta Fernanda Albuquerque da Silva profissional que me incentivou a vivenciar a Cirurgia Veterinaacuteria Obrigada por ter me recebido como sua estagiaacuteria pelo conhecimento e pela convivecircncia oferecidos neste periacuteodo Agradeccedilo a dedicaccedilatildeo e a amizade Agrave Professora Regina Ramadinha e Rosana Botelho pelos ensinamentos pela paciecircncia pelo apoio e amizade durante a minha trajetoacuteria Agrave Professora Ticiana Franccedila e ao Professor Andreacute Luiz pela dedicaccedilatildeo e ajuda oferecida na qualificaccedilatildeo do mestrado Ao Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Parasitologia Animal de nossa Universidade pelo fornecimento dos camundongos utilizados neste experimento Agrave amiga Claudia Borges por todo apoio e solidariedade na execuccedilatildeo de nossas tarefas experimentais Agrave amiga e Residente do Laboratoacuterio de Anatomia Patoloacutegica Juliana da Silva Prado pela dedicaccedilatildeo incondicional esforccedilo e apoio teacutecnico na confecccedilatildeo do material analisado Agrave amiga Vivian de Assunccedilatildeo Nogueira pela sua amizade desde a graduaccedilatildeo pelo apoio teacutecnico e dedicaccedilatildeo

Agrave amiga Sylvia Azevedo pelos ensinamentos pela amizade e apoio oferecidos desde a graduaccedilatildeo Agraves minhas amigas de graduaccedilatildeo Marina Lahora Martins e Tatiana da Paz Ribeiro que sempre estiveram presentes Aos amigos de turma de mestrado Priscila Cavalcanti Camila Pedreira Anselmo Ramos e Diego Medeiros por me acompanharem nesta caminhada Aos amigos de profissatildeo Paulo Diniz Carla Anesi e Ignez Neves pelo apoio e compreensatildeo Por fim agradeccedilo a todos que contribuiacuteram direta ou indiretamente para a realizaccedilatildeo deste trabalho

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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resecciones pulmonares no antoacutemicas em perros Revista de Investigacion Clinica v 54 n

4 p 334-341 Ciudad del Mexico 2002

2002

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA VETERINAacuteRIA

PATOLOGIA E CIEcircNCIAS CLIacuteNICAS

AVALIACcedilAtildeO ANATOMOPATOLOacuteGICA DE RIM FIacuteGADO E

BACcedilO DE CAMUNDONGOS SUBMETIDOS AO REPARO DE

FERIDAS CIRUacuteRGICAS EM PAREDE ABDOMINAL COM

FRAGMENTOS DE PERICAacuteRDIO BOVINO CONSERVADO EM

GLICERINA E GLUTARALDEIacuteDO

CAROLINE RODRIGUES PEREIRA MARTINS

Sob a Orientaccedilatildeo da Professora

Marilene de Farias Brito Queiroz

e Co-orientaccedilatildeo da Professora

Marta Fernanda Albuquerque da Silva

Dissertaccedilatildeo submetida como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Medicina Veterinaacuteria no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Veterinaacuteria Aacuterea de Concentraccedilatildeo em Patologia e Ciecircncias Cliacutenicas

Seropeacutedica RJ

Outubro de 2009

61607 M379a

T

Martins Caroline Rodrigues Pereira

1982-

Avaliaccedilatildeo anatomopatoloacutegica de

rins fiacutegado baccedilo de camundongos

submetidos ao reparo de parede

abdominal com pericaacuterdio bovino

conservado em glicerina e

glutaraldeiacutedo Caroline Rodrigues

Pereira Martins ndash 2009

45 f il

Orientador Marilene de Farias

Brito Queiroz

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) ndash

Universidade Federal Rural do Rio

de Janeiro Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo

em Medicina Veterinaacuteria

Bibliografia f 38-45

1 Anatomia patoloacutegica - Teses

2 Materiais biomeacutedicos ndash Teses 3

Implantes artificiais - Teses I

Queiroz Marilene de Farias Brito

1960- II Universidade Federal

Rural do Rio de Janeiro Curso de

Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina

Veterinaacuteria III Tiacutetulo

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA VETERINAacuteRIA

CAROLINE RODRIGUES PEREIRA MARTINS

Dissertaccedilatildeo submetida como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em

Ciecircncias no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Veterinaacuteria Aacuterea de Concentraccedilatildeo

em Patologia e Ciecircncias Cliacutenicas

DISSERTACcedilAtildeO APROVADA EM 2009

_____________________________________________

Marilene de Farias Brito MV Dr UFRRJ

_____________________________________________

Alan Kardec da Silveira MV Dr UBM

____________________________________________

Elan Cardozo Paes de Almeida MV Dr UFF

AGRADECIMENTOS

A Deus por toda forccedila serenidade e oportunidades consedidas ao longo desses 2 anos pela minha famiacutelia e amigos que satildeo essenciais na minha jornada Agrave minha amada matildee Maria Leida Rodrigues Pereira que sempre me incentivou em todas as decisotildees Obrigada pelo amor apoio carinho cuidado e todos os ensinamentos ao longo da minha vida Agrave minha querida avoacute Lindinalva Rodrigues Pereira e tias maternas Ceacutelia Auxiliadora e Faacutetima por todo afeto confianccedila e dedicaccedilatildeo oferecidos Agrave minha irmatilde Amanda Rodrigues Pereira Martins pelo incentivo constante Ao meu amado noivo e melhor amigo Felipe Matias Nunes pelo amor atenccedilatildeo apoio carinho incentivo cuidado preocupaccedilatildeo paciecircncia e confianccedila ao longo de todos estes anos Agrave Professora Marilene de Farias Brito minha orientadora e patologista por todo o apoio e ensinamentos prestados na execuccedilatildeo deste trabalho Obrigada pela confianccedila oportunidade paciecircncia e pela dedicaccedilatildeo Sempre serei muito grata Agrave Professora Marta Fernanda Albuquerque da Silva profissional que me incentivou a vivenciar a Cirurgia Veterinaacuteria Obrigada por ter me recebido como sua estagiaacuteria pelo conhecimento e pela convivecircncia oferecidos neste periacuteodo Agradeccedilo a dedicaccedilatildeo e a amizade Agrave Professora Regina Ramadinha e Rosana Botelho pelos ensinamentos pela paciecircncia pelo apoio e amizade durante a minha trajetoacuteria Agrave Professora Ticiana Franccedila e ao Professor Andreacute Luiz pela dedicaccedilatildeo e ajuda oferecida na qualificaccedilatildeo do mestrado Ao Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Parasitologia Animal de nossa Universidade pelo fornecimento dos camundongos utilizados neste experimento Agrave amiga Claudia Borges por todo apoio e solidariedade na execuccedilatildeo de nossas tarefas experimentais Agrave amiga e Residente do Laboratoacuterio de Anatomia Patoloacutegica Juliana da Silva Prado pela dedicaccedilatildeo incondicional esforccedilo e apoio teacutecnico na confecccedilatildeo do material analisado Agrave amiga Vivian de Assunccedilatildeo Nogueira pela sua amizade desde a graduaccedilatildeo pelo apoio teacutecnico e dedicaccedilatildeo

Agrave amiga Sylvia Azevedo pelos ensinamentos pela amizade e apoio oferecidos desde a graduaccedilatildeo Agraves minhas amigas de graduaccedilatildeo Marina Lahora Martins e Tatiana da Paz Ribeiro que sempre estiveram presentes Aos amigos de turma de mestrado Priscila Cavalcanti Camila Pedreira Anselmo Ramos e Diego Medeiros por me acompanharem nesta caminhada Aos amigos de profissatildeo Paulo Diniz Carla Anesi e Ignez Neves pelo apoio e compreensatildeo Por fim agradeccedilo a todos que contribuiacuteram direta ou indiretamente para a realizaccedilatildeo deste trabalho

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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61607 M379a

T

Martins Caroline Rodrigues Pereira

1982-

Avaliaccedilatildeo anatomopatoloacutegica de

rins fiacutegado baccedilo de camundongos

submetidos ao reparo de parede

abdominal com pericaacuterdio bovino

conservado em glicerina e

glutaraldeiacutedo Caroline Rodrigues

Pereira Martins ndash 2009

45 f il

Orientador Marilene de Farias

Brito Queiroz

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) ndash

Universidade Federal Rural do Rio

de Janeiro Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo

em Medicina Veterinaacuteria

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Implantes artificiais - Teses I

Queiroz Marilene de Farias Brito

1960- II Universidade Federal

Rural do Rio de Janeiro Curso de

Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina

Veterinaacuteria III Tiacutetulo

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA VETERINAacuteRIA

CAROLINE RODRIGUES PEREIRA MARTINS

Dissertaccedilatildeo submetida como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em

Ciecircncias no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Veterinaacuteria Aacuterea de Concentraccedilatildeo

em Patologia e Ciecircncias Cliacutenicas

DISSERTACcedilAtildeO APROVADA EM 2009

_____________________________________________

Marilene de Farias Brito MV Dr UFRRJ

_____________________________________________

Alan Kardec da Silveira MV Dr UBM

____________________________________________

Elan Cardozo Paes de Almeida MV Dr UFF

AGRADECIMENTOS

A Deus por toda forccedila serenidade e oportunidades consedidas ao longo desses 2 anos pela minha famiacutelia e amigos que satildeo essenciais na minha jornada Agrave minha amada matildee Maria Leida Rodrigues Pereira que sempre me incentivou em todas as decisotildees Obrigada pelo amor apoio carinho cuidado e todos os ensinamentos ao longo da minha vida Agrave minha querida avoacute Lindinalva Rodrigues Pereira e tias maternas Ceacutelia Auxiliadora e Faacutetima por todo afeto confianccedila e dedicaccedilatildeo oferecidos Agrave minha irmatilde Amanda Rodrigues Pereira Martins pelo incentivo constante Ao meu amado noivo e melhor amigo Felipe Matias Nunes pelo amor atenccedilatildeo apoio carinho incentivo cuidado preocupaccedilatildeo paciecircncia e confianccedila ao longo de todos estes anos Agrave Professora Marilene de Farias Brito minha orientadora e patologista por todo o apoio e ensinamentos prestados na execuccedilatildeo deste trabalho Obrigada pela confianccedila oportunidade paciecircncia e pela dedicaccedilatildeo Sempre serei muito grata Agrave Professora Marta Fernanda Albuquerque da Silva profissional que me incentivou a vivenciar a Cirurgia Veterinaacuteria Obrigada por ter me recebido como sua estagiaacuteria pelo conhecimento e pela convivecircncia oferecidos neste periacuteodo Agradeccedilo a dedicaccedilatildeo e a amizade Agrave Professora Regina Ramadinha e Rosana Botelho pelos ensinamentos pela paciecircncia pelo apoio e amizade durante a minha trajetoacuteria Agrave Professora Ticiana Franccedila e ao Professor Andreacute Luiz pela dedicaccedilatildeo e ajuda oferecida na qualificaccedilatildeo do mestrado Ao Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Parasitologia Animal de nossa Universidade pelo fornecimento dos camundongos utilizados neste experimento Agrave amiga Claudia Borges por todo apoio e solidariedade na execuccedilatildeo de nossas tarefas experimentais Agrave amiga e Residente do Laboratoacuterio de Anatomia Patoloacutegica Juliana da Silva Prado pela dedicaccedilatildeo incondicional esforccedilo e apoio teacutecnico na confecccedilatildeo do material analisado Agrave amiga Vivian de Assunccedilatildeo Nogueira pela sua amizade desde a graduaccedilatildeo pelo apoio teacutecnico e dedicaccedilatildeo

Agrave amiga Sylvia Azevedo pelos ensinamentos pela amizade e apoio oferecidos desde a graduaccedilatildeo Agraves minhas amigas de graduaccedilatildeo Marina Lahora Martins e Tatiana da Paz Ribeiro que sempre estiveram presentes Aos amigos de turma de mestrado Priscila Cavalcanti Camila Pedreira Anselmo Ramos e Diego Medeiros por me acompanharem nesta caminhada Aos amigos de profissatildeo Paulo Diniz Carla Anesi e Ignez Neves pelo apoio e compreensatildeo Por fim agradeccedilo a todos que contribuiacuteram direta ou indiretamente para a realizaccedilatildeo deste trabalho

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINAacuteRIA

CURSO DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM MEDICINA VETERINAacuteRIA

CAROLINE RODRIGUES PEREIRA MARTINS

Dissertaccedilatildeo submetida como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em

Ciecircncias no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Veterinaacuteria Aacuterea de Concentraccedilatildeo

em Patologia e Ciecircncias Cliacutenicas

DISSERTACcedilAtildeO APROVADA EM 2009

_____________________________________________

Marilene de Farias Brito MV Dr UFRRJ

_____________________________________________

Alan Kardec da Silveira MV Dr UBM

____________________________________________

Elan Cardozo Paes de Almeida MV Dr UFF

AGRADECIMENTOS

A Deus por toda forccedila serenidade e oportunidades consedidas ao longo desses 2 anos pela minha famiacutelia e amigos que satildeo essenciais na minha jornada Agrave minha amada matildee Maria Leida Rodrigues Pereira que sempre me incentivou em todas as decisotildees Obrigada pelo amor apoio carinho cuidado e todos os ensinamentos ao longo da minha vida Agrave minha querida avoacute Lindinalva Rodrigues Pereira e tias maternas Ceacutelia Auxiliadora e Faacutetima por todo afeto confianccedila e dedicaccedilatildeo oferecidos Agrave minha irmatilde Amanda Rodrigues Pereira Martins pelo incentivo constante Ao meu amado noivo e melhor amigo Felipe Matias Nunes pelo amor atenccedilatildeo apoio carinho incentivo cuidado preocupaccedilatildeo paciecircncia e confianccedila ao longo de todos estes anos Agrave Professora Marilene de Farias Brito minha orientadora e patologista por todo o apoio e ensinamentos prestados na execuccedilatildeo deste trabalho Obrigada pela confianccedila oportunidade paciecircncia e pela dedicaccedilatildeo Sempre serei muito grata Agrave Professora Marta Fernanda Albuquerque da Silva profissional que me incentivou a vivenciar a Cirurgia Veterinaacuteria Obrigada por ter me recebido como sua estagiaacuteria pelo conhecimento e pela convivecircncia oferecidos neste periacuteodo Agradeccedilo a dedicaccedilatildeo e a amizade Agrave Professora Regina Ramadinha e Rosana Botelho pelos ensinamentos pela paciecircncia pelo apoio e amizade durante a minha trajetoacuteria Agrave Professora Ticiana Franccedila e ao Professor Andreacute Luiz pela dedicaccedilatildeo e ajuda oferecida na qualificaccedilatildeo do mestrado Ao Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Parasitologia Animal de nossa Universidade pelo fornecimento dos camundongos utilizados neste experimento Agrave amiga Claudia Borges por todo apoio e solidariedade na execuccedilatildeo de nossas tarefas experimentais Agrave amiga e Residente do Laboratoacuterio de Anatomia Patoloacutegica Juliana da Silva Prado pela dedicaccedilatildeo incondicional esforccedilo e apoio teacutecnico na confecccedilatildeo do material analisado Agrave amiga Vivian de Assunccedilatildeo Nogueira pela sua amizade desde a graduaccedilatildeo pelo apoio teacutecnico e dedicaccedilatildeo

Agrave amiga Sylvia Azevedo pelos ensinamentos pela amizade e apoio oferecidos desde a graduaccedilatildeo Agraves minhas amigas de graduaccedilatildeo Marina Lahora Martins e Tatiana da Paz Ribeiro que sempre estiveram presentes Aos amigos de turma de mestrado Priscila Cavalcanti Camila Pedreira Anselmo Ramos e Diego Medeiros por me acompanharem nesta caminhada Aos amigos de profissatildeo Paulo Diniz Carla Anesi e Ignez Neves pelo apoio e compreensatildeo Por fim agradeccedilo a todos que contribuiacuteram direta ou indiretamente para a realizaccedilatildeo deste trabalho

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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2002

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AGRADECIMENTOS

A Deus por toda forccedila serenidade e oportunidades consedidas ao longo desses 2 anos pela minha famiacutelia e amigos que satildeo essenciais na minha jornada Agrave minha amada matildee Maria Leida Rodrigues Pereira que sempre me incentivou em todas as decisotildees Obrigada pelo amor apoio carinho cuidado e todos os ensinamentos ao longo da minha vida Agrave minha querida avoacute Lindinalva Rodrigues Pereira e tias maternas Ceacutelia Auxiliadora e Faacutetima por todo afeto confianccedila e dedicaccedilatildeo oferecidos Agrave minha irmatilde Amanda Rodrigues Pereira Martins pelo incentivo constante Ao meu amado noivo e melhor amigo Felipe Matias Nunes pelo amor atenccedilatildeo apoio carinho incentivo cuidado preocupaccedilatildeo paciecircncia e confianccedila ao longo de todos estes anos Agrave Professora Marilene de Farias Brito minha orientadora e patologista por todo o apoio e ensinamentos prestados na execuccedilatildeo deste trabalho Obrigada pela confianccedila oportunidade paciecircncia e pela dedicaccedilatildeo Sempre serei muito grata Agrave Professora Marta Fernanda Albuquerque da Silva profissional que me incentivou a vivenciar a Cirurgia Veterinaacuteria Obrigada por ter me recebido como sua estagiaacuteria pelo conhecimento e pela convivecircncia oferecidos neste periacuteodo Agradeccedilo a dedicaccedilatildeo e a amizade Agrave Professora Regina Ramadinha e Rosana Botelho pelos ensinamentos pela paciecircncia pelo apoio e amizade durante a minha trajetoacuteria Agrave Professora Ticiana Franccedila e ao Professor Andreacute Luiz pela dedicaccedilatildeo e ajuda oferecida na qualificaccedilatildeo do mestrado Ao Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Parasitologia Animal de nossa Universidade pelo fornecimento dos camundongos utilizados neste experimento Agrave amiga Claudia Borges por todo apoio e solidariedade na execuccedilatildeo de nossas tarefas experimentais Agrave amiga e Residente do Laboratoacuterio de Anatomia Patoloacutegica Juliana da Silva Prado pela dedicaccedilatildeo incondicional esforccedilo e apoio teacutecnico na confecccedilatildeo do material analisado Agrave amiga Vivian de Assunccedilatildeo Nogueira pela sua amizade desde a graduaccedilatildeo pelo apoio teacutecnico e dedicaccedilatildeo

Agrave amiga Sylvia Azevedo pelos ensinamentos pela amizade e apoio oferecidos desde a graduaccedilatildeo Agraves minhas amigas de graduaccedilatildeo Marina Lahora Martins e Tatiana da Paz Ribeiro que sempre estiveram presentes Aos amigos de turma de mestrado Priscila Cavalcanti Camila Pedreira Anselmo Ramos e Diego Medeiros por me acompanharem nesta caminhada Aos amigos de profissatildeo Paulo Diniz Carla Anesi e Ignez Neves pelo apoio e compreensatildeo Por fim agradeccedilo a todos que contribuiacuteram direta ou indiretamente para a realizaccedilatildeo deste trabalho

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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2002

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Agrave amiga Sylvia Azevedo pelos ensinamentos pela amizade e apoio oferecidos desde a graduaccedilatildeo Agraves minhas amigas de graduaccedilatildeo Marina Lahora Martins e Tatiana da Paz Ribeiro que sempre estiveram presentes Aos amigos de turma de mestrado Priscila Cavalcanti Camila Pedreira Anselmo Ramos e Diego Medeiros por me acompanharem nesta caminhada Aos amigos de profissatildeo Paulo Diniz Carla Anesi e Ignez Neves pelo apoio e compreensatildeo Por fim agradeccedilo a todos que contribuiacuteram direta ou indiretamente para a realizaccedilatildeo deste trabalho

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Page 7: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

RESUMO

Martins Caroline Rodrigues Pereira Avaliaccedilatildeo anatomopatologica de rins fiacutegado e

baccedilo de camundongos submetidos ao reparo de ferida ciruacutergica em parede

abdominal com fragmentos de pericaacuterdio bovino conservado com glicerina e

glutaraldeiacutedo 2009 45p Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Medicina Veterinaacuteria) Instituto de

Veterinaacuteria Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

O emprego de pericaacuterdio bovino como membrana bioloacutegica eacute bastante difundido em

teacutecnicas de reparos ciruacutergicos devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa

aplicabilidade A glicerina 98 eacute o agente quiacutemico mais utilizado como conservante de

tecidos bioloacutegicos em medicina veterinaacuteria poreacutem estudos comprovam sua ineficaacutecia na

eliminaccedilatildeo viral O glutaraldeiacutedo eacute um conservante de tecidos bioloacutegicos e suas

concentraccedilotildees mais difundidas satildeo de 05 e 0625 Entretanto a persistecircncia do

viacuterus raacutebico em amostras de pericaacuterdio de camundongos conservadas em glutaraldeiacutedo

0625 foi comprovada sendo provavelmente necessaacuterias concentraccedilotildees mais altas

para accedilatildeo virucida Sabendo-se da sua capacidade toacutexica este estudo teve como

objetivo avaliar macro e microscopicamente rins fiacutegado e baccedilo de 65 camundongos

dos quais 60 foram submetidos a implante de pericaacuterdio bovino conservado em

glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 e 15 e 5 camundongos natildeo implantados

que serviram como controles Os animais implantados os mesmos utilizados em outra

pesquisa para avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas reacionais locais nas paredes abdominais aos

implantes foram eutanasiados apoacutes 7 14 e 30 dias apoacutes a implantaccedilatildeo do pericaacuterdio e

os baccedilos fiacutegados e rins foram avaliados quanto agraves caracteriacutesticas macro e

microscoacutepicas Fragmentos desses oacutergatildeos foram coletados fixados em formol a 10

tamponados processados pelos meacutetodos usuais para histopatologia e corados pela

hematoxilina e eosina Natildeo foram evidenciadas alteraccedilotildees macro ou microscoacutepicas que

pudessem estar relacionadas agrave toxicidade destas substacircncias

PALAVRAS-CHAVE bioproacuteteses glutaral glicerol

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Page 8: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

ABSTRACT

Martins Caroline Rodrigues Pereira Histopathological evaluation of kidneys liver

and spleen of mice undergoing repair of surgical wound in the abdominal wall with

pieces bovine pericardium preserved with glycerin and glutaraldehyde 2009 45p

Dissertation (Master in Veterinary Medicine) Instituto de Veterinaacuteria Universidade

Federal Rural do Rio de Janeiro Seropeacutedica RJ

The use of bovine pericardium as a biological membrane is widespread in surgical

repair because of the low cost good applicability and it is easily obtained Glycerin

98 is the chemical agent most used as a biological tissue preservative in veterinary

medicine but studies show it is ineffective in eliminating viruses Glutaraldehyde is a

biological tissue preservative widely used in 05 and 0625 concentrations

However the persistence of rabies virus in samples of mice pericardium preserved in

0625 glutaraldehyde was proven and probably higher concentrations are required for

virucidal action Given its toxic capacity this study aims to evaluate macro-and

microscopically kidney liver and spleen of 65 mice 60 of whom underwent

implantation of bovine pericardium preserved in glycerin 98 and 0625 1 and

15 glutaraldehyde and 5 non-implanted mice served as controls The animals

implanted the same used in other research to evaluate local reaction on the abdominal

wall implants were euthanized after 7 14 and 30 days after implantation of the

pericardium and the spleens livers and kidneys were assessed as to their macro and

microscopic features Fragments of these organs were collected fixed in buffered

formalin 10 processed by usual histopathologic methods and stained with

hematoxylin and eosin There was no macro or microscopic changes that could be

related to the toxicity of these substances

KEY-WORDS bioprosthesis glutaral glycerol

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 3

21 Implantes 3

211 Membranas Bioloacutegicas 4

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino 4

22 Conservantes 5

221 Glicerina 6

2211 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina 6

2212 Toxicidade da Glicerina 7

2213 Tecidos Bioloacutegicos Conservados em Soluccedilatildeo de Glicerina 8

2221 Glutaraldeiacutedo 9

2222 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo 9

259 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo 10

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo 10

3 MATERIAL E MEacuteTODOS 14

31 Obtenccedilatildeo das Membranas Bioloacutegicas 14

32 Preparaccedilatildeo das Soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina 14

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos 14

34 Animais 15

35 Procedimentos Ciruacutergicos 16

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios 16

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macroscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo 21

4 RESULTADOS 22

5 DISCUSSAtildeO 33

6 CONCLUSAtildeO 37

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 38

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

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considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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resecciones pulmonares no antoacutemicas em perros Revista de Investigacion Clinica v 54 n

4 p 334-341 Ciudad del Mexico 2002

2002

Page 10: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

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1 INTRODUCcedilAtildeO

A utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas para correccedilatildeo de defeitos anatocircmicos eacute uma

teacutecnica comumente praticada em medicina elas podem ter origem heteroacuteloga (quando o

doador e o receptor satildeo de espeacutecies diferentes) autoacuteloga (quando doador e receptor satildeo da

mesma espeacutecie) e homoacuteloga (quando o tecido doado proveacutem do proacuteprio receptor)

O pericaacuterdio bovino eacute uma membrana heteroacuteloga bastante difundida em teacutecnicas de

implante devido agrave facilidade de aquisiccedilatildeo baixo custo e boa aplicabilidade poreacutem a melhor

forma de tratamento e conservaccedilatildeo ainda natildeo foi padronizada Muitas substacircncias quiacutemicas

empregadas no tratamento dessas membranas tecircm sido utilizadas visando principalmente a

eliminaccedilatildeo de possiacuteveis patoacutegenos que podem ser transmitidos do doador ao receptor deste

biomaterial

O agente quiacutemico mais utilizado como conservante de membranas bioloacutegicas na

praacutetica veterinaacuteria em nosso paiacutes eacute a glicerina a 98 por apresentar baixo custo e praticidade

de aplicaccedilatildeo poreacutem esse material soacute oferece relativa biosseguranccedila contra fungos e bacteacuterias

fato que pode permitir a contaminaccedilatildeo de agentes virais no uso de enxertos homoloacutegos ou

heteroacutelogos de origem animal

O glutaraldeiacutedo tem sido utilizado no tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso

meacutedico como por exemplo na conservaccedilatildeo de tecidos bioloacutegicos para reparo em paredes de

cavidades e de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui potente

accedilatildeo polivalente contra bacteacuterias fungos e viacuterus pela alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila

hidroxila carboxila e amina desses microrganismos alterando seu DNA RNA e a siacutentese de

proteiacutenas Aleacutem de atividade esporicida o glutaraldeiacutedo reage com a superfiacutecie do esporo

provocando o endurecimento das camadas externas

A manipulaccedilatildeo deste produto estaacute relacionada a diversos efeitos irritantes no sistema

respiratoacuterio na pele e nos olhos que resultam em bronquite asma eczemas queimaduras

conjuntivite e cegueira temporaacuteria a permanente

As concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo mais difundidas satildeo de 05 e 0625

consideradas com accedilatildeo esterilizante e natildeo nociva agrave incorporaccedilatildeo do implante bioloacutegico

Segundo Trani et al em 2006 o tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 0625 natildeo

inativa o viacuterus da raiva presente em pericaacuterdio bovino e portanto concentraccedilotildees mais altas

devem ser avaliadas

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Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

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2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

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211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

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O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

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traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

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O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

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2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

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conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

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microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

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formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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2

Eacute importante definir-se uma concentraccedilatildeo desta substacircncia que consiga associar seus

efeitos bactericida fungicida esporicida e virucida a uma baixa ou nula toxicidade ao tecido

do receptor sem repercussotildees sistecircmicas

A avaliaccedilatildeo da integridade estrutural e funcional de fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

com pericaacuterdio conservado preacute-implantado eacute importante para se determinar a toxicidade do

glutaraldeiacutedo e fornecer maior confiabilidade com relaccedilatildeo agrave indicaccedilatildeo de sua utilizaccedilatildeo O

presente trabalho teve por objetivo avaliar se a glicerina a 98 e concentraccedilotildees maiores de

glutaraldeiacutedo que as comumente utilizadas satildeo capazes de promover lesotildees macroscoacutepicas ou

histoloacutegicas em fiacutegado baccedilo e rins de camundongos

3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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3

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Implantes

A parede abdominal eacute uma estrutura dinacircmica com papel fundamental sobre as funccedilotildees

respiratoacuteria e digestiva (GIROTTO et al 2003)

A correccedilatildeo de defeitos da parede abdominal eacute uma das condutas recorrentes em

afecccedilotildees ciruacutergicas Praticamente todas as espeacutecies animais incluindo o homem satildeo

susceptiacuteveis o que causa um grande impacto na sauacutede fiacutesica independente da espeacutecie

abordada

Durante muito tempo o uacutenico tipo de membrana bioloacutegica utilizada em implantes eram

as homoacutelogas Devido agrave dificuldade de obtenccedilatildeo deste material assim como a sua

conservaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo estudos com membranas heteroacutelogas (implante de membrana

bioloacutegica onde o doador eacute de espeacutecie diferente do receptor) comeccedilaram a ser realizados e

com isso alguns tipos de soluccedilotildees para tratamento e conservaccedilatildeo dessas membranas com

eficiente efeito antimicrobiano foram analisadas (TRANI et al 2008)

A eleiccedilatildeo do procedimento ciruacutergico reconstrutivo da parede abdominal deve considerar

a perda dos diferentes planos anatocircmicos que a constituem e a funccedilatildeo de suporte perdida deve

ser restabelecida sempre que possiacutevel

Materiais sinteacuteticos ou bioloacutegicos tecircm sido comparados ou sugeridos para uso cliacutenico e

experimental em diversas espeacutecies O material substitutivo para ser considerado ideal deve ter

baixo custo de produccedilatildeo ser de faacutecil manipulaccedilatildeo promover o crescimento dos tecidos do

hospedeiro permitir que o tecido cicatricial tenha forccedila igual ao tecido normal ser resistente

agraves infecccedilotildees natildeo induzir resposta inflamatoacuteria exacerbada natildeo promover a formaccedilatildeo de

aderecircncias e fiacutestulas e natildeo ter suas caracteriacutesticas fiacutesicas alteradas pelos liacutequidos tissulares

bem como ser flexiacutevel inerte poroso e resistente (CERISE et al 1974) Os implantes

comumente utilizados na reconstruccedilatildeo da parede abdominal reuacutenem apenas uma ou outra

destas caracteriacutesticas (PREVEL et al 1995)

Leber et al (1998) salientaram que as complicaccedilotildees decorrentes do uso de material

proteacutetico para reconstruccedilatildeo da parede abdominal podem advir das propriedades fiacutesicas do

material implantado bem como das variaccedilotildees da teacutecnica de implantaccedilatildeo

4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

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COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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Histologia da associaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas de origem bovina implantadas no tecido

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ZHAO X COURTNEY JM Influence on blood of plasticized polyvinyl chloride

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ZAGER RA Rhadmomyolisis and myoglobinuric acute renal failure Kidney

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GUERRA H L DOHERTY P S Evaluacioacuten de la utilidad del pericaacuterdio bovino em

resecciones pulmonares no antoacutemicas em perros Revista de Investigacion Clinica v 54 n

4 p 334-341 Ciudad del Mexico 2002

2002

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4

211 Membranas Bioloacutegicas

Membranas bioloacutegicas como materiais para implante de oacutergatildeos e tecidos vecircm sendo

empregadas no Brasil desde a deacutecada de sessenta com Pigossi O emprego de membranas

bioloacutegicas deve-se principalmente a facilidade de sua obtenccedilatildeo baixo custo preparo simples

esterilizaccedilatildeo viaacutevel facilidade de estocagem pouca e ou nenhuma reaccedilatildeo tecidual

(ALVARENGA 1992)

Grande parte dos trabalhos sobre membranas bioloacutegicas busca avaliar sua viabilidade

em diferentes regiotildees do organismo animal (ALVARENGA 1992 COSTA NETO et al

1999 DALECK et al 1987 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992 PIGOSSI et al

1971 RODASKI et al 2002) Suas principais funccedilotildees satildeo fornecer arcabouccedilo para orientaccedilatildeo

e para o desenvolvimento de novos tecidos mediante processo de reparaccedilatildeo que restabeleccedila a

estrutura e funccedilatildeo do oacutergatildeo afetado (BATISTA et al 1996)

Dentre as membranas estudadas destacam-se o centro tendiacuteneo a dura-maacuteter faacutescia

lata o pericaacuterdio e o peritocircnio que possuem como caracteriacutestica principal constituiccedilatildeo quase

que exclusiva de colaacutegeno (ALVARENGA 1992) Para natildeo estimularem reaccedilatildeo imunoloacutegica

essas membranas devem permanecer preservadas por um periacuteodo miacutenimo de 30 dias em

glicerina (COSTA NETO et al 1999 DALECK et al 1992 SARTORI FILHO et al 1997)

Em 1969 Carpentier et al utilizaram o glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees para a

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas O termo bioproacutetese foi utilizado para descrever as

vaacutelvulas cardiacuteacas manufaturadas com tecidos bioloacutegicos modificados pelo glutaraldeiacutedo No

iniacutecio da deacutecada de 70 Ionescu et al (1972) confeccionaram uma vaacutelvula aoacutertica com

pericaacuterdio bovino fixado em glutaraldeiacutedo e posteriormente apresentaram sua experiecircncia

cliacutenica inicial com as bioproacuteteses de pericaacuterdio bovino

212 Utilizaccedilatildeo do Pericaacuterdio Bovino

O pericaacuterdio eacute uma membrana que forma um saco fibroso grosso transluacutecido com dois

folhetos Eacute composto por uma camada fibrosa externa (pericaacuterdio parietal) que se adere ao

esterno aos grandes vasos e ao diafragma e por uma camada serosa interna (pericaacuterdio

visceral) Eacute constituiacutedo basicamente por fibras compactas de colaacutegeno e fibras de elastina o

que confere uma capacidade viscoelaacutestica ao tecido (HOLT 1970 apud COVARRUBIAS et

al 2005)

5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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5

O pericaacuterdio bovino eacute um material bioloacutegico que haacute anos eacute usado com sucesso para

diversos tipos de cirurgia tais como enxerto dural (ANSON amp MARCHAND 1996)

tratamento de heacuternias (JAMES 1991) e para revestimentos periorbitais apoacutes enucleaccedilatildeo

(GAYRE et al 2001) Segundo Anson amp Marchand (1996) o pericaacuterdio bovino apoacutes

tratamento para remoccedilatildeo de restos celulares proteiacutenas degradaacuteveis e lipiacutedeos consiste de uma

malha de fibras colaacutegenas Eacute um material de baixo custo de faacutecil sutura pouca antigenicidade

e toxicidade boa forccedila miacutenima elasticidade e ausecircncia de irritaccedilatildeo com outros materiais

(YAMATOGI et al 2005)

O pericaacuterdio bovino eacute um material de origem bioloacutegica altamente resistente de faacutecil

manejo ciruacutergico maleaacutevel e sem problemas de reaccedilatildeo com corpo estranho Aleacutem disso eacute um

tecido de faacutecil acesso e habitualmente representa um material de interesse no processo

industrial de bovinos (IONESCU et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995)

A proacutetese de pericaacuterdio bovino tratada previamente com glutaraldeiacutedo proporciona

maior flexibilidade melhor estabilidade bioquiacutemica tornando-o mais resistente o que

favorece sua incorporaccedilatildeo bioloacutegica (WOODROOF 1979) Por esses motivos esta proacutetese eacute

indicada em cirurgia cardiovascular (fechamento de defeitos intercavitaacuterios ampliaccedilatildeo da via

de saiacuteda do ventriacuteculo direito alargamento do anel aoacutertico em trocas valvares tratamento de

aneurismas de aorta e ventriacuteculo esquerdo reconstruccedilotildees atriais e ventriculares) toraacutecica

(fechamento de coto brocircnquico fechamento de heacuternias diafragmaacuteticas tratamento de defeitos

congecircnitos e traumaacuteticos da parede toraacutecica) geral (tratamento ciruacutergico de heacuternias e

eventraccedilotildees) uroloacutegica (citoplastias ureteroplastias) e neurocirurgia (substituiccedilatildeo de dura-

maacuteter) (BRAILE 1990)

Alguns autores sugerem que o pericaacuterdio homoacutelogo tratado com glutaraldeiacutedo eacute o

material de escolha para reparos de vaacutelvula mitral pois previne deterioraccedilatildeo tardia e

calcificaccedilatildeo do tecido (CHAUVAUD et al 1991) Em contrapartida nas uacuteltimas quatro

deacutecadas estudos vecircm sendo realizados e mostram que o pericaacuterdio bovino tem boa resposta

quando aplicado nessa aacuterea por exemplo em reparos de aorta aacutetrio esquerdo e paredes

pericaacuterdicas (PIRES et al 1999)

22 Conservantes

Os meios de preservaccedilatildeo utilizados para manter as membranas bioloacutegicas devem

possuir alto poder estabilizador impedir a total decomposiccedilatildeo dos tecidos e crescimento de

microorganismos aleacutem de preservar ao maacuteximo a integridade celular aumentar a resistecircncia agrave

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

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considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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Histologia da associaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas de origem bovina implantadas no tecido

subcutacircneo de ratos Ciecircncia Rural v35 n4 jul-ago Santa Maria 2005

ZHAO X COURTNEY JM Influence on blood of plasticized polyvinyl chloride

significance of the plasticizer Artificial Organs v23 n1 p104-107 Cleveland 1999

ZAGER RA Rhadmomyolisis and myoglobinuric acute renal failure Kidney

International Edinburgh New York v49 p314-26 1996

ZUNtildeIGA J R O VICTORIA RJ VEJA A S GAXIOLA M O G GREEN L M A

GUERRA H L DOHERTY P S Evaluacioacuten de la utilidad del pericaacuterdio bovino em

resecciones pulmonares no antoacutemicas em perros Revista de Investigacion Clinica v 54 n

4 p 334-341 Ciudad del Mexico 2002

2002

Page 15: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

6

traccedilatildeo dos tecidos e atuar por um periacuteodo de tempo prolongado (ALVARENGA 1992

MOTA et al 2002)

221 Glicerina

O meio de conservaccedilatildeo mais utilizado eacute a glicerina a 98 mantida em temperatura

ambiente e que apresenta como vantagens baixo custo e propriedade antisseacuteptica

(ALVARENGA 1992) aleacutem de reduzir a antigenicidade preservar a textura do tecido e

aumentar a resistecircncia agrave traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (PIGOSSI 1967)

A glicerina desidrata o tecido substitui a maior parte da aacutegua intracelular sem alterar a

concentraccedilatildeo iocircnica das ceacutelulas atua como protetor da integridade celular (PIGOSSI 1967

PIGOSSI et al 1971) possui accedilatildeo fixadora e desidratante raacutepida aleacutem de elevar resistecircncia agrave

traccedilatildeo sem alterar o grau de elasticidade (LEX amp RAIA 1971 LEITE et al 1979) Tem accedilatildeo

anti-seacuteptica e na concentraccedilatildeo igual ou maior que 25 age como desinfetante Quando

concentrada a glicerina destroacutei bacteacuteria em 3 horas (SOLIMANN 1957)

Pigossi et al (1971) observaram que fungos e bacteacuterias (gram-positivas e gram-

negativas) eram susceptiacuteveis ao efeito da glicerina uma vez que na dura-maacuteter humana apoacutes

288 horas em imersatildeo na glicerina jaacute natildeo existiam fungos e bacteacuterias apenas formas

esporuladas Natildeo foi possiacutevel atribuir accedilatildeo antiviral poreacutem constatou-se que natildeo houve

alteraccedilatildeo nas caracteriacutesticas de textura nem contaminaccedilatildeo e natildeo foi observada reaccedilatildeo

inflamatoacuteria aguda ou tipo corpo estranho a membrana foi incorporada ao tecido neoformado

natildeo promovendo reaccedilatildeo local imunoloacutegica e teve baixa antigenicidade

221 1 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas da Glicerina

A glicerina tambeacutem conhecida como glicerol ou propano-123-triol eacute um composto

orgacircnico pertencente agrave funccedilatildeo aacutelcool apresenta-se no estado liacutequido agrave temperatura ambiente

eacute inodoro higroscoacutepico viscoso e adocicado (COLLINS 2005)

O glicerol eacute um precursor para a siacutentese de triacilgliceroacuteis e de fosfoliacutepidos no fiacutegado

e no tecido adiposo Quando o corpo usa a gordura acumulada como fonte de energia glicerol

e aacutecidos graxos satildeo libertados na corrente sanguiacutenea O glicerol pode ser convertido em

glicose pelo fiacutegado gerando energia para o metabolismo celular

7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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7

O glicerol estaacute presente em todos os oacuteleos e gorduras de origem animal e vegetal Esta

substacircncia eacute reconhecida desde 1959 como segura para consumo humano e eacute utilizada em

diversos produtos alimentiacutecios para os mais diversos propoacutesitos Os niacuteveis de DL50 em ratos

satildeo de 470 mg kg-1

e em porquinhos-da-iacutendia de 7750 mgkg-1

Vaacuterios estudos mostraram

que uma grande quantidade de glicerol (sinteacutetico ou natural) pode ser administrada sem

aparecimento de qualquer efeito adverso agrave sauacutede (KIRK-OTHMER 2007)

Aleacutem da induacutestria alimentiacutecia tambeacutem eacute utilizado na aacuterea farmacecircutica para fabricaccedilatildeo

de medicamentos e cosmeacuteticos na fabricaccedilatildeo tecircxtil para dar maleabilidade a tecidos como

preservante de bacteacuterias em alguns meios de cultura (KIRK-OTHMER 2007) e conservante

de materiais como por exemplo pericaacuterdio bovino

Figura 1 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glicerol (Fonte IUPAC 1993)

2212 Toxicidade da Glicerina

Coelho et al (1996) demonstraram que a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose

10mLKg-1

induz rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando-se insuficiecircncia renal

aguda mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Relataram tambeacutem que a literatura descreve

propriedades embriotoacutexicas e teratogecircnicas do glicerol (administraccedilatildeo subcutacircnea

intramuscular e oral) para ratos em dosagens superiores a 75mgKg-1

Quando aplicado

intramuscular o glicerol produz um estado de mioglobinuacuteria devido agrave necrose muscular

similar a rabdomioacutelise cliacutenica levando a insuficiecircncia renal aguda ocorrendo principalmente

lesatildeo em tuacutebulos uriniacuteferos proximais

Martim et al (2007) induziram insuficiecircncia renal aguda apoacutes administraccedilatildeo de

glicerol 50 na dose de 6mLKg-1

na regiatildeo do muacutesculo femoral de ratos devido agrave

rabdomioacutelise Posteriormente administou extrato de Vitis vinifera em 2 grupos e observou

efeito renoprotetor atribuiacutedo aos efeitos antioxidantes desta substacircncia

8

2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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2213 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glicerina

Pigossi (1967) utitizou dura-maacuteter homoacutegena canina conservada em glicerina lavada

em aacutegua corrente para retirada de sujidades e conservada em frasco de tubo de ensaio com

glicerina pura agrave temperatura ambiente e conservada por um periacuteodo de 19 a 105 dias Foi

realizada em periacuteodos diferentes anaacutelise histoloacutegica dos implantes para avaliar alteraccedilatildeo em

sua textura e observou-se uma sutil delaminaccedilatildeo do colaacutegeno que foi relacionada agrave

desidrataccedilatildeo Estas membranas foram implantadas em dura-maacuteter de catildees sem realizaccedilatildeo de

testes bacterioloacutegicos Os animais foram eutanasiados entre 10 a 360 dias sendo um animal

por mecircs e apresentaram agrave necropsia ausecircncia de reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda o que foi

considerado pelo autor indicativo de esterilidade e de baixa antigenicidade do material

implantado jaacute que os animais natildeo fizeram antibioticoterapia Ocorreu tambeacutem substituiccedilatildeo da

dura-maacuteter com a reabsorccedilatildeo e incorporaccedilatildeo do material implantado nos casos de maior

evoluccedilatildeo (PIGOSSI 1967 PIGOSSI et al 1971) Segundo Pigossi (1967) estas membranas

podem ser conservadas por um periacuteodo de ateacute seis meses ou mais naquele meio Em outro

estudo o mesmo autor e colaboradores (PIGOSSI et al1971) relataram que a glicerina a

98 em temperatura ambiente mostrou-se eficiente para conservaccedilatildeo de tecidos natildeo

provocando reaccedilotildees de rejeiccedilatildeo ou infeccccedilatildeo no tecido hospedeiro estudado

No iniacutecio da deacutecada de 70 Puig et al (1973 1975 e 1976) desenvolveram uma vaacutelvula

cardiacuteaca confeccionada com dura-maacuteter humana conservada pelo glicerol Concluiacuteram que a

dura-maacuteter preservada e esterilizada em glicerina 98 agrave temperatura ambiente por no miacutenimo

12 dias com ou sem o uso de antibioacuteticos praticamente natildeo satildeo trombogecircnicos mesmo sem

uso de anticoagulantes e permitem a fabricaccedilatildeo de valvas com fluxo central e de vaacuterios

tamanhos para substituiccedilatildeo de valva mitral aoacutertica tricuacutespide pulmonar mantendo os

pacientes operados com padrotildees hemodinacircmicos satisfatoacuterios e que esta membrana possui a

mesma resistecircncia em toda superfiacutecie por isso eacute ideal para confecccedilatildeo de valvas

Em 2000 Coronado et al conservaram metatarsos felinos contaminados com viacuterus da

Leucemia Felina em soluccedilatildeo de glicerina a 220C por 4 semanas sendo estes ossos

transplantados em gatos sadios Foi constatado em 98 dos animais do grupo a

soropositividade para avaliaccedilatildeo do enxerto sendo que todos os enxertos avaliados foram

positivos para o viacuterus da Leucemia Felina

Algumas membranas bioloacutegicas de bovinos tecircm sido utilizadas em estudos

experimentais e apresentaram resultados satisfatoacuterios Em catildees empregou-se dura-maacuteter

9

conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ADLINGTON P ANSCOMBE AJ PHILLIPS JJ Influence of the mode of preparation

on the long-term efficacy of homologous costal cartilage implants Journal of Laryngology

and Otology London v 106 n 6 p511-7 1992

ALKAN M TALIM B CIFTCI AO SENOCAK ME CAGLAR M

BUumlYUumlKPAMUKCcedilU N Histological response to injected gluteraldehyde cross-linked bovine

collagen based implant in a rat model BMC Urology London v6 n 3 2006

ALVARENGA J Possibilidades e limitaccedilotildees da utilizaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas

preservadas em cirurgia In DALECK C R BAPTISTA L C MUKAI L S (Ed)

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conservada em glicerina por periacuteodo maior que seis meses na reparaccedilatildeo da bainha do

muacutesculo reto do abdome (INATOMI et al 1980) peritocircnio na substituiccedilatildeo de retalho

diafragmaacutetico (DALECK et al 1988) na reparaccedilatildeo de heacuternia perineal (DALECK et al

1992) na tenoplastia do tendatildeo calcanear comum (COSTA NETO et al 1999) e pericaacuterdio na

artroplastia do acetaacutebulo femural (RODASKI et al 2002)

222 Glutaraldeiacutedo

2221 Caracteriacutesticas Bioquiacutemicas do Glutaraldeiacutedo

O glutaraldeiacutedo eacute um dialdeiacutedo saturado encontrado amplamente em forma liacutequida

incolor ou amarelada em soluccedilatildeo aquosa a 50 que tem sido amplamente utilizado no

tratamento e conservaccedilatildeo de materiais de uso meacutedico principalmente para reparo em paredes

de cavidades de oacutergatildeos ocos em reconstruccedilatildeo vascular e valvular dentre outros Possui

potente accedilatildeo polivalente sendo portanto bactericida fungicida virucida (sua atividade eacute

devida a alquilaccedilatildeo de grupos sulfidrila hidroxila carboxila e amino dos microrganismos o

que altera o seu DNA RNA e siacutentese de proteiacutenas) e esporicida (devido ao glutaraldeiacutedo

reagir com a superfiacutecie do esporo o que provoca o endurecimento das camadas externas e

morte do esporo) Eacute uma substacircncia pouco poluente devido agrave sua raacutepida biodegradaccedilatildeo natildeo

bioacumulativa e de pouca persistecircncia no ar solo e aacutegua aleacutem de ser um excelente fixador

de tecidos para a microscopia eletrocircnica (APECIH 1998 e ANVISA 2007)

Eacute um produto muito reativo que pode ser polimerizado na presenccedila da aacutegua A reaccedilatildeo

de condensaccedilatildeo eacute mais raacutepida em meio alcalino e pode tornar-se violenta em contato com

bases fortes As soluccedilotildees aquosas de glutaraldeiacutedo levemente aacutecidas satildeo relativamente

estaacuteveis A accedilatildeo de um estabilizante como por exemplo o metanol permite conservaacute-las por

mais tempo O Glutaraldeiacutedo e as suas soluccedilotildees aquosas corroem numerosos materiais

nomeadamente o accedilo o ferro galvanizado o alumiacutenio o estanho e o zinco (Costa et al 1990)

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo possui accedilatildeo contra fungos bacteacuterias e viacuterus e segundo a

Comissatildeo de Controle de Infecccedilatildeo Hospitalar da Universidade Federal de Minas Gerias

(UFMG 1993) e a Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz (2002) esta soluccedilatildeo na concentraccedilatildeo de 2 eacute

utilizada na esterilizaccedilatildeo de materiais com tempo miacutenimo de 10 horas de exposiccedilatildeo Tambeacutem

eacute utilizada como um dos meios de tratamento das membranas bioloacutegicas contra

10

microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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microrganismos pois possui poder de esterilizaccedilatildeo (CARPENTIER et al 1969 IONESCU et

al 1977)

Figura 2 Estrutura quiacutemica da moleacutecula do glutaraldeiacutedo (Fonte IUPAC 1993)

2222 Toxicidade do Glutaraldeiacutedo

A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo eacute toacutexica para o organismo receptor portanto eacute

extremamente importante a lavagem abundante com soluccedilatildeo salina antes de a membrana

bioloacutegica ser implantada (PINTO et al 1993) Aleacutem disso jaacute foi considerado que qualquer

variaccedilatildeo no modo de preparaccedilatildeo pode influenciar no balanccedilo (equiliacutebrio) entre a reabsorccedilatildeo

do implante e a deposiccedilatildeo de fibrose no local do implante (ADLIGTON et al 1992) Por isso

eacute importante definir uma concentraccedilatildeo ideal de glutaraldeiacutedo que natildeo interfira bruscamente na

reaccedilatildeo inflamatoacuteria que natildeo provoque calcificaccedilatildeo do implante que natildeo gere toxicidade local

e sistecircmica e que seja capaz de controlar de forma eficaz o crescimento microbiano

Ao se avaliar o processo inflamatoacuterio na utilizaccedilatildeo de enxerto de pericaacuterdio bovino

tratado com glutaraldeiacutedo pode-se caracterizaacute-lo como crocircnico e moderado (GRECA et al

2005) Segundo Tang et al (1995) respostas inflamatoacuterias crocircnicas acompanhadas de

macroacutefagos eou acuacutemulo de ceacutelulas gigantes do organismo tecircm sido observadas ao redor de

muitos tipos de implantes de biomateriais e tecircm sido associadas com vaacuterias complicaccedilotildees que

afetam tanto o receptor quanto o implante por si mesmo (TANG et al 1995) Durante a

resposta inflamatoacuteria crocircnica ao implante produtos da aderecircncia de ceacutelulas inflamatoacuterias

podem ser gerados e danificar o implante eou reagir com o biomaterial e gerar cataboacutelitos

toacutexicos (ZHAO amp COURTNEY 1999)

2223 Tecidos Bioloacutegicos Tratados em Soluccedilatildeo de Glutaraldeiacutedo

Ionescu et al em 1968 utilizaram vaacutelvulas de suiacutenos para confecccedilatildeo de vaacutelvulas

aoacuterticas para humanos devido ao diacircmetro compatiacutevel do modelo suiacuteno com o humano Estas

valvas foram coletadas de animais sem precauccedilotildees de esterilidade e foram conservadas em

11

formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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formaldeiacutedo a 4 de soluccedilatildeo fosfato pH 56 por no miacutenino 2 semanas e mantidas nesta

mesma soluccedilatildeo tendo este procedimento sido realizado em 63 pacientes

Carpentier et al 1969 introduziram o uso do glutaraldeiacutedo em baixas concentraccedilotildees

para preservaccedilatildeo dos tecidos bioloacutegicos e concluiacuteram haver esterilizaccedilatildeo manutenccedilatildeo das

propriedades mecacircnicas eliminaccedilatildeo ou desnaturaccedilatildeo dos componentes antigecircnicos e

prevenccedilatildeo da desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno Para descrever as vaacutelvulas confeccionadas com

tecidos vivos tratados pelo glutaraldeiacutedo propocircs um novo termo chamando-as de bioproacuteteses

Em 1974 Ionescu et al confeccionaram uma vaacutelvula com pericaacuterdio bovino tratado

pelo glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo Isto apoacutes um trabalho que comparava as

vaacutelvulas confeccionadas de faacutescia lata homoacuteloga que foi preservada em 4 de formaldeiacutedo ou

02 de glutaraldeiacutedo das vaacutelvulas de pericaacuterdio heteroloacutego foi tratado com 02 ou 06 de

glutaraldeiacutedo e verificou atraveacutes de anaacutelises cliacutenicas e hemodinacircmicas que as vaacutelvulas de

pericaacuterdio apresentavam um maior potencial de qualidade para o uso como vaacutelvula cardiacuteaca

sendo considerado tambeacutem que o meacutetodo de preparaccedilatildeo da vaacutelvula eacute importante para sua

durabilidade

Ionescu et al(1977) estabilizaram e fixaram pericaacuterdios bovinos com soluccedilatildeo de

glutaraldeiacuteo 05 tampatildeo fosfato com pH 74 a 4oC por 2 semanas sendo estocada em 4 de

soluccedilatildeo de formaldeiacutedo tampatildeo a pH 54 com 02 M acetato Foram realizadas implantaccedilotildees

de vaacutelvulas de pericaacuterdio em 212 pacientes humanos e na anaacutelise estrutural e da integridade

funcional da proacutetese mostrada por histologia e avaliaccedilatildeo hemodinacircmica respectivamente

evidenciou-se que a durabilidade e integridade fornecidas pela estabilizaccedilatildeo do glutaraldeiacutedo

eram satisfatoacuterias

A importacircncia do tratamento preacutevio com glutaraldeiacutedo eacute que esta soluccedilatildeo serve para

esterilizaccedilatildeo e preservaccedilatildeo da membrana previne reaccedilatildeo imunoloacutegica pela reduccedilatildeo do

potencial antigecircnico de cada tecido previne desnaturaccedilatildeo do colaacutegeno criando uma grande

estabilidade pela durabilidade das proacuteteses Baseada na estabilidade do material bioloacutegico os

tecidos tratados apresentam durabilidade de acordo com a regeneraccedilatildeo tecidual das ceacutelulas do

hospedeiro (CARPENTIER et al 1969 CARPENTIER et al 1974) GOISSIS et al (1999)

concluiram que a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo provoca diminuiccedilatildeo da reaccedilatildeo imunoloacutegica da

membrana bioloacutegica no organismo receptor e aumento da resistecircncia da membrana

Em 1990 Braile confecciou proacuteteses de pericaacuterdio bovino e implantou em humanos

para correccedilatildeo fechada de insuficiecircncia mitral As membranas pericaacuterdicas foram coletadas em

12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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12

abatedouros seguidas de limpeza para retirada das sujidades e tratamento com glutaraldeiacutedo

05 por um periacuteodo de 18 dias

Zuacutentildeiga et al (2002) desenvolveram um estudo experimental em catildees e avaliaram

pericaacuterdio tratado pela soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo para o uso em ressecccedilatildeo pulmonar em catildees

As amostras foram colocadas em soluccedilatildeo de Hanks a 40C por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida

(penicilina e estreptomicina) e fungicida (anfotericina B) depois as membranas foram

tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05 com pH 74 por um periacuteodo de 15 dias Os

autores utilizaram esta membrana na forma de tratamento por 10 anos na cliacutenica ciruacutergica

toacuteraco-abdominal e obtiveram resultados satisfatoacuterios

A utilidade cicatrizaccedilatildeo e integridade do pericaacuterdio de bovinos em tecidos nasoseptais

de porcos foi observada por Marcos et al(2002-2003) que colocaram as membranas imersas

em soluccedilatildeo de Hanks a 4oC por 6 horas com soluccedilatildeo bactericida (penicilina e estreptomicina)

e fungicida (anfotericina B) e posteriormente tratadas com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 05

com pH tampatildeo fosfato por um periacuteodo de 15 dias O controle microbioloacutegico depois dos 15

dias de tratamento das amostras de pericaacuterdio foi negativo e antes da implantaccedilatildeo tambeacutem foi

negativo assim como na soluccedilatildeo de preservaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo atuou como

agente que estabiliza a forccedila de uniatildeo cruzada do tecido e atua como germicida e

desnaturando as proteiacutenas dos agentes infecciosos e portanto reduz a antigenicidade A

evoluccedilatildeo cliacutenica foi satisfatoacuteria com baixa reaccedilatildeo de corpo estranho baixo potencial

infeccioso e adequado suporte para incorporaccedilatildeo do tecido fibroso promovendo boa

cicatrizaccedilatildeo O material foi considerado de faacutecil manipulaccedilatildeo ciruacutergica e baixo custo

Pinto et al (1993) realizaram um estudo experimental para avaliaccedilatildeo da

biocompatibilidade do pericaacuterdio bovino tratado com glutaraldeiacutedo conservados ou natildeo em

formaldeiacutedo e tecido sinteacutetico (dacron) implantados no tecido subcutacircneo da regiatildeo

abdominal de ratos A histologia das peccedilas revelou ausecircncia de biocompatibilidade

principalmente na membrana tratada pelo glutaraldeiacutedo e conservada com formaldeiacutedo

diferentemente do dacron que apresentou perfeita biocompatibilidade No teste da cultura de

ceacutelula ldquoin vitrordquo mostrou um grau intenso de toxicidade associado ao resiacuteduo do agente de

tratamento Tanto o grupo tratado com glutaraldeiacutedo e conservado em formaldeiacutedo quanto o

grupo soacute tratado pelo glutaraldeiacutedo apresentaram toxicidade nas ceacutelulas

Trani et al (2008) em experimento com pericaacuterdios de camundongos tratados com

glutaraldeiacutedo 0625 observaram a ocorrecircncia do viacuterus raacutebico mesmo quando as membranas

foram mantidas na soluccedilatildeo por 30 dias agrave temperatura ambiente sendo reproduzida a infecccedilatildeo

13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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13

em 50 dos camundongos que receberam injeccedilatildeo de macerado das amostras tratadas Este

trabalho demonstrou a necessidade de encontrar-se uma maior concentraccedilatildeo de glutaraldeiacutedo

que possa demonstrar accedilatildeo viricida sem promover maiores danos teciduais locais ao

hospedeiro nem toxicidade sistecircmica

Em trabalho recente de nosso Grupo de Pesquisa Costa (2009)1 observou nos mesmos

animais utilizados no presente trabalho reaccedilatildeo inflamatoacuteria local exacerbada e incorporaccedilatildeo

insatisfatoacuteria naqueles implantes tratados com concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo

obtendo boa resposta local nos outros grupos

1 Comunicaccedilatildeo pessoal (dados ainda natildeo publicados) E-mail claudiabdacostagmailcom

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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2002

Page 23: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

14

3 MATERIAL E MEacuteTODOS

31 Obtenccedilatildeo e Limpeza das Membranas Bioloacutegicas

Os pericaacuterdios bovinos foram obtidos de animais abatidos em matadouro na cidade de

Trecircs Rios Rio de Janeiro e submetidos agrave fiscalizaccedilatildeo do Departamento de Inspeccedilatildeo Federal

do Ministeacuterio da Agricultura e Departamento de Vigilacircncia Sanitaacuteria da Secretaria de Sauacutede

Estadual Para a conservaccedilatildeo do material durante o transporte foi utilizado um recipiente

teacutermico com gelo o qual permitiu que os pericaacuterdios permanecessem em temperatura de

aproximadamente 10degC ateacute a chegada ao laboratoacuterio Em prosseguimento foi realizada a

limpeza manual da membrana pericaacuterdica e retirada da gordura para que o seu tratamento e

conservaccedilatildeo fossem iniciados

32 Preparaccedilatildeo das soluccedilotildees de Glutaraldeiacutedo e Glicerina

As soluccedilotildees foram preparadas em laboratoacuterio do Departamento de Cliacutenica e Cirurgia

da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Uma soluccedilatildeo PBS (Phosphate-Bufferid

Saline) composta por fosfato monopotaacutessico fosfato dissoacutedico cloreto de soacutedio e aacutegua

destilada foi utilizada para tamponamento das soluccedilotildees de glicerina PA (Pro-Analysis)

bidestilada 982 e de glutaraldeiacutedo 25

3 em aacutegua A soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo foi diluiacuteda em

aacutegua destilada ateacute chegar-se agraves concentraccedilotildees de 0625 1 e 15 e tamponada com

soluccedilatildeo PBS ateacute chegar-se a um pH de 74 assim como a glicerina 98 (TRANI et al 2006)

33 Tratamento e Conservaccedilatildeo dos Pericaacuterdios Bovinos

Os pericaacuterdios bovinos foram fracionados em partes com aacutereas de aproximadamente

9cm2 e colocados em frascos coletores esteacutereis comerciais para exames laboratoriais com

capacidade para 80mL cada frasco contendo volume aproximado de 50mL das soluccedilotildees de

glicerina a 98 e glutaraldeiacutedo a 0625 1 ou 15 recebeu trecircs fragmentos de pericaacuterdio

Parte dos fragmentos foi conservada em soluccedilatildeo de glicerina 98 durante 30 dias e a outra

parte dos fragmentos pericaacuterdicos recebeu tratamento com a soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo por 18

2 Apresentaccedilatildeo Comercial Glicerina 98 PA bidestilada Proquimios 3 Apresentaccedilatildeo Comercial Soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 25 em aacutegua Proquimios

15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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15

dias nas concentraccedilotildees de 0625 1 ou 15 Os frascos foram armazenados em

temperatura ambiente e protegidos da luz

34 Animais

Foram utilizados 65 camundongos com pesos entre 20 e 30g procedentes do Bioteacuterio

do Laboratoacuterio de Coccidioses do Departamento de Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica da

Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Os animais foram mantidos separados em

caixas de accedilo inoxidaacutevel individuais em sala com refrigeraccedilatildeo adequada Os camundongos

tiveram suas caixas trocadas uma vez por semana e apoacutes cada troca eram lavadas com cloro

secadas e forradas com maravalha limpa e autoclavada A aacutegua e a raccedilatildeo eram fornecidas sem

restriccedilotildees

Foram formados um grupo controle (contendo 5 animais) um grupo para receber o

pericaacuterdio bovino conservado com glicerina 98 subdivido em 3 subgrupos (composto por 5

animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7 14 e 30 dias) 3 grupos

para as diferentes concentraccedilotildees de glutaraldeiacutedo (06255 1 e 15) sendo cada subdivido

em 3 subgrupos (com 5 animais cada subgrupo) correspondentes ao tempo para eutanaacutesia (7

14 e 30 dias) conforme descrito no Quadro 1

Quadro1 Delineamento experimental dos grupos de camundongos (Mus musculus)

submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com glicerina 98 e glutaraldeiacutedo a

0625 1 e 15 e grupo controle sem implantaccedilatildeo da membrana

GRUPOS SOLUCcedilAtildeO DE

TRATAMENTO

TEMPO DE

AVALIACcedilAtildeO SUBGRUPOS

NUacuteMERO

DE

ANIMAIS

Grupo I Controle 1 dia ----- 5

GrupoII Glicerina 98 7 dias IIa 5

14 dias IIb 5

30 dias IIc 5

Grupo III Glutaraldeiacutedo 0625 7dias IIIa 5

14 dias IIIb 5

30dias IIIc 5

Grupo IV Glutaraldeiacutedo 1 7 dias IVa 5

14 dias IVb 5

30 dias IVc 5

Grupo V Glutaraldeiacutedo 15 7 dias Va 5

14 dias Vb 5

30 dias Vc 5

Total de animais 65

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Page 25: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

16

35 Procedimentos Ciruacutergicos

351 Implantaccedilatildeo dos Pericaacuterdios

Os fragmentos de pericaacuterdios foram retirados dos frascos com cuidados de assepsia e

lavados com salina esteacuteril para a retirada do excesso de soluccedilatildeo conservante presente na

superfiacutecie da membrana (PINTO et al 1993) Foram feitas trecircs lavagens nos fragmentos

tratados com glicerina e oito lavagens nos fragmentos em glutaraldeiacutedo (PINTO 1993

HADDAD FILHO et al 2004) Cada lavagem continha 10mL de soluccedilatildeo salina e na uacuteltima

lavagem permaneciam por 30 minutos

Os camundongos encontravam-se em jejum de 12 horas para a realizaccedilatildeo do

procedimento ciruacutergico foram preacute-anestesiados via intraperitoneal com diazepam4 (5mgkg

-

1) (PAIVA 2005) e anestesiados com xilazina

5 (15mgkg

-1) e quetamina

6 (150mgkg

-1) via

intraperitoneal (PLUNKETT 2006) Em seguida foram tricotomizados e receberam para

controle de dor cloridrato de tramadol7 (7mgkg

-1) por via subcutacircnea e 005mL de

antibioacutetico8 (composto associado de benzilpenicilina benzatina 1200000 UI

benzilpenicilina procaiacutena 600000 UI benzilpenicilina potaacutessica 600000 UI

diidroestreptomicina base 500mg estreptomicina base 500mg em 6mL) por via intramuscular

(PLUNKETT 2006) e realizou-se a antissepsia do local com aacutelcool iodado a 05

A regiatildeo abdominolateral esquerda foi escolhida para implantaccedilatildeo do fragmento de

pericaacuterdio Os animais encontravam-se em decuacutebito lateral direito com membros relaxados

foi realizada incisatildeo de pele de 15cm (Figura 5) no sentido dorsoventral paralelamente entre a

uacuteltima costela e a articulaccedilatildeo fecircmur-tiacutebio-patelar Em sequecircncia seccionou-se um retalho de

musculatura abdominal com auxiacutelio de um molde quadrado de polipropileno com 05 cm de

lado e reparos com fios de nylon nos veacutertices do recorte Devido agrave indefiniccedilatildeo dos limites de

cada muacutesculo abdominal o fragmento muscular retirado em cada camundongo abrangia o

muacutesculo obliacutequo externo aleacutem do muacutesculo obliacutequo interno e do muacutesculo transverso

abdominal (Figura 6)

4 Apresentaccedilatildeo Comercial Compaz 5mgmL Cristaacutelia 5 Apresentaccedilatildeo Comercial Ansedan 2 Vetbrands 6 Apresentaccedilatildeo Comercial Ketamina 10 Agener 7 Apresentaccedilatildeo Comercial Dorless 100mg2mL Uniatildeo Quiacutemica 8 Apresentaccedilatildeo Comercial Pentabioacutetico FortDodge

17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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17

Figura 3 Animal em decuacutebito lateral direito apoacutes

tricotromia

Figura 4 Incisatildeo na pele

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

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COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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WOODROOF EA Use of glutaraldehyde and formaldehyde to process tissue heart valves

In IONESCU MI Tissue heart valves London Butterworth p 347 1979

YAMATOGI RS RAMAL SC GRANJEIRO JM CESTARI TM LIMA AFM

Histologia da associaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas de origem bovina implantadas no tecido

subcutacircneo de ratos Ciecircncia Rural v35 n4 jul-ago Santa Maria 2005

ZHAO X COURTNEY JM Influence on blood of plasticized polyvinyl chloride

significance of the plasticizer Artificial Organs v23 n1 p104-107 Cleveland 1999

ZAGER RA Rhadmomyolisis and myoglobinuric acute renal failure Kidney

International Edinburgh New York v49 p314-26 1996

ZUNtildeIGA J R O VICTORIA RJ VEJA A S GAXIOLA M O G GREEN L M A

GUERRA H L DOHERTY P S Evaluacioacuten de la utilidad del pericaacuterdio bovino em

resecciones pulmonares no antoacutemicas em perros Revista de Investigacion Clinica v 54 n

4 p 334-341 Ciudad del Mexico 2002

2002

Page 27: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

18

Figura 5 Incisatildeo na pele e pontos de reparo com fio Nylon 5-0 fixados na musculatura abdominal lateral de camundongo

delimitando a aacuterea que seraacute incisada para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Figura 6 Pontos de reparo delimitando as bordas da aacuterea de

na musculatura abdominal lateral de camundongo apoacutes incisatildeo

e retirada de fragmento muscular para implantaccedilatildeo de

fragmento de pericaacuterdio bovino conservado

Um fragmento de pericaacuterdio quadrado com 1cm em cada lado foi implantado entatildeo no

mesmo local de retirada do retalho atraveacutes de sutura descontiacutenua simples com fio de nylon

50 (Figura 7) e posterior rafia cutacircnea com sutura descontiacutenua simples e fio de nylon 50

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Page 28: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

19

Figura 8 Suturas das margens de fragmento de pericaacuterdio

bovino conservado com a face lisa do implante voltada para o

interior da cavidade abdominal de camundongo

Figura 9 Suturas dos veacutertices do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Page 29: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

20

Figura 10 Suturas das bordas do fragmento de pericaacuterdio

bovino na cavidade abdominal do camundongo

Figura 10 Suturas da pele

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

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accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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4 p 334-341 Ciudad del Mexico 2002

2002

Page 30: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

21

Figura 11 Ferida ciruacutergica recoberta

Cada animal no poacutes-operatoacuterio recebeu mais duas doses do mesmo antibioacutetico do preacute-

operatoacuterio via intramuscular sendo cada uma administrada com um intervalo de 48 horas e

nenhuma administraccedilatildeo de antiinflamatoacuterio foi realizada As feridas foram recobertas com

curativo constando de tira de esparadrapo hipoalergecircnico9

36 Eutanaacutesia Coleta e Anaacutelise Macro e Microscoacutepica das Amostras Teciduais de Rins

Fiacutegado e Baccedilo

A eutanaacutesia dos camundongos seguiu as normas preconizadas pelo COBEA (lei no 6338

de maio de 1979) e foi realizada nos periacuteodos poacutes-operatoacuterios correspondentes a 7 14 e 30

dias de acordo com o Quadro 1

Os faacutermacos para eutanaacutesia foram aplicadas por via intraperitoneal constando de

quetamina (450mgkg-1

) e xilazina (45mgkg-1

) (PAIVA 2005)

Os fiacutegados baccedilos e rins foram avaliados quanto ao aspecto macroscoacutepico e logo apoacutes

foram fixados em formol a 10 tamponado

As amostras foram encaminhadas ao Laboratoacuterio de Histopatologia do Departamento de

Epidemiologia e Sauacutede Puacuteblica do Instituto de Veterinaacuteria Apoacutes fixaccedilatildeo o material foi

processado como de rotina para exame histopatoloacutegico e avaliado em microscopia oacutetica

9 Apresentaccedilatildeo Comercial Fita Micropore 3M (25mm x 134m)

22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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22

4 RESULTADOS

A implantaccedilatildeo dos fragmentos na parede abdominal dos camundongos natildeo apresentou

dificuldade de execuccedilatildeo tampouco complicaccedilotildees poacutes-operatoacuterias como deiscecircncias de

suturas eventraccedilatildeo ou evisceraccedilatildeo Os curativos mantiveram-se nos animais por periacuteodos que

variaram entre 3 a 7 dias quando observou-se a regiatildeo operada sem edemas hematomas ou

exsudatos

O protocolo anesteacutesico empregado permitiu a execuccedilatildeo do implante na maioria dos

animais Em dez camundongos foi necessaacuteria aplicaccedilatildeo de mais um terccedilo da dose inicial por

via intraperitoneal para a rafia dos uacuteltimos pontos de fixaccedilatildeo da membrana e sutura da pele

A teacutecnica ciruacutergica levava em torno de 45 minutos a uma hora e a recuperaccedilatildeo anesteacutesica

ocorria aproximadamente em uma hora e trinta minutos

Agrave avaliaccedilatildeo macroscoacutepica os oacutergatildeos apresentaram alteraccedilotildees tais como rins e fiacutegados

com focos amarelados e ateacute todo o parecircnquima com esta cor Ocorreram tambeacutem coloraccedilotildees

acinzentadas esbranquiccediladas e com aacutereas ligeiramente enegrecidas nos parecircnquimas Os

baccedilos de alguns animais apresentavam polpa branca evidente Estas alteraccedilotildees ocorreram

aleatoriamente entre os animais dos cinco grupos sem portanto caracterizar indicativo de

toxicidade das soluccedilotildees em estudo (Quadro2)

Da mesma forma foram observadas alteraccedilotildees microscoacutepicas variadas com

distribuiccedilatildeo aleatoacuteria tais como em rins cilindros hialinos congestatildeo moderada poucas

ceacutelulas tubulares com citoplasma mais eosinofiacutelico alguns tuacutebulos apresentavam-se

tumefeitos e ligeiramente vacuolizados hemossiderose e infiltrado inflamatoacuterio mononuclear

fiacutegados congestos e infiltrado inflamatoacuterio polimorfonuclear em regiotildees periductais alguns

hepatoacutecitos com vacuolizaccedilatildeo baccedilo apresentando moderada hematopioese extramedular Foi

observada tambeacutem congestatildeo dos oacutergatildeos em todos os grupos de animais

23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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23

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Levemente

aumentado com

pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie e

evidentes tambeacutem

ao corte

---

Levemente amarelado e

com pontos

esbranquiccedilados agrave

superfiacutecie

--- Pontos esbranquiccedilados

agrave superfiacutecie

FIacuteGADO Moderadamente

amarelado

Pontos levemente mais

escuros agrave superfiacutecie

alguns vistos tambeacutem ao

corte

--- --- ---

RINS --- --- --- --- ---

--- = sem alteraccedilatildeo

24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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24

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de peicaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie e

evidentes

tambeacutem ao

corte

--- --- --- --- --- --- --- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Difusame

nte

amarelad

o

FIacuteGADO Moderame

nte

amarelado

Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusament

e amarelo

claro

---

Levemen

te

amarelad

o

Levemen

te

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendid

a

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

alguns

pontos

milimeacutetri

cos

escuros

RINS Difusament

e amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

Levemente

amarelado

Levemente

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusame

nte

amarelo

claro e

pontos

marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

focos

marrom

escuros

Alguns

pontos

milimeacutetri

cos

vermelho

escuros

---

Moderam

ente

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Com focos

marrom

escuros na

superfiacutecie

Levemen

te

amarelad

o

25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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25

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e

evidentes

tambeacutem ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- --- --- --- ---

FIacuteGA

DO

Levement

e

amarelado

e pontos

acinzentad

os e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

vesiacutecula

biliar

distendida

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

marrom

escuros

Difusam

ente

amarelo

claro

Moderam

ente

amarelad

o

Levem

ente

amarela

do

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Levement

e

amarelado

e pontos

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Levement

e

amarelado

e Alguns

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Difusamen

te amarelo

claro

Leveme

nte

amarelad

o

---

Levem

ente

amarela

do

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

do e

pontos

vermelh

o

escuros

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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26

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 1

Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e e

evidentes

tambeacutem

ao corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte e

pontos

acinzentad

os na

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

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corte

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderam

ente

amarelad

o

Moderam

ente

amarelad

o

Moderame

nte

amarelado

e pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderam

ente

amarelad

o

Modera

mente

amarela

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o

escuros

Moderame

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os

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os

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

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superfiacutecie

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milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

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os

Moderame

nte

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milimeacutetric

os

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os

Moderame

nte

amarelado

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esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

Moderame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

acinzentad

os

RINS

pontos

esbranqui

ccedilados agrave

superfiacuteci

e

---

Difusamen

te amarelo

claro e

pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Pontos

milimeacutetr

icos

vermelh

o

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

e focos

acinentado

s

---

Ligeiraam

ente

amarelo

claro e

alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Difusame

nte

amarelo

claro

Alguns

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

Levement

e

amarelado

Levement

e

amarelado

e pontos

milimeacutetric

os

vermelho

escuros

---

Levement

e

amarelado

27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

7 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ADLINGTON P ANSCOMBE AJ PHILLIPS JJ Influence of the mode of preparation

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27

Quadro 2 ndash Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Pontos

esbranquiccedilad

os ao corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

e evidentes

tambeacutem ao

corte

---

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

--- ---

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

pontos

vermelho

escuros

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

Pontos

esbranquiccedil

ados agrave

superfiacutecie

Pontos

esbranquiccedil

ados ao

corte

FIacuteGADO

Moderament

e amarelado

com pontos

acinzentados

marrom

escuros e

enegrecidos

na superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

os marrom

escuros

Moderam

ente

amarelad

o

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Moderame

nte

amarelado

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Moderame

nte

amarelado

com

pontos

acinzentad

os

Difusament

e amarelo

claro com

alguns

pontos

acinzentado

s e vesiacutecula

biliar

distendida

Difusam

ente

amarelo

claro

com

alguns

pontos

vermelho

escuros

na

superfiacuteci

e

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

pontos

esbranquiccedil

ados na

superfiacutecie

Moderame

nte

amarelado

e com

alguns

pontos

esbranquiccedil

ados e

vermelho

escuros na

superfiacutecie

RINS

Pontos

esbranquiccedilad

os agrave

superfiacutecie

Ligeirame

nte

amarelado

e com

pontos

milimeacutetric

os

amarronza

dos na

superfiacutecie

Difusamen

te amarelo

claro

Difusame

nte

amarelo

claro e

com

focos

marrom

escuros

Ligeiram

ente

amarelad

o

Ligeirame

nte

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Ligeirame

nte

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro

Difusamen

te amarelo

claro

Moderada

mente

amarelo

Levemen

te

amarelad

o

Levemente

amarelado

e pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Levemente

amarelado

Difusamen

te amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o vermelho

escuros

Moderada

mente

amarelo

claro e

com

pontos

milimeacutetric

o

vermelho

escuros

28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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28

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) controle sem implantaccedilatildeo da membrana Continua

GRUPO I (Controle)

A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo --- --- --- Leve congestatildeo e hemossiderose

FIacuteGADO --- Leve congestatildeo Alguns hepatoacutecitos

com citoplasma eosinofiacutelico

Presenccedila de infiltrado

neutrofiacutelico focal ---

RINS --- Algumas ceacutelulas epiteliais

tubulares vacuolizadas --- ---

Algumas ceacutelulas

epiteliais tubulares

vacuolizadas

--- = sem alteraccedilatildeo

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Page 38: Federal Rural University of Rio de Janeiro · Created Date: 3/18/2010 12:06:40 AM

29

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glicerina a 98

Continua

GRUPO II (Glicerina 98)

SUB- GRUPO IIa (7dias) SUB- GRUPO IIb (14dias) SUB- GRUPO IIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO

Hematopo

iese

extramedu

lar

Leve

congestatildeo ---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

--- --- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatilde

o

---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedul

ar

---

FIacuteGADO Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatilde

o

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo ---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e com

citoplasm

as

eosinofiacutelic

os

---

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulare

s

tumefeit

as

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelic

o

30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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30

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

0625 Continua

GRUPO III (Glutaraldeiacutedo 0625)

SUB- GRUPO IIIa (7dias) SUB- GRUPO IIIb (14dias) SUB- GRUPO IIIc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

--- ---

Leve

congestatilde

o

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

--- ---

Hematopoie

se

extramedul

ar e

hiperplasia

folicular

---

Hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedul

ar

FIacuteGADO

Infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

Leve

congestatilde

o e

alguns

hepatoacutecit

os

tumefeito

s

Leve

congest

atildeo

Alguns

hepatoacutecitos

tumefeitos

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatilde

o

Alguns

hepatoacutecito

s

vacuolizad

os

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

neutrofiacutelico

focal

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s e infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

neutrofiacutelico

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

RINS

Leve

congestatildeo

e

infiltrado

inflamatoacuter

io

mononucl

ear focal

Moderada

congestatildeo e

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

---

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

--- ---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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31

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a

1 Continua

GRUPO IV (Glutaraldeiacutedo 1)

SUB- GRUPO IVa (7dias) SUB- GRUPO IVb (14dias) SUB- GRUPO IVc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve

congestatilde

o

--- Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo --- ---

Leve

congestatildeo e

hematopoie

se

extramedula

r

---

Hematopoie

se

extramedula

r

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatilde

o

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecit

os

vacuoliz

ados

Leve

congestatildeo

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

---

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizado

s

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatilde

o e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

RINS

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s e

infiltrado

inflamat

oacuterio

mononuc

lear focal

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasma

eosinofiacutelico

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

--- ---

Leve

congestatilde

o e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeita

s

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclea

r focal

Leve

congestatildeo

e algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

com

citoplasm

a

eosinofiacutelic

o

---

Algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

Leve

congestatildeo e

algumas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo ---

32

Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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Quadro 3 ndash Avaliaccedilatildeo microscoacutepica de camundongos (Mus musculus) submetidos a implantes de pericaacuterdio bovino tratado com Glutaraldeiacutedo a 15

GRUPO V (Glutaraldeiacutedo 15)

SUB- GRUPO Va (7dias) SUB- GRUPO Vb (14dias) SUB- GRUPO Vc (30dias)

A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5 A1 A2 A3 A4 A5

BACcedilO Leve congestatildeo

e

hemossiderose

--- Leve congestatildeo Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

e

hemossider

ose

--- Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

FIacuteGADO

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

tumefeitos

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

e infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Leve

congestatildeo e

alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

---

Leve congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizados

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Moderada

congestatildeo

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

Leve

congestatildeo

e alguns

hepatoacutecitos

vacuolizad

os

--- ---

RINS

Hemossiderose

e poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve congestatildeo

Poucas ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

--- Leve

congestatildeo --- --- ---

Leve

congestatildeo

Leve

congestatildeo

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

Leve

congestatildeo

e infiltrado

inflamatoacuteri

o

mononucle

ar focal

---

Leve

congestatildeo e

infiltrado

inflamatoacuterio

mononuclear

focal

Poucas

ceacutelulas

epiteliais

tubulares

tumefeitas

33

5 DISCUSSAtildeO

Os estudos sobre biocompatibilidade de membranas bioloacutegicas vecircm utilizando

principalmente o rato Wistar como animal de experimentaccedilatildeo (OLIVER et al 1980

ADLINGTON et al 1992 PINTO et al 1993 BURUGAPALLI et al 2004 HADDAD

FILHO et al 2004 COSTA et al 2005 ALKAN et al 2006) devido agrave praticidade de

manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

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COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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5 DISCUSSAtildeO

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manutenccedilatildeo anestesia e execuccedilatildeo de procedimentos ciruacutergicos No presente trabalho a

facilidade de obtenccedilatildeo de camundongos em nossa instituiccedilatildeo determinou a escolha desta

espeacutecie e os resultados de praticidade de execuccedilatildeo das teacutecnicas anesteacutesicas e ciruacutergicas bem

como a evoluccedilatildeo cliacutenica favoraacutevel dos animais demonstraram adequaccedilatildeo do modelo

experimental

Durante a execuccedilatildeo da teacutecnica ciruacutergica houve sempre a preocupaccedilatildeo de realizar-se a

implantaccedilatildeo do pericaacuterdio bovino em uma regiatildeo do abdome onde houvesse menor

movimentaccedilatildeo para reduzir-se as chances de deiscecircncia de sutura e ateacute uma possiacutevel

eventraccedilatildeo atraveacutes do siacutetio de implantaccedilatildeo fato que natildeo foi observado em nenhum dos

animais As dimensotildees da falha produzida na parede abdominal foram adequadas apesar de

demandarem instrumental ciruacutergico e manipulaccedilatildeo delicados e o fragmento de pericaacuterdio

possuindo tamanho maior que a falha permitiu preenchimento da aacuterea lesada uma vez que a

retraccedilatildeo da musculatura aumentava bastante o tamanho do recorte na parede

O tempo para execuccedilatildeo da cirurgia de aproximadamente 45 minutos foi apropriado agraves

condiccedilotildees anesteacutesicas uma vez que na maioria dos animais a primeira injeccedilatildeo anesteacutesica foi

suficiente e o tempo de recuperaccedilatildeo da anestesia (em torno de uma hora e trinta minutos) foi

tambeacutem considerado conveniente

Natildeo foram encontrados na literatura trabalhos que relacionassem a possiacutevel toxicidade

sistecircmica sobre viacutesceras abdominais devido ao uso do glutaraldeiacutedo e do glicerol para

preservaccedilatildeo de membranas bioloacutegicas implantadas cirurgicamente

Tanto o glicerol na concentraccedilatildeo de 98 quanto as diversas concentraccedilotildees (0625 10

e 15) de glutaraldeiacutedo utilizadas como conservantes de pericaacuterdio bovino que foi

implantado na parede abdominal dos 60 camundongos utilizados em nosso estudo natildeo

produziram lesotildees macro ou microscoacutepicas que permitissem uma inferecircncia sobre o efeito

toacutexico dessas substacircncias sobre o fiacutegado baccedilo e rim de todos esses animais

34

A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

medicina veterinaacuteria (INATOMI et al 1980 DALECK et al 1988 DALECK et al 1992

COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

38

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A ocorrecircncia de hematopoiese extramedular caracterizada pela presenccedila de grandes

ceacutelulas multinucleadas (megacarioacutecitos e megacarioblastos) observadas no baccedilo de todos os

animais do experimento foram inclusive observadas nos baccedilos dos cinco animais do grupo

controle o que portanto natildeo pode ser relacionado ao efeito das substacircncias conservantes

utilizadas

A presenccedila de fiacutegados amarelados no aspecto macroscoacutepico e com vacuolizaccedilatildeo no

citoplasma de hepatoacutecitos em distribuiccedilatildeo aleatoacuteria foi observada em camundongos

implantados e natildeo implantados e pode estar relacionada a reservas nutricionais de glicogecircnio

eou lipiacutedeos

Segundo Coelho et al (1996) a administraccedilatildeo de glicerol 50 na dose 10mLKg-1

induziu rabdomioacutelise em ratos apoacutes 24 horas observando insuficiecircncia renal aguda

mioglobinuacuterica e lesatildeo hepaacutetica Martim et al (2007) em experimentos com ratos Wistar

machos adultos induziram rabdomioacutelise e consequente lesatildeo renal aguda (LRA) pela

administraccedilatildeo muscular de glicerol 50 (6mLkg metade em cada regiatildeo femural) a fim de

testar a funccedilatildeo protetora das sementes de uva (Vitis vinifera) sobre os rins Sabe-se que a LRA

por nefrose mioglobinuacuterica eacute causada pela destruiccedilatildeo dos tuacutebulos renais decorrente da

presenccedila de cilindros formados pelo pigmento heme pela vasoconstriccedilatildeo renal (lesatildeo

isquecircmica) pela toxicidade direta desse pigmento pelo estresse oxidativo sobre as ceacutelulas

tubulares renais e pelos mecanismos interrelacionados (PALLER 1988 ZAGER 1996) Nos

rins de todos os 15 camundongos que receberam implantes de pericaacuterdio bovino tratados com

glicerol a 98 no presente trabalho natildeo foram encontradas lesotildees renais de qualquer

natureza que pudessem causar diminuiccedilatildeo ou perda da funccedilatildeo renal o que se justifica pela

provaacutevel diferenccedila de absorccedilatildeo do glicerol em relaccedilatildeo aos trabalhos de Coelho et al (1996) e

Martim et al (2007) uma vez que estes autores aplicaram a substacircncia por via muscular

mesmo que em menor concentraccedilatildeo

Cabe ainda ressaltar que os pericaacuterdios utilizados no implante da parede abdominal

dos camundongos foram submetidos a dez lavagens sucessivas com soluccedilatildeo fisioloacutegica o que

reduz ainda mais a possibilidade de produccedilatildeo de lesotildees musculares e consequumlente

rabdomioacutelise Costa (2009) que utilizou os mesmos camundongos dos nossos experimentos

natildeo observou rabdomioacutelise no local do implante em nenhum dos animais nem mesmo com a

concentraccedilatildeo de 15 de glutaraldeiacutedo que foi capaz de produzir citotoxidade exarcebada

levando a destruiccedilatildeo celular sem regeneraccedilatildeo muscular abdominal

35

As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

1990 CHAUVAUD et al 1991 PIRES et al 1999 YAMATOGI et al 2005)

A utilizaccedilatildeo da glicerina como conservadora de tecidos bioloacutegicos eacute muito difundida na

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COSTA NETO et al 1999 RODASKI et al 2002) Seus efeitos antibacterianos satildeo

considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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As vantagens atribuiacutedas ao pericaacuterdio bovino em relaccedilatildeo a ser uma membrana

acessiacutevel (ALVARENGA 1992 YAMATOGI et al 2005) foram comprovadas neste

experimento uma vez que pocircde ser obtida sem custos e com seguranccedila em abatedouro com

inspeccedilatildeo estadual Seu tratamento e manutenccedilatildeo com glicerina e glutaraldeiacutedo foram

considerados de baixo custo e faacutecil implementaccedilatildeo Outras vantagens como elevada

resistecircncia a forccedilas fiacutesicas e estabilidade bioquiacutemica foram descritas na literatura (IONESCU

et al 1979 SANTILLAN-DOHERTY et al 1995 ANSON amp MARCHAND 1996 HOLT

1970 apud COVARRUBIAS et al 2005) o que vem tornando o pericaacuterdio bovino a

membrana bioloacutegica ou bioproacutetese de escolha para maioria dos reparos ciruacutergicos (BRAILE

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considerados desde os trabalhos de Pigossi (1967) sem entretanto ter sido questionada sua

accedilatildeo esterilizante em relaccedilatildeo a partiacuteculas virais ateacute o trabalho de Coronado et al (2000) no

qual 98 dos felinos com enxertos homoacutelogos de metatarsos conservados em glicerina 98

apresentaram positividade para o viacuterus da Leucemia Felina sabendo-se que antes da

implantaccedilatildeo oacutessea esses animais eram negativos e que os metatarsos foram retirados de

animais soropositivos concluindo-se que a glicerina 98 natildeo eacute capaz de inativar o viacuterus da

FeLV

Trani et al (2008) tambeacutem verificaram a ocorrecircncia de viacuterus raacutebico em 50 das

amostras positivas de pericaacuterdio de camundongos apoacutes conservaccedilatildeo em glicerina 98 por 30

dias No mesmo experimento os autores obtiveram positividade tambeacutem para pericaacuterdios

tratados com glutaraldeiacutedo 0625 que eacute uma concentraccedilatildeo considerada segura em vaacuterios

estudos experimentais e descriccedilotildees de utilizaccedilatildeo cliacutenica Estes achados motivaram a

continuidade dos estudos estando o presente trabalho inserido neste processo

Concentraccedilotildees de glicerina e glutaraldeiacutedo semelhantes agraves utilizadas neste experimento

foram testadas por Costa (2009) quanto agraves reaccedilotildees locais e incorporaccedilatildeo dos implantes O

tratamento dos pericaacuterdios com soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo 15 mostrou elevada toxicidade no

local do implante o que entretanto natildeo foi equivalente aos achados sistecircmicos nas

observaccedilotildees deste estudo Este fato deve estar relacionado a uma baixa absorccedilatildeo sanguiacutenea

incapaz de promover efeitos sistecircmicos nos oacutergatildeos pesquisados Ainda considera-se que os

resultados obtidos no presente trabalho reforccedilam a seguranccedila de utilizaccedilatildeo das concentraccedilotildees

36

entre 0625 e 1 de glutaraldeiacutedo quanto agrave sua biocompatibilidade no tratamento de

pericaacuterdios bovinos

37

6 CONCLUSAtildeO

Natildeo se observaram lesotildees macroscoacutepicas ou histoloacutegicas no rim fiacutegado e baccedilo dos 60

camundongos implantados com pericaacuterdio bovino conservados com glicerol a 98 e

glutaraldeiacutedo a 0625 10 e 15 que pudessem estar associadas aos efeitos toacutexicos dessas

substacircncias conservadoras

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