Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas...
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Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Prof. Marcos Túlio Oliveira
Depto. Tecnologia
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Green Fluorescent Protein (GFP)
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Green Fluorescent Protein (GFP)
S65T – aumento de fluorescência e
fotoestabilidade
F64L – melhor atividade a 37°C
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Green Fluorescent Protein (GFP)
S65T – aumento de fluorescência e
fotoestabilidade
F64L – melhor atividade a 37°C
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Green Fluorescent Protein (GFP)
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
GFP
BFP (Y66H, Y145F, H148G)
CFP (Y66W, Y145A, H148D)
YFP (T203Y)
RFP, etc.
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
The Big Bang Theory
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Engenharia de Proteínas – 2017
Ciências Biológicas – FCAV/UNESP
Terskikh et al. Science 2000;290:1585-1588
Laker et al. J. Biol. Chem. 2014;289:12005-12015
Disciplina de Engenharia de Proteínas
Curso de Ciências Biológicas
2º Semestre de 2017
Aula 1: Aminoácidos, Peptídeos
e Proteínas (Cap. 3-5, Lehninger 4ª Edição)
Prof. Marcos Túlio de Oliveira [email protected]
Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal
Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”
Proteínas
Grande variedade:
diferentes tipos
de poucos aminoácidos a polímeros muito extensos
enorme diversidade de funções biológicas
a informação genética é expressa na forma de proteína
Proteínas
Aminoácidos
Aminoácidos
Classificação baseada no grupo R:
Apolares, alifáticos (hidrofóbicos)
Aromáticos (hidrofóbicos)
Polares, não-carregados
Carregados positivamente
Carregados negativamente
Aminoácidos
Apolares, alifáticos (hidrofóbicos)
Aminoácidos
Aromáticos (hidrofóbicos)
Aminoácidos Polares, não carregados
Aminoácidos
Carregados positivamente Carregados
negativamente
Aminoácidos Além daqueles 20...
Aminoácidos Bases ou ácidos?
Aminoácidos Curvas de titulação
Aminoácidos Curvas de titulação
pKa (pK1 ou pK2) – equilíbrio
entre a forma protonada e
desprotonada;
mede a tendência de um grupo de
oferecer um próton – quanto mais
baixo o pKa, mais facilmente o
próton é liberado.
Aminoácidos Curvas de titulação
Aminoácidos Curvas de titulação
pI (ponto isoelétrico) – carga
elétrica líquida é zero.
pH acima do pI – carregado
negativamente
pH abaixo do pI – carregado
positivamente
aminoácido + aminoácido + aminoácido
= peptídeo (proteína)
Peptídeos – cadeias de aminoácidos
Oligopeptídeos
Polipeptídeos
Proteínas
Peptídeos
Peptídeos
Proteínas
Proteínas
Proteínas
Proteínas A ligação peptídica é rígida e planar
Proteínas
A ligação peptídica é rígida e planar
Proteínas
Proteínas
Estrutura secundária:
Conformação local de alguma parte do polipeptídeo
Padrões de enovelamentos mais regulares do esqueleto
polipeptídico
α-hélices conformação β dobras β
Proteínas
Estrutura secundária: α-helices
Proteínas
Estrutura secundária: folhas β
Proteínas
Estrutura secundária: dobras β
Proteínas
Estrutura secundária: resumo
Proteínas
Estrutura terciária e quaternária
Proteínas Fibrosas
queratina
Proteínas Fibrosas
Proteínas
Fibrosas
colágeno
G-X-Y
Prolina ou Hidroxiprolina
Proteínas
Fibrosas
colágeno
Proteínas
Fibrosas
escorbuto
Proteínas Fibrosas
fibroína da seda
Proteínas Fibrosas
resumo
Proteínas Globulares
Proteínas Globulares
mioglobina
Proteínas Globulares
protoporfirina + Fe2+ = heme
Proteínas Globulares
mioglobina
Proteínas Globulares
Proteínas Globulares
motivos
estruturais
Proteínas Globulares
motivos
estruturais
Estrutura Quaternária
múltiplas subunidades = multímero
poucas subunidades = oligômero
dímeros, trímeros, tetrâmeros, etc...
Estrutura Quaternária
simetria rotacional X helicoidal
Estrutura Quaternária
simetria rotacional
Desnaturação Protéica
Renaturação Protéica
Problemas de Dobramento – Prion
Interação Proteína-Ligante
Interação Proteína-Ligante
mioglobina
Interação Proteína-Ligante
Interação Proteína-Ligante
concentração do ligante
porcentagem dos sítios de ligação ocupados
concentração constante da proteína
Interação Proteína-Ligante
Interação Proteína-Ligante
a mioglobina e o
oxigênio
Interação Proteína-Ligante
a mioglobina e o
oxigênio
Complete a frase: um Kd alto indica _________________
Interação Proteína-Ligante
Interação Proteína-Ligante
Interação Proteína-
Ligante
Interação Proteína-Ligante
hemoglobina
(desoxihemoglobina)
Interação Proteína-Ligante
hemoglobina
(desoxihemoglobina)
Interação Proteína-
Ligante
ligação cooperativa
Interação Proteína-Ligante
ligação cooperativa
Interação Proteína-Ligante
afinidade dependente de pH
Anemia falciforme
Disciplina de Engenharia de Proteínas
Curso de Ciências Biológicas
2º Semestre de 2017
Próxima aula: Purificação de Proteínas e
Cristalografia de Raio-X