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EFEITO DO GERADOR DE ALTA FREQUNCIA NO CRESCIMENTO BACTERIANO IN VITRO

Maria da Glria Karan Marquetti1; Joo Afonso Ruaro2, Andersom Ricardo Frz3

1 Faculdade Anglo-Americano (FAA).

2 Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN), Faculdade de Cincias da

Sade do Trairi (FACISA). 3 Universidade Estadual do Centro-Oeste (UNICENTRO).

RESUMO Introduo: O gerador de alta frequncia um recurso que vem sendo utilizado na fisioterapia como auxlio no tratamento de leses cutneas, por possuir efeito cicatrizante, trmico, analgsico e anti-inflamatrio, os quais so importantes para o tratamento de leses da pele. Apresenta tambm ao bactericida e antissptica, sendo utilizado em leses dermatolgicas infectadas por bactrias e fungos. Objetivo: Verificar o efeito bactericida do gerador de alta frequncia sobre a cultura de Staphylococcus aureus. Tipo de estudo: Estudo analtico experimental in vitro. Mtodo: 36 placas de Petri foram inoculadas com S. aureus e divididas em 6 grupos: 4 tratados (G5-15, G5-10, G3-15 e G3-10) e 2 controles (GC3 e GC5). O G5-15 e o G5-10 foram tratados 5 vezes por semana durante 15 e 10 minutos respectivamente; j o G3-15 e o G3-10 foram tratados 3 vezes por semana durante 15 e 10 minutos respectivamente. No tratamento foi utilizado o gerador de alta frequncia na intensidade 10, tcnica de faiscamento com eletrodo standard. A proliferao ou no de colnias de bactrias foram submetidas ao teste exato de Fisher (p

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eletromagnticas pelo ar h a formao de oznio (O3) na superfcie do eletrodo1,4,5. O O3 estimula a produo de citocinas, ativa os linfcitos T, melhora a

oxigenao e o metabolismo celular atravs da vasodilatao e produz um aumento da resposta enzimtica antioxidativa, contribuindo, assim, de forma efetiva no tratamento de leses cutneas causadas por diferentes microrganismos1,6,7.

As bactrias so os organismos mais sensveis ao O3, o que garante a sua eficcia bactericida. Ele atua primeiramente sobre a membrana bacteriana e causa a perda da atividade enzimtica celular normal, a partir da ocorre uma mudana na permeabilidade da clula que leva a morte da bactria. Este processo ocorre associado lise celular4.

O Staphylococcus aureus (S. aureus) uma bactria do grupo dos cocos gram-positivos, encontrada em pessoas saudveis, principalmente na pele e nas fossas nasais. Porm, pode causar infeco em leses cutneas, alm de causar infeces graves como pneumonia, meningite, endocardite, septicemia e at mesmo infeces sistmicas, podendo levar a morte. O S. aureus responsvel por 30% das infeces hospitalares e piognicas8,9, e as infeces causadas por esta bactria apresentam alto ndice de morbidade e mortalidade tanto em casos hospitalares como domiciliares. um microorganismo bastante resistente, que possui a caracterstica de polimorfismo, o que dificulta o controle da infeco e faz com que os antibiticos antes utilizados para combat-la hoje no sejam to eficazes, dificultando o seu tratamento10.

O aumento da resistncia das bactrias s drogas antibiticas gera a necessidade de desenvolver novos meios bacteriostticos e bactericidas que colaborem com a teraputica de indivduos infectados. No entanto, h poucos trabalhos que forneam dados prticos sobre o efeito bactericida da alta frequncia. Assim, o objetivo desse trabalho foi verificar se o gerador de alta frequncia possui efeito bactericida em culturas de S. aureus.

MTODOS Esta pesquisa, realizada no Laboratrio de Microbiologia da Faculdade Anglo-Americano (Foz do Iguau, Paran), caracteriza-se como um estudo analtico experimental in vitro, com uso do gerador de alta frequncia em cultura de S. aureus.

Inicialmente foi preparado Agar Manitol como meio de cultura, utilizando-se 111 g para 1000 mL de gua deionizada estril. Os contedos foram levados autoclave at atingir 121C. Ento a autoclave foi regulada em temperatura mdia, por 15 minutos.

Aps ser retirado da autoclave, o Agar, em estado lquido, foi distribudo em 36 placas de Petri, estreis e descartveis, de 5 cm de dimetro. Essa distribuio ocorreu dentro de uma capela com luz ultravioleta para evitar contaminao. Depois de esfriar e atingir a forma slida, as placas foram fechadas e colocadas em estufa por 24 horas, para se avaliar a esterilidade da placa.

Posteriormente, foi inoculada a bactria S. aureus dentro da capela devidamente esterilizada. A inoculao foi realizada na forma estriada central, utilizando uma ala de 1 microlitro descartvel estril.

As placas de Petri permaneceram armazenadas na estufa a 35C, simulando a temperatura da pele, em um recipiente com gaze e gua deionizada para manter o ambiente mido. Aps 48 horas da inoculao as placas foram fotografadas e foi iniciado o tratamento proposto.

As 36 placas de Petri inoculadas com S. aureus foram divididas em 6 grupos: Quatro grupos foram tratados (G5-15, G5-10, G3-15 e G3-10). O G5-15 e o

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G5-10 foram tratados 5 vezes por semana durante 15 e 10 minutos respectivamente, enquanto o G3-15 e o G3-10, 3 vezes por semana durante 15 e 10 minutos respectivamente. Todos os grupos tratados receberam 15 intervenes do uso do aparelho de alta frequncia.

Dois grupos foram utilizados como controle (GC5 e GC3), no recebendo qualquer interveno. O GC5 foi utilizado para acompanhar os grupos tratados 5 vezes na semana, enquanto o GC3 para os tratados 3 vezes na semana.

Para o procedimento de interveno proposto, foi utilizado o aparelho gerador de alta frequncia modelo Plus, fabricado pela empresa Tone Derm, com o eletrodo standard, com gs neon em seu interior. Aplicou-se a tcnica de faiscamento, na qual o eletrodo posicionado a milmetros de distncia da placa, causando a formao de fascas, com intensidade 10, a qual representa uma tenso de 100% para formao de O32.

Aps a 15 aplicao do procedimento experimental foram realizadas repicagens em novas placas estreis, repetindo os procedimentos de esterilizao. Estas repicagens tiveram a finalidade de verificar a proliferao das bactrias, e assim observar o efeito do aparelho sobre as culturas. Aps 48 horas estas novas placas foram observadas e fotografadas para verificar a ocorrncia de proliferao das bactrias.

Para a anlise foi considerado a proliferao ou no de colnias de bactrias. Os dados foram agrupados aos pares e submetidos ao teste exato de Fisher do programa GraphPad InStat. Considerou-se o nvel de significncia de 5% (p

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G3-15 X GC3 0,1818 G3-10 X GC3 0,0606 G5-15 X G5-10 0,0606 G3-15 X G3-10 1,0000 G5-15 X G3-15 0,1818 G5-10 X G3-10 0,5671 *significativo

DISCUSSO Sabe-se que durante o uso do gerador de alta frequncia existe a formao

de O3 na superfcie de seu eletrodo1,4,5. O O3 tem sido utilizado para uma ampla gama de tratamentos, como por exemplo em disfunes da coluna11, na preveno de complicaes ps-operatrias12,13, estimular o reaparo tecidual13,14, ou ainda como coadjuvante no tratamento de enfisema pulmonar15, sempre obtendo respostas positivas.

H tambm que se relatar que o O3 pode ter efeitos nocivos, pois ainda no h tratamentos totalmente padronizados nem avaliados toxicologicamente16. Alm disso, tambm no h consenso sobre a forma de aplicao do O3, pois observa-se desde a aplicao direta do gs (ozonoterapia)14, uso de gua ozonizada7 ou a associao do O3 com leos (leo ozonizado)14.

Outrossim, o que tem sido observado como seu maior espectro de ao o seu efeito bactericida e/ou fungicida, como revelaram os estudos de Biaoszewski et al.17 e Polydorou et al.18, inclusive associado ao oxignio hiperbrico19. Entretanto, este efeito ainda pobremente ilustrado, principalmente quando uso do O3 atribudo ao uso do gerador de alta frequncia, principal objetivo da presente pesquisa.

Nas pesquisas com seres humanos, o uso do gerador de alta frequncia apresentou resultados satisfatrios em lceras de presso5. Tambm foi observada atividade fungicida como tratamento complementar aos frmacos convencionais para tratamento das onicomicoses20 e para tratamento de verruga ungueal4. Para verruga ungueal foi aplicado um protocolo de 3 intervenes dirias, de 15 minutos cada, durante 3 meses4, enquanto para as onicomicoses o tratamento foi por 12 meses, mas sem descrio do protocolo20.

J nas pesquisas com modelos animais, o estudo com o gerador de alta frequncia demonstrou ser efetivo na reparao de feridas cutneas em modelos experimentais em ratos, quando aplicado com uma intensidade de 80%, por 120 segundos, durante 7 dias21. Com o uso direto do O3, um estudo experimental com coelhos demonstrou seu efeito bactericida, reduzindo a reao inflamatria pela reduo da carga bacteriana da endoftalmite causada por S. epidermidis aps aplicao intravtrea de soluo salina ozonizada22.

Outro estudo que demonstrou o efeito bactericida do O3 descreveu o uso deste gs como agente para desinfeco de gua, o qual agiu sobre bactrias, fungos e vrus, alm de ter reduzido totalmente a proliferao de S. aureus7, o que est de acordo parcial com os resultados do presente estudo.

Alm deste, em um modelo experimental in vitro, para avaliar o efeito de gases sobre o crescimento bacteriano, o O3 demonstrou-se superior para inibir este crescimento quando comparado a outros gases23.

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J o seu efeito fungicida in vitro pode ser observado em cultura de Candida tropicalis, as quais foram submetidas a uma exposio da alta frequncia com a tcnica de faiscamento, utilizando o mesmo modelo do equipamento gerador da presente pesquisa, mas com intensidade 8. Os autores observaram uma inibio no crescimento em 90% das placas, quando expostas 5 minutos por dia1. Entretanto, estes resultados no permitem a comparao com a presente pesquisa, pois os microrganismos utilizados foram distintos.

Na literatura os resultados sobre o uso do gerador de alta frequncia e do oznio limitam-se aos estudos in vitro ou com modelos experimentais ou estudos de caso. Entretanto, pode-se observar que, quando se trata de estudos in vitro estes resultados aparecem em poucas, e at mesmo em uma nica interveno1,22,23. Enquanto em seres humanos, principalmente nas leses fngicas, so necessrios meses de aplicao4,20.

Na presente pesquisa o nico grupo que apresentou resultado bactericida significativo foi o grupo G5-15. Tal fato pode ser justificado por este ser o grupo que recebeu a interveno com menor intervalo entre as abordagens associada ao maior tempo dirio de aplicao. Porm, outro fator observado posteriormente, no nico trabalho que aplicou o gerador de alta frequncia in vitro1, foi o uso de uma folha de papel alumnio abaixo da placa de Petri durante a aplicao do gerador de alta frequncia. Segundo os autores1 o uso do papel alumnio melhora a condutibilidade, j que o vidro no um bom condutor eltrico, assemelhando-se, assim, a pele.

CONCLUSES O aparelho de alta frequncia apresentou efeito bactericida em cultura de S.

aureus in vitro aps 15 intervenes, em uma frequncia semanal de 5 aplicaes, com tempo de exposio diria de 15 minutos.

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