CROMATOGRAFIA POR AFINIDADE

DEFINIÇÃO

“Cromatografia de Afinidade envolve a ligação

covalente de um reagente, denominado ligante de

afinidade, a um suporte sólido.”1

1 – Holler, Skoog, Crouch. Princípios de Análise Instrumental, 6ª edição, ARTMED

EDITORA S. A., São Paulo, Brasil – 2009. página - 862

COMO FUNCIONA

A fase estacionária para esta cromatografia é um

sólido, como a agarose ou microesferas de vidro, no

qual é imobilizado o ligante de afinidade.

O ligante pode ser de

várias naturezas

desde, anticorpos,

antigénios,

enzimas, substratos,

etc..

COMO FUNCIONA

A fase móvel vai desempenhar dois papeis distintos. 1 – Permitir uma forte ligação das moléculas do analito

ao ligante. 2 – Remover as espécies indesejáveis e com o

enfraquecimento da ligação, molécula de analito – ligante fazer a eluição do analito em si.

COMO FUNCIONA

Em relação à segunda função esta pode ser feita com:

Mudança no Ph

Força iónica

Isto vai permitir alterar as condições da eluição durante

as duas fases do processo.

Este tipo de cromatografia tem como vantagem ser extraordinariamente seletiva.

Foram usadas primeiramente no isolamento rápido de biomoléculas durante um trabalho preparativo.