CARACTERIZACION DE FITOPATOGENOS Y EVALUACION DE BIOCONTROLES ENAJI TABASCO CAPSICUM FRUTESCENS (SOLANACEAE) EN ROZO, VALLE

Gustavo Adolfo Rodriguez SalazarUniversidad del Valle, Apartado Aereo 25360, Cali, Colombia.correo electronico: gustavo.rodriguez.salazar@correounivalle.edu.co

Celina Torres GonzalezUniversidad del Valle, Apartado Aereo 25360, Cali, Colombia.correo electronico: celina.torres@correounivalle.edu.co

RESUMEN

Capsicum frutescens es un arbusto perteneciente a la familia Solanaceae, de gran importanciaalimenticia, industrial y medicinal debido a la capsaicina, metabolito de gran potencial para eltratamiento contra el cancer. Esta planta presenta problemas fitosanitarios causados por hongos, consıntomas especıficos de manchas cloroticas que se controlan generalmente con agentes quımicos. Setomaron muestras de hojas de ajı Tabasco de la localidad de Rozo, y fueron procesadas y sembradasen papa-dextrosa-agar (PDA). De los microorganismos aislados y purificados en diferentes mediosde cultivo (PDA, agar avena y agar V8), se identificaron Alternaria alternata, Alternaria tenuis,Alternaria solani, dos morfoespecies de Colletotrichum gloeosporioides, dos morfoespecies deRhizoctonia solani y dos morfoespecies de Cercospora sp. Se realizaron pruebas de patogenicidaden hojas con heridas donde se inocularon fragmentos de micelio, lo que permitio validar que loshongos aislados eran causantes de lesiones foliares. Se evaluo la eficiencia de inhibicion de tresdosis (dosis recomendada, dosis media y dosis doble) de un producto comercial biologico a basede esporas de Bacillus subtilis comparado con un fungicida (Mancozeb). El mejor rendimientodel producto biologico se obtuvo al doble de la dosis recomendada. Las dos morfoespecies deCercospora, Alternaria solani y Rhizoctonia solani morfo 2 mostraron mayor susceptibilidad ante elinsumo biologico; Colletotrichum gloeosporioides y Alternaria alternata no presentaron diferenciasentre el fungicida y el producto biologico, lo que evidencio a B. subtilis como un tratamientoeficiente para el control de enfermedades en ajı tabasco.

Palabras clave: antagonismo, Bacillus subtilis, Capsicum frutescens, Mancozeb.

ABSTRACT

Capsicum frutescens is a bush belonging to the Solanaceae family, with great food, industrialand medical importance due to capsaicin, a metabolite of great potential for cancer treatment.This plant has phytosanitary problems caused by fungi, with specific symptoms of chlorotic spotswhich are usually controlled with chemical agents. Tabasco chili pepper’s leaf samples weretaken from the Rozo village, and were processed and plated on potato dextrose agar (PDA). Fromthe microorganisms isolated and purified in different culture media (PDA, oatmeal agar and V8agar), Alternaria alternata, Alternaria tenuis, Colletotrichum gloeosporioides, two morphospeciesof Rhizoctonia solani and two Cercospora sp. morphospecies, were identified. Pathogenicitytests were performed on leaves with wounds which were inoculated with mycelial fragments,allowing to validate that fungal isolates were the foliar lesions cause. Inhibition efficiency of

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three doses (recommended dose, half-dose and double dose) of a biological commercial productbased on Bacillus subtilis spores was evaluated and compared to a fungicide (Mancozeb). Thebest performance of the biological product was obtained at twice the recommended dose. The twoCercospora’s morphospecies, Alternaria solani and Rhizoctonia solani morpho-2, showed greatersusceptibility to the bio-input; Colletotrichium gloeosporioides y Alternaria alternata showed nodifference between the fungicide and the biological product, what pointed out B. subtilis as aneffective treatment for the control of Tabasco pepper diseases.

Key words: antagonism, Bacillus subtilis, Capsicum frutescens, Mancozeb.

INTRODUCCION

Capsicum frutescens es un arbusto dela familia Solanaceae, que presenta uncrecimiento hasta de dos metros de longitud,originario de las regiones tropicales ysubtropicales de America; sus usos seremontan a poblaciones indıgenas de estasareas, con reportes que datan de mas de 7000anos. Actualmente es un cultivo pantropical,encontrandose tambien en Asia y Africa.Su fruto es una baya color verde quecambia a amarillo, naranja o rojo brillante almadurar, es de importancia comercial porser usado en la dieta de muchos paıses,ademas de ser utilizado en la obtencionde colorantes, oleorresinas e insecticidasbiologicos (Fonnegra & Jimenez 2007).Tambien presenta usos medicinales debido ala produccion de compuestos que combatenla atonıa gastrointestinal y diarrea, otro usomedico es el metabolito secundario queproduce el fruto denominado capsaicina,el cual es analgesico. Estudios recientesdemuestran que este compuesto induce laapoptosis en varios celulas cancerıgenasincluidas piel, leucemia, colon, vejiga,hıgado, mama y prostata (Chow et al. 2007).Estas ultimas propiedades convierten a C.frutescens como una planta de gran usopara el hombre, no solo desde el punto devista alimentario, sino tambien con un granpotencial medico.

En esta investigacion se trabajo con lavariedad Tabasco que es susceptible a

enfermedades generalmente causadas porhongos y el grueso de sus estudios seencuentra en los paıses con mayor produccionde ajı. Estudios realizados en Aguascalientesy Zacatecas (Mexico) muestran la presenciade enfermedades endemicas y emergentesque tienen efecto desde el desarrollo de laplantula, hasta un estado maduro en el quese producen frutos, con altos porcentajesde mortalidad en el caso de pudricion de laraız, con un 90 % a nivel parcelario, mientrasque en otras enfermedades no existe unaestimacion sobre las perdidas directas oindirectas causadas a la planta. La pudricionde la raız se caracteriza por sıntomas comomarchitez, clorosis, defoliacion, perdidade estructuras reproductivas, necrosis deraıces, entre otras, y ha sido asociada a uncomplejo de microorganismos entre los quedestacan Phytophthora spp. Fusarium spp.,Rhizoctonia spp., Pythium spp. y Verticilliumspp., los cuales pueden presentarseindividualmente o en combinacion en unamisma planta (Velasquez & Medina 2003;citado por Velasquez-Valle & Amador).La mayorıa de estos patogenos producenestructuras de resistencia (esclerocios,oosporas o clamidiosporas) lo que asegurasu supervivencia en el suelo por periodosprolongados.

En la fase de plantula segun Velasquez (1991)citado por Velasquez-Valle & Amador (2007),el 75 % de los productores consideraron aldamping-off como el problema principal enesta fase de desarrollo, causada por Fusarium

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spp. y Rhizoctonia spp., aunque tambien sedetecto Alternaria en follaje con sıntoma detizon foliar; estos hongos han sido reportadoscomo responsables de la enfermedad a nivelmundial segun Black et al. (1991) y Goldberg(1995) citado por Velasquez-Valle & Amador(2007).

Otra enfermedad reportada en los estadosmencionados es la Cenilla polvorienta,causada por Oidiopsis spp. (tel. Leveillulataurica), la cual tambien ha sido reportadoen diversos paıses del mundo, no solo comopatogeno del genero Capsicum, sino tambienen otros generos y familias de plantas.Este hongo fue reportado recientementecomo nuevo patogeno de C. frutescens paraArgentina, en la provincia de Mendozapor Soto & Lucero 2004. Ademas de loshongos fitopatogenos descritos anteriormente,tambien se ha reportado a Sclerotiniasclerotiorum y Sclerotium rolfsii comoagentes causales de enfermedades en Mexico(Guigon & Gonzales 2001).

En los ultimos anos, Colombia haincrementado las areas sembradas con estaespecie por ser promisoria para exportacion,pero donde se han establecido los cultivosse han presentado problemas fitosanitarios,en gran medida por las condicionesclimaticas de la region que permite laproliferacion de estos. Estudios realizados enla vereda Villanueva municipio de Popayanpor Flor et al. (2007), demostraron quela presencia de enfermedades varıa deacuerdo a la variedad de ajı y el usode agroquımicos ayudo de cierta maneraal control de enfermedades. Por su parteToro (1999) en un estudio fitosanitario entres localidades de Colombia: Santuario yCerritos (Risaralda), Quimbaya (Quindıo)y Caicedonia (Valle del Cauca), reporto lapresencia de enfermedades fungosas comoantracnosis, causada por Colletotrichumcapsici; mancha de las hojas (Cercosporacapsici); Quemazon o Anublo (Phytophthora

capsici); Pudricion y marchitamiento(Fusarium sp.); Damping-off o Mal delTalluelo (Pythium spp. y Rhizoctonia solani);Mildeo polvoso (Leveillula taurica) yla mancha foliar grisacea causada porStemphylium solani.

Otro problema, pero ya relacionado conel manejo convencional que se le da altratamiento de las enfermedades, curativoo preventivo, es el uso de agroquımicos quepueden degradar el suelo y ser una fuenteimportante de contaminacion no solo parael ambiente si no para el hombre por losgrados de toxicidad que estos presentan, loque hace prioritario la busqueda alternativade controles biologicos que sean amigablescon el ambiente, y pueden ayudar a laregeneracion del suelo.

En esta investigacion se evaluaron eidentificaron hongos presentes en lesionesde follaje de Capsicum frutescens en lalocalidad de Rozo, Valle del Cauca yse probo si la utilizacion de bioinsumospresentaban un control eficiente ante dichoshongos comparado con fungicidas usadosgeneralmente.

METODOS

Recoleccion y Procesamiento de Muestras

El trabajo en campo se llevo a cabo enla finca Alvaro Cuero, vereda Chambala,corregimiento de Rozo, Valle del Cauca,con altitud de 974 m.s.n.m. Se realizo unmuestreo sistematico en zigzag en el centrodel cultivo, donde se tomaron muestras dehojas que presentaron manchas tıpicas delesiones causadas por fitopatogenos fungicos,se descarto aquellas que fueran aparentementeproducto de estres fisiologico de un cultivode 45 dıas de edad.

Las muestras se procesaron en el Laboratorio

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de Investigaciones Microbiologicas (LIM) delDepartamento de Biologıa de la Universidaddel Valle. Las hojas tomadas se lavaron conagua destilada esteril durante treinta segundos,luego se desinfestaron con hipoclorito al1 % durante un minuto. Posteriormente, seenjuagaron con agua destilada esteril porun minuto y secaron en papel absorbenteesteril para despues ser sembradas en agarPDA; pasados cuatro dıas y con la evidenciade crecimiento, se procedio al aislamiento,caracterizacion e identificacion medianteclaves dicotomicas de Barnett & Hunter(1999) y Watanabe (1999). Para garantizarla esporulacion de los microorganismosfungicos aislados, estos fueron sembrados enPDA, agar avena y agar V8.

Pruebas de patogenicidad

Se comprobo la condicion fitopatogena de losmicrorganismos identificados y que ademasfueran reportados en la literatura comoagentes causantes de lesiones en ajı; paraesto se utilizaron hojas que previamentese desinfestaron superficialmente conhipoclorito de sodio al 1 % durante un minutoy lavadas con agua destilada esteril, sobreestas se realizaron heridas y se deposito undisco de 0,8 cm de micelio. Las hojasinoculadas se colocaron en camaras humedasque consistıan en una caja petri con papelabsorbente humedecido con agua destiladaesteril, estas cajas se incubaron a temperaturaambiente.

Pruebas de antagonismos

Se evaluo el efecto inhibitorio de dosproductos biologicos, el primero consisteen una solucion de esporas de Trichodermaharzianum a 1 x 106 ufc/g y el segundo en unasolucion de esporas de Bacillus subtilis a 2 x108 ufc/g. Para cada tratamiento se utilizarontres dosis: recomendada por el fabricante delproducto, que consistıa para una caja de Petride 9 cm de diametro una dosis de 0.000315 gpara la solucion de T. harzianum y 0.000126

g para la solucion de B. subtilis; la mitadde la dosis que para T. harzianum fue de0.000157 g y 0.000063 g para B. subtilis; eldoble de la dosis que para T. harzianum fuede 0.00063 g y 0.000252 g para B. subtilis. Encada tratamiento se emplearon tres replicasy un blanco en donde no se empleaban losproductos biologicos, todos estos sembradosen PDA e incubados a 28oC. Se realizo unacomparacion con un fungicida de principioactivo Mancozeb para determinar la eficaciade los productos biologicos ante productosquımicos convencionales usados para elcontrol de hongos en cultivos, se empleo unaconcentracion de 0,001279 g que correspondea la recomendada por el fabricante delproducto. Se midio el porcentaje de inhibicionde crecimiento (PIC) mediante la ecuacion:

Se tuvo en cuenta el area de crecimientodel hongo, la cual fue calculada atreves delsoftware de analisis de imagenes ImageJ,desarrollado por el RSB y el NIMH; el cuala traves de una fotografıa con una escalametrica, usado en este caso un metro se pudocalcular el area del hongo. Las medicionesse realizaron a los tres, siete y catorcedıas, en donde se tomaba en cuenta parala comparacion la medida donde el blancopresentara el maximo crecimiento.

Se realizo un analisis de varianza ANOVAmultifactorial, con dos factores (dosis delproducto y especies); al determinar cualdosis presentaba mejor rendimiento, secomparo esta con el fungicida mediante unanalisis de varianza.

RESULTADOS

Se encontraron tres patrones de manchas enel limbo de las hojas (tabla 1), la distribucionde estas se hallaba cercana a las nervadurassecundarias.

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Tabla 1. Descripcion de sintomatologıa en hojas de plantulas de Ajı tabasco con 45 dıas de edad, endonde se observan tres patrones de manchas cerca de las nervaduras secundarias.

Muestra Sintomatologıa

Manchas claras de bordedefinido, presentan halooscuro en su interior con

centro claro

Mancha marron de bordeirregular con centro y halo

claro alrededor distribuida enel limbo de la hoja

Manchas cremas a blancascon borde definido y halo

claro alrededor, se encuentraen toda la hoja

Del primer patron de manchas descrito seaislaron dos hongos del genero Alternaria(Alternaria alternata y Alternaria tenuis)y una morfoespecie de Colletotrichumgloeosporioides. En el segunda patronse encontraron dos morfoespecies de

Rhizoctonia solani. Del tercer patron sehallaron cuatro hongos, Alternaria solani,dos morfoespecies de Cercospora sp.y una morfoespecie de Colletotrichumgloeosporioides (tabla 2).

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Tabla 2. Descripcion de hongos aislados e identificados en follaje de Ajı Tabasco.

Patogeno Descripcion Macro Descripcion Micro

Alternariaalternata

Radial habano concırculos oscuros almadurar

Afelpado habano,al madurar se tornablanco

Conidias catenuladascolor marron conseptos

Alternariatenuis

Liso oscuroAfelpado marron queal madurar se tornaun marron mas claro

Conidias catenuladasacropetalas colormarron, con septoslongitudinales ytransversales

Colletotrichumgloeosporioides

morfo 1

Radial amarillo, enel centro naranja,reflejo del anverso

Granular de micelioblanco que seoscurece al madurary esporas naranja

Hifas hialinas conconidias hialinaslibres

Rhizoctoniasolani

morfo 1

Liso oscuroAfelpado colornegro, con centrogris

Sin presencia deconidias, hifasseptadas marron conestrechamiento basalen hifas ramificadas,celulas monoloidesformadas

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Continuacion tabla 2Patogeno Descripcion Macro Descripcion Micro

Rhizoctoniasolani

morfo 2

Liso oscuroAfelpado marronoscuro, con centromarron claro

Sin presencia deconidias, hifasseptadas marron conestrechamiento basalen hifas ramificadas

Alternariasolani

Liso con formacionde un radio haciael borde, marronoscuro

Afelpado marronclaro formando unradio hacia el borde

Conidias marroncatenuladas

Colletotrichumgloeosporioides

morfo 2Liso blanco conamarillo hacia elcentro

Afelpado blanco,con esporulacionamarilla en el centro

Conidias hialinas

Cercosporasp. morfo 1

Liso habano Algodonoso blancoConidias filiformeshialinas

Cercosporasp. morfo 2

Liso blanco Algodonoso blancoConidias filiformeshialinas

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Las pruebas de patogenicidad resultaronpositivas para las tres especies de Alternaria,Colletotrichum gloeosporioides, las dosmorfoespecies de Rhizoctonia solani, yCercospora sp. A los quince dıas deevaluacion presentaron severidades distintas

(tabla 3), pero en general los mismossıntomas con clorosis que se extendıa porlas nervaduras primaria y secundaria, conmanchas similares a la sintomatologıa unoy tres. Alternaria tenuis presento mayorseveridad.

Tabla 3. Pruebas de patogenicidad de los hongos aislados en hojas de ajı.

Patogeno Descripcion

Alternaria alternata

Tejido necrotico ennervadura principal ysecundaria, clorosismarcada en cercade las nervadurassecundarias al igualque manchas conborde oscuro

Alternaria tenuis

Clorosis severaen casi toda lahoja, que va desdela base hasta elapice, nervadurassecundarias conoscurecimiento

Colletotrichumgloeosporioides

Clorosis quese extiendealrededor de lasnervaduras primaray secundarias, conmancha clara a unalado de estas

Rhizoctonia solanimorfo 1

Clorosis sobre lanervadura secundariacon manchas cerca aestas

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Continuacion tabla 3Patogeno Descripcion

Rhizoctonia solanimorfo 2

Clorosis quese extiende pornervaduras primaria,secundaria y terciaria

Alternaria solani

Necrosis ennervadura principaly secundarias conclorosis cerca a estas

Cercospora sp.

Necrosis ennervadura principaly secundarias conclorosis cerca a estas

En las pruebas de antagonismo, la solucionde esporas de Trichoderma harzianum nopresento crecimiento alguno, sin presencia deinhibicion.

Para la solucion de Bacillus subtilis cadaespecie aislada (tabla 2) presento patronesde PIC distintos para cada dosis de la

solucion de esporas de B. subtilis (figura1) con diferencias estadısticas significativas(P = 0,000000); los rangos de inhibicionfluctuaron entre el 7,51 % y el 77,38 %aproximadamente, en donde el mayorporcentaje de inhibicion se observo enRhizoctonia solani morfo 2 para la dosis dobledel producto.

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Figura 1. Inhibicion de crecimiento causada por Bacillus subtilis sobre los hongos aislados, medidoen porcentaje de inhibicion; el mayor porcentaje se observo en la dosis doble del producto sobreRhizoctonia solani, morfo 2 y el menor valor 7,5 % en la dosis doble del producto para Rhizoctoniasolani morfo 1.

Las especies de Alternaria alternata yCercospora sp. morfo 2, no presentarondiferencias significativas en los PIC paracada dosis con una inhibicion similar.Estadısticamente, la dosis Recomendada conun valor promedio de 34,66 % de inhibicionno presento diferencias significativas conrespecto a la dosis media con valor de32,16 % (P = 0,321493) y la doble convalor de 38,51 % (P = 0,080467), pero sise encontraron diferencias significativas entrela dosis media y la doble con valor de P= 0,001729, con un mayor porcentaje deinhibicion en esta ultima. Rhizoctonia solanimorfo 1 presento los menores valores de

inhibicion.

Las pruebas de antagonismo realizadas conel fungicida de principio activo Mancozeb,muestran respuestas de inhibicion diferentespor cada especie con un valor de P= 0,000044. Rhizoctonia solani morfo 1presento el mayor porcentaje de inhibicioncon un valor de 51,44 %, el de menor valorfue Alternaria solani con 4,76 %; Alternariatenuis no presento valor PIC, debido a queel hongo no crecio en el ensayo (figura 2).Alternaria alternata, morfo 1, Cercospora sp.morfo 1 y Cercospora sp. morfo 2 presentaronPIC semejantes sin diferencias significativas.

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Figura 2. Efecto de Mancozeb en el porcentaje de inhibicion de crecimiento en cada hongo aislado,donde Alternaria solani presento el valor mas bajo 4,76 %, caso contrario de Rhizoctonia solanimorfo 1 que presento el mayor valor 51,44 %.

Al contrastar el fungicida y el insumobiologico a la concentracion con mejorrendimiento (doble) para el control demicrohongos patogenos, Colletotrichumgloesporiodes morfo 2, Cercospora sp. morfo1 y Cercospora sp. morfo 2, presentaroncomportamiento similar de inhibicion antelos tratamientos, en los tres casos fuemayor el porcentaje de inhibicion de lasolucion de B. subtilis al doble de la dosisrecomendada (figura 3); Alternaria alternatano presento diferencias significativas entreambos tratamientos con valores similares de

inhibicion; las dos especies de Rhizoctoniaencontradas tuvieron patrones de inhibiciondistintos para cada tratamiento, para lamorfoespecie uno fue mas efectivo eltratamiento con el fungicida, mientras quepara la morfoespecie dos fue al contrario.Alternaria solani, tuvo en promedio elmenor valor (4,76 %) de inhibicion frentea Mancozeb, por otro lado Colletotrichumgloeosporioides morfo 1 no presentodiferencias significativas con un valor deP = 0,0028.

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Figura 3. Efecto de Mancozeb dosis recomendada y solucion de esporas de B. subtilis al doble dela dosis en la inhibicion de crecimiento de patogenos fungicos aislasdos. B. subtilis presenta unmayor porcentaje excepto en Rhizoctonia solani morfo 1, Colletotrichum gloeosporioides morfo 1,y Alternaria alternata, donde estos dos ultimos no presentaron diferencias significativas entre losdos tratamientos.

La comparacion en general del productobiologico a base de esporas de Bacillussubtilis presento diferencias significativas encuanto a rendimiento comparado frente alfungicida con un valor P = 0,000205, conmayor efecto inhibitorio ante los hongosencontrados excepto en Rhizoctonia solani,que presento diferencias marcadas con menorsusceptibilidad a Bacillus subtilis.

DISCUSION

Los hongos aislados pertenecientes alos generos Alternaria, Colletotrichum yRhizoctonia (tabla 2), son reconocidospatogenos de una gran diversidad de plantascomo en el caso de las Solanaceas; el primerose caracteriza por ser uno de los causantes

de mancha foliar con presencia de necrosis,segun lo indica Alejo et al. (2006), quiendetermino una especie de este genero comopatogeno causante de este sıntoma en plantasde chile habanero (Capsicum chinese) nosolo en hojas, tambien presenta patrones demanchas en fruto. Colletotrichum por su partees uno de los agentes causales de antracnosis,una enfermedad que se caracteriza porpresentar diversos sıntomas como manchasnecroticas en hojas, frutos y yemas queconlleva a la muerte del tejido (Than et al.2008). Estos sıntomas fueron semejantes a losobservados en campo (tabla 1) lo que indicaque estos patogenos son los causantes de laenfermedad y se valido con las pruebas depatogenicidad (postulados de Koch) (tabla 3).Estos hongos presentaron manchas cloroticas

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y se mostraron mucho mas severas en laspruebas de patogenicidad, comparadas conlos sıntomas observados en el campo debidoposiblemente a que la concentracion deinoculo que se utilizo (disco de miceliode 0,8 cm) permitio que los patogenos sedesarrollaran con mayor eficiencia en lashojas inoculadas.

En el segundo patron de manchas se aislarondos especies de Rhizoctonia, las cualeshan sido reportadas como agentes causalesdel damping-off o pudricion de la planta,sin embargo en campo, solo se observaronmanchas marron de borde irregular con centroy halo claro alrededor, esto puede deberse aque la enfermedad mencionada anteriormenteesta asociada a la interaccion de varios hongosque conjuntamente causan la muerte de laplanta (Toro 1999, Velasquez 1991 citadopor Velasquez-Valle & Amador 2007). Enla prueba de patogenicidad se hallo queambas morfoespecies de Rhizoctonia solanicausaron clorosis en las hojas, pero no elmismo patron de mancha necrotica hallada encampo, esto puede deberse a que en campola planta tambien fuera parasitada por otraespecie de hongo que presentara este sıntomay que no fue aislado en el laboratorio.

En el ultimo patron de manchas sehallo Alternaria solani y dos morfoespeciesdel genero Cercospora, conocidos comocausantes de lesiones en hojas conpatrones de manchas. Las pruebas depatogenicidad validaron lo anterior (tabla3), donde Alternaria solani y Cercospora sp.,presentaron sıntomas de clorosis similaresa las halladas en campo (tabla 1), aunqueel tizon foliar se caracteriza ademas por lapresencia de manchas marron concentricascon un leve halo clorotico en estadios tardıos(Tamayo & Jaramillo 2006), esto no seobservo en campo ni en las pruebas depatogenicidad, lo que puede deberse a queplantas jovenes son mas resistentes ante laenfermedad causada por este hongo (Chew et

al. 2008).

Con respecto a las pruebas de antagonismo,el producto a base de esporas de Bacillussubtilis, mostro un amplio rango de inhibicioncon el doble de la dosis recomendada(0.000252 g) desde 7.51 % en Rhizoctoniasolani morfo 1 hasta 77.39 % en Rhizoctoniasolani morfo 2, la dosis recomendadapresento un rango de inhibicion que iba de20,74 % en Rhizoctonia solani morfo 1 a48,77 % en Alternaria solani, por su parte lamitad de la dosis presento un rango de 9,65 %en Rhizoctonia solani morfo 1 a 53,29 % enRhizoctonia solani morfo 2, estas diferenciasde rango de inhibicion puede deberse ala viabilidad de las esporas de la bacteria.De las tres dosis, la que presento menorrendimiento y con diferencias significativasfue la mitad de la dosis recomendada conun promedio en general de inhibicion del32 %, la dosis recomendada no presentodiferencias significativas comparada con lasotras dosis, un analisis con mas datos podrıasolucionar esta incongruencia. La dosis dobleobtuvo en promedio el mejor rendimientode inhibicion cerca del 39 % y presento maseficiencia contra Rhizoctonia solani morfo2 con un porcentaje de inhibicion del77,39 % (figura 1). Liu et al. (2014) yOngena & Jacques (2009) comprueban elefecto antagonico que presenta Bacillussubtilis ante hongos fitopatogenos comoRhizoctonia solani debido a tres familias depolipeptidos que estos producen (surfactinas,iturinas y fengicinas) que afectan tanto amicelio como a estructuras reproductivas.Estudios realizados por Elkahoui et al. (2012)donde utilizo esta bacteria para antibiosis deRhizoctonia solani encontraron un porcentajede inhibicion del 44 %, lo que se aproximaal valor obtenido del 48 % para la dosisrecomendada del producto contra Rhizoctoniasolani morfo 2 (figura 1), esto demuestraque este fitopatogeno es susceptible a losmecanismos de antagonismos que exhibe labacteria donde un incremento de la dosis

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presenta un mayor rendimiento dado a lacantidad de microorganismo antagonista,por su parte el R. solani morfo 1 presentoun porcentaje menor en cuanto a inhibicion(20 %), lo que evidencia resistencia de estehongo ante dichos metabolitos secundariosque producen la antibiosis, probablemente amecanismos de resistencia en su membrana,dado a que estos metabolitos actuan sobreella.

El fungicida de contacto de principioactivo Mancozeb presento un porcentajede inhibicion por encima del 30 % enColletotrichum gloeosporioides (30,46 %),Rhizoctonia solani (51,44 %) y Rhizoctoniasolani morfo 2 (45,91 %) con mayorsusceptibilidad en estas dos morfoespeciesultimas; las demas especies presentaronvalores cercanos al 20 % (figura 2). Mancozebes un fungicida de contacto que afecta lıpidosde membrana, interrumpe la formacion deATP en las celulas fungicas e inhibe lagerminacion de esporas lo que permite tenerun buen rendimiento en cuanto inhibicion defitopatogenos por parte de este agroquımico(Sneh /textit et al. 1996). Estudios realizadospor Hussain et al. (2008) muestran unrendimiento del 49,21 % de inhibicion paraColletotrichum gloeosporioides por partede este fungicida a una contraccion de100 g/L y un 100 % de inhibicion a unadosis de 300 g/L, valores mas altos que losobtenidos en el presente trabajo, aunque lasdosis mencionadas anteriormente son cincoy quince veces respectivamente mas altasque las usadas en este estudio, lo que indicaque una concentracion mayor del productopresenta un mejor rendimiento. Alternariatenuis no crecio en este ensayo debidoprobablemente a problemas del miceliotomado, el cual pudo encontrarse envejecido.Las especies de A. alternata y A. solanipresentaron valores bajos de inhibicion,sobre todo esta ultima con un valor de4,75 %, lo que contradice estudios realizadospreviamente por Kantwa et al. (2014) donde

el producto presento una eficiencia de almenos el 50,70 % para la dosis mınimausada por ellos (50 ppm). La dosis juegaun papel importante debido al mecanismo deantagonismo que presenta el fungicida que sebasa en el contacto.

Se observaron diferencias significativas encuanto al porcentaje de inhibicion para elfungicida quımico (Mancozeb) y el biologicoque mostro mayor rendimiento, exceptopara Alternaria alternata y Colletotrichumgloeosporioides que presentaron porcentajesde inhibicion sin diferencias significativaspara ambos productos. En general se obtuvoun mejor rendimiento de inhibicion porparte del producto biologico a base deesporas de B. subtilis para los hongosencontrados en campo (figura 3), dado a queeste microorganismos ademas de producirmetabolitos que impiden el crecimiento delhongo, mecanismo similar al del fungicida,tambien compite por espacio y nutrientes loque hace que sea un controlador mas eficiente.

Los hongos encontrados en las plantas deajı tabasco son los reportados mundialmentecomo patogenos causantes de patrones demanchas en hojas, lo que demuestra que enla localidad de Rozo donde se tomaron lasmuestras hay presencia de estos organismosy que pese al uso de agroquımicos para sucontrol estos no han sido eficientes lo que haocasionado lesiones en la planta, lo que haceprioritario el uso de mecanismo alternos comolos bioinsumos como se mostro en el presentetrabajo evidenciaron un mejor rendimiento,en este caso como mejor opcion la solucionde esporas de B. subtilis al doble de la dosisrecomendada para el tratamiento preventivoy curativo de las enfermedades ademas depresentar una baja toxicidad en comparacioncon el agroquımico Mancozeb.

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AGRADECIMIENTOS

A la profesora Celina Torres por laorientacion del presente trabajo y ayuda en laidentificacion de los fitopatogenos fungicos, aNatalia Aristizabal por sus consejos y ayuda

en el montaje de ensayos en el laboratorio,a Alexander Mora por su asesorıa en losanalisis y a los miembros de Laboratorio deInvestigaciones Microbiologicas por brindarel espacio y equipos necesarios para eldesarrollo de la investigacion.

LITERATURA CITADA

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