as funções Vitais básicas - · PDF file• Para obtenção...

Preparo de lmina para observao de mitose de clula vegetal ao microscpio ptico
EXPERIMENTO
identidadedos seres ViVos
Verso: dezembro 6, 2010 12:13 PM
as funes Vitais bsicas

2
1. resumoeste experimento proporciona a visualizao da mitose em clulas de razes de cebola ao microscpio ptico.
2. o experimento 2.1 Materiais
Razes novas de cebola (preparar uma semana antes da aula); soluo de orcena actica 1%;copos, potes de plstico, garrafa Pet ou frasco de lcool cortados;Lminas;Lamnulas, Pinas; Lmina de barbear; Pipetas Pasteur ou conta-gotas;Papelabsorvente,papeltoalhaoupapelfiltro;Placa de Petri ou pires de material resistente ao calor;Lamparina a lcool, vela, bico de bunsen ou fogareiro;Microscpio ptico que proporcione uma ampliao total de pelo menos 100x;leo de imerso.
2.1.1 dicas de obteno de materiaisOrcena actica, lmina e lmnula podem ser encontradas em distribuidoras de material para laboratrio;Para manuseio da lmina de barbear com maior segurana, quebre previamente a lmina de barbear ao meio
eprotejaaparteinterna,quesermanuseadapeloaluno,comfitaadesiva.Faaesseprocedimentoantesdaaula, no sendo aconselhado a realizao do mesmo pelos alunos.
Para obteno de razes novas de cebola, a cebola deve ser preparada aproximadamente uma semana antes da aula de acordo com as instrues abaixo:
Figura 1: Materiais necessrios.

3Verso: dezembro 6, 2010 12:13 PM
1) Raspar a regio da raiz da cebola com a lmina de barbear conforme mostra a figura 2;
com esse procedimento, a regio ressecada (razes antigas da cebola) retirada, permitindo melhor contato da gua com as clulas basais.
2) colocar a cebola com as razes raspadas em um copo com gua, com a regio da raiz imersa. Para deix-la parcial-mente submersa, podem ser inseridos palitos na regio mediana que serviro de apoio, como mostra a figura 3, ou ainda pode ser usado o frasco de lcool cortado invertido, conforme ilustrado na figura 4.
Figura 2: Raspando a raiz da cebola.
Figura 3: Cebola com a parte da raiz submersa em gua.
Figura 4 : Cebola mantida na gua em frasco de lcool cortado.

4
3) esperar aproximadamente de cinco a sete dias at as razes atingirem aproximadamente 2 cm. aconselha-se a fazer uma cebola para cada dois experimentos, pelo nmero de razes que crescem nesse perodo;
2.2 Procedimentosugerimos que esta atividade seja desenvolvida depois que voc j tiver trabalhado com os alunos o conceito de
ciclo celular, a importncia da intrfase e da mitose e a caracterizao das fases da mitose. na aula, antes de iniciar o experimento, retome os conceitos de clula e de diviso celular explorados em aulas
anteriores.apresente o roteiro de trabalho antes da execuo do procedimento, apontando questes de segurana, dicas
importantes e as tarefas e avaliaes advindas dessa atividade, algumas das quais encontram-se descritas neste ro-teiro.
2.2.1 Protocolo experimental
1) corte trs ou quatro razes em tamanhos de 1 a 2 cm a partir da regio apical (meristema apical) e transferira as razes para uma placa de Petri contendo orcena actica (corante);
Aorcenaacticaumcoranteformadopororcenaecidoactico.Ocidoacticoumfixadorquetemcomofuno manter a integridade das estruturas celulares. a orcena cora os cromossomos, fazendo com que se destaquem dasoutrasestruturasecomquesejamfacilmenteidentificadosaomicroscpio.
O meristema apical (figura 9) o tecido da regio da ponta da raiz responsvel pelo seu crescimento, sendo assim, possui clulas com alto grau de diviso celular (mitose).
Figura 5: Cebola com razes novas.
Figura 6: Retirada das razes. Figura 7: Razes retiradas. Figura 8: Razes com orcena actica.

2) aquea a placa de Petri com uma lamparina a lcool at a emisso de vapores, sem deixar ferver (figura 10);
Nesseprocesso,vocdevesomentepassaraplacadePetri(flambar),semdeix-lapormuitotempoemcontatocom o fogo.
Professor, se achar conveniente, voc pode retirar as razes da lmina, deixando um pedao na placa e depois flamb-loatafervuraparacompararosresultados.
segurana: aquea as razes da cebola com a orcena actica perto de janelas, em capela ou em local com corrente de ar para
eliminar os vapores que se desprendem do corante.utilize uma pina de madeira, um pedao de pano ou papel espesso no manuseio da placa de Petri para evitar
queimaduras.
Figura 9: Estruturas da cebola.
Figura 10: Aquecimento das razes com orcena actica.

6
3)Pegueasrazescomumapinadepontafina,coloc-lassobreumalminalimpaeseccionararegiodomeriste-ma, que representa um pedacinho de cerca de 2 a 3mm a partir do pice. Despreze o resto da estrutura;
segurana:chame ateno para que os alunos no toquem na placa de Petri, pois pode causar queimaduras. se achar conve-
niente, deixe esfriar por volta de 2 minutos.Cortealminaaomeioecoloqueumpedaodefitaadesivaparaqueseumanuseiosejafeitonaregiodafita,
evitando o contato com a parte cortante. De preferncia, acompanhe o manuseio da lmina por cada grupo e depois a recolha de volta.
4) Pingue uma gota de orcena actica sobre o meristema seccionado e, com muito cuidado, cobra o material com a lamnula;
5)Comumpedaodepapelabsorvente,elimineoexcessodecorante,conformemostraafiguraabaixo;
Figura 11: Retirada do pice da raiz.
Figura 12: Montagem da lmina.
Figura 13 : Retirada do excesso de corante .

segurana:
Certifique-sedequealminaestejasobreumasuperfcielisa.Irregularidadescomoainterfaceentreazulejos,porexemplo, podem promover a quebra da lmina.
6) cubra a lamnula com o papel absorvente e, cuidadosamente, pressione com o polegar at visualizar uma cama-da nica de clulas ao microscpio ptico.
segurana:
ao esmagar o pice da raiz entre a lmina e a lamnula, use a bancada como apoio (figura 14).
Certifique-sedequealminaestejasobreumasuperfcielisa.Irregularidadescomoainterfaceentreazulejos,porexemplo, podem promover a quebra da lmina.
7) coloque a lmina no microscpio e visualize as clulas em diviso mittica. O aumento de 1000x proporciona melhor visualizao.
O aumento calculado multiplicando-se o aumento da lente objetiva pelo aumento da lente ocular. Para objetivas, a partir do aumento de 100x, dever ser usado leo de imerso.
O leo de imerso uma interface lquida que possui o mesmo ndice de refrao da objetiva. O leo deve ser usa-do para a objetiva de 100x, pois far com que os raios luminosos no se dispersem ao atravessarem o conjunto lmina-leo, permitindo a entrada de um grande cone de luz na objetiva, o que melhora a visualizao do material.
Para uso do leo de imerso, pingue uma pequena gota do leo em cima da lamnula somente quando a for visuali-zar com a objetiva de 100x. coloque a lmina no microscpio e posicione a objetiva. sendo a maior lente, a objetiva de 100x quase toca na lamnula.
Figura 14 : Esmagamento do pice corado entre lmina e lamnula.
Figura 15: Clulas em mitose (aumento de 1000x).

8
segurana:
Devido proximidade da objetiva de 100x com a lamnula, a focalizao do corte dever ser feita com muito cuidado,dandoprefernciafocalizaofina,poisalminapodeserompercasoaobjetivaencostenela.Encaixeprimeiro a objetiva de menor aumento e ajuste o foco. Depois passe para a objetiva seguinte, de maior aumento (use leo de imerso para a objetiva de 100x).
espera-se que as clulas estejam coradas, com os cromossomos destacados por uma colorao mais forte. nem todas as clulas da raiz estaro em mitose. Muitas estaro na intrfase, sendo necessrio que toda a extenso do corte seja pesquisada.
Caso as clulas no apareamdefinidas ou casoestejamescuras ou sobrepostas, impedindo a visualizaodeimagensntidaseclaras,provvelqueocortedaraiztenhaficadomuitogrosso.Tentemovimentaralamnula,girando-a um pouquinho enquanto a pressiona contra a lmina.
Senoencontrarclulasemmitose,prepareoutralminacertificando-sedequesejautilizadoumfragmentodeapenas 1 ou 2 mm do pice da raiz.
Voc pode mostrar esquemas das fases da mitose para discutir as imagens visualizadas e retomar o contedo. no software Lminrio virtual 4 Diviso celular, so encontrados cortes de cebola e de testculo de gafanhoto que po-dem ser utilizados para complemento da discusso.
De acordo com a disponibilidade de material (microscpio, lmina etc.), a classe pode ser dividida em grupos que prepararo sua prpria lmina. Depois, os componentes de cada grupo faro as observaes ao microscpio. caso a quantidade de material seja pequena, aconselhvel que voc, professor, prepare a lmina, demonstrando todos os passos para que haja maior tempo para os alunos poderem fazer as observaes ao microscpio.
3.sugesto de roteiro de trabalhoa seguir, sugerimos um roteiro de trabalho para ser utilizado na ntegra ou adaptado que poder ser entregue aos
alunos. ele contm todas as orientaes necessrias para o desenvolvimento da aula prtica e ta

as funções Vitais básicas - · PDF file• Para obtenção...

Documents

Transcript of as funções Vitais básicas - · PDF file• Para obtenção...