UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

COLÉGIO TÉCNICO

SETOR DE PATOLOGIA CLÍNICA

RELATÓRIO DE MICROBIOLOGIA CLÍNICA

Nome: Esther Iolanda Silva Frois Turma: P3A Data: 05 Mai. 2014

ANTIBIOGRAMA

Bactéria usada: E coli

INTRODUÇÃO

Quando uma amostra chega ao laboratório, ela deve passar por 3 etapas: isolamento, identificação e antibiograma; sendo que ao fim dessas etapas é liberado o laudo laboratorial.

Por definição, antibiograma é a técnica destinada à determinação da sensibilidade bacteriana in vitro frente a agentes antimicrobianos, também conhecidos por Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA).

No antibiograma, a bactéria passa por testes que permitem o conhecimento de quais antibióticos ela é sensível

(em testes qualitativos) e qual a quantidade mínima inibitória (CMI) do antibiótico mais adequado (em testes

quantitativos). É possível também saber se a cepa da bactéria possui mecanismos de virulência, sendo resistente ao tratamento normalmente usado. O antibiograma é de grande importância para o médico, pois

orienta a escolha do tratamento a ser feito no paciente.

O teste de disco-difusão em Ágar, descrito por Bauer e Kirby, em 1966, é um dos métodos de

sensibilidade mais simples e confiáveis. É um método que orienta a escolha do antimicrobiano mais adequado,

verificando a resistência/sensibilidade do MMO à vários antimicrobianos simultaneamente e permitindo a identificação de bactérias multirresistentes, com cepas muito virulentas. Para sua realização, a bactéria, em

uma suspensão de concentração pré-estabelecida, é inoculada no Ágar e são dispostos discos feitos de papel-

filtro impregnados com o antimicrobiano na placa. Após 24 horas, aproximadamente, de incubação, são

medidos os diâmetros dos halos formados em torno da droga, mensurados em milímetros, onde quanto maior o halo, menos a CMI necessária para o controle do MMO. A interpretação dos resultados é dada como

antimicrobiano sensível, intermediário ou resistente, de acordo com os critérios estabelecidos pelo Clinical

and Laboratory Standards Institute (CLSI) no documento de disco-difusão, que é revisado a cada três anos.

OBJETIVO

Aprender a realizar o método do disco-difusão em Ágar e conhecer alguns dos antimicrobianos que são

usados no laboratório de microbiologia.

METODOLOGIA

Todo o procedimento foi realizado em área limpa com Álcool 70°, em torno do bico de Bunsen.

1. PREPARO DO INÓCULO BACTERIANO

Por suspensão direta, diluir colônias da bactéria em solução salina até atingir turvação semelhante à do tubo com concentração padrão pré-estabelecida, que é correspondente a 0,5 da escala de McFarland, sendo

equivalente a 1,5x108 unidades formadoras de colônia por microlitro de solução salina (UFC)/mL.

a. Com uma alça bacteriológica, transferir, de 1 a 1, colônias com morfologia semelhante na solução

salina, homogeneizando e comparando com o tubo padrão

2. INOCULAÇÃO DA PLACA

Inserir um swab estéril no tubo com a suspensão bacteriana, comprimindo contra a parede interna do tubo para

tirar o excesso do inoculo, e semear a superfície do Ágar em 3 direções diferentes, assim como na imagem abaixo, cobrindo toda a placa.

3. APLICAÇÃO DOS DISCOS DE ANTIBIÓTICO

Aguardar 5 minutos após o plantio, para que o inoculo seja completamente absorvido pelo Ágar e aplicar, com

o auxílio de uma pinça estéril (pinça metálica esterilizada na chama do bico de Bunsen) e colocar os discos, dispondo-os mantendo um espaço satisfatório entre eles (espaço este de ±3 centímetros), sem mudá-los de

lugar evitando uma possível falsa leitura do teste.

a. Dispor os discos a partir do centro. Colocar 1 disco no centro, 4 nas laterais

4. INCUBAÇÃO DAS PLACAS

Incubar as placas invertidas no máximo 15 minutos após a colocação dos discos, em temperatura máxima de

35±2°C, por período de acordo com o antibiótico usado, com oxigenação de acordo com a necessidade da

bactéria.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Foram escolhidos e utilizados os seguintes antibióticos: Imipenem (IPM), Norfloxatina (NOR),

Meropenem (ME), Gentamicins (GEN), Ceftriaxona (CEF), Iproflaxacina (CIP), Cefepime(CPM), Sulfazotem (SUT), Rifampicina (RIF), Piperacilina+Tazobactam (PPT), Trobamicina (TOB), Cefotaxima (CTX). Os

discos de antibiótico foram dispostos na placa de Petri grande com Ágar Mueller-Hinton, de forma que

houvesse uma distancia satisfatória entre eles.

Após o período de incubação, foi visto que não houve o crescimento da bactéria, sendo assim, não foi

possível visualizar a reação da E. coli aos antibióticos usados. Porém houve o crescimento de 4 pequenas colônias, de coloração acinzentada, na placa, o que é indicativo de contaminação.

Os resultados encontrados podem ter ocorrido devido a possíveis erros técnicos durante o

procedimento ou podem estar relacionados com a bactéria usada, pois, em discussão com outros colegas de turma, foi visto que os que usaram a E. coli também não observaram crescimento na placa.

A contaminação pode ter sido resultado do manuseio da placa de disco-difusão fora da área da chama do bico de Bunsen.

CONCLUSÃO

Aprendi com a aula que existem antibióticos adequados para cada bactéria, de acordo com seu grupo (ex.:

Gram-negativo e Enterobactérias), que a forma de realizar o plantio em Ágar disco-difusão exige um

procedimento diferente do que é comumente usado para estriar e que deve-se manter a atenção e seguir todos

os cuidados necessários para a realização correta do teste e obtenção de resultados confiáveis.