TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS (TSA) OU ANTIBIOGRAMA Thiago C. Nascimento.
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TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS (TSA)
OU ANTIBIOGRAMA
Thiago C. Nascimento
Conceito: Teste para verificar o comportamento dos microrganismos (sensibilidade ou resistência) “in vitro”, frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do antimicrobiano ideal.
Indicações: • Para microrganismos isolados e identificados como agentes causadores de infecção;
• Quando o microrganismo causador da infecção apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no espectro de resistência ou tendência à mesma.Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas sp.
Dispensado: Para microrganismos cuja sensibilidade não apresenta variação ao longo do tempo.Ex: Neisseria meningitidis, Streptococcus pyogenes (sensíveis à penicilina G)
Os resultados servem de base para:
1. Nortear a escolha do agente antimicrobiano mais adequado;
2. Predizer a chance de sucesso de um esquema terapêutico.
Cultura + Antibiograma
O diagnóstico laboratorial das doenças infecciosas começa com a indicação clínica adequada do exame microbiológico, o que requer conhecimento da epidemiologia e da fisiopatologia do processo infeccioso
Laboratórios brasileiros
CLSI
Rede Brasileira de Monitoramento da
Resistência Microbiana (ANVISA)
Tipos de Teste:
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).
A. Diluição: em tubo ou em placa;
B. Teste E (Teste epsilométrico).
1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar
1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer)
16 a 24h, 35ºC
Suspensão bacteriana (0,5 McFarland)
Ágar Mueller- Hinton
Disposiç ão dos discos impregnados com antimicrobianos
16 a 24h, 35ºC
Suspensão bacteriana (0,5 McFarland)
Ágar Mueller- Hinton
Disposiç ão dos discos impregnados com antimicrobianos
16 a 24h, 35ºC
Suspensão bacteriana (0,5 McFarland)
Ágar Mueller- Hinton
Disposiç ão dos discos impregnados com antimicrobianos
16 a 24h, 35ºC
Suspensão bacteriana (0,5 McFarland)
Ágar Mueller- Hinton
Disposiç ão dos discos impregnados com antimicrobianos
Princípio: medida do halo de inibição (mm)
1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer)
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).
A. Diluição: em tubo;
Inoculo padronizado da amostra teste
Aerobiose ~24 H - 37ºC
Caldo
Ágar
Caldo + droga em concentrações crescentes
Controle
0,0625µg/mL -1024,0 µg/mL
CIM
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).
A. Diluição: em placa;
Aerobiose 24h - 35ºC
Suspensão bacteriana (0,5
McFarland)
Controle Concentração Inibitória Mínima
Replicador de Steers Ágar + Droga
0,0 µg/mL 0,0625 µg/mL 0,125µg/mL
0,25µg/mL 0,5µg/mL 1,0µg/mL
2,0µg/mL 4,0µg/mL 8,0µg/mL
?
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilométrico).
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilométrico).
Vários estudos demonstram que a CIM determinada pelo Etest® apresenta concordância com os métodos de diluição em ágar ou tubo, para dierentes antimicrobianos, em geral, com uma variação permitida de +/- 1 diluição.
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilométrico).
DEMONSTRAÇÃOE
INTERPRETAÇÃO
2. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer)
Halo de
leitura em mm
Leitura• Ausência de halo: resistência• Presença de halo: sensibilidade ou resistência
2. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer)
Medir os halos de cada placa distribuída
Anotar os resultados
Consultar o CLSI
Resultado
• Sensível• Resistente• Resistência Intermediária
Correlação entre tamanho do halo e CIMQuando os halos de inibição são correlacionados aos valores logarítmicos da CIM, pela análise de regressão linear, encontra-se uma relação linear consistente demonstrando que o halo de inibição é inversamente proporcional à CIM daquele antimicrobiano
Do ponto de vista clínico, o que significa dizer que uma bactéria é sensível, resistente, ou apresenta resistência intermediária?• Resistente: significa que a bactéria não é inibida pelas concentrações de antimicrobiano alcançadas pelas doses habituais e há grande chance de falha terapêutica; a bactéria cresce na concentração sérica máxima do antimcrobiano no paciente;
• Resistência intermediária: isolados cujas CIMs são próximas à concentração sérica máxima obtida por aquele antimicrobiano;
• Sensível: a categoria sensível implica que a infecção causada pela bactéria isolada pode ser adequadamente tratada com a dosagem recomendada para aquele tipo de infecção e para aquela espécie bacteriana, portanto o antimicrobiano pode ser utilizado para o tratamento;
Os resultados dos TSA devem ser muito bem interpretados pela equipe do laboratório de microbiologia, antes que o relatório final seja emitido ao médico.
Fatores que influenciam o resultado do TSA:
1. Composição química do meio de cultura: ágar Muller-Hinton, com 4 a 6 mm de espessura ;
2. Densidade do inóculo: 108 células/mL;
3. Temperatura: 35ºC a 37ºC;
4. Concentração dos antimicrobianos nos discos;
5. Validade e conservação dos discos;
6. Ação e estabilidade da droga:
7. Tempo de incubação : 18 a 24h
6.1 . Algumas drogas podem sofrer hidrólise nas primeiras horas de incubação
6.2 . Velocidade de crescimento maior que velocidade de difusão da droga
Antimicrobianos de escolha x
Antimicrobianos de reserva
Antimicrobianos de espectro estreito
x Antimicrobianos
de amplo espectro
Triste Realidade
Obrigado