ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE COLETIVA MESTRADO ACADÊMICO Paulo de Tarso Jambeiro Brandão ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL FEIRA DE SANTANA 2012

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Page 1: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

PROacute-REITORIA DE PESQUISA E POacuteS-GRADUACcedilAtildeO

PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM SAUacuteDE COLETIVA

MESTRADO ACADEcircMICO

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

FEIRA DE SANTANA

2012

2

PAULO DE TARSO JAMBEIRO BRANDAtildeO

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de

Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva da

Universidade Estadual de Feira de

Santana como requisito para obtenccedilatildeo do

tiacutetulo de mestre em Sauacutede Coletiva

Aacuterea de concentraccedilatildeo Epidemiologia

das Doenccedilas Bucais

Orientadora Profordf Drordf Eneida de

Moraes Marciacutelio Cerqueira

Co-Orientador Prof Dr Isaac Suzart

Gomes Filho

FEIRA DE SANTANA

2012

3

Ficha Catalograacutefica ndash Biblioteca Central Julieta Carteado

Brandatildeo Paulo de Tarso Jambeiro

B819a Alteraccedilotildees citogeneacuteticas na doenccedila periodontal Paulo de Tarso

Jambeiro Brandatildeo ndash Feira de Santana 2012

61 f il

Orientadora Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Co-orientador Isaac Suzart Gomes Filho

Dissertaccedilatildeo (mestrado) ndash Universidade Estadual de Feira de Santana

Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva 2012

1 Doenccedila periodontal 2 Citogeneacutetica 3 Apoptose I Cerqueira

Eneida de Moraes Marciacutelio orient II Gomes Filho Isaac Suzart III

Universidade Estadual de Feira de Santana IV Tiacutetulo

4

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Data de defesa 28 de marccedilo de 2012

Banca Examinadora

_______________________________________________

Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)

_______________________________________________________

Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)

_______________________________________________

Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)

5

Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse

sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza

que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente

6

AGRADECIMENTOS

Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres

diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor

Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs

foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida

Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do

caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor

Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o

companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece

Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e

Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina

promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de

meus pensamentos

Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci

Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas

agradaacuteveis horas e pelos sorrisos

Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo

pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de

fazer esse sonho se tornar realidade

Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da

graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais

terna companhia nos momentos em que pensei fracamente

Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo

Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de

conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos

piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores

novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas

variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar

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sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

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APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

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RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

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ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

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SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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41

Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 2: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

2

PAULO DE TARSO JAMBEIRO BRANDAtildeO

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de

Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva da

Universidade Estadual de Feira de

Santana como requisito para obtenccedilatildeo do

tiacutetulo de mestre em Sauacutede Coletiva

Aacuterea de concentraccedilatildeo Epidemiologia

das Doenccedilas Bucais

Orientadora Profordf Drordf Eneida de

Moraes Marciacutelio Cerqueira

Co-Orientador Prof Dr Isaac Suzart

Gomes Filho

FEIRA DE SANTANA

2012

3

Ficha Catalograacutefica ndash Biblioteca Central Julieta Carteado

Brandatildeo Paulo de Tarso Jambeiro

B819a Alteraccedilotildees citogeneacuteticas na doenccedila periodontal Paulo de Tarso

Jambeiro Brandatildeo ndash Feira de Santana 2012

61 f il

Orientadora Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Co-orientador Isaac Suzart Gomes Filho

Dissertaccedilatildeo (mestrado) ndash Universidade Estadual de Feira de Santana

Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva 2012

1 Doenccedila periodontal 2 Citogeneacutetica 3 Apoptose I Cerqueira

Eneida de Moraes Marciacutelio orient II Gomes Filho Isaac Suzart III

Universidade Estadual de Feira de Santana IV Tiacutetulo

4

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Data de defesa 28 de marccedilo de 2012

Banca Examinadora

_______________________________________________

Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)

_______________________________________________________

Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)

_______________________________________________

Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)

5

Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse

sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza

que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente

6

AGRADECIMENTOS

Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres

diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor

Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs

foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida

Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do

caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor

Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o

companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece

Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e

Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina

promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de

meus pensamentos

Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci

Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas

agradaacuteveis horas e pelos sorrisos

Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo

pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de

fazer esse sonho se tornar realidade

Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da

graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais

terna companhia nos momentos em que pensei fracamente

Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo

Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de

conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos

piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores

novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas

variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar

7

sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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41

Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

REFEREcircNCIAS

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 3: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

3

Ficha Catalograacutefica ndash Biblioteca Central Julieta Carteado

Brandatildeo Paulo de Tarso Jambeiro

B819a Alteraccedilotildees citogeneacuteticas na doenccedila periodontal Paulo de Tarso

Jambeiro Brandatildeo ndash Feira de Santana 2012

61 f il

Orientadora Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Co-orientador Isaac Suzart Gomes Filho

Dissertaccedilatildeo (mestrado) ndash Universidade Estadual de Feira de Santana

Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva 2012

1 Doenccedila periodontal 2 Citogeneacutetica 3 Apoptose I Cerqueira

Eneida de Moraes Marciacutelio orient II Gomes Filho Isaac Suzart III

Universidade Estadual de Feira de Santana IV Tiacutetulo

4

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Data de defesa 28 de marccedilo de 2012

Banca Examinadora

_______________________________________________

Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)

_______________________________________________________

Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)

_______________________________________________

Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)

5

Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse

sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza

que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente

6

AGRADECIMENTOS

Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres

diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor

Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs

foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida

Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do

caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor

Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o

companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece

Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e

Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina

promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de

meus pensamentos

Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci

Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas

agradaacuteveis horas e pelos sorrisos

Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo

pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de

fazer esse sonho se tornar realidade

Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da

graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais

terna companhia nos momentos em que pensei fracamente

Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo

Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de

conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos

piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores

novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas

variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar

7

sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 4: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

4

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo

ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Data de defesa 28 de marccedilo de 2012

Banca Examinadora

_______________________________________________

Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)

_______________________________________________________

Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)

_______________________________________________

Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)

5

Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse

sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza

que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente

6

AGRADECIMENTOS

Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres

diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor

Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs

foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida

Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do

caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor

Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o

companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece

Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e

Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina

promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de

meus pensamentos

Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci

Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas

agradaacuteveis horas e pelos sorrisos

Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo

pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de

fazer esse sonho se tornar realidade

Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da

graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais

terna companhia nos momentos em que pensei fracamente

Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo

Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de

conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos

piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores

novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas

variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar

7

sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

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RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

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ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 5: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

5

Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse

sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza

que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente

6

AGRADECIMENTOS

Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres

diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor

Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs

foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida

Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do

caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor

Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o

companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece

Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e

Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina

promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de

meus pensamentos

Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci

Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas

agradaacuteveis horas e pelos sorrisos

Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo

pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de

fazer esse sonho se tornar realidade

Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da

graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais

terna companhia nos momentos em que pensei fracamente

Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo

Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de

conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos

piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores

novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas

variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar

7

sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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41

Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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WEINBERG RA RA Uma ceacutelula renegada como o cacircncer comeccedila Ciecircncia Atual

Rocco Rio de Janeiro 2000

YALDA B OFFENBACHER S COLLINS J G Diabetes as a modifier of periodontal

disease expression Periodontology 2000 V 6 n 1 p 37-49 October 1994

55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 6: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

6

AGRADECIMENTOS

Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres

diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor

Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs

foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida

Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do

caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor

Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o

companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece

Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e

Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina

promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de

meus pensamentos

Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci

Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas

agradaacuteveis horas e pelos sorrisos

Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo

pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de

fazer esse sonho se tornar realidade

Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da

graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais

terna companhia nos momentos em que pensei fracamente

Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo

Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de

conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos

piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores

novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas

variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar

7

sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 7: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

7

sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o

amor tem dessas coisas

Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo

Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e

pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas

Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais

nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo

Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um

trabalho prazeroso pelas suas companhias

Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram

algo e ajudaram a me formar mestre

Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e

bom humor me foi dado pelos meus pacientes

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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41

Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 8: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

8

ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor

mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos

buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo

Mas onde ele se esconde

Dentro das pessoasrdquo

Martha Medeiros

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 9: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

9

APRESENTACcedilAtildeO

A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a

sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos

anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade

Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido

desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX

e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM

Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as

periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um

aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em

complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES

CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de

Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase

experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua

totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as

frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em

indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes

endpoints

O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo

cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS

CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no

capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical

Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento

de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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Head Neck Surg v 133 p 450-454 2007

TOLBERT PE SHY CM ALLEN JW Micronuclei and other nuclear anomalies in

buccal smears methods development Mutat Res v 271 p 69-77 1992

TOLBERT PE SHY CM ALLEN JW Micronuclei and other nuclear anomalies in

buccal smears a field test in snuff users Am J Epidemiol v134 p 840-850 1991

THOMAS P HOLLAND N BOLOGNESI C KIRSCH-VOLDERS M BONASSI S

ZEIGER E KNASMUELLER S amp FENECH M Buccal micronucleus cytome assay

Nature Protocols v 4 p 825-837 2009

UNFER B Avaliaccedilatildeo do conhecimento popular e praacuteticas cotidianas em sauacutede bucal Sauacutede

Puacuteblica v34 p 190-195 2000

WARNAKULASURIYA S Global epidemiology of oral and orofharyhgeal cacircncer Oral

Oncol v 45 p 309-316 2009

WEINBERG RA RA Uma ceacutelula renegada como o cacircncer comeccedila Ciecircncia Atual

Rocco Rio de Janeiro 2000

YALDA B OFFENBACHER S COLLINS J G Diabetes as a modifier of periodontal

disease expression Periodontology 2000 V 6 n 1 p 37-49 October 1994

55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 10: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

10

RESUMO

As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na

colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo

inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando

oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos

futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com

o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose

em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em

ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que

compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II

formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos

sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo

periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do

Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi

observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre

os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente

maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite

(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila

estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para

efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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41

Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 11: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

11

ABSTRACT

Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial

colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is

accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of

damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic

process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of

cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the

micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72

individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with

gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of

27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to

define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to

test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no

statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups

gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher

among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls

(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant

difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic

effects induced by periodontal inflammation

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 12: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

12

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 13

2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15

3 OBJETIVO 20

4 METODOLOGIA 21

41 Etapa Preparatoacuteria 21

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21

43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22

441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23

451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23

452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23

454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24

46 Anaacutelise estatiacutestica 24

47 Aspectos eacuteticos 24

5 RESULTADOS 26

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48

REFEREcircNCIAS 50

APEcircNDICE I 55

APEcircNDICE II 69

APEcircNDICE III 60

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 13: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

13

1 INTRODUCcedilAtildeO

As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de

sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute

associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a

um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu

desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)

As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa

(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos

com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de

sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila

periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave

gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma

medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta

Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto

soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em

populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com

condiccedilotildees sociais menos favorecidas

No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do

Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no

levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em

proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos

afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente

entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19

Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana

incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de

2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles

matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel

soacutecio econocircmico

A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo

tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso

alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu

desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas

como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 14: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

14

PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007

LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)

Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da

inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao

desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses

dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com

polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de

periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e

Michalowicl (2001)

A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte

celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto

todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes

virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas

(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al

2002)

Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens

5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas

periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros

(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de

cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre

periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua

O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou

aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da

proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o

reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica

As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a

proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente

observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a

ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela

ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila

periodontal

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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41

Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 15: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

15

2 REVISAtildeO DA LITERATURA

A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam

respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave

colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme

dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)

Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride

de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas

incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella

Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos

bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti

(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal

O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na

perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo

particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre

destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das

fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON

2005)

Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica

caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo

gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de

bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que

progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes

O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente

associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo

passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a

maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o

desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI

2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR

2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)

Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o

consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)

diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al

2009)

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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WARNAKULASURIYA S Global epidemiology of oral and orofharyhgeal cacircncer Oral

Oncol v 45 p 309-316 2009

WEINBERG RA RA Uma ceacutelula renegada como o cacircncer comeccedila Ciecircncia Atual

Rocco Rio de Janeiro 2000

YALDA B OFFENBACHER S COLLINS J G Diabetes as a modifier of periodontal

disease expression Periodontology 2000 V 6 n 1 p 37-49 October 1994

55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 16: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

16

Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo

fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas

condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila

reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida

a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene

(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001

MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)

Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se

relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do

indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al

1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)

Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila

periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a

relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus

doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios

estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros

(2007)

Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no

desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER

ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos

com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva

(SHIRODARIA et al 2000)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)

Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e

desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de

alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo

comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes

associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade

celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG

2000)

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

REFEREcircNCIAS

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 17: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

17

Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do

contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila

periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo

inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da

resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave

condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social

individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)

FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das

degeneraccedilotildees celulares

O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute

particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007

WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120

casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)

Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa

doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a

identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo

inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 18: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

18

Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos

cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma

metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente

utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG

2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)

Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de

cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e

assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas

interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho

do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND

2008)

A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando

empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)

o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em

relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque

1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do

epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo

jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel

2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura

uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia

de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional

3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees

citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que

diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo

3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose

evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que

ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver

Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar

associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene

bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia

destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos

entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 19: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

19

comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles

apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)

Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo

observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e

indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade

Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas

indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos

portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente

aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina

condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle

Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de

micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

28

RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

29

ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

30

INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

31

Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

38

REFEREcircNCIAS

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 20: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL

20

3 OBJETIVO

Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e

apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal

21

4 METODOLOGIA

41 Etapa Preparatoacuteria

Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que

prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da

pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem

contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente

treinado

42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra

A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos

atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana

onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os

indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o

termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos

foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que

segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que

alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas

Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite

Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite

Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal

43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra

Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi

convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as

seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida

aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos

(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de

exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e

consumo atual de tabaco

22

44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal

441 Meacutetodos de diagnoacutestico

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um

cirurgiatildeo-dentista treinado para tal

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de

10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade

de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia

intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas

respectivamente

No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem

profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes

locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-

lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por

um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o

auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando

apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo

apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

23

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame

periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi

detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou

igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e

presenccedila de sangramento ao estiacutemulo

45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos

451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram

coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush

Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o

cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses

dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos

siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos

anteriormente

452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com

fast Green (1 em etanol)

453 Anaacutelise de Micronuacutecleo

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo

foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por

Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos

24

estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo

visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares

medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram

computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise

cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim

como aquelas que apresentaram broken-eggs

454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

46 Anaacutelise Estatiacutestica

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-

variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes

estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das

co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de

significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos

citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia

de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica

Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos

Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle

47 Aspectos Eacuteticos

Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles

que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS

Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total

liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que

concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

25

(Apecircndice II)

A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem

superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo

oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das

pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao

pesquisador principal

A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo

1212009)

26

5 RESULTADOS

Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of

Clincal Periodontology

27

AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE

NA DOENCcedilA PERIODONTAL

Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart

Gomes-Filho 2

Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio

Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75

3623-0661 e-mail

eneidacerqueiragmailcom

Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida

Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax

55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom

Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico

(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas

1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil

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RESUMO

Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas

traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e

cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila

periodontal

Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os

sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite

(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio

demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico

odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa

ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares

indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os

grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis

picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para

comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros

Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila

estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite

periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os

indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e

controles (plt0025)

Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e

periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior

ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos

genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal

Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose

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ABSTRACT

Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal

abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis

pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and

no periodontal disease

Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes

apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and

control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic

characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical

examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa

exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative

of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The

differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and

condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a

rare events situation

Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant

difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis

and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with

periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)

Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and

periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher

incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects

induced by periodontal infection

Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis

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INTRODUCcedilAtildeO

A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica

a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes

cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos

sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas

cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003

Gomes-Filho et al 2007)

As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam

tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido

nervoso

Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando

assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas

que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et

al 2004)

Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo

do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e

supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer

doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes

Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua

ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo

relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010

Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)

Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material

geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose

podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar

a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida

pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem

doenccedila periodontal

MEacuteTODO

Protocolo de seleccedilatildeo da amostra

Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana

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Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo

os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada

uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos

em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O

grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos

com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila

periodontal

Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a

fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo

recente radiaccedilatildeo X

O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da

Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram

termo de consentimento livre e esclarecido

Entrevista e exame cliacutenico periodontal

Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um

questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria

meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a

agentes genotoacutexicos

Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo

realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado

Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de

sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda

de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em

seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-

vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel

Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams

A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas

periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da

amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de

sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador

o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente

32

Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em

periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)

Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais

dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com

perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento

ao estiacutemulo

No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados

quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem

contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite

A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame

periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos

Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas

Obtenccedilatildeo do Material

Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas

por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos

indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e

periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos

radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta

de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos

cuidados referidos anteriormente

Preparo e Coloraccedilatildeo

O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril

contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente

as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo

Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com

fast Green (1 em etanol)

Anaacutelise Citoloacutegica

Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao

diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000

ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo

33

de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de

cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e

Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo

cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano

deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho

do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas

satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d

Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)

Anaacutelise estatiacutestica

Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram

utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011

Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de

interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41

anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou

solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em

salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas

ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de

medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C

D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila

renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)

Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para

avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-

Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao

controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na

distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura

A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose

34

entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees

em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia

alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando

uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada

aberraccedilatildeo cromossocircmica

RESULTADOS

Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens

e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de

diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando

periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees

no periodonto

Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o

diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo

realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou

que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda

familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)

Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar

menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite

Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite

apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do

grupo controle (3810 x 1111)

Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os

grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos

analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos

participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro

daquela observada no grupo controle (1852)

Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes

natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)

Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram

excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete

do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle

dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite

A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos

35

controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante

entre os grupos (pgt 010)

A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio

de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os

grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia

eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos

indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594

plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente

significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos

com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09

DISCUSSAtildeO

Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes

Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre

os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs

diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos

pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se

mostraram bastante homogecircneos

Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma

universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este

perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd

et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que

informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito

mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)

Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a

certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico

da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos

do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos

periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais

com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram

semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no

sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade

de unidades dentaacuterias presentes

Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade

36

em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele

empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e

outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A

literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso

Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo

amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final

do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero

insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou

com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido

influenciados

Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade

aos resultados apresentados

Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas

entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros

(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade

de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita

de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados

obtidos

Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis

cromatina condensada e apoptose)

O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos

dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010

Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da

capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de

transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que

apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)

Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos

associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes

em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al

(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre

indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e

sem doenccedila periodontal

37

Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram

avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo

diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta

metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos

cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos

nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada

cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste

Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos

cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo

inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)

tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com

gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al

(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com

periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite

moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)

No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite

aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que

este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das

ceacutelulas geneticamente alteradas

Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da

periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de

sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a

necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo

sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de

alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose

CONCLUSAtildeO

De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados

obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute

relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com

periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo

periodontal

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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)

Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Idade (anos)

le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048

gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)

MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490

Mediana 43 40 405

Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77

Sexo

Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023

Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)

Situaccedilatildeo conjugal

Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079

Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)

Niacutevel de escolaridade (em

anos de estudo)

le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022

gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)

Renda familiar (em

salaacuterio miacutenimo)

le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019

gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)

Densidade domiciliar

le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010

gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)

42

Ex-fumante

Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077

Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)

Fumante Passivo

Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006

Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)

Consumo de aacutelcool

Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084

Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)

Usuaacuterio de medicamentos

Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071

Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)

Histoacuteria de cacircncer na

famiacutelia

Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008

Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)

Classe social

A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078

B 1(370) 0(000) 2(833)

C 19(7037) 17(8095) 15(6250)

D 6(2222) 4(1905) 5(2083)

E 1(37) 0(0) 2(83)

Hipertensatildeo arterial

Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086

Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)

43

Diabetes

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024

Sim 1(370) 1(476) 3(1250)

Alergia

Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013

Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)

Doenccedilas renais

Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093

Sim 1(370) 1(476) 1(417)

Doenccedilas oacutesseas

Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047

Sim 4(1481) 1(476) 2(833)

Praacutetica de atividade fiacutesica

Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097

Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite

Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite

Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)

44

Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Caracteriacutesticas Controle

(27)

n()

Gengivite

(21)

n()

P Periodontite

(24)

n()

P

Frequecircncia de

escovaccedilatildeo dental ao dia

le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)

Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028

Uso de fio dental

Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)

Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003

Frequecircncia do uso de

fio dental (n=46)

Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)

Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090

Faz uso de

enxaguatoacuterio bucal

Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)

Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061

Visita perioacutedica ao

dentista

Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)

Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005

45

Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle

gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P

n () n () n ()

Sangramento agrave

sondagem ()

Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000

Mediana 57 50 529

Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100

Iacutendice de Placa

visiacutevel ()

Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000

Mediana 568 6300 807

Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100

Profundidade de

sondagem (mm)

Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000

Mediana 184 226 286

Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548

Perda de inserccedilatildeo

cliacutenica (mm)

Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000

Mediana 192 241 295

Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751

Nuacutemero de dentes

presentes (n)

Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062

Mediana 22 19 205

Variaccedilatildeo

600-2800 6-28 6-27

46

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 1-2

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000

Mediana 8 2 0

Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica 3-4

mm (n)

Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002

945plusmn127 093

Mediana 8 14 11

Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19

Nuacutemero de siacutetios

com perda de

inserccedilatildeo cliacutenica

ge5mm (n)

Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000

Mediana 1 2 65

Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21

Nuacutemero de siacutetios

com profundidade

de sondagem igual

ou superior a 4mm

(n)

Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004

125plusmn139 000

Mediana 0 1 900

Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25

P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005

47

Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012

Grupo MN

Observados

MN

Esperados

Ceacutelulas 2

Controle (n=24) 10 1141 50112

243

GL=2

Plt010

Grupo I (n=18) 14 1006 37600

Grupo II (n=17) 9 952 35589

Trecircs informaccedilotildees perdidas

Sete informaccedilotildees perdidas

P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005

Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I

(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)

Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1

Controle (n=24) 1798 50112

684

GL=2

plt005

Grupo I x Controle = 004 pgt09

Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005

Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025

AP= Apoptose

Ceacutel= Total de Ceacutelulas

48

6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema

bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos

desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os

quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre

a temaacutetica

Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres

humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM

com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de

biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais

que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da

terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados

Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas

metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento

periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou

a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e

humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre

outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias

Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo

niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a

dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o

ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do

tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e

outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees

domeacutesticas

Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa

dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim

por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma

preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada

pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos

com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi

observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles

indiviacuteduos com gengivite e periodontite

49

Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica

quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da

epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas

populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da

terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante

referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo

50

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55

APEcircNDICE I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas

Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica

QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA

Data

Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG

03 Nome 04 Data de Nascimento

05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil

08 Grau de Instruccedilatildeo

( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo

10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm

13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP

17 Telefone

18 Zona

19 Cor da pele (auto referida)

( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena

20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)

21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio

22 Peso _____________

24 IMC _____________

23 Altura ___________

25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade

27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade

Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de Cigarro

( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto

( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica

03 Quantidade de cigarrodia

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20

( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica

04 Traga o Cigarro

( )Sim ( ) Natildeo

05 Haacute quanto tempo

fuma _______

06 Jaacute fumou

( )Natildeo ( )Sim

07 Haacute quanto tempo deixou de fumar

08 Quantos cigarros fumava

( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15

( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30

( ) Natildeo de aplica

09 Por quanto tempo fumou

( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) Natildeo se aplica

10 Convive com pessoa que fuma

( ) Sim ( ) Natildeo

11 Em que local convive com fumante

( ) Residecircncia ( ) Trabalho

( ) Outro local ______________________

( ) Natildeo se aplica

56

Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1

vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) Natildeo se aplica

03 Tipo de bebida

( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho

( ) conhaque ( ) whisky ( )outras

___________________ ( ) natildeo se aplica

04 Haacute quanto tempo bebe

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica

05 Quanto bebe

_______copos

Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Frequumlecircncia do uso de medicamento

( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana

( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs

( ) ocasionalmente ( ) raramente

( ) natildeo se aplica

03 Tempo de uso

( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano

( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos

( ) natildeo de aplica

04 Quais

( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina

( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos

( ) outros

Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Tipo de radiaccedilatildeo

( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo

04 Tempo de exposiccedilatildeo

Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)

( ) Sim ( ) Natildeo

02 Quais

Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia

( )Sim ( ) Natildeo

02 Localizaccedilatildeo topograacutefica

( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros

57

Variaacuteveis Bioloacutegicas

Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas

Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo

Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual

Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida

Faz alguma atividade fiacutesica

1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual

Qual a frequecircncia

1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana

Quantas vezes escova os dentes por dia

1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes

Usa Fio dental

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Com que frequumlecircncia usa o fio dental

1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica

Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual

Consulta periodicamente o dentista

1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo

Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista

1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano

58

Variaacuteveis ambientais

Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural

No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou

agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________

Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com

Metais ( )sim ( )natildeo

Fibras ( )sim ( )natildeo

Solventes ( )sim ( )natildeo

Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________

Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________

Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo

Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes

( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo

Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora

59

APEcircNDICE II

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade

Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor

da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que

podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e

periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves

pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na

reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute

importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute

cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da

gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de

fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute

descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a

boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia

independentemente de participar ou natildeo deste estudo

Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em

entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e

permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc

Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar

participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for

indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos

Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica

Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213

32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de

acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim

__________________ ____ de _____________ de ______

_________________________ ______________________________

Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira

Endereccedilo para contato

Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT

Sala 15

APEcircNDICE III

Page 21: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
Page 22: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
Page 23: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
Page 24: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
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Page 27: ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
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