3 ANLISES ESPECTROFOTOMTRICAS As anlises descritas a seguir utilizaram como instrumento Espectrofotmetro de UV/vis CG UV 8000, da Merk. 3.1 Determinao de Nitritos (Nitrognio de Nitritos ) O teste visa determinar a quantidade de Nitrognio que foi parcialmente oxidado. Os Nitritos correspondem a um estado de oxidao que antecede aos Nitratos, no sendo estveis podem ser reduzidos produzindo amnia ou oxidados produzindo Nitratos. Deve-se levar em conta que a converso dos Nitritos podem se dar atravs de processos biolgicos de reduo ou oxidao (MACEDO, 2002). Nesta anlise deve-se adicionar a cada litro de amostra 0,8 mL de cido Sulfrico concentrado para que a ao biolgica seja evitada (APHA, 1995). 3.1.1 Materiais utilizados - Proveta de 50 mL, com tampa; - Espectrofotmetro, utilizando o comprimento de onda de 543 nm e cubetas de 50 mm; - Pipeta de 1 mL. 3.1.2 Reagentes - Reagente para Nitritos; - Soluo padro de Nitrito. 3.1.3 Procedimento - Medir 50 mL de amostra clarificada ou uma alquota diluda 50 mL, transferir a uma proveta de 50 mL. - Adicionar 1 mL do reagente para Nitritos. - Homegeneizar, aguardar no mnimo 10 minutos e no mximo 2 horas. - Fazer leitura no Espectrofotmetro 543 nm utilizando cubetas de 50 mm. - O padro utilizado para efetuar a calibrao do aparelho 0,1 ppm e um branco clarificado deve acompanhar cada lote de amostra. 3.2 Determinao de Nitratos (Nitrognio de Nitratos ) Este mtodo tem como objetivo determinar a fase mais elevada da oxidao de Nitrognio em determinaes de amostras de esgotos, os Nitratos podem se originar de guas superficiais, guas potveis ou de guas provenientes de lenis freticos que, por infiltrao, podem penetrar no sistema de esgoto (MACEDO, 2002). 3.2.1 Material Utilizado - Balo de 100 mL. - Proveta de 25 mL. - Becker de 250 mL. - Espectrofotmetro em 543 nm, usando cubetas de 20 mm. - Pipeta de 2mL. - Pipeta volumtrica de 50mL. o

3.2.2 Reagentes - Soluo eluidora. - Reativo para Nitritos. 3.2.3 Procedimento - Medir 25mL da amostra clarificada, diluir para 100mL com soluo eluidora. - Homogeneizar e eluir esta soluo numa coluna de cdmio ativado. - Desprezar os primeiros 25mL da soluo e ao terminar de passar a soluo pela coluna, percolar mais 25mL da soluo eluidora, recebendo esta soluo em balo volumtrico de 100mL at a aferio. - Homogeneizar a soluo do balo e retirar uma alquota de 50mL, e aos 50mL que restar no balo adicionar 2mL do reativo para Nitritos, agitar e aguardar no mnimo 10minutos e no mximo 2 horas. - Fazer leitura no espectrofotmetro em 543nm, usando cubeta de 20mm. - Deve-se trabalhar com o branco clarificado e o aparelho calibrado com um padro de 1ppm de N (NO3 ). 3.2.4 Montagem da coluna de cdmio para anlise do Nitrato Lavar 25g de Cd granulado com HCl 6,0 N e depois lavar com gua destilada. Reagir o Cd com 100mL de CuSO4 2% at a cor azuldesaparecer. Decantar e reagir novamente com 100mL de CuSO4 2% , at um precipitado marrom coloidal comear a formar, lavar lentamente com gua destilada para remover todo o precipitado de cobre. Fazer um recheio, na parte de baixo da coluna colocar l de vidro e ench-la com gua destilada e adicionar lentamente o Cd ativado, tomando o cuidado de que o nvel da gua esteje sempre acima do nvel do cdmio e no compactar a coluna. Depois da coluna pronta percolar 150mL de soluo eluidora, regular para uma vazo de aproximadamente 10mL por minuto e passar um padro de 1ppm ( 25mL do padro de 1ppm e 75mL de eluidora ) para ativar a coluna, e depois comear o lote de amostras. OBS- 1 - Aps a passagem de uma amostra muito concentrada , passar 50mL de soluo eluidora atravs da coluna. OBS- 2 - Aps um dia de trabalho, passar gua destilada atravs da coluna para que a amnia contida na eluidora no forme bolha de gs no interior da coluna, o que resultaria em erros analticos. 3.2.5 Preparo de solues para Nitratos e Nitritos a-)Soluo eluidora: Dissolver 13g de NH4Cl e 1,7g de EDTA Dissdico em 900mL de gua destilada. Ajustar o pH para 8,5 com NH4OH concentrado e diluir para 1litro. Medir 600mL da soluo acima e diluir a 1litro de gua destilada, sendo esta a soluo eluidora. b-)Reativo para Nitritos: Num balo volumtrico de 1 litro adicionar 800mL de gua destilada, 100mL de cido Fosfrico 85% e 10g de Sulfanilamida. Aps dissolver completamente a Sulfanilamida, adicionar 1g de N-(1-Naftil)-Etilenodiamino Dicloridrato.Misture para dissolver, ento diluir para 1litro de gua destilada. A soluo deve ser estocada em frasco escuro e no refrigerador. c-)Soluo estoque para Nitritos: Dissolver 1,2320g de Nitrito de Sdio em gua destilada,adicionar 1mL de Clorofrmio para preservar e diluir a 1litro num balo volumtrico. Como este

sal possui muita impureza, deve ento ser quantificado o teor de N(NO2) pelo mtodo Permanganomtrico. A partir desta soluo, atravs de diluies chega-se ao padro de calibrao do espectrofotmetro com concentrao igual a 0,1 ppm. d-)Soluo estoque para Nitratos: Dissolver 0,7218g de Nitrato de Potssio (previamente seco em estufa a 105C por 24 horas) em gua destilada, adicionar 2mL de Clorofrmio e diluir a 1 litro. A partir desta soluo, atravs de diluies chega-se ao padro de calibrao do espectrofotmetro com concentrao igual a 1 ppm. 3.3 Determinao do Nitrognio Amoniacal - Mtodo do Fenato Esta anlise tem por objetivo determinar a quantidade de nitrognio sob a forma de hidrxido de amnia e sais amoniacais, provenientes de despejos recentes de origem animal e vegetal (MACEDO, 2002). O nitrognio orgnico convertido em nitrognio amoniacal atravs de atividades biolgicas. Ento deve-se preservar o equilbrio do nitrognio atravs da adio de 0,8mL de cido sulfrico por litro de amostra (MACEDO, 2002). 2.3.3.1 Material Utilizado - Millipore 45mm; - Filtro de bomba vcuo; - Provetas de 50mL com tampa; - Pipeta volumtrica de 50mL; - Pipetas graduadas de 1mL; - Pipeta graduada de 5mL; - Ler absorbncia no espectofotmetro em 640nm; 3.3.2 Reagentes - Soluo-estoque de nitrognio amoniacal/NKT (1000 mg/l N). - Soluo de tartarato de sdio e potssio. - Fenato. - Hipoclorito de sdio 20% (v/v) - Nitroprussiato de sdio. - NaOH 6N. 3.3.3 Procedimento - Filtrar a amostra em millipore 0,45 mm, caso a amostra apresente cor/turbidez . OBS- o papel filtro pode conter amnia, portanto este deve ficar pelo menos 1hora antes de seu uso mergulhado em soluo de HCl 50%. - Transferir quantitativamente 50mL da amostra para proveta de 50mL com tampa. - Adicionar de 1 a 2 gotas de tartarato de sdio e potssio e agitar. - Adicionar 1mL de NaOH 6N e agitar. - Adicionar 3mL de fenato e agitar. - Adicionar 1mL de hipoclorito de sdio 20% e agitar. - Adicionar 0,5mL de nitroprussiato de sdio e agitar vigorosamente. - Aguardar 45 minutos e ler absorbncia em 640nm. - A cor da reao azul-esverdeada.

3.4 Determinao do Nitrognio Kjedahl Total (NKT ) - Mtodo do Fenato A determinao de nitrognio total pode ser realizada em amostras de guas naturais, guas de abastecimento e efluentes domsticos e industriais (MACEDO, 2002). Nos despejos orgnicos, o nitrognio aparece combinado em quatro tipos de compostos: amoniacais, orgnicos, sais ntricos e sais nitratos (MACEDO, 2002). Este mtodo visa a determinao de Nitrognio Total em amostras que incluam teor de amnia e de nitrognio orgnico, no incluindo o nitrognio proveniente de nitratos e nitritos (MACEDO, 2002). 3.4.1 Material utilizado - Pipeta volumtrica de 100mL; - Pipeta volumtrica de 10mL; - Pipeta volumtrica de 25mL; - Pipetas graduadas de 1mL; - Pipeta graduada de 5mL; - Prolas de ebulio; - Chapa de aquecimento; - Erlenmeyer de 250mL; - Bales de 100mL; - Ler absorbncia no espectofotmetro em 635nm; 3.4.2 Reagentes - Soluo digestora para NKT; - Soluo-estoque de nitrognio amoniacal/NKT (1000mg/l N); - Soluo de tartarato de sdio e potssio; - Fenato; - Hipoclorito de sdio 20%; - Nitroprussiato de sdio; - NaOH + NaCl; 3.4.3 Procedimento da digesto - No filtrar a amostra. - Adicionar 100mL da amostra (se necessrio diluir) em erlenmeyer de 250mL no esquecendo de colocar as prolas de ebulio. - Adicionar 10mL de soluo digestora para NKT. - Digerir em chapa de aquecimento at produo de fumos brancos (liberao de SO3). - Deixar esfriar e transferir quantitativamente para um balo de 100mL. - Correr brancos e padres de C.Q.A. OBS - desta mesma digesto retirada uma alquota de onde ser feito a determinao de Fosfatos Totais. 3.4.4 Procedimento da determinao de Nitrognio Total - Retirar uma alquota de 25mL da amostra digerida para NKT. Transferir para um balo volumtrico de 100mL, j contendo 25mL de gua destilada. - Adicionar 1 a 2 gotas de tartarato de sdio e potssio e agitar.

- Adicionar 0,8mL de soluo de NaOH+NaCl e agitar (o pH fica em torno de 10,0). - Adicionar 3mL de fenato e agitar. - Adicionar 1mL de hipoclorito de sdio 20%(v/v) e agitar. - Adicionar 0,5mL de nitroprussiato de sdio e agitar vigorosamente. - Aguardar 45 minutos e ler a absorbncia em 635 nm. - A colorao produzida azul intenso. 3.4.5 Preparo de Solues para Nitrognio Kjeldahl Total e Amoniacal a-)Soluo digestora para NKT/P Dissolver 134g de K2SO4 P.A. em 650 mL de gua destilada + 200mL de H2SO4 conc. .Adicionar a esta soluo 2g de xido de mercrio dissolvido em H2SO4 6N (4,2mL de H2SO4conc. Para 25mL de H2O.). Completar o volume para 1000mL. OBS - guardar esta soluo digestora em temperatura acima de 14C para previnir a cristalizao. b-)Soluo-estoque de nitrognio amoniacal/NKT (1000mg/l N) Dissolver 3,819g de cloreto de amnio NH4Cl P.A.,previamente seco a 105C por 2 horas em 1000mL de gua destilada. A partir desta soluo, atravs de diluices chegaremos ao padro de calibrao do espectrofotmetro com concentrao igual a 1 ppm. c-) Soluo de tartarato de sdio e potssio Dissolver 50g de tartarato de sdio e potssio (Sal de Seignette ou Sal de Rochelle) em 100mL de gua destilada. d-) Fenato: Dissolver 90g de NaOH em cerca de 400mL de gua destilada. Dissolver 100g de Fenol P.A. em 400mL de gua destilada. Juntar soluo de NaOH a soluo de fenol. Aos poucos e com agitao constante.Completar o volume para 1000mL com gua destilada,homogeneizando bem a soluo. e-) Hipoclorito de Sdio a 20% (v/v) Pipetar 20mL de hipoclorito de sdio concentrado,NaClO comercial ou P.A. ,em balo de 100mL, completando o volume com gua destilada. f-) Nitroprussiato de Sdio: Dissolver 0,75g de Nitroprussiato de Sdio P.A. em gua destilada, completando o volume para 100mL em balo volumtrico. g-) NaOH+NaCl: Dissolver 200g de NaOH P.A. em gua destilada;adicionar 80g de NaCl P.A. Dissolver e completar o volume para 1000mL com gua destilada. h-) NaOH 6N: Dissolver 240g de NaOH P.A. em gua destilada; completar o volume para 1000mL em balo volumtrico. 3.5 Determinao do Nitrognio Orgnico O chamado nitrognio albuminide parte do nitrognio orgnico e corresponde parte da matria orgnica de rpida degradao biolgica (MACEDO, 2002). O nitrognio orgnico encontrado nas molculas de protena ou dos aminocidos que ainda no foram assimiladas. H ainda presente nos despejos, N2 que se dissolve no lquido pela interface com a atmosfera. Os microrganismos responsveis pela oxidao da matria orgnica utilizam, principalmente os hidrxidos de amnia e sais amoniacais disponveis, como

fonte direta de nitrognio para formao de material celular, em se tratando de esgotos sanitrios brutos. O nitrognio orgnico s utilizvel aps sua transformao em nitrognio amoniacal (MACEDO, 2002). Com relao assimilao do nitrognio pelos produtores primrios, alm das formas inorgnicas de nitrognio, podem assimilar formas orgnicas como: uria, aminocidos, peptdeos etc. Estes compostos, juntamente com outros (muitos deles quimicamente ainda no identificados), formam um grupo de compostos genericamente denominado de nitrognio orgnico dissolvido (MACEDO, 2002). Somente quando a concentrao das formas inorgnicas de nitrognio atinge valores muito baixos ou so esgotadas as formas orgnicas so aproveitadas (MACEDO, 2002). 3.5.1 Procedimento O Nitrognio Orgnico determinado atravs de clculo. Que dado pela diferena do Nitrognio Total - Nitrognio Amoniacal. NO = NKT - NA Onde: NO = Nitrognio Orgnico NKT= Nitrognio Kjeldahl Total NA = Nitrognio Amoniacal 3.6 Determinao de Fosfato Total - Mtodo do cido ascrbico Este mtodo ter por objetivo determinar fsforo total em amostras de guas naturais em geral e efluentes domsticos e industriais (MACEDO, 2002). A vida aqutica necessita grandemente do fsforo, constituindo no elemento principal para o controle dos vegetais (eutrofizao). A microvida responsvel pelo tratamento biolgico dos esgotos necessita da presena de fsforo como nutriente e geralmente ele ocorre nos despejos em concentraes superiores a 0,2 mg/l (MACEDO, 2002). A relao entre a DBO e o fsforo de grande importncia para se estabelecer o ponto timo de estabilizao. Fosfato Total = Fosfato Orgnico + Inorgnico Fosfato Hidrolizvel = Fosfato Inorgnico - Ortofosfato. 3.6.1 Material Utilizado - Erlenmeyer de 100ml; - Pipetas graduadas de vrios volumes; - Pipeta volumtrica de 50ml; - Ler absorbncia em espectofotmetro em 880nm; 3.6.2 Reagentes - Soluo de NaOH+NaCl. - Soluo de cido forte. - Fenolftalena 0,1% alcolica. - Mistura Combinada. - Reagente Combinado. - Soluo-estoque de fosfato (50mg/l P). 3.6.3 Procedimento

- No filtre a amostra. - Pipetar do balo de 100ml da amostra digerida para NKT/PT, uma alquota de 50ml para um erlenmeyer de 100ml. - Adicionar 1 a 2 gotas de fenolftalena 0,1% alcolica. - Adicionar a soluo de NaOH+NaCl at a soluo ficar rsea. - Adicionar soluo de cido forte at a colorao rsea passar a incolor. - Adicionar 10ml de reagente combinado. - Aguardar 15 minutos e ler a absorbncia em 880nm. - A colorao produzida pela reao azulada. 3.7 Ortofosfato ou Fosfato Disponvel Fosfato Total = Fosfato Orgnico + Inorgnico Fosfato Hidrolizvel = Fosfato Inorgnico - Ortofosfato. 3.7.1 Material Utilizado - Proveta de 50ml; - Membrana 0,45mm; - Pipeta volumtrica de 10ml; - Ler absorbncia em espectofotmetro em 660nm; 3.7.2 Reagentes - Mistura Combinada. - Reagente Combinado. - Soluo-estoque de fosfato (50mg/l P). 3.7.3 Procedimento Adicionar 50ml da amostra em proveta de 50ml; se a amostra apresentar turbidez ou cor, filtrar em membrana 0,45mm. Se a amostra for lmpida no necessrio filtrar. Adicionar 10ml de reagente combinado (o mesmo utilizado para fosfato total) e agitar bem. Aguardar 10 minutos e ler absorbncia em 660nm. A colorao da reao azulada. Correr brancos e padres de C.Q.A. para as cartas de controle em cada lote de amostras. 3.7.4 Preparo de Solues para Fosfato Total e Ortofosfato a-) Soluo de cidos: Adicionar 300ml de H2SO4 concentrado P.A. a 600ml de gua destilada; esfriar,adicionar 4ml de HNO3 P.A., e completar o volume para 1000ml com gua destilada. b-) Fenolftalena 0,1% alcolica: Dissolver 0.1g de fenolftalena P.A. em 100ml de lcool etlico (etanol). c-) Mistura Combinada: Dissolver 0,13g de antimonil tartarato de potssio em 700ml de gua destilada; adicionar 5,0g de molibdato de amnio P.A. e dissolver. Adicionar 70ml de cido sulfrico P.A., homogeneizar e esfriar. Completar o volume para 1000ml. d-) Reagente Combinado: Adicionar 0,5g de cido ascrbico para cada 100ml de mistura combinada no momento do uso.

e-) Soluo-estoque de fosfato (50mg/l): Dissolver 219,5mg de fosfato dicido de potssio anidro P.A.,KH2PO4, em gua destilada e completar o volume para 1000ml. A partir desta soluo, atravs de diluies chegaremos ao padro de calibrao do espectrofotmetro com concentrao igual a 1 ppm. 3.8 Determinao Espectrofotmetro de Sulfato Mtodo Turbidimtrico por

O on sulfato precipitado em cido actico mdio, com cloreto de brio, de maneira a formar cristais de sulfato de brio, de tamanho uniforme. A luz de absorbncia da suspenso de SO42- determinada por comparao da leitura com a curva padro (APHA, 1995). 3.8.1 Interferncias Cor ou matria suspensa em grande quantidade iro interferir. Alguma matria suspensa pode ser removida por filtrao. Slica em excesso de 500 mg/L ir interferir, e em guas contendo grandes quantidades de material orgnico no ser possvel a precipitao satisfatria do BaSO4 . Em guas potveis, no h outros ons , seno SO 42- , que tenham provenincia de compostos insolveis com brio , sob condies fortemente cidas. Fazer a determinao na temperatura normal da sala ; variaes de 10C no causaro erros apreciveis. 3.8.2 Deteco mnima de concentrao Aproximadamente 1 mg SO42-/ L ou 1 ppm . 3.8.3 Materiais - Agitador magntico: usar uma velocidade constante. - Espectrofotmetro: para uso em 420 nm, provido de cubeta de 2,5 a 10 cm. - Cronmetro ou relgio eltrico - Erlenmayer de 250 mL 3.8.4 Reagentes - Cloreto de magnsio hexahidratado MgCI2 . 6 H2O - Acetato de sdio trihidratado CH3COONa . 3H2O - Nitrato de potssio KNO3 - cido actico 99% 3.8.5 Solues - Soluo Buffer A Dissolver 30g de cloreto de magnsio hexahidratado, 5g de acetato de sdio, 1,0g de nitrato de potssio, e 20 mL de cido actico em 500 mL de gua destilada e avolumar para 1000 mL . - Soluo Buffer B (Requerida quando a concentrao simples de SO42- menor que 10 mg / L) Dissolver 30g de MgCl2 . 6 H2O , 5g de CH3COONa . 3H2O , 1,0 g de KNO3 , 0,111 g Na2SO4 , e 20 mL de cido actico 99% , em 500 mL de gua destilada e avolumar para 1000 mL. - Soluo de cloreto de brio BaCl2 Dissolver 25g de BaCl2 para 100mL de gua destilada .

- Soluo padro de sulfato Dissolver 0,1479 g de Na2SO4 anidro em gua destilada e avolumar para 1000 mL. 3.8.6 Procedimento - Formao da turvao pelo sulfato Medir 100 mL de amostra em um frasco erlenmayer de 250 mL. Despejar a soluo em uma cubeta de 50mm do fotmetro e zerar o mesmo . Adicionar 20 mL da soluo Buffer e agitar. Adicionar ainda sob agitao 2 mL de soluo de BaCl2 . Deixar sob agitao somente 60 +/- 2 segundos , aps a adio. Terminado o tempo de agitao , despejar a soluo na mesma cubeta utilizada anteriormente e medir a turbidez por 5 +/- 0.5 minutos. Mg++ + SO42- + Ba++ + 2 Cl- BaSO4 + Mg++ + 2 Cl3.8.7 Preparo da curva de calibrao Preparar as solues padro espaando as concentraes em 5mg /L , num intervalo de 0,0 40,0 mg /L . Acima de 40,0 mg /L a exatido diminui e a suspenso de BaSO4 perde estabilidade. Checar a confiabilidade da curva de calibrao, fazendo a leitura de um padro a cada trs ou quatro amostras. 3.8.8 Clculo mg SO42-/ L =

mg SO42-x 1000 mL amostra

2.3.9 Determinao de Slica Mtodo Molibdato silicato Molibdato de amnio em pH aproximadamente 1,2 reage com slica e algum fosfato presente, para produzir cidos heteroplios. cido oxlico adicionado para destruir o cido molibdofosfrico, mas no o cido molibdosilcico. Mesmo sabendo-se o fosfato ser ausente, a adio de cido oxlico grandemente desejada e um passo obrigatrio (MACEDO, 2002) . A intensidade da cor amarela proporcional a concentrao de slica molibdato-reaiva. Em pelo menos uma de suas formas, a slica no reage com o molibdato, at mesmo se for capaz de passar por um filtro de papel e no for notificada turbidez. No sabido em que extenso tal slica no reativa ocorre em guas. Slica molibdato no reativa pode ser convertida para a forma reativa por aquecimento ou misturando com alcali. Os termos molibdato reativo ou no reativo , no implicam reatividade ou falta dela, para outros procedimentos ou reagentes. 3.9.1 Deteco mnima de concentrao De 0,4 25 mg SiO2 / L , podendo o alcance ser estendido , se necessrio, por diluio ou concentrao , ou por variao do tamanho da cubeta utilizada . 3.9.2 Materiais - Bureta de 50mL - Espectrofotmetro UV / visvel , para uso em 410 nm , provido de cubeta de 1 cm ou maior. Cubeta (cm) 1 2 5 10 3.9.3 Reagentes - Bicarbonato de sdio , NaHCO3 - cido sulfrico 1 N , H2SO4 - cido clordrico 1+1, HCl - Molibdato de amnio , (NH4)6Mo7O24 . 4H2O - cido oxlico , H2C2O4 . H2O - Meta silicato de sdio hidratado , Na2SiO3 . 9 H2O 3.9.4 Solues - Soluo de molibdato de amnio Dissolver 10 g (NH4)6 Mo7O24 . 4H2O em gua destilada , com agitao e suave aquecimento , e diluir para 100 mL . Filtrar se necessrio. Ajustar para pH 7 8 com NH4 OH ou NaOH livre de slica e armazenar em recipiente de polietileno para estabilizar. ( Se o pH no for ajustado , uma precipitao gradual de slica ir se formar. Se necessrio, preparar NH4OH livre de slica por passagem de NH3 gasoso, para dentro de gua destilada contida em recipiente plstico. - Soluo estoque de slica Slica em volume final 55 mL 200 1300 100 700 40 250 20 130

Dissolver 4,73 g de meta silicato de sdio mono hidratado em gua destilada e diluir para 1000 mL . Estocar em um recipiente plstico firmemente fechado com rolha. - Soluo padro de slica Diluir 10 mL da soluo estoque para 1000 mL de gua destilada; 1 mL = 10.0mg SiO2 . Calcular a concentrao exata da soluo estoque de slica. 3.9.5 Procedimento Para 50 mL de amostra , adicionar em rpida sucesso , 1 mL de HCl 1+1 e 2 mL de reagente molibdato de amnio. Misturar invertendo pelo menos 6 vezes e deixar em p por 5 a 10 minutos. Adicionar 2 mL de soluo de cido oxlico e misturar satisfatoriamente. Ler a colorao aps 2 minutos mas antes de 15 minutos, medindo o tempo a partir da adio do cido oxlico. Fazer a leitura nesta ordem : Amostra em branco ; zerar ento o fotmetro ; padro de slica e em seguida o conjunto de amostras. Converso da slica molibdato no reativa Para detectar a presena de slica molibdato no reativa, digerir a amostra com NaHCO3 antes do desenvolvimento da cor. Esta digesto no necessariamente suficiente para converter toda slica molibdato no reativa para a forma reativa. Silicatos complexos e altos polimeros de slica, iro requerer extensa fuso com alcali a altas temperaturas ou digesto sob presso, para completa converso. Omitir a digesto se for sabido que toda slica reagir com molibdato. Preparar uma amostra limpa , por filtrao se necessrio. Colocar 50 mL, ou uma quantidade menor diluda para 50 mL, em um recipiente de platina de 100 mL. Adicionar 200 mg de NaHCO3 livre de slica e digerirem banho maria por 1h. Esfriar e adicionar vagarosamente com agitao, 2,4 mL de H2SO4 1N . Transferir quantitativamente para um tubo de nessler ou proveta de 50 mL e proceder como no incio do item procedimento. - Preparao dos padres Se for usado pr tratamento com NaHCO3 , adicionar aos padres (volume total de 45mL aproximadamente ) 200mg de NaHCO3 e 2,4 mL de H2SO4 1N para compensar ambos, pela desprezvel quantidade de slica introduzida pelos reagentes e pelo efeito do sal na intensidade da colorao. Diluir para 50 mL. 3.9.6 Curva de calibrao Preparar uma curva de calibrao de uma srie de aproximadamente 6 padres para cobrir as extenses citadas na tabela. Seguir as diretrizes do item procedimento, em pores adequadas de solues de padres de slica , diludos para 50 mL em tubos de nessler. Deixar o fotmetro em absorbncia zero com gua destilada e ler todos os padres , incluindo o branco, defronte a gua destilada. Delinear microgramas de slica na soluo final desenvolvida (55mL) defronte a leitura do fotmetro. Correr um branco e por fim um padro com cada grupo de amostras, para confirmar que a curva de calibrao previamente estabelecida no foi trocada. 3.9.7 Calculo mg SiO2 / L = mg SiO2 (em 55 mL de volume final ) mL de amostra