24.001 ESTEREOLOGIA DOS COMPONENTES FIBRO-ELÁSTICOS DASARTÉRIAS, BASILAR E CEREBRAL MÉDIA, DE RATOS EXPOSTOS AO

TABAGISMO PASSIVORobello, E. C. , Balestra, L. , Lyra, A. C. , Morais, M. P. , Barros, A. V. C. , Gatto, L. , Silva, R. E. . ,

Camposilvan, F. , Carvalho, C. A. F. ,

1Departamento de Morfologia e Patologia Básica - FMJ

Departamento de Anatomia - ICB/USP

Introducao:

As doenças vasculares encefálicas (DVEs) estão entre as principais causas de morbidade e

mortalidade. O tabagismo ativo é um dos principais fatores para esta condição. Na fumaça do

cigarro, contém aproximadamente 4720 substâncias tóxicas, sendo a nicotina, o alcatrão e os

hidrocarbonetos aromáticos os principais componentes químicos, responsáveis pelos efeitos

prejudiciais à saúde vascular. A nicotina provoca a tabaco-dependência, a vasoconstrição e a

hipertensão. Os hidrocarbonetos aromáticos e o alcatrão são as toxinas carcinogênicas. Tem-se

que a inalação passiva da fumaça do cigarro também pode provocar alterações orgânicas, dentre

as elas, as DVEs, tal como no tabagismo ativo. As artérias, basilar (AB) e a cerebral média (ACM)

são os vasos mais susceptíveis a esta condição. A degradação dos componentes fibro-elásticos da

parede destes vasos, no tabagismo, tem sido apontada como precursora das dilatações

(aneurismas) e rupturas. A inflamação vascular, provocada pela fumaça do cigarro, sugere o

aumento das citocinas, dos leucócitos e das metaloproteinases, as quais poderiam estar

associadas à referida degradação da parede vascular. Apesar disto, a relação do tabagismo

passivo com as alterações nas artérias cerebrais ainda não está clara.

Objetivos:

Este trabalho teve como objetivo geral realizar um estudo morfoquantitativo dos componentes

fibro-elásticos das artérias basilares e cerebrais média de ratos expostos passiva e cronicamente à

fumaça do cigarro. Especificamente, avaliou-se a densidade de fibras de colágeno I e III na túnica

adventícia e a espessura da lamela elástica interna das artérias cerebrais.

Metodos:

Os encéfalos utilizados no presente estudo foram dissecados de animais oriundos de um

experimento aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Medicina de Jundiaí em

2011, obedecendo às orientações do CONCEA sobre o aproveitamento máximo dos tecidos de

animais em pesquisa (protocolo nº 130/2011).  Ratos machos (Rattus norvergicus) com 6 semanas,

pesando em média 200 gramas, foram divididos nos grupos, controle (GC, n=10) e tabagista (GT,

n=10). Os animais do GT foram expostos diariamente e por um período de 90 dias à fumaça de 20

cigarros (Alto teor – alcatrão:10mg; nicotina: 0,8mg; monóxido de carbono: 10mg). Findo o

período experimental, os animais de ambos os grupos foram sacrificados com overdose de

anestésico. Os encéfalos foram dissecados, embebidos em Tissue-tek® e congelados, cortados em

criostato Leica® (CM1510S), colocados em lâminas silanizadas, corados com Picrossirius Red e

Verhoeff. Os cortes foram analisados e digitalizados no Microscópio Motic BS210. Os cálculos

estereológicos foram realizados através do programa Motic Images Plus® 2.0. Os valores obtidos

foram tratados estatisticamente no programa BioStat 5.0.

Resultados:

A densidade de colágeno I (Vv/µm²) na adventícia das AB’s e ACM’s dos ratos do GT

diminuiu significativamente quando comparada ao GC (AB- GT=0.844±0.09/

GC=0.593±0.08-P<0,01 e ACM- GC=0.603±0.09/ GT=0.374±0.12-P<0,05). Já a densidade de

colágeno III aumentou no GT (AB- GT=0.155±0.11 / GC=0.406±0.08- P<0,01 e GC=0.387±0.08 /

GT=0.625±0.12- P<0,01). Quando comparadas a relação das densidades entre os colágenos I e III

da AB no GT e no GC prevaleceu o predomínio do I em relação ao III, apesar da diminuição

significativa do I no GT (GT=0.593±0.08 / 0.406±0.08 - P<0,01), (GC= 0.844±0.09 /

0.155±0.11-P<0,01). Entretanto, essa relação mostrou-se inversa na ACM do GT, com prevalência

significativa do colágeno tipo III em relação ao tipo I (GT=0.374±0.12/ 0.625±0.12- P<0,05). No GC

a relação também foi significativa, mas prevalecendo o predomínio do colágeno I (GC= 0.603±0.09

/ 0.387±0.08 - P<0,05). A espessura da lamela elástica interna (µm) das AB&rsquo;s e

ACM&rsquo;s dos ratos do GT diminuiu significativamente em relação ao GC (AB-

GC=0.03±0.01/GT=0.01±0.00 - P<0,05 e ACM- GC= 0,021±0,004/ GT=0,010±0,002 - P<0,05).

Conclusão:

Apesar das diferenças morfológicas existentes na artéria basilar em relação às artérias cerebrais,

diante da exposição da fumaça de cigarro em ratos, é possível inferir que o tabagismo passivo atue

na degeneração das fibras elásticas e do colágeno. Entretanto, o mecanismo de ação ainda não

está claro na literatura. Presume-se que um processo inflamatório iniciado no endotélio, pela ação

da nicotina, poderia explicar tal degradação. Todavia, independente do fator determinante tem-se

que a exemplo do tabagismo ativo, o passivo também provoca alterações estruturais nas artérias

do encéfalo, podendo estas culminar em um vaso consideravelmente mais frágil e susceptível a

dilatações e/ou rupturas.

Apoio Financeiro:

Apesar das diferenças morfológicas existentes na artéria basilar em relação às artérias cerebrais,

diante da exposição da fumaça de cigarro em ratos, é possível inferir que o tabagismo passivo atue

na degeneração das fibras elásticas e do colágeno. Entretanto, o mecanismo de ação ainda não

está claro na literatura. Presume-se que um processo inflamatório iniciado no endotélio, pela ação

da nicotina, poderia explicar tal degradação. Todavia, independente do fator determinante tem-se

que a exemplo do tabagismo ativo, o passivo também provoca alterações estruturais nas artérias

do encéfalo, podendo estas culminar em um vaso consideravelmente mais frágil e susceptível a

dilatações e/ou rupturas.

Comitê de Ética:

protocolo nº 130/2011 - FMJ.

24.002 AVALIAÇÃO DO CONTEÚDO DE CÁLCIO E FÓSFORO NOS FÊMURES EMANDÍBULAS DE RATOS RECÉM-NASCIDOS EXPOSTOS AO ÁLCOOL

DURANTE A GESTAÇÃOCarvalho, I. C. S. , Martinelli, C. S. M. , Marchini, A. M. P. S. , Dutra, T. P., Lima, T. A. , Souza, D.

M. , Rocha, R. F. ,

Faculdade de Odontologia - FAPI

Departamento de Biociências e Diagnóstico Bucal - UNESP Univ Estadual Paulista, São José dos

Campos

Introducao:

O consumo materno de álcool durante a gestação pode ter efeitos teratogênicos importantes.

Estudos in vivo têm demonstrado que o consumo crônico de etanol antes e durante a gestação

causa atraso na ossificação, perda de peso corporal, redução do comprimento dos ossos

individuais, e consequente atraso no crescimento ósseo total da prole. O mecanismo pelo qual o

álcool age causando atraso no crescimento é desconhecido. Todavia, os estudos indicam que o

atraso no crescimento pode estar relacionado à qualidade óssea dos fetos, uma vez que alterações

como diminuição da resistência dos ossos e os atrasos na ossificação foram encontrados em

animais recém-nascidos expostos ao álcool durante a gestação.

Objetivos:

Avaliar, por meio de análise quantitativa por espectroscopia de energia dispersiva (EDS), possíveis

alterações na composição química dos fêmures e mandíbulas de ratos recém-nascidos cujas mães

consumiram álcool a 20% antes e durante a gestação.

Metodos:

O presente estudo foi aprovado pelo comitê de ética de São José dos Campos Instituto de Ciência

e Tecnologia, Universidade Estadual Paulista - UNESP (Protocol No. 04/2012-PA/CEP). Nove ratas

Wistar virgens (5 semanas), pesando cerca de 120 g, foram divididas em três grupos: (a) grupo

álcool: recebeu solução alcoólica a 20% e ração à vontade, (b) grupo pareado: receberam a mesma

quantidade de calorias do grupo álcool, (c) grupo controle: receberam água e ração à vontade. As

dietas foram oferecidas antes (8 semanas) e durante a gestação (3 semanas). Transcorridos os

vinte e um dias de gestação, os filhotes nasceram por parto natural. Foram utilizados 8

recém-nascidos aleatoriamente de cada grupo experimental, independentemente da quantidade

total de animais nascidos vivos. Aos cinco dias de vida, os filhotes foram sacrificados por

decapitação para a coleta dos ossos. As amostras dos fêmures e mandíbulas foram analisadas

para verificar possíveis mudanças no grau de mineralização óssea através da mensuração da

quantidade de Ca e P utilizando a espectroscopia de energia dispersiva (EDS). Os dados obtidos

mostraram distribuição não-normal e foram realizados por meio de testes não paramétricos

(Kruskal-Wallis e Mann-Whitney). Nenhum ajuste estatístico foi aplicado às amostras. Todas as

comparações foram feitas com um nível de significância de 5%.

Resultados:

Os resultados mostraram que as concentrações dos íons Ca e P foram significativamente menores

nas mandíbulas do grupo álcool (2.34 ± 0.90 e 1.03 ± 0.41, respectivamente) em relação aos

grupos pareado (5.5 ± 1.89) e controle (4.64 ± 0.72). Além disso, não houve diferença estatística

nas concentrações dos íons Ca e P entre os grupos pareado e controle (p=0.668 and p=0.617,

respectivamente). Em relação aos fêmures não houve diferença estatística entre os grupos na

concentração dos íons Ca (p= 0,242) e para os íons P houve diferença estatística apenas entre os

grupos álcool e controle (p= 0.001) e pareado e controle (p= 0.001).

Conclusão:

A exposição pré-natal ao álcool causou a redução da concentração de Ca e P na mandíbula dos

neonatos, no entanto, não alterou a concentração destes componentes nos fêmures.

Apoio Financeiro:

A exposição pré-natal ao álcool causou a redução da concentração de Ca e P na mandíbula dos

neonatos, no entanto, não alterou a concentração destes componentes nos fêmures.

Comitê de Ética:

Protocol No. 04/2012-PA/CEP

24.003 EFEITOS DO FIPRONIL SOBRE O METABOLISMO DE CARBOIDRATOSNO FÍGADO DE RATO EM PERFUSÃO

Medeiros, H. C. D. , Constantin, J. , Ishii-iwamoto, E. L. , Mingatto, F. E. ,

Laboratório de Bioquímica Metabólica e Toxicológica - UNESP

Laboratório de Metabolismo Hepático - UEM

Introducao:

O fipronil é um inseticida de amplo-espectro de ação utilizado extensivamente para o controle de

infestações parasitárias. A ação tóxica do fipronil é devido à sua habilidade de agir como um

bloqueador não competitivo dos canais de Cl- ligados aos receptores do ácido

&gamma;-aminobutírico. Além do sistema nervoso central, outros órgãos podem ser afetados pelo

tratamento com fipronil, dentre eles o fígado. O fígado desempenha função central no metabolismo,

pois recebe nutrientes e xenobióticos, transformando, armazenando ou liberando-os no sangue.

Existem poucos estudos relacionados ao metabolismo do fipronil em mamíferos. Portanto, uma

maior investigação experimental sobre a atividade tóxica do fipronil e seus metabólitos no fígado

deve ser realizada.

Objetivos:

Estudar os efeitos do fipronil sobre o metabolismo hepático por meio do método de perfusão de

fígado de rato, com relação a parâmetros associados ao metabolismo de carboidratos.

Metodos:

Foram utilizados ratos Wistar machos entre 200 e 250g alimentados ad libitum com uma dieta

padronizada para animais de laboratório e tratados de acordo com o Comitê de Conduta Ética da

UNESP. Para o procedimento cirúrgico os ratos foram anestesiados por injeção intraperitoneal de

tiopental. A técnica usada foi seguindo Cont. Ener. Metab.  USA; 393, 1965. O fígado permaneceu

conectado ao animal (sistema de perfusão in situ), e o fluxo através do órgão foi ajustado para

valores que permitiam oxigenação adequada. O líquido de perfusão padrão utilizado foi tampão

Krebs/Henseleit-bicarbonato com pH 7,6. O fipronil era solubilizado no meio de perfusão nas

concentrações 10, 15, 25 e 50 uM e infundindo no fígado por 40 minutos. Amostras do líquido

perfundido foram coletadas a cada dois minutos e analisadas para a determinação de glicose,

lactato e piruvato por espectrofotometria o consumo de oxigênio foi monitorado durante o período.

Resultados:

Comparado ao tempo controle (sem o fipronil) observou-se um aumento significativo

dose-dependente na concentração de lactato após a infusão do fipronil (18,45±2,50%,

50,32±4,19%, 66,15±13,68% e 84,40±13,23% para 10, 15, 25 e 50 uM, respectivamente). A

concentração de piruvato teve um aumento não significativo nas concentrações 10, 15 e 25 uM

(20,62±6,86%, 13,46±3,85% e 13,36±2,5%, respectivamente) e um decréscimo na concentração 50

uM (-4,3±1,7%). A produção de glicose aumentou 30,58±8,07% somente quando o fígado foi

perfundido com 50 uM do fipronil, porém esse aumento não foi significativo. Houve inibição não

significativa no consumo de oxigênio nas concentrações 15, 25 e 50 uM do fipronil (2,87±1,6%,

11,59±2,45% e 15,16±3,09%, respectivamente).

Conclusão:

Os resultados indicam que houve ativação da glicogenólise e da glicólise, provavelmente

ocasionadas por inibição da fosforilação oxidativa, assim, os efeitos tóxicos do fipronil podem estar

ligados ao metabolismo energético do fígado.

Apoio Financeiro:

Os resultados indicam que houve ativação da glicogenólise e da glicólise, provavelmente

ocasionadas por inibição da fosforilação oxidativa, assim, os efeitos tóxicos do fipronil podem estar

ligados ao metabolismo energético do fígado.

Comitê de Ética:

Protocolo 34/2012

24.004 Estudo de efeitos neurotóxicos da injeção intrahipocampal de trêstoxinas isoladas do veneno do escorpião Tityus bahiensis.

Freitas, L. A. , Kuniyoshi, A. K. , Carvalho, D. C. , Paulo, M. E. F. V. , Sobral, A. C. M. , Portaro, F.

C. V. , Dorce, V. A. C. , Nencioni, A. L. A. ,

Farmacologia - IBu

Imunoquímica - IBu

Programa de Pós-graduação em Toxinologia - IBu

Programa de Pós-graduação Interunidades em Biotecn - USP

Introducao:

Escorpiões do gênero Tityus pertencentes à família Buthidae são os principais causadores de

acidentes graves em humanos no Brasil. Os venenos escorpiônicos são formados por uma mistura

complexa de componentes ativos, sendo as neurotoxinas os principais elementos tóxicos. Contudo

ainda são poucos os estudos dedicados a avaliar as ações das toxinas do veneno do T.

bahiensis principalmente sobre o sistema nervoso central.

Objetivos:

Avaliar os efeitos comportamentais, eletroencefalográficos e histopatológicos da injeção

intrahipocampal de toxinas isoladas do veneno de Tityus bahiensis em ratos Wistar.

Metodos:

Os procedimentos realizados foram aprovados pelo CEUA/IBu sob o protocolo 870/11. Foram

utilizados ratos Wistar machos, pesando entre 240-260g. O veneno do escorpião T. bahiensis foi

fracionado por gel filtração, obtendo-se 4 frações. Estas foram testadas quanto a sua atividade,

sendo que a fração 2 mostrou maior atividade. A fração 2 foi cromatografada em HPLC obtendo-se

3 picos, os quais foram empregados nos experimentos seguintes. Os animais foram submetidos à

cirurgia estereotáxica, para implantação de cânulas e eletrodo, na região CA1 do hipocampo. Os

animais foram divididos em 4 grupos (n=6) que receberam a injeção intrahipocampal de 1&mu;L de

solução Ringer (controle), ou 2&mu;g/&mu;l das toxinas TbII-I, TbII-II ou TbII-III (grupos

experimentais). O cérebro desses animais foi retirado e processado para análise histopatológica

das regiões hipocampais CA1, CA3 e CA4 ipsi e contralateral. Um grupo de animais (n=4) foi

injetado com a toxina TbII-II (2&mu;g/&mu;l) por via intrahipocampal e submetido à microdiálise

para dosagem dos níveis de neurotransmissores (Glutamato, GABA e Glicina). Os dados foram

analisados estatisticamente pela prova exata de Fischer (atividade comportamental e AEC), por

análise de variância (one way ANOVA) seguida do teste de Tukey (avaliação histológica) e Anova

para medidas repetidas seguida de Teste de Tukey (dosagem de neurotransmissores).

Resultados:

Os animais dos grupos experimentais injetados com as toxinas TbII-I e TbII-II apresentaram

alterações significantes respectivamente nos parâmetros comportamentais dificuldade respiratória

(66,6%), mioclonia (66,6% e 83,3%) e WDS (66,6% e 83,3%) e nos parâmetros eletrográficos

surgimento de espículas (66,6% e 83,3%) e descargas (66,6% e 83,3%). A analise histológica, nas

regiões CA1 ipsilateral (C 50.5±2.5, TbII-I 32.3±1.5, TbII-II 22.3±1.6 e TbII-III 31.3±1.9), CA1

contralateral (C 49.9±1.7, TbII-I 40.4±1.8, TbII-II 29.9±2.0 e TbII-III 39.1±1.2), CA3 ipsi (C 34.7±1.4,

TbII-I 25.6±1.1, TbII-II 24.4±1.5 e TbII-III 27.0±1.5) e CA3 contra (C 35.0±1.0, TbII-I 29.4±0.9, TbII-II

29.6±1.1 e TbII-III 27.0±0.7) as 3 toxinas diminuíram o número de células hipocampais, já na região

CA4 ipsilateral as toxinas TbII-I e TbII-II diminuíram o número de células integras (C 36.2±1.5, TbII-I

25.4±1.2, TbII-II 30.4±1.4). Em relação aos níveis dos neurotransmissores dosados, a injeção da

toxina TbII-II elevou significativamente os níveis de Glutamato (C 0.0123±0.0007 TbII-II

0.023±0.002) e GABA (C 0.030±0.010 TbII-II 0.055±0.008).

Conclusão:

As 3 toxinas utilizadas promoveram alterações comportamentais, eletrográficas e histopatológicas,

sendo que a toxina TbII-II altera os níveis dos neurotransmissores Glutamato e GABA.

Apoio Financeiro:

As 3 toxinas utilizadas promoveram alterações comportamentais, eletrográficas e histopatológicas,

sendo que a toxina TbII-II altera os níveis dos neurotransmissores Glutamato e GABA.

Comitê de Ética:

24.005 Antimicrobial activity of Dinoponera quadriceps  venom againstStaphylococcus aureus

Lima, D. B. , Dantas, R. T. , Mello, C. P. , Torres, A. F. C. , Menezes, R. R. P. P. B. , Sampaio, T. L.

, Fernandes, L. C. , Bezerra, G. F. , Quinet, Y. P. , Nogueira, N. A. P. , Martins, A. M. C. ,

Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas - UFCE

Instituto de Ciências Biomédicas - UECE

Introducao:

The search of new drugs with antimicrobial activity is of interest to scientific community due to

increased resistance to antimicrobial.

Objetivos:

The aim of this study was to evaluate the antimicrobial action of Dinoponera

quadriceps venom (Dqv) on Staphylococcus aureus ATCC 6538P.

Metodos:

The antimicrobial effect of Dqv was evaluated using the broth microdilution method. Sterile PBS

buffer (pH 7.4) was used as negative control. Amikacin was used as a positive control. In addition,

aliquots were removed from the wells without visible turbidity and spread on the surface of Agar

Plate count. Colonies were counted after incubation at 37ºC for 24 h. The sample concentration that

resulted in &le;0.1% of the growth of the initial inoculums was determined as the minimum lethal

concentration (MLC). The alteration in membrane permeability was detected by crystal violet assay.

Suspensions of S. aureus were prepared in BHI broth. Cells were harvested, washed twice and

resuspended in PBS (pH-7.4). Dqv 25, 12.5 and 6.25µg/mL and amikacin (1.6µg/mL) was added to

the cell suspension and incubated at 37 ºC for 30 min. EDTA (0.25M) was used as positive control.

Control negative samples were prepared similarly without treatment. The cells were harvested and

resuspended in PBS containing 10µg/ml of crystal violet. The cell suspension was then incubated

for 10 min at 37 ºC. The suspension was then centrifuged and the supernatant was measured in

spectrophotometer. Three independent experiments were performed in triplicate. The MIC and MLC

were 6.25 and 12.5 respectively. The statistical analysis was made by ANOVA, Tukey, post test.

Resultados:

A significant enhancement in the uptake of crystal violet was observed in S. aureus treated with Dqv

when compared to control cells.

Conclusão:

The results shows that Dqv have antimicrobial activity against S. aureus and alters membrane

permeability.

Apoio Financeiro:

The results shows that Dqv have antimicrobial activity against S. aureus and alters membrane

permeability.

Comitê de Ética:

24.006 ATIVIDADE ESPECÍFICA DE ENZIMAS ANTIOXIDANTES EM Protothecazopfii ATCC 16-533 FRENTE EXPOSIÇÃO AO SISTEMA PD/HRP

Cunha, L. T. , Pugine, S. M. P. , Lins, P. G. , Brunetti, I. L. , Melo, M. P. ,

Ciências Básicas - FZEA/USP

Análises Clínicas - UNESP

Introducao:

Prototheca zopfii é uma alga patogênica que possui elevado potencial zoonótico. A incidência de

prototecoses humanas (Br. J. Dermatol., 146:713, 2006) e animais (Mycopathologia, 169:99, 2010)

têm se tornado evidente, pois trata-se de um micro-organismo que não responde de forma efetiva

às terapias convencionais. A ação citotóxica de compostos sobre células-alvo é umas das

alternativas para se obter morte celular. Assim, a 2,4-pentanodiona (PD) tem sido descrita como um

destes compostos, utilizada como substrato de peroxidase de raiz forte (HRP) cujas reações

ocorrem independentes de peróxido de hidrogênio, induzindo um processo de apoptose (Biochim.

Biophys. Acta, 1760:1755, 2006). Estas reações levam à geração de espécies reativas de oxigênio

que exercem efeitos citotóxicos. É importante considerar que existem poucos trabalhos que relatam

a citotoxicidade de espécies reativas geradas enzimaticamente, com sistemas exógenos, sobre

micro-organismos.

Objetivos:

O objetivo deste trabalho foi verificar a resposta antioxidante da P. zopfii desafiada com o sistema

PD/HRP em diferentes concentrações do substrato. Para tal, foi avaliada a atividade específica das

enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa redutase (GR).

Metodos:

P. zopfii (2,0 x 107 UFC/mL) foi incubada na ausência (controle) e presença do sistema PD/HRP(1

&mu;mol/L), nas concentrações de 1 e 15 mM do substrato, a 37oC sob agitação lenta e constante,

depois centrifugadas por 10 minutos a 9.447 x g e o sobrenadante descartado. O sedimento obtido

foi macerado com nitrogênio líquido em almofariz de porcelana, diluído em tampão salina fosfato,

centrifugado por 10 minutos a 9.447 x g e o sobrenadante utilizado para determinação da atividade

das enzimas e conteúdo de proteínas totais. A atividade específica da CAT foi determinada pelo

consumo de peróxido de hidrogênio a 240 nm e 25oC (J. Biol. Chem. 195:133, 1952); da SOD de

acordo com a taxa de redução do Nitro Blue Tetrazolium (NBT) pelo ânion superóxido a 550 nm e

25oC (Anal. Biochem. 44:276, 1971); da GR com base no decréscimo da concentração de NADPH

com a concomitante redução da glutationa oxidada (GSSG) a 340 nm e 25oC (Meth. Enzymol.

113:484, 1985); e todas as atividades acompanhadas espectrofotometricamente (DU-800,

Beckman, USA) por 3 minutos. O conteúdo de proteínas das amostras foi determinado pelo método

Bradford (Anal. Biochem. 72:248, 1976).

Resultados:

Após 24 horas de incubação, P. zopfii exposta ao sistema PD (1 mM)/HRP(1 &mu;mol/L)

apresentou um aumento na atividade específica de CAT, SOD e GR em 64±12%, 14±5% e

56±13% quando comparado ao controle. Contudo, quando exposta ao sistema PD (15 mM)/HRP(1

&mu;mol/L) não apresentou diferença significativa para SOD e GR, mas apresentou diminuição da

atividade de CAT em 78±9%. Uma hipótese que pode ser levantada para a diminuição da CAT

quando se aumenta PD é a geração de algum composto intermediário formado pelo sistema que se

torna substrato para HRP. A incubação do micro-organismo com PD ou HRP individualmente não

alterou a atividade das enzimas antioxidantes.

Conclusão:

Conclui-se que houve uma resposta antioxidante da P. zopfii desafiada com PD/HRP verificada

pelo aumento da atividade da maioria das enzimas avaliadas. Assim, PD induz mecanismos de

auto-proteção do patógeno frente ao estresse oxidativo provocado pela exposição ao sistema.

Apoio Financeiro:

Conclui-se que houve uma resposta antioxidante da P. zopfii desafiada com PD/HRP verificada

pelo aumento da atividade da maioria das enzimas avaliadas. Assim, PD induz mecanismos de

auto-proteção do patógeno frente ao estresse oxidativo provocado pela exposição ao sistema.

Comitê de Ética:

24.007 Biochemical and functional characterization of an L-amino acid oxidasefrom the yellow venom of the rattlesnake Crotalus durissus terrificus.

Teixeira, T. L. , Thomaz, C. D. , Pollettini, F. L. , Furlan, M. P. , Antonio, F. S. , Pianca, A. A. ,

Zambon, F. L. , Mazzi, M. V. ,

Programa de Pós graduação em Ciências Biomédicas - Uniararas

Introducao:

The crotalic rattlesnake venom is rich in enzymes and peptides, which trigger important effects on

skeletal muscles, nervous system, kidneys and blood coagulation system. L-amino acid oxidases

(LAAOs) are flavoproteins that have potent cytotoxic, platelet aggregation, hemorrhage, edema, and

apoptosis effects, as well as a wide spectrum of bactericidal and anti-parasitic activities which make

them important pharmacological models.

Objetivos:

Herein, we studied the biochemical, pharmacological and toxicological properties of a LAAO isolated

from Crotalus durissus terrificus snake venom.

Metodos:

The enzyme was isolated by molecular exclusion chromatography using Sephadex G-75 followed by

hydrophobic interaction chromatography using Phenyl Sepharose FF. LAAOcdt isoelectric point and

protein mass were determined by 1-D and 2-D gel electrophoresis. Kinect parameters such as pH,

temperature, Km and Vmax were also determined, using different L-amino acids as substrate.

 Toxicological properties were evaluated by the Hemolysis Test, using human erythrocyte cells.

Antimicrobial properties were evaluated by the agar disc diffusion method using different

microorganisms (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Candida

albicans).

Resultados:

LAAOcdt presented isoelectric point and molecular mass of 6.5 and 113 kDa, respectively. The

optimum pH and temperature values of the enzyme were 7.5 and 45°C, respectively, and Km and

Vmax values were 5.0 mM and 0.9x10-3 mM/min-1, respectively. LAAOcdt fraction presented

antimicrobial activity only against Staphylococcus aureus (75 µg). Hemotoxicity was also observed

and concentrations as low as 5µg of LAAOcdt induced hemolysis.

Conclusão:

Binding of substrate with different hydrophobic properties, such as L-phenylalanine provides useful

insights into the environment of the catalytic sites. In addition, this study has elucidated

pharmacological and toxicological properties of a new 113 kDa L-amino acid oxidase isolated from

this genus. Antimicrobial activity found with LAAOcdt can contribute to reveal the structure-function

relationship of such toxin, as well as its possible applications in drug design.

Apoio Financeiro:

Binding of substrate with different hydrophobic properties, such as L-phenylalanine provides useful

insights into the environment of the catalytic sites. In addition, this study has elucidated

pharmacological and toxicological properties of a new 113 kDa L-amino acid oxidase isolated from

this genus. Antimicrobial activity found with LAAOcdt can contribute to reveal the structure-function

relationship of such toxin, as well as its possible applications in drug design.

Comitê de Ética:

All assays were performed in vitro

24.008 Exposição à radiação emitida por aparelho de telefonia móvel (1800MHz) durante o período de fetogênese causa toxicidade hepática em ratas

Wistar prenhesSantos, T. R. , Souza, F. F. , Carvalho, D. P. , Leal, L. L. , Souza, Y. O. , Bastos, L. C. N. , Almeida,

M. M. , Garcia, . R. M. G. ,

departamento de Biologia - UFJF

Introducao:

O telefone móvel tornou-se popular e necessário à vida moderna, seu uso nos últimos anos tem

levantado várias questões relacionadas a sua segurança e a possíveis efeitos biológicos e riscos à

saúde. Dentre esses efeitos biológicos tem sido mostrado que a radiação emitida por esses

aparelhos induz stress oxidativo e mudanças na atividade de enzimas antioxidantes do fígado (Int.

J. Radiat. Biol., 86 (11): 935, 2010). Espécies reativas de oxigênio estão relacionadas com dano

tecidual. O fígado é um tecido com papel central no metabolismo energético e o principal órgão de

desintoxicação. Uma das características mais evidentes de alterações patológicas de células do

fígado é a alteração das enzimas ALT e AST no soro. Dano nos hepatócitos provoca aumento dos

níveis dessas enzimas na circulação periférica (J. Med. Sci., 11 (6): 256, 2011).  Para

complementar o diagnóstico de possível lesão do fígado são feitas dosagens de fosfatase alcalina e

gama GT que se elevam quando há lesão nas vias biliares. Em mamíferos, é indispensável o

desempenho normal das funções maternas para a saúde dos filhotes durante o desenvolvimento

embriofetal e logo após o nascimento, uma vez que alterações do seu metabolismo por doença,

estresse ou toxicidade se refletem no desenvolvimento.

Objetivos:

Avaliar se a radiação emitida por telefonia móvel tem efeito tóxico sobre hepatócitos em ratas

prenhes durante o período de fetogênese.

Metodos:

Vinte ratas Wistar no 1º dia pós-coito provenientes do Biotério do CBR/UFJF e mantidas em

condições controladas de temperatura, umidade e ventilação, foram distribuídas aleatoriamente em

dois grupos: exposto à radiação (E, n=10) e não exposto (C, n=10). Os animais do grupo controle

foram submetidos as mesmas condições dos animais expostos, exceto pela ausência do aparelho

celular em suas gaiolas.  A exposição ocorreu do 15º ao 20º dia de prenhez durante todas as

noites. Foram feitas ligações de 25 segundos a cada 2 minutos durante 12h. A eutanásia foi

realizada no 20º dia de prenhez por exsangüinação total sob anestesia (xilazina + ketamina, IP). No

sangue foram medidos: transaminases hepáticas (AST e ALT), fosfatase alcalina e gama GT. As

variáveis maternas analisadas foram a presença de sinais clínicos indicativos de toxicidade,

consumo de ração, ganho de massa corporal e massa do fígado. Os resultados são expressos

como média ± erro padrão da média e comparados utilizando o teste &ldquo;t&rdquo; de Student

(p<0,05).

Resultados:

Não foram observados sinais clínicos de toxicidade materna. Consumo de ração, ganho de peso

materno e o peso do fígado materno foram semelhantes nos dois grupos. Houve aumento

significativo da concentração plasmática de ALT e de fosfatase alcalina no grupo exposto em

relação ao grupo controle (E=35,92±2,55; C=28,45±1,39 e E=112,60±10,79; C=70,00±9,30,

respectivamente); a concentração plasmática de AST e gama GT não diferiu entre os dois grupos

experimentais (E=27,74±3,70; C=30,24±1,24 e E:6,59±0,62; C=7,21±0,60, respectivamente).

Conclusão:

Ratas prenhes expostas à radiação emitida por aparelhos celulares durante o período de

fetogênese apresentam danos hepáticos.

Apoio Financeiro:

Ratas prenhes expostas à radiação emitida por aparelhos celulares durante o período de

fetogênese apresentam danos hepáticos.

Comitê de Ética:

CEEA/UFJF protocolo 76/2012.

24.009

Efeitos hepatotóxicos da &Beta;- Ecdisona na dose terapêutica e ensaio demicronúcleos em medula óssea em ratos Wistar (Rattus norvergicus) machos

adultos. 

Souza, Y. O. , Souza, F. F. , Carvalho, D. P. , Leal, L. L. , Santos, T. R. , Almeida, M. M. , Neves, C.

S. , Gomes, S. S. L. , Garcia, R. M. G. , Campos, J. M. S. ,

Departamento de Biologia - UFJF

Introducao:

Pfaffia glomerata é conhecida popularmente como &ldquo;Ginseng brasileiro&rdquo;, sendo uma

das ervas mais comercializadas no mundo. Seus principais compostos são: triterpenóides,

&beta;-ecdisona, nortriterpeno, rubrosterona, ácido oleanólico, &beta; glucopiranosiloleanolato (J.

Etnopharmacology.122:468,2009). &beta;-Ecdisona atua na regeneração das células, purificação

do sangue, inibição do crescimento de células cancerígenas, regularização das funções hormonais

e sexuais e como bioenergético (Biol. Pharm. Bull.2245:31,2008). Porém, pouca atenção é dada

em relação aos possíveis efeitos tóxicos desses extratos. Um dos principais alvos de agentes

tóxicos é o fígado, tecido metabólico importante e o principal órgão de desintoxicação. Para o

desenvolvimento de um produto seguro, efetivo e não tóxico para o ser humano é importante que

se avalie a genotoxidade de seus compostos. Dentre os testes de avaliação de genotoxicidade

preconizados, o teste de micronúcleo em medula óssea de roedores in vivo é amplamente aceito e

recomendado para avaliação e o registro de novos produtos farmacêuticos que entram anualmente

no mercado mundial (J. Pharmaceutical Sciences.49:135,2013).

Objetivos:

Analisar os efeitos hepatóxicos e genotóxicos causados  pela &beta;-ecdisona em animais tratados

com a substância com a dose terapêutica.

Metodos:

15 ratos Wistar com 90 dias de idade, peso de 250g + 20g foram divididos aleatoriamente em 3

grupos experimentais, sendo 5 animais em cada grupo: controle negativo (CN), controle positivo

(CP) e tratado (T).  CN, CP e T receberam por dois dias consecutivos, via intragástrica, 1mL de

água destilada, 80 mg-1 dia-1  de metanossulfonato de metila e 0,0823 mg-1 dia-1  de &beta;-

ecdisona (dose terapêutica), respectivamente. 24h após da última administração, os animais foram

eutanasiados por exsanguinação total sob anestesia (xilasina + cetamina, IP). Foram realizadas

dosagens séricas da atividade enzimática de ALT, gama GT e fosfatase alcalina (Bioclin/Quibasa,

MG, Brasil). A medula óssea do fémur esquerdo de cada animal  foi lavada com solução salina,

centrifugada (1500 rpm/ 5 min) e os esfregaços em lâminas foram corados com Giemsa. As lâminas

foram codificadas e cegamente analisadas com um microscópio de luz com aumento de 1000x. A

quantificação de presença de micronúcleos em eritrócitos policromáticos (PCE) foi realizada pela

contagem de 2000 PCE por esfregaço. Os resultados são apresentados como média ± erro padrão

da média. Foi utilizada análise ANOVA seguido por teste de Dunnet com nível de significância de

p<0,05. O software usado foi o GraphPad Prism 5.0.

Resultados:

ALT em CN, CP e T foram de 36,90 ± 1,54; 32,26 ± 2,07; 32,74 ± 1,58, respectivamente, sendo que

os valores não diferiram estatisticamente entre si. Fosfatase alcalina em CN, CP e T foram de

126,50 ± 1,21; 101,30 ± 3,99; 101,60 ± 10,78, respectivamente, com os valores de CP e T

significativamente inferiores ao resultado de CN. Gama GT em CN, CP e T foram de 5,89 ± 0,32;

5,30 ± 1,21; 5,45 ± 0,75, respectivamente, não havendo diferença estatística entre os resultados.

Conclusão:

&beta;-ecdisona é genotóxica na dose terapêutica para PCE da medula óssea e causa uma

diminuição da fosfatase sérica na dose terapêutica. Também o grupo positivo apresentou uma

diminuição na concentração sérica de fosfatase, sugerindo que este efeito possa estar relacionado

com a genotoxicidade, porém são necessários mais estudos pra investigar esse processo.

Apoio Financeiro:

&beta;-ecdisona é genotóxica na dose terapêutica para PCE da medula óssea e causa uma

diminuição da fosfatase sérica na dose terapêutica. Também o grupo positivo apresentou uma

diminuição na concentração sérica de fosfatase, sugerindo que este efeito possa estar relacionado

com a genotoxicidade, porém são necessários mais estudos pra investigar esse processo.

Comitê de Ética:

CCEA/UFJF protocolo 61/2013

24.010 Mecanismo de Toxicidade dos Metabólitos Fipronil Dessulfinil e FipronilSulfona em Mitocôndrias Isoladas de Fígado de Rato.

Tavares, M. A. , Guelfi, M. , Medeiros, H. C. , Bizerra, P. F. V. , Mingatto, F. E. ,

Laboratório de Bioquímica Metabólica e Toxicológic - UNESP

Introducao:

O fígado desempenha função central no metabolismo, pois recebe nutrientes e xenobióticos que

são por ele absorvidos, transformados, armazenados e liberados no sangue. O citocromo P450 é o

principal responsável pelas transformações dos xenobióticos para desintoxicar o organismo,

entretanto  os metabólitos gerados podem ser mais reativos e tóxicos do que os compostos de

origem. As mitocôndrias são responsáveis por quase toda a totalidade da produção de ATP celular.

O fipronil é um inseticida de amplo espectro de ação utilizado extensivamente para o controle de

pragas em lavouras e infestações parasitárias em animais. Ele sofre biotransformação no fígado

originando dois metabólitos, o dessulfinil e o sulfona. Existem relatos na literatura de intoxicação

provocada pelo fipronil causando hepatotoxicidade.

Objetivos:

Estudar os metabólitos do fipronil em mitocôndrias isoladas de fígado de rato, avaliando parâmetros

associados à bioenergética, para elucidar os mecanismos de ação tóxica da substância.

Metodos:

O presente trabalho foi submetido à avaliação da Comissão de Ética em Experimentação Animal do

Campus da UNESP de Dracena sob o protocolo nº 34/2012. As mitocôndrias foram isoladas do

fígado de ratos Wistar machos com aproximadamente 200 g pelo método de centrifugação

diferencial. A respiração mitocondrial (n=4) foi monitorada nas concentrações 0 (controle), 5, 10, 15

e 25 uM utilizando um oxímetro acoplado a um eletrodo do tipo Clark. Foi avaliada também a

síntese de ATP pelo método de quimioluminescência utilizando o sistema luciferina-luciferase por

meio de um kit Bioluminescent Assay Kit Sigma nas mesmas concentrações (n=4). A significância

estatística foi realizada pela análise de variância seguida pelo teste de Dunnet.

Resultados:

O metabólito dessulfinil estimulou significativamente o estado II da respiração de maneira

dose-dependente a partir da concentração 15 uM (9,21 ± 0,72 para o controle, 17,47 ± 2,11 para 15

uM e 19,79 ± 2,11 nmol O2/min/mg de proteína para 25 uM) indicando um efeito desacoplador. O

sulfona apresentou resultados semelhantes a partir de 5 uM (11,98 ± 1,32 para o controle, 35,41 ±

6,82 para 5 uM, 41,45 ± 8,47 para 10 uM, 49,58 ± 3,95 para 15 uM e 39,09 ± 1,75 nmol O2/min/mg

de proteína para 25 uM). O dessulfinil inibiu significativamente a síntese de ATP a partir de 15 uM

(17,02 ± 0,28 para o controle, 9,92 ± 0,42 para 15 uM e 9,94 ± 1,48 nmol de ATP/mg de proteína

para 25 uM). O sulfona apresentou resultados semelhantes (14,99±2,23 para o controle,

11,22±1,56 para 15 uM e 8,42±1,69 nmol de ATP/mg de proteína para 25 uM).

Conclusão:

Os metabólitos dessulfinil e sulfona afetam a bioenergética mitocondrial diminuindo a produção de

ATP, e este efeito pode estar relacionado à toxicidade do fipronil.

Apoio Financeiro:

Os metabólitos dessulfinil e sulfona afetam a bioenergética mitocondrial diminuindo a produção de

ATP, e este efeito pode estar relacionado à toxicidade do fipronil.

Comitê de Ética:

Protocolo nº 34/2012

24.011 Effects of formaldehyde exposure on liver function and redox imbalancein rats

Pena, K. B.* , Campos, K. K. D. , Martins, T. L. , Sampaio, J. S. , Lima, W. G. , Bezerra, F. S.,

Laboratory of Metabolic Biochemistry (LBM) - Federal University of Ouro Preto - UFOP

Laboratory of Immunopathology (LIMP) - Federal University of Ouro Preto - UFOP

Introducao:

Formaldehyde (FA) is an industrial raw material of great importance and its production and use

occur indiscriminately. With various applications such as synthetic resins, lubricants, cosmetics and

disinfectants, the FA is within reach a large part of worldwide population. Due to their

physicochemical characteristics, studies show that formaldehyde is a carcinogen and the exposure

to this compound promotes severe injury to the organs and complications to tissues.

Objetivos:

The study aimed to evaluate inflammatory process and oxidative effects caused in the liver of

animals exposed to different concentrations of formaldehyde.

Metodos:

The study was approved by the Commission of Ethics in the Use of Animals of the Federal

University of Ouro Preto (CEUA 2011/01). Male Fischer rats (n = 28, adults, 180 &ndash; 200

grams) were divided in four groups: control (GC), exposed to ambient air and three groups with the

following formaldehyde solutions: 1% (FA1), 5% (FA5) and 10% (FA10). An ultrasonic nebulizer

(Ultra-Relief Inhaler Multipower - Unique Group) coupled to a chamber was used to produce air

suspension, containing 1%, 5% and 10% formaldehyde solution during twenty minutes, three times

per day during five days. After twenty four hours last exposure the body mass of the animals was

measured for biometric analysis and then the animals were euthanatized. The blood and the liver

were collected for analysis of oxidative damage (reactive substances to thiobarbituric acid - TBARS)

and activity of antioxidant enzyme catalase, as well as quantitative histological analysis of the

cellular influx. The normal distribution of each variable was evaluated using the

Kolmogorov&ndash;Smirnov test and was expressed as means ± SEM. For comparison among

groups, one-way ANOVA followed by the Tukey post-test was performed (p < 0.05). The InStat

Graphpad software was used to perform the statistical analyses (GraphPad InStat version 5.00 for

Windows 7, GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

Resultados:

Biometric analysis showed a reduction of body mass (g) in group FA10 (164,8 ± 5,36) when

compared to the group CTR (184,5 ±  2,61). The group FA10 (0,21 ± 0,02) presented an elevated

TBARS (U/mg ptn) content when compared to groups FA1 (0,15 ± 0,01) and CTR (0,15 ± 0,01). The

CAT activity (U/mg ptn) was higher in group FA5 (2,08 ± 0,14) when compared to groups FA1

(1,24 ± 0,20) and CTR (1,37 ± 0,13). There was a the decrease in serum alkaline phosphatase (U/l)

in FA10 (62,17 ± 12,89) compared to CTR (103,90 ± 7,20). There was a the decrease in serum

aspartate aminotransferase (U/l) in FA10 (82,08 ± 4,56) and FA5 (80,17 ± 2,08) compared to CTR

(106,20 ± 5,96). We observed that formaldehyde exposure lead to a significant increase of

inflammatory cells in the kidney tissue in the FA01 (58,87 ± 9,12) when compared to CTR

(31,76 ± 1,49).

Conclusão:

The formaldehyde exposure caused redox imbalance and liver dysfunction in adults rats.

Apoio Financeiro:

The formaldehyde exposure caused redox imbalance and liver dysfunction in adults rats.

Comitê de Ética:

CEUA 2011/01

24.012 O Papel da Biotransformação na Citotoxicidade do Fipronil emHepatócitos Isolados de Ratos. 

Guelfi, M. , Tavares, M. A. , Maioli, M. A., Mingatto, F. E.,

Laboratório de Bioquímica Metabólica e Toxicológica - LaBMeT, UNESP- Dracena/SP

Laboratório de Endocrinologia Animal - LaBMeT, UNESP- Dracena/SP

Introducao:

O fígado desempenha função central no metabolismo, pois recebe nutrientes e xenobióticos que

são por ele absorvidos, transformados, armazenados e liberados no sangue além de produzir e

armazenar a bile. A célula parenquimal (hepatócito) é a principal unidade funcional do fígado e tem

sido extensivamente utilizada para estudar o metabolismo e a toxicidade de uma grande variedade

de substâncias químicas, uma vez que propicia características adequadas ao estudo dos danos

que essas substâncias e seus metabólitos podem causar. O fipronil é um inseticida de

amplo-espectro de ação utilizado extensivamente para o controle de infestações parasitárias tais

como pulgas, carrapatos e piolhos de cães, gatos e bovinos. Existem relatos descritos na literatura

de intoxicação provocada pelo composto, causando até a morte. É importante elucidar os

mecanismos de hepatotoxicidade do composto para o auxílio no tratamento em caso de intoxicação

por parte dos mamíferos.

Objetivos:

 Estudar o papel da biotransformação sobre os efeitos tóxicos do fipronil em hepatócitos isolados

de ratos.

Metodos:

O presente trabalho foi submetido à avaliação pela Comissão de Ética em Uso de Animais do

Campus da UNESP de Dracena sob o protocolo 34/2012. Os hepatócitos foram isolados de ratos

Wistar machos (200 g de peso vivo) através de perfusão com colagenase IV. Para as análises

enzimáticas da alanina aminotransferase (ALT) e lactato desidrogenase (LDH), os hepatócitos

foram incubados com diferentes concentrações de Fipronil (25, 50, 75 e 100 µM) na ausência ou

presença de 100 µM de proadifen, um inibidor das enzimas do citocromo P450, durante 120

minutos. A atividade das enzimas ALT e LDH foi dosada por meio de kit comercial (Bioclin). A

significância estatística foi determinada pela análise de variância seguida pelo teste de Dunnet.

Resultados:

O fipronil apresentou aumento significativo na liberação da enzima ALT (n=5) a partir dos 30

minutos em células normais (8,66±1,26% do total para o controle; 16,81±3,33% do total para 100

µM), atingindo liberação máxima aos 90 minutos (9,28±1,22% do total para o controle;

65,42±3,71% do total para 50 µM). Já para as células previamente tratadas com proadifen o início

da liberação foi aos 30 minutos (13,56±5,49% do total para o controle; 38,56±5,49% do total para

100 µM), atingindo liberação máxima aos 120 min (14,09±2,32 % do total para o controle;

69,81±5,46 % do total para 75 µM). No caso da liberação da enzima LDH (n=5) o aumento

significativo teve início aos 60 minutos em células normais (10,33±1,14% do total para o controle;

40,05±1,30% do total para 75 µM), atingindo liberação máxima aos 90 minutos (10,99±2,10% do

total para o controle; 59,80±1,01% do total para 50 µM). Nas células tratadas com proadifen o início

da liberação foi aos 60 minutos (23,95±6,22% do total para o controle; 65,80±6,22% do total para

75 µM), atingindo liberação máxima aos 90 minutos (27,62±6,88% do total para o controle;

87,88±6,22% do total para 100 µM).

Conclusão:

 O fipronil apresentou toxicidade para os hepatócitos isolados de rato e a sua biotransformação

influenciou nesse efeito, pois os hepatócitos com atividade metabólica normal e os previamente

tratados com proadifen foram diferentemente afetados pelo inseticida.

Apoio Financeiro:

 O fipronil apresentou toxicidade para os hepatócitos isolados de rato e a sua biotransformação

influenciou nesse efeito, pois os hepatócitos com atividade metabólica normal e os previamente

tratados com proadifen foram diferentemente afetados pelo inseticida.

Comitê de Ética:

34/2012

24.013 Análise bioquímica hepática em ratas Wistar prenhes expostas àradiação emitida por aparelho de telefonia móvel (1800 MHz) durante a

organogêneseSantos, T. R. , Caputo, T. D. , Ribeiro, L. C. A. , Júnior, L. C. C. , Musso, C. M. , Garcia, R. M. G. ,

Departamento de Biologia - UFJF

Introducao:

Em mamíferos, é indispensável o desempenho normal das funções maternas para a saúde dos

filhotes durante o desenvolvimento embriofetal e logo após o nascimento, uma vez que alterações

do seu metabolismo por doença, estresse ou toxicidade se refletem no desenvolvimento da cria.

Alterações no embrião e nutrição fetal, bem como o estado do sistema endócrino durante a

gestação, podem resultar em adaptações de desenvolvimento que produzem mudanças estruturais,

fisiológicas e metabólicas permanentes. O fígado é um tecido com papel central no metabolismo

energético e o principal órgão de desintoxicação. Uma das características mais evidentes de

alterações patológicas de células do fígado é a alteração da concentração sérica das enzimas ALT

e AST. Dano nos hepatócitos provoca aumento dos níveis dessas enzimas na circulação periférica

(J. Med. Sci., 11 (6): 256, 2011).  Alguns estudos demonstram que a radiação emitida por aparelhos

celulares é capaz de aumentar a concentração plasmática da enzima ALT e alterar a organização

tecidual do fígado (J. Med. Sci., 11 (6): 256, 2011), porém não foram encontrados estudos que

mostrassem os efeitos da radiação emitida por aparelhos celulares no fígado durante a gestação.

Assim, considerando a importância e a magnitude da contaminação com radiação eletromagnética,

a falta de informações consistentes sobre os seus efeitos fisiológicos durante a gestação, se torna

necessário avaliar a possível hepatoxicidade da exposição à radiação.

Objetivos:

Avaliar a possível toxicidade hepática da exposição à radiação em ratas prenhes durante o período

de organogênese.

Metodos:

Vinte ratas Wistar no 1º dia pós-coito, provenientes do Biotério do CBR/UFJF e mantidas em

condições controladas de temperatura, umidade e ventilação, foram distribuídas aleatoriamente em

dois grupos: exposto à radiação (E, n=10) e não exposto (C, n=10). A exposição ocorreu do 1º ao

15º dia de prenhez durante todas as noites. Foram feitas ligações de 25 segundos a cada 2 minutos

durante 12h. A eutanásia foi realizada no 15º dia de prenhez por exsangüinação total sob anestesia

(xilazina + ketamina, IP). No sangue foram medidas as transaminases hepáticas (AST e ALT),

fosfatase alcalina e gama GT. As variáveis maternas analisadas foram a presença de sinais clínicos

indicativos de toxicidade (hiper ou hipoatividade, piloereção, estereotipia, cromodacriorréia,

sangramento vaginal, diarréia e morte) consumo de ração, ganho de peso corporal e peso do

fígado. Os resultados são expressos como média ± erro padrão da média e comparados utilizando

o teste &ldquo;t&rdquo; de Student (p<0,05).

Resultados:

Não foram observados sinais clínicos de toxicidade materna. Consumo de ração, ganho de peso

materno e o peso do fígado materno foram semelhantes nos dois grupos. As concentrações séricas

das enzimas estudadas não apresentaram diferenças significativas nos grupos experimental e

controle (ALT: E=27,06±1,24 e C=31,47±2,75; AST: E=28,78±3,60 e C=37,12±2,18; fosfatase

alcalina: E=59,48±8,95 e C:67,73±7,46; e gama GT: E=7,98±0,47 e C=9,90±0,46).

Conclusão:

Ratas prenhes expostas à radiação emitida  por aparelhos celulares durante o período de

organogênese não apresentam danos hepáticos no modelo estudado.

Apoio Financeiro:

Ratas prenhes expostas à radiação emitida  por aparelhos celulares durante o período de

organogênese não apresentam danos hepáticos no modelo estudado.

Comitê de Ética:

CEEA/UFJF protocolo 52/2012.

24.014 ATIVIDADE DO GOSSIPOL SOBRE A REPRODUÇÃO E ABIOENERGÉTICA EM RATOS E EFEITO PROTETOR DA VITAMINA E.

Santana, A. T. , Bizerra, P. F. V. , Guelfi, M. , Tavares, M. A. , Mingatto, F. E. ,

Laboratório de Bioquímica Metabólica e Toxicológic - LaBMeT

Introducao:

O gossipol é um composto polifenólico presente nas plantas de algodão (Gossypium sp.). O

algodão vem sendo utilizado para a alimentação animal na forma de farelo, pelo seu alto teor

protéico e baixo custo. O gossipol é considerado um fator anti-nutricional, possuindo efeito

oxidante, além de afetar a reprodução. A vitamina E é uma vitamina lipossolúvel e é o principal

antioxidante das membranas celulares. As mitocôndrias são as organelas responsáveis pela

produção de quase todo o ATP necessário para as funções celulares.

Objetivos:

Estudar os efeitos do gossipol sobre reprodução em ratos e a influência da bioenergética

mitocondrial, além da proteção da vitamina E nos efeitos tóxicos da substância.

Metodos:

Ratos Wistar machos com aproximadamente 200 g foram divididos em 4 grupos de 10 animais e

tratados por 14 dias. G1: recebeu óleo de milho por gavagem gástrica e dimetilsulfóxido (DMSO) +

salina via intraperitoneal (i.p). G2: vitamina E (100 mg/kg de peso vivo) em óleo de milho por

gavagem e DMSO + salina i.p.. G3: gossipol (5 mg/kg de peso vivo) em DMSO + salina i.p. e óleo

de milho por gavagem. G4: gossipol (5 mg/kg de peso vivo) i.p. e vitamina E (100 mg/kg de peso

vivo) por gavagem. Após o tratamento, 4 machos de cada grupo foram alojados individualmente em

caixas com duas ratas virgens não tratadas por 10 dias. Os ratos foram removidos e as fêmeas

mantidas até o parto, avaliando-se a quantidade de neonatos. Para o estudo da bioenergética os

animais (6 por grupo) foram eutanasiados por decapitação, os testículos foram coletados e

homogeneizados. As mitocôndrias de testículo foram isoladas por centrifugação diferencial e foram

avaliados a respiração, o potencial de membrana e a síntese de ATP.

Resultados:

O gossipol afetou a reprodução, sendo o número de neonatos no G3 igual a zero. No G4,

observou-se a proteção da vitamina E, sendo fecundadas 50% das fêmeas e o número de

neonatos se aproximou do G1 (65 para G1 e 42 para G4). Nas mitocôndrias isoladas de testículos

o G3 apresentou um aumento significativo no estado 2 da respiração em relação ao G1 (2,3±0,2

para G1 e 2,8±0,15 nmol O2/min/mg de proteína para G3), utilizando os substratos oxidáveis

glutamato 5 mM e malato 5 mM, indicando um efeito desacoplador. O tratamento com a vitamina E

restaurou a velocidade da respiração a valores próximos ao G1 (2,2±0,15 nmol O2/min/mg de

proteína para G4). O gossipol diminuiu significativamente o potencial de membrana se comparado

ao G1 (131±7.8 para G1 e 54,5±4,7 URF para G3) e a vitamina E apresentou efeito protetor,

restaurando o potencial de membrana a valores semelhantes aos do G1 (105,6±6,9 URF para G4).

O gossipol inibiu significativamente a síntese de ATP mitocondrial (32,48±5,55 para G1 e

16,08±1,08 nmol/mg de proteína para G3), enquanto que a vitamina E reestabeleceu a

concentração de ATP a valores próximos aos do G1 (38,24±1,06 nmol/mg de proteína para G4).

Conclusão:

O gossipol afeta a reprodução de ratos e a bioenergética mitocondrial e a vitamina E protege contra

esse efeito tóxico causado pela substância.

Apoio Financeiro:

O gossipol afeta a reprodução de ratos e a bioenergética mitocondrial e a vitamina E protege contra

esse efeito tóxico causado pela substância.

Comitê de Ética:

Protocolo 19/2012

24.015 Efeitos da microcistina-LR (Microcystis aeruginosa) sobre a funçãorespiratória de traíra (Hoplias malabaricus).

Martins, N. D. , Yunes, J. S. , Rantin, F. T. , Kalinin, A. L. ,

Unidade de Pesquisa em Cianobactérias - FURG

Departamento de Ciências Fisiológicas - UFSCar

Introducao:

As microcistinas (MCs) são toxinas encontradas comumente na natureza, altamente tóxicas e muito

dispersas em ambientes aquáticos. Devido a ocorrência de hipóxia aquática associada às florações

de cianobactérias produtoras de MCs e por não haver estudos acerca das respostas fisiológicas in

vivo desencadeadas pelas mesmas, nosso estudo se propôs a avaliar as respostas respiratórias de

traíras expostos à MC-LR em normóxia e durante hipóxia gradual.

Objetivos:

Avaliar as respostas respiratórias de traíras expostas à MC-LR em normóxia e durante hipóxia

gradual.

Metodos:

Foram utilizados 14 exemplares de traíra (Wt= 155 ± 5,5g), divididos em: Grupo controle (Controle,

n=7) - injeção intraperitoneal de 0,5 ml de salina 0,9%; Grupo exposto à MC-LR, (Mcis, n=7) -

injeção intraperitoneal de 0,5 ml de salina 0,9% acrescida de extrato liofilizado contendo MC-LR

(100 µg/Kg peso corpóreo). Após 48 horas, os seguintes parâmetros foram avaliados por meio de

respirometria de fluxo constante: Consumo de O2 (VO2 - mlO2.kg-1.h-1), ventilação branquial (VG -

mlH2O.kg-1.min-1), frequência respiratória (fR - ciclos respiratórios.min-1), volume ventilatório (VT -

mlH2O.kg-1.ciclo respiratório-1), extração de O2 (EO2 - %). Os protocolos experimentais foram

aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da UFSCar.

Resultados:

A tensão crítica de O2 (PcO2) foi de ~31 mmHg para Ctrl e de ~43 mmHg para Mcis. A VO2 dos

grupos controle (60,9 ± 2,0) e Mcis (67,5 ± 1,4) não apresentaram diferenças significativas entre as

PinO2 estudadas. A VG do Controle foi mantida constante até a PinO2 de 60 mmHg a partir da qual

aumentos progressivos foram registrados, com valores máximos a 10 mmHg (1144,9 ± 92,6). A VG

de Mcis foi superior ao Controle desde a tensão de O2 de 100 mmhg até 10 mmhg, com valor

máximo de 1887,5 ± 106,7. A fR dos grupos Controle e Mcis, não diferiu significativamente em

nenhuma das tensões de O2 analisadas. Comparativamente, podemos observar que os valores de

VT  entre os grupos apresentaram diferenças significativas nas tensões compreendidas entre 120 e

10 mmhg, com indicação de que o VT do grupo Mcis foi superior em todas essas tensões de O2,

sendo que os valores máximos obtidos foram 11,5 ± 1,3 e 19,7 ± 0,8 para o Controle e Mcis

respectivamente. A EO2 do grupo Mcis foi significativamente inferior ao Controle desde a normóxia

até a menor PinO2 analisada (10mmhg).

Conclusão:

Hoplias malabaricus utilizou de respostas fisiológicas que se mostraram capazes de manter sua

taxa metabólica constante, compensando os efeitos da MC-LR sobre seus tecidos.

Apoio Financeiro:

Hoplias malabaricus utilizou de respostas fisiológicas que se mostraram capazes de manter sua

taxa metabólica constante, compensando os efeitos da MC-LR sobre seus tecidos.

Comitê de Ética:

n° 062/2011

24.016 Efeitos comportamentais de toxinas isoladas do veneno da Micruruslemniscatus em ratos Wistar

Satake, T. S. , Cazotti, M. O. , Paulo, M. E. V. , Reis, E. , Freitas, L. A. , Xavier, G. F. , Bandeira, D.

, Sandoval, M. R. L. ,

Farmacologia - IBu

Neurosciências e Comportamento - USP

Introducao:

Previamente fizemos a identificação e caracterização dos componentes, MT-Ml&alpha; e

MT-Ml&beta;, isolados do veneno da M.lemniscatus. Ambos foram capazes de deslocar a ligação

do [3H]QNB e reduzir o conteúdo de fosfatos de inositol totais, aumentados pelo carbacol. Uma vez

que estes componentes atuam sobre receptores muscarínicos e parecem ser antagonistas desse

sistema, uma abordagem interessante seria o estudo desses componentes sobre os efeitos no

processamento de aprendizado e memória, visto que o sistema colinérgico muscarínico está

envolvido em funções cognitivas.

Objetivos:

Avaliação dos efeitos das MT-Ml&alpha; e MT-Ml&beta; sobre o aprendizado e memória espacial de

ratos.

Metodos:

Procedimentos aprovados pelo Comitê de Ética do Instituto Butantan (CEUAIB nº 843/11). Foram

implantadas bilateralmente cânulas guias no hipocampo de ratos Wistar machos (250g). Os ratos

foram submetidos ao Labirinto Aquático de Morris, cujo treinamento envolveu 4 tentativas por dia,

com intervalo de 10 minutos entre elas durante 9 dias. A cada dia a plataforma mudava de

localização para o desenvolvimento da memória operacional espacial nos ratos. No dia da

inoculação (8ºdia), os animais receberam bilateralmente: MT-Ml&alpha; (1&mu;g/&mu;l) (N=7) ou

MT-Mlß (0,125&mu;g/&mu;l) (N=7) ou solução controle (1ul) (N=7), 20 minutos antes do treino. No

dia pós inoculação (9ºdia) os animais treinaram normalmente. Os dados foram coletados pelo

Software Any-Maze. Estatística: Análise de Variância 2 way-ANOVA e o pós-teste de Bonferroni.

Após 7 dias da injeção intrahipocampal, os ratos foram sacrificados para análise histopatológica

dos cérebros.

Resultados:

Observamos alterações significantes na primeira tentativa do dia pós inoculação no grupo

MT-Ml&alpha; quando comparado ao grupo controle. Dados expressos em Média ± E.P.: Latência

(s) MT-Ml&alpha; 44,30±16,57, Controle 75,00±20,70; Tempo de permanência no quadrante do dia

anterior (s) MT-Ml&alpha; 7,44±2,68, Controle 12,50±1,52. Esses resultados indicam que os

animais injetados com a MT-Ml&alpha; permaneceram mais tempo na piscina, porém quando

comparados com o grupo controle, permaneceram menos tempo no quadrante do dia anterior,

indicando que a toxina interfere na consolidação da memória de longo prazo. Por outro lado, a

ANOVA revelou alterações significantes no grupo MT-Mlß, na primeira tentativa do dia pós

inoculação para os seguintes parâmetros: latência (s) MT-Mlß 71,80±21,67, Controle 37,98±12,38;

Tempo de permanência no quadrante do dia anterior (s) MT-Mlß 18,76±6,48, Controle 7,44±2,68,

indicando que, ao contrário da MT-Ml&alpha;, os ratos injetados com a MT-Mlß permaneceram

mais tempo na piscina quando comparados ao grupo controle, porém esse tempo foi gasto no

quadrante do dia anterior, demonstrando que a toxina causou um efeito facilitatório quanto à

recuperação da informação da localização da plataforma.

Conclusão:

A MT-Ml&alpha; causou prejuízo na memória de longo prazo sem interferência com a memória

espacial de curto prazo. A MT-Ml&beta; causou um efeito facilitatório quanto a formação da

memória de longo prazo da memória, este fato pode estar relacionado com uma melhor

recuperação da informação sobre a localização da plataforma adquirida no dia anterior. Ambas as

toxinas não causaram danos histopatológicos.

Apoio Financeiro:

A MT-Ml&alpha; causou prejuízo na memória de longo prazo sem interferência com a memória

espacial de curto prazo. A MT-Ml&beta; causou um efeito facilitatório quanto a formação da

memória de longo prazo da memória, este fato pode estar relacionado com uma melhor

recuperação da informação sobre a localização da plataforma adquirida no dia anterior. Ambas as

toxinas não causaram danos histopatológicos.

Comitê de Ética:

Comitê de Ética do Instituto B

24.017 Análise temporal dos efeitos hepatotóxicos do paracetamol emcamundongos C57BL/6

Costa, L. H. , Bandeira, A. C. B. , Miranda, P. H. A. , Lima, W. G. , Bezerra, F. S. , Costa, D. C. ,

Departamento de Ciências Biológicas - UFOP

Introducao:

O Paracetamol (APAP) é um medicamento que em doses terapêuticas atua como analgésico e

antipirético. No entanto, em doses excessivas pode causar hepatotoxicidade em animais

experimentais e seres humanos, sendo a causa mais freqüente de insuficiência hepática aguda em

todo o mundo ocidental. Muitos conceitos básicos de toxicidade da droga foram desenvolvidos

utilizando esse modelo, como conseqüência, a toxicidade pelo APAP é um dos modelos mais

populares para testar agentes potencialmente hepatoprotetores, principalmente produtos naturais.

Objetivos:

O presente estudo tem como objetivo realizar uma análise temporal do dano hepático e do sistema

glutationa em camundongos intoxicados com paracetamol.

Metodos:

Foram utilizados camundongos da linhagem C57BL/6 (n = 40), com 12 semanas de idade e massa

corporal de 20-30g. Os animais foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes grupos: controle,

APAP 3h (500mg/kg, dose única, gavagem), APAP 6h (500mg/kg, dose única, gavagem), APAP

12h (500mg/kg, dose única, gavagem), APAP 24h (500mg/kg, dose única, gavagem). Os animais

foram eutanasiados 3, 6, 12 e 24 horas após intoxicação com APAP. Análises séricas das enzimas

alanina aminotransferase (ALT) e aspartato transaminase (AST) e análises do sistema glutationa no

homogenato do fígado foram realizadas. Os dados foram expressos como média±erro padrão da

média. Foi utilizado P<0,05 como nível de significância e o teste estatístico one-way ANOVA

seguido do pós-teste Bonferroni para os dados paramétricos e o teste de Kruskal -Wallis seguido do

pós-teste de Dunns para os dados não-paramétricos.

Resultados:

Os animais do grupo APAP 3h (203,7±5,7), 6h (189,0±2,9), 12h (210,4±2,4) e 24h (202,5±5,8)

apresentaram um aumento na concentração da enzima ALT (UI) quando comparado ao grupo

controle (28,5±0,9). O mesmo foi observado na concentração enzimática da AST (UI), onde os

animais APAP 3h (212,7±6,5), 6h (159,3±6,5), 12h (190,1±6,0) e 24h (145,9±0,7) apresentaram um

aumento quando comparado ao grupo controle (57,3±3,1). Ao analisar a Glutationa Total (nmol/ml),

os grupos APAP 12h (77,5±4,6) e 24h (69,8±2,6) apresentaram um aumento de sua quantidade

quando comparados ao grupo controle (51,1±2,0) e o grupo APAP 3h (19,1±2,0) apresentou uma

diminuição quando comparado ao controle. Ainda, a quantidade de Glutationa Reduzida no grupo

APAP 3h (16,1±1,8) foi menor quando comparada aos grupos controle (42,7±2,2), APAP 6h

(52,3±5,3), 12h (48,0±6,4) e 24h (54,8±3,3). Em relação a Glutationa Oxidada (nmol/ml) foi

observada uma diminuição de sua quantidade no grupo APAP 3h (2,9±0,3) quando comparado ao

controle (8,3±0,4) e um aumento no grupo APAP 12h (29,5±2,2) e 24h (15,0±1,1) quando

comparado ao controle. Finalmente, a relação GSH/GSSG apresentou uma diminuição significativa

no grupo APAP 12h (1,7±0,3) quando comparado ao controle (5,2±0,5) e aos grupos APAP 3h

(5,6±0,6), 6h (6,2±0,6) e 24h (3,9±0,4).

Conclusão:

Nesse modelo específico de toxicidade, foi possível observar a clara alteração nas enzimas

hepáticas nas primeiras horas após a administração do paracetamol. Ainda nas primeiras horas,

observamos a depleção da glutationa marcando o início do desequilíbrio redox, que ficou evidente

12h após a intoxicação dos animais. Estes primeiros resultados são importantes para nortear outros

estudos de hepatotoxicidade no nosso laboratório.

Apoio Financeiro:

Nesse modelo específico de toxicidade, foi possível observar a clara alteração nas enzimas

hepáticas nas primeiras horas após a administração do paracetamol. Ainda nas primeiras horas,

observamos a depleção da glutationa marcando o início do desequilíbrio redox, que ficou evidente

12h após a intoxicação dos animais. Estes primeiros resultados são importantes para nortear outros

estudos de hepatotoxicidade no nosso laboratório.

Comitê de Ética:

nº 2013/41

24.018 EFEITO DO EXTRATO DE Ginkgo biloba SOBRE OS PARÂMETROSREPRODUTORES DE RATOS WISTAR ORIGINÁRIOS DE MÃES EXPOSTAS

DURANTE O PERÍODO DA FETOGÊNESE.Bezerra, J. C. , Rocha, E. R. S. , Teixeira, J. R. P. V. A. , Ferreira, F. M. , Peters, V. M. , Guerra, M.

O. ,

Centro de Biologia da Reprodução - CBR/UFJF

Introducao:

A exposição intrauterina a fármacos e agentes tóxicos é causa de inúmeros problemas

desenvolvidos na vida adulta. Fitoterápicos costumam ser utilizados indiscriminadamente por serem

produtos naturais, considerados inofensivos. Entre os fitoterápicos  com ação estrogênica

observaram-se, em roedores, redução do peso dos testículos e da concentração espermática,

hipospadias, criptorquidismo e tumores testiculares. O Ginkgo biloba é um fitoestrógeno que possui

compostos com estrutura química semelhante ao estradiol que tem afinidade por receptores &beta;

estrogênicos, importantes no desenvolvimento e função do sistema reprodutor masculino. Seu

efeito sobre o sistema reprodutor de fetos não foi suficientemente avaliado,o que  justifica seu

estudo em ratos cujas mães foram expostas ao extrato no período da Fetogênese.

Objetivos:

Avaliar o efeito do extrato de Ginkgo biloba sobre o sistema reprodutor masculino de ratos Wistar

cujas mães foram expostas durante o período fetal.

Metodos:

40 ratas no primeiro dia pós-coito (pc), provenientes do Biotério do CBR/UFJF e mantidas em

condições controladas de temperatura, umidade e ventilação, foram distribuídas, aleatoriamente,

em  grupos: controle (C 1ml de água destilada) e três tratados T1, T2 e T3 que receberam,

respectivamente, 25; 50 e 100mg/kg de extrato aquoso de Ginkgo biloba, via intragástrica, nos dias

16 a 20 pc. Após o nascimento, dois machos por mãe foram observados quanto à descida testicular

e morfologia da glande do pênis à partir do 15º dia pós natal (DPN). Os animais foram anestesiados

no 65º DPN com associação de xilazina (10mg/kg) e quetamina (90mg/kg) e coletado sangue por

punção cardíaca e em seguida procedeu-se a eutanásia por deslocamento cervical. Foram

analisados: concentração e morfologia espermáticas, peso dos testículos, epidídimo esquerdo e

vesícula seminal vazia. Os dados foram analisados através do teste de ANOVA, seguido do teste

de Dunnet (&alpha;=0.05). O procedimento experimental foi aprovado pela Comissão de Ética no

Uso de Animais da Universidade Federal de Juiz de Fora (CEUA/UFJF nº 81/2012).

Resultados:

Não foram encontradas diferenças significativas, exceto na morfologia espermática, onde foi

observado aumento do número de espermatozoides anormais em todos os grupos tratados quando

comparados com o grupo controle (p<0.05). O numero de espermatozoides anormais nos grupos C,

T1, T2 e T3 foi, respectivamente, 19,90± 3,53, 29,0± 7,01, 26,05± 3,72 e 30,05± 6,53 (Média ± DP),

contando-se 200 espermatozoides/lâmina. A maioria das anomalias concentrou-se na cauda do

espermatozoide, totalizando 13,35± 2,42, 18,45± 6,87, 16,15± 4,31 e 19,55± 5,43(Média ± DP) nos

grupos C, T1, T2 e T3, respectivamente.

Conclusão:

O Ginkgo biloba não causou alterações significativas nos parâmetros reprodutores, exceto na

morfologia espermática que apresentou índice de anomalias superior nos grupos tratados em

relação ao controle, sugerindo que o Ginkgo biloba promove alterações na morfologia dos

espermatozoides.

Apoio Financeiro:

O Ginkgo biloba não causou alterações significativas nos parâmetros reprodutores, exceto na

morfologia espermática que apresentou índice de anomalias superior nos grupos tratados em

relação ao controle, sugerindo que o Ginkgo biloba promove alterações na morfologia dos

espermatozoides.

Comitê de Ética:

CEUA/UFJF nº 81/2012

24.019 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE CITOTÓXICA DE NOVOS DERIVADOSPIRIDIL-TIAZOL

Ribeiro, N.E., Silva, E. B. , Araújo, L. C. C. , Aguiar, J. S. , Leite, A. C. L. , Silva, T. G. ,

1Departamento de Antibióticos - UFPE

2Departamento de Ciências Farmacêuticas - UFPE

Introducao:

O câncer é um termo geral aplicado a um grupo de doenças caracterizadas pelo crescimento

desordenadodas células que podem invadir tecidos e órgãos. O câncer tem sido configuradocomo

um problema de saúde pública, sendo uma das maiores causas de morte em todo mundo. Apesar

do aumento do número de casos, ainda existe pouca expectativa para o desenvolvimentode novos

fármacos anticâncer. Tiossemicarbazonas e seus bioisósteros, heterociclicos, tiazol e tiazolinonas,

são compostos com elevado interesse científico devido suas diversas atividades biológicas, dentre

elas atividade imunomodulatória e antitumoral. Estudos já mostraram que derivados de

benzo[d]isotiazol são capazes de inibir o crescimento celular em linhagens de células leucêmicas.

Objetivos:

Avaliar os efeitos citotóxicos de novos derivados piridil-tiazol.

Metodos:

A atividade citotóxica foi realizada através do método colorimétrico do MTT([brometo de

(3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazólio]) (Sigma-Aldrich®). A célula tumoral HL-60 (leucemia

promielocítica humana) foi semeada (0,3 x 106 células/mL) em placas de 96 poços e cultivadas por

24 h. Em seguida, as substâncias (PF01, PF02, PF03, PF04, PF05, PF06, PF07, PF08, PF09,

PF10) foram adicionadas na concentração de 25µg/ml e a doxorrubicina foi utilizada como padrão.

Após 72h foi adicionado MTT (5mg/ mL-1), e após2h de incubação, o meio de cultura juntamente

com o MTT foram aspirados e 100 &mu;L de DMSO foi adicionado a cada poço. A absorbância foi

medida em espectrofotômetro (540 nm). Para as substâncias que apresentaram uma inibição

superior a 70% foi determinada sua CI50 (concentração que inibe 50% do crescimento celular em

relação ao controle), calculada pela regressão não linear com intervalo de confiança de 95%,

utilizando-se o software Graph Pad Prism. 5.0.

Resultados:

Todos os compostos testados apresentaram atividade citotóxica, com os seguintes percentuais de

inibição: PF01 (78,6%), PF02 (74,5%), PF03 (78,3%), PF04 (77,5%), PF05 (77,7%), PF06 (75,6%),

PF07 (76,1%), PF08 (75,1%), PF09 (73,3%) e PF10 (74,1%). Dentre eles, os que apresentaram

maior taxa de inibição foram o PF01, PF03 e PF05 frente à linhagem de leucemia. A CI50 dos

compostos com maior percentual de inibição foi determinada pelo método de MTT em

concentrações que variaram de (3,125- 25µg/mL). PF01 apresentou uma CI50 variando de

0,65&ndash;1,05µg/mL, PF03 de 0,71 &ndash; 0,99µg/mL a PF05 com a CI50 entre 0,68 &ndash;

0,90µg/mL. Os três compostos apresentaram uma CI50 menor que 3µg/mL, sendo considerados

bastante promissores.

Conclusão:

Os novos derivados piridil-tiazois mostraram-se eficientes na inibição do crescimento celular na

linhagem HL-60. Com base nestes resultados, estudos posteriores mais específicos serão

conduzidos para elucidação do modo de ação destes compostos.

Apoio Financeiro:

Os novos derivados piridil-tiazois mostraram-se eficientes na inibição do crescimento celular na

linhagem HL-60. Com base nestes resultados, estudos posteriores mais específicos serão

conduzidos para elucidação do modo de ação destes compostos.

Comitê de Ética:

N&atilde;o foram realizados experimentos que envolvesse animais e humanos.

24.020 Evaluation of the effects of human exposure to atmosphericcontaminants associated with biomonitoring of air quality

Fleck, A. S. , Teles, M. V. , Amantea, S. L. , Rhoden, C. R. ,

Farmacociências - UFCSPA

Introducao:

Air pollution in large cities is exacerbated near heavy traffic routes. However, air pollution has a

distinct distribution in different regions of the city and the evaluation of the impact of these

differences in human health is essential. 

Objetivos:

The aim of this study was to evaluate the effects of air pollution in areas with different population

density near heavy traffic roads at increasing distances from the pollution source, as well as

correlating plant biomonitoring data with marker of human exposure and passive sampling.

Metodos:

Monitoring areas were selected near major streets in 3 regions with different population profiles in

Porto Alegre &ndash;Brazil.  Area A, B and C: high, intermediate and low population density,

respectively. Points at 0m, 100m and 200m from the major street were selected in each area.

Human exposure was made in public school students next to areas A, B and C. Biomonitoring assay

conducted was pollen abortion in Bauhinia variegate (n= 3000 cells per point). NO2 were

determined by passive sampling (n= 6 per point). Human exposure was evaluated by micronuclei in

buccal cells (n=35). Comparison of means was done with One-Way ANOVA followed by Bonferroni

test. Association between these parameters was determined with Pearson Correlation. Level of

significance: 5%.

Resultados:

NO2 had higher concentration in area A compared with B and C (P<0.001). Furthermore, area B

had higher concentration compared with C (P<0.001). All points located on the major street showed

a higher concentration in comparison with points 200m away (P<0.001) showing the dispersion of

this gas even considering the flow of secondary streets. Area A showed a higher mean of cells

aborted than B and C (P<0.001). Area B was statistically different from C (P<0.001). Pollen abortion

and NO2 showed a strong correlation (r=0.842; P=0.004). This correlation represents the relation in

the concentration of an air pollutant that is marker of vehicular flow with an air pollution biomarker of

genotoxicity. In micronuclei assay, children of area A and B showed a higher rate when compared

with C (P<0.001). All these results combined demonstrated the air quality and exposure differences

in distinct regions of the same city.

Conclusão:

This study demonstrated the difference in air quality in regions with different population density near

heavy traffic roads. Also, we compared the effects of human exposure to air pollution with a vegetal

bioindicator. Despite we found no difference in micronuclei of high and intermediate population

areas, human and plant exposure were related when comparing high and low populated areas. In

our knowledge, this is the first study comparing human and vegetal biomonitoring in a city.

Apoio Financeiro:

This study demonstrated the difference in air quality in regions with different population density near

heavy traffic roads. Also, we compared the effects of human exposure to air pollution with a vegetal

bioindicator. Despite we found no difference in micronuclei of high and intermediate population

areas, human and plant exposure were related when comparing high and low populated areas. In

our knowledge, this is the first study comparing human and vegetal biomonitoring in a city.

Comitê de Ética:

315.260

24.021 A EXPOSIÇÃO CRÔNICA AO CHUMBO AUMENTA A PRODUÇÃO DEPERÓXIDO DE HIDROGÊNIO E DIMINUI A REATIVIDADE VASCULAR EM

AORTA DE RATOS.Nunes, K. Z. , Nunes, D. O. , Fioresi, M. , Vassallo, D. V. ,

1Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas - UFES

2Departamento de Enfermagem - UFES

NCB - EMESCAN

Introducao:

A exposição crônica ao chumbo aumenta a pressão arterial e promove alterações cardíacas em

animais com plumbemia abaixo do limite recomendado pela legislação internacional (PlosOne 9:5,

2014). Entretanto, os efeitos vasculares da exposição a baixas concentrações de chumbo não

estão totalmente esclarecidos.

Objetivos:

Investigar os efeitos da exposição por trinta dias ao acetato de chumbo sobre a reatividade vascular

à fenilefrina em anéis de aorta de ratos e investigar as possíveis vias envolvidas com a resposta

Metodos:

Foram utilizados ratos Wistar (Rattus novergicus albinus), machos, com peso entre 280 e 350

gramas (g) e idade aproximada de 12 semanas. Os protocolos experimentais foram aprovados pelo

Comitê de Ética em Pesquisa com Animais Experimentais do CEUA / UFES sob o número:

002/2013. Os animais foram divididos em dois grupos: controle- recebiam água de beber por trinta

dias; e chumbo-tratado- recebiam água de beber acrescida de 100 ppm de acetato de chumbo por

trinta dias. Os resultados são expressos como média ± EPM; diferenças de Rmáx e pD2 foram

analisados ??pelo teste t de Student, e P<0,05 foi considerado significante.

Resultados:

O tratamento com o chumbo reduziu a resposta vasoconstritora de anéis de aorta à fenilefrina (Ct =

107 ± 6,39 vsPb = 87,60 ± 6,04 n= 15). A resposta contrátil à fenilefrina, na incubação com

L-NAME, não diferiu em ambos os grupos experimentais (Ct/L-NAME= 134 ± 10,4 vs Pb/L-NAME=

141 ± 8,5 n=13). A incubação dos anéis com TEA e Catalase, promoveu uma resposta à fenilefrina

de maior magnitude no grupo chumbo (Ct/TEA = 140 ± 11,4 vs Pb/TEA = 145 ± 6,2 n= 9;

Ct/Catalase = 112 ± 5,2 vs Pb/Catalase = 137 ± 6,7 n=6).

Conclusão:

A exposição por trinta dias ao chumbo promoveu diminuição da reatividade vascular em anéis de

aorta de ratos sem alterar a produção de óxido nítrico. Essa diminuição pode estar relacionada ao

aumento da produção de peróxido de hidrogênio e sua ação nos canais para potássio promovendo

relaxamento vascular.

Apoio Financeiro:

A exposição por trinta dias ao chumbo promoveu diminuição da reatividade vascular em anéis de

aorta de ratos sem alterar a produção de óxido nítrico. Essa diminuição pode estar relacionada ao

aumento da produção de peróxido de hidrogênio e sua ação nos canais para potássio promovendo

relaxamento vascular.

Comitê de Ética:

CEUA / UFES sob o número: 002/

24.022 Avaliação da contratilidade de tecido isolado in vitro de músculo liso(artéria mesentérica) em ratos Wistar frente às frações peptídicas do veneno da

serpente Crotalus durissus terrificus.Mendes, P. R. , Filho, H. V. R. , Magalhães, P. A. F. , Barros, L. C. , Magalhães, P. J. C. , Bindá, A.

H. , Santos, L. D. ,

Centro de Estudos em Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) - UNESP

Departamento de Fisiologia e Farmacologia - UFC

Introducao:

Os venenos de serpentes representam uma mistura de compostos orgânicos e inorgânicos, ricos

em moléculas biologicamente ativas. Estas moléculas constituem modelos moleculares

interessantes para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas aplicáveis na geração de

agentes terapêuticos com propriedade hipotensora. 

Objetivos:

Avaliar a atividade farmacológica em preparações isoladas de artéria mesentérica das frações

peptídicas presentes no veneno da serpente Crotalus durissus terrificus (C.d.terrificus), avaliando a

contratilidade de tecido isolado in vitro de músculo liso em ratos Wistar. 

Metodos:

Cem mg do veneno da serpente C.d.terrificus foi solubilizado em TFA 0,1%, para a precipitação de

proteínas totais. Em seguida, a amostra foi centrifugada à 8.000xg por 30 minutos em filtros de

cut-off de 3.000 Da. Por sua vez, os peptídeos foram submetidos à cromatografia líquida de fase

reversa sob gradiente de 5 a 70% por 60 minutos, sob fluxo de 0,5 mL/min e leitura de absorbância

em 254 nm. As frações peptídicas resultantes foram aplicadas no modelo experimental descrito a

seguir. Ratos Wistar machos (200-250g) obtidos do biotério do Departamento de Fisiologia e

Farmacologia da Universidade Federal do Ceará foram anestesiados com pentobarbital sódico de

30 a 50mg /kg, via intra-peritonial e em seguida, sacrificados por deslocamento cervical (Protocolo

CEUA 990-2013). O tecidos foram montados em câmaras para órgão isolados contendo 5mL de

solução fisiológica de Krebs-Henseleit, pH 7,4, mantida aquecia à 37°C. Os tecidos foram atados a

um ponto fixo na câmara e à unidade transdutora de força apropriada para registro isométrico das

contrações. A tensão basal aplicada ao tecido foi de 0,5g para estabilização dos canais de trabalho.

Os sinais gerados pelo transdutor de força foram condicionados e registrados em um sistema de

aquisição computadorizado. Após um período de equilíbrio, os tecidos foram expostos à solução

despolarizante de alta concentração de K+ (60 mM), repetidas vezes até que duas respostas de

mesma amplitude fossem obtidas. Após este processo, o protocolo de reversão foi realizado na

presença das soluções de Phe 0,1uM e Ach 1uM, finalizando com Phe 0,05uM. As curvas de

concentração-efeito para o veneno bruto da serpente Crotalus durissus terrificus e suas frações

peptídicas foram obtidas pela exposição da preparação à concentrações crescentes (0,01, 0,1, 1,

10, 100, 200, 300 ug/mL) à solução fisiológica de Krebs-Henseleit normal na câmara de banho,

para avaliação de seus efeitos sobre o tônus basal da artéria mesentérica isolada de rato Wistar.

Após a realização da curva concentração-efeito, o tecido foi lavado com Verapamil à 25mM, para

avaliar a integridade do tecido. Foi utilizado o Programa Estatístico Sigma Plot 11.0.

Resultados:

O perfil cromatográfico obtido revelou a presença de x frações, as quais foram coletadas e

submetidas aos ensaios de contratibilidade in vitro descrito anteriormente. As frações que

apresentaram significância estatística (p>0,05) em relação a ação de relaxamento do músculo liso

avaliado foram as frações 1 e 3. Levando em consideração que essas frações peptídicas foram

eluídas na presença de 5-10% de acetonitrila/TFA 0,1%, denota-se que, as frações 1 e 3

apresentam compostos predominantemente hidrofílicos e, como estas evidenciaram um efeito

hipotensor para a artéria mesentérica, acredita-se que a prospecção presente de novos candidatos

à medicamentos hipotensores está sendo bem desenvolvida.   

Conclusão:

O perfil cromatográfico obtido revelou a presença de x frações, as quais foram coletadas e

submetidas aos ensaios de contratibilidade in vitro descrito anteriormente. As frações que

apresentaram significância estatística (p>0,05) em relação a ação de relaxamento do músculo liso

avaliado foram as frações 1 e 3. Levando em consideração que essas frações peptídicas foram

eluídas na presença de 5-10% de acetonitrila/TFA 0,1%, denota-se que, as frações 1 e 3

apresentam compostos predominantemente hidrofílicos e, como estas evidenciaram um efeito

hipotensor para a artéria mesentérica, acredita-se que a prospecção presente de novos candidatos

à medicamentos hipotensores está sendo bem desenvolvida.   

Apoio Financeiro:

O perfil cromatográfico obtido revelou a presença de x frações, as quais foram coletadas e

submetidas aos ensaios de contratibilidade in vitro descrito anteriormente. As frações que

apresentaram significância estatística (p>0,05) em relação a ação de relaxamento do músculo liso

avaliado foram as frações 1 e 3. Levando em consideração que essas frações peptídicas foram

eluídas na presença de 5-10% de acetonitrila/TFA 0,1%, denota-se que, as frações 1 e 3

apresentam compostos predominantemente hidrofílicos e, como estas evidenciaram um efeito

hipotensor para a artéria mesentérica, acredita-se que a prospecção presente de novos candidatos

à medicamentos hipotensores está sendo bem desenvolvida.   

Comitê de Ética:

CEUA 990-2013

24.023 QUERCETIN PROTECTS THE &delta;-ALA-D ACTIVITY AND ROSPRODUCTION IN THE BRAIN OF CADMIUM EXPOSED RATS

Pelinson, L. P. , Abdalla, F. H. , Costa, P. , Oliveira, J. S. , Honnef, D. S. , Baldissarelli, J. , Bottari,

N. B. , Pereira, A. S. , Gonçalves, J. F. , Schetinger, M. R. C. , Morsch, V. M. , Mazzanti, C. M. ,

Departamento de Química - UFSM

Departamento de Fisiologia e Farmacologia - UFSM

Introducao:

Cadmium (Cd) is a heavy metal with a long biological half-life in humans which presents low rate of

excretion. The molecular mechanisms of Cd toxicity are not yet well defined; however, the

accumulation of Cd can damage various tissues including the brain. On the other hand, quercetin is

a natural antioxidant that has been studied due to its wide therapeutic benefits that involves its

antioxidant effects, chelating properties of some elements as metals and neuroprotective capacity.

Objetivos:

The present study investigated the effects of quercetin on the &delta; - aminolevulinate dehydratase

(&delta;-ALA-D) activity and reactive oxygen species (ROS) production in the central nervous

system (CNS) of Cd exposed rats.

Metodos:

Adult male Wistar rats (70-90 days; 220-300 g) from the Central Animal House of the University

Federal University of Santa Maria were used in this experiment. All animal procedures were

approved by the Animal Ethics Committee (protocol under number: 031/2011). Animals received by

oral administration (1ml/kg): Cd as CdCl2 (Cd 2.5 mg/kg) dissolved in saline and/or quercetin (5, 25

and 50 mg/kg) dissolved in ethanol 25%. Both solutions were administered 5 days for week for 45

days. Animals were randomly divided into eight groups of 10 - 14 animals each: saline/control,

saline/Querc 5 mg/kg, saline/Querc 25 mg/kg, saline/Querc 50 mg/kg, Cd/ethanol 25%, Cd/Querc 5

mg/kg, Cd/Querc 25 mg/kg, and Cd/Querc 50 mg/kg. Quercetin was administered 30 min after Cd.

In the last day of treatment animals were submitted to euthanasia and the total brain was collected

to &delta;-ALA-D assay (Enzyme 28: 133, 1982), and cerebral cortex(CO), hippocampus(HC),

striatum(ES), hypothalamus(HT) and cerebellum(CE) were collected for the

2&rsquo;-7&rsquo;-Dichlorofluorescein assay (Biochem. Pharmacol. 65:1575, 2003). Statistical

analyses were carried out by two-way ANOVA, followed by Tukey test where p<0.05 was

considered to represent a significant difference. The data are expressed as mean±SEM.

Resultados:

Cd exposure decreased the &delta; - ALA-D activity significantly (53%) in brain when compared with

saline/control group. The quercetin administration was ineffective in restoring &delta; - ALA-D

activity to normal values. The ROS production was significantly increased in CO, HC and HT in

Cd/ethanol group when compared to the saline/control group (84.2%, 88.1%, 92.8% respectively).

However, the treatment with quercertin was able to prevent the increased on ROS production when

compared to Cd/ethanol group.

Conclusão:

Preliminary result allows us to infer that the probable mechanism to &delta;-ALA-D activity decrease

in Cd exposed rats could be Zn2+ displacement caused by Cd. Therefore, inhibition of

&delta;-ALA-D may impair the heme biosynthetic pathway and lead to the accumulation of its

substrate, ALA, which can auto-oxidize, leading to increase in the production of ROS. Thus, we

suggest that quercetin is a promising compound which should be investigated in future studies in

order to improve therapeutic alternatives for brain injury associated with Cd-induced neurotoxicity.

Apoio Financeiro:

Preliminary result allows us to infer that the probable mechanism to &delta;-ALA-D activity decrease

in Cd exposed rats could be Zn2+ displacement caused by Cd. Therefore, inhibition of

&delta;-ALA-D may impair the heme biosynthetic pathway and lead to the accumulation of its

substrate, ALA, which can auto-oxidize, leading to increase in the production of ROS. Thus, we

suggest that quercetin is a promising compound which should be investigated in future studies in

order to improve therapeutic alternatives for brain injury associated with Cd-induced neurotoxicity.

Comitê de Ética:

031/2011

24.024 AVALIAÇÃO DO DANO OXIDATIVO EM ANIMAIS COM DEMÊNCIAESPORÁDICA

Mânica, A. , Rodrigues, M. V. , Gutierres, J. M. , Vieira, J. M. , Bottari, N. B. , Carvalho, F. B. ,

Lemes, J. G. , Abdalla, F. H. , Morsch, V. M. , Shetinger, M. R. , Dalenogare, D. P. , Bagatini, M. D. ,

Departamento de Quimica - UFSM -RS

Colegiado do Curso de Enfermagem - UFFS - SC

Introducao:

A Doença de Alzheimer (DA) é considerada a principal causa de demência em idosos no mundo

afetando o Sistema Nervoso Central, principalmente o córtex cerebral responsável pelos processos

de aprendizagem e memória (Am. J. Geriatr. Psychiatry. 14; 1032, 2006). Em animais, tem sido

utilizada a injeção intracerebroventricular de estrepzotocina (icv-STZ) como modelo de demência

esporádica do tipo Alzheimer (DETA)  (Behav Brain Res. 209; 73, 2010). Estudos têm demonstrado

que as espécies reativas de oxigênio (EROs) são responsáveis pelos déficits comportamentais e de

memória em doenças neurodegenerativas, como a DA, sendo que seus efeitos podem ser

observados através da peroxidação lipídica (LPO) e danos as proteínas.Considerando que a DA é

uma das principais causas de demência em idosos, tornou-se relevante avaliar os efeitos da

Vitamina D (VD3) nesta patologia.

Objetivos:

Analisar a produção de EROs, os níveis de TBARS e o conteúdo de Proteína Carbonil em ratos

tratados com VD3 e investigar os efeitos da VD3 no modelo em estudo. 

Metodos:

Foram utilizados 56 ratos machos Wistar adultos, pesando entre 350-400g que foram divididos em

8 grupos: veículo, VD3 12,5µg/kg (12,5VD), VD3 42µg/kg (42VD), VD3 125µg/kg (125 VD),

estreptozotocina (SDAT), estreptozotocina + VD3 12,5µg/kg (SDAT+VD12,5), estreptozotocina +

VD3 42µg/kg (SDAT+VD42), estreptozotocina + VD3 125µg/kg (SDAT+VD125). A indução da

demência ocorreu através de uma injeção bilateral de estreptozotocina (3mg/kg)

intracerebroventicular. Após os animais passaram por um período de recuperação de 72 horas,

sendo tratados em seguida com VD3, via oral, durante 21 dias. A produção de EROS foi

determinada de acordo com o método de Ali et al. (Neurotoxicology. 13: 637, 1992), os níveis de

TBARS foram realizados de acordo com Ohkawa et al. (Anal. Biochem. 95: 351, 1979) e o

conteúdo de PC foi descrito de acordo com o método de Levini modificado (Methods Enzymol.186:

464, 1990). Os dados paramétricos foram analisados por ANOVA de duas vias, seguido pelo teste

de Bonferroni (*p <0,05).

Resultados:

Não foi observada diferença significativa nos níveis de EROs em córtex cerebral nos grupos

estudados. Entretanto, ocorreu um aumento significativo nos níveis de TBARS nos grupos SDAT

(1,40 ± 0,103), SDAT+VD12,5 (1,41 ± 0,175), SDAT+VD42 (1,18 ± 0,183) e SDAT+VD125 (1,00 ±

0,090) quando comparados com o veículo (0,633 ± 0,100) (p<0.05), porém no grupo SDAT+VD125

(1,00 ± 0,0903) os níveis de TBARS foram diminuídos quando comparados com o SDAT(1,40 ±

0,103). Já no conteúdo de PC ocorreu um aumento no grupo SDAT (5,24 ± 0,198) quando

comparado com o veículo (2,34 ± 0,280) (p<0.05). Nos grupos SDAT+VD12,5 (3,05 ± 0,580)

SDAT+VD42 (2,37 ± 0,252) e SDAT+VD125 (2,476 ± 0,349) observou-se uma diminuição

significativa quando comparado com o grupos SDAT (5,24 ± 0,198).

Conclusão:

Concluímos que a DA leva a um aumento nos níveis de TBARS e PC e a VD3 foi capaz de reverter

os danos causados pela demência, devido ao fato dela ser um importante antioxidante.

Apoio Financeiro:

Concluímos que a DA leva a um aumento nos níveis de TBARS e PC e a VD3 foi capaz de reverter

os danos causados pela demência, devido ao fato dela ser um importante antioxidante.

Comitê de Ética:

102/2013

24.025 INFLUÊNCIA DO TRATAMENTO COM SULFADIAZINA ASSOCIADO ÀRESVERATROL SOBRE O COMPORTAMENTO DE CAMUNDONGOS

INFECTADOS COM TOXOPLASMA GONDIIBottari, N. B. , Baldissera, M. D. , Tonin, A. A. , Thomé, G. , Luchese, C. , Schetinger, M. R. C. ,

Mânica, A. , Pelinson, L. P. , Valvassori, M. , Dalenogare, D. P. , Da Silva, A. S. ,

Departamento de Química - UFSM

Departamento de Zootecnia - UDESC

Departamento de Microbiologia e Parasitologia - UFSM

Departamento de Ciências Químicas, Farmacêuticas e de Alimentos - UFPEL

Introducao:

A toxoplasmose é uma doença causada pelo Toxoplasma gondii, capaz de provocar mudanças

comportamentais e difícil tratamento. Atualmente, a sulfadiazina é uma droga de escolha para

humanos com toxoplasmose, porém apresenta toxicidade e efeitos colaterais indesejáveis. Em

virtude disso, buscar alternativas é desejável, assim como a associação com resveratrol, um

polifenol com alto potencial antioxidante, naturalmente encontrado em uvas.

Objetivos:

O objetivo foi investigar o efeito do resveratrol livre e nanoencapsulado associado à quimioterapia a

base de sulfadiazina no comportamento de camundongos infectados experimentalmente com T.

gondii.

Metodos:

Camundongos Swiss machos (n=50) com 60 dias de idade (25±5 g) foram utilizados como modelo

experimental. Os animais foram divididos em dois grandes grupos, não infectados (n=20) e

infectados (n=30).  Após, foram subdivididos em grupos de acordo com os tratamentos (n=5). Isto

é, quatro grupos de camundongos não infectados e não tratados (grupo A), tratado com

sulfadiazina (grupo B), tratado com resveratrol livre (grupo C) e tratado com resveratrol

nanoencapsulado (grupo D). Assim como, seis grupos de animais infectados com T. gondii e não

tratado (grupo E), tratado com sulfadiazina (grupo F), tratado com resveratrol livre (grupo G),

tratado com resveratrol nanoencapsulado (grupo H), tratado com sulfadiazina associado à

resveratrol livre (grupo I) e tratado com sulfadiazina em associação à nanocapsulas de resveratrol

(grupo J). Os camundongos foram infectados via oral com cepa cistogênica (VEG) e 20 dias

pós-infecção (PI) iniciaram-se os tratamentos via oral durante 10 dias consecutivos (sulfadiazina-

0,5 mg/kg; resveratrol livre e nanoencapsulado- 100 mg/kg). Após 18 e 30 dias PI, parâmetros

comportamentais foram avaliados. O teste de cruz elevada segundo Pellow et al. (J. Neurosci.

Meth. 14:149&ndash;167, 1985) foi realizado para verificar a ansiedade dos animais, já a memória

foi avaliada conforme Sakaguchi et al. (Eur. J. Pharmacol. 530:81&ndash;87, 2006) pelo teste de

Schiva inibitória. Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal pela

Universidade do Estado de Santa Catarina (nº 01.52.13). A análise estatística foi realizada pelo

teste de ANOVA de uma via seguido do teste de Studant-Newman-Keuls, e dados apresentados

como média e desvio padrão (Significativo; p<0,05).

Resultados:

Os resultados revelam um aumento no número de entradas (12,4±5,4), no tempo gasto nos braços

abertos (6,0±2) e redução no tempo de latência (181±19,9) em animais infectados quando

comparado com grupo controle (6,41±4,3; 3,2±0,8 e 293±12,1), indicando um comportamento

ansiolítico e perda de memória nos animais infectados no dia 18 PI. A administração das

combinações reduziu a atividade ansiolítica e reverteu a perda de memória no dia 30 dias PI, pois

reduziu o número de vezes (grupo I- 4,1±2,7; grupo J- 8,33±4,8) e tempo nos braços abertos (grupo

I-1,5±0,5; grupo J- 1,8±0,4), assim como aumentou o tempo de latência (grupo I-300±33,6; grupo J-

295±4,8), similar ao encontrado no grupo controle (5,05±4; 3,3±11; 293±12,1, respectivamente). No

dia 30 PI, não teve diferenças comportamentais significativas entre grupos: E, F, G e H, apesar do

tratamento.

Conclusão:

Concluímos que o resveratrol quando combinado potencializa o efeito da sulfadiazina ao evitar

alterações de comportamento relacionadas à memória e ansiedade em camundongos infectados

com T. gondii.

Apoio Financeiro:

Concluímos que o resveratrol quando combinado potencializa o efeito da sulfadiazina ao evitar

alterações de comportamento relacionadas à memória e ansiedade em camundongos infectados

com T. gondii.

Comitê de Ética:

01.52.13

24.026 Effect of Aluminum on the Chlorophyll Content and Activity of EnzymeDelta Aminolevulinate Dehydratase Genotypes of Avena sativa L.

Silva, A. D. , Morsch, V. M. , Schetinge, M. R. C. , Pereira, L. B. ,

Departamento de Química - UFSM

Introducao:

The aluminum directly affects the synthesis of enzymes, pigments, and essential cofactors (Funct.

Plant. Biol. 32, 481, 2005).

Objetivos:

The aim of this study was to evaluate the activity of delta-aminolevulinic acid dehydratase and

chlorophyll contents in shoots of oat in plants exposed to Al 3+.

Metodos:

Plant material and growth conditions: Avena sativa L. (oat) of three genotypes (UFRGS 17

Al-tolerant; UFRGS 93605 Al-sensitive, UFRGS 280 Al-intermediate), were transferred into plastic

boxes (10.000 mL), the roots were submerged in aerated full nutrient solution of low ionic strength.

Five different Al2(SO4)3 treatments (0, 5, 10, 20 and 30 mg L-1) were applied randomly. After 7

days of Al 3+ exposure, 24 plantlets per replicate were randomly harvested from hydroponic

containers and the shoots of oat were separated for analysis. Delta-aminolevulinic acid dehydratase

activity: ALA-D activity was assayed as described by Morsch et al. (Biol. Plantarum. 45, 85, 2002) by

measuring the rate of porphobilinogen (PBG) formation. Chlorophyll contents: Chlorophyll contents

were determined following the method of Hiscox and Israeslstam (Can. J. Bot. 57, 1132, 1979) and

estimated with the help of Lichtenthaler&rsquo;s formula (Met. Enz. 148, 350, 1987). The analyses

of variance were computed on statistically significant differences based on the appropriate F-tests

considering significant p <0.05.

Resultados:

The chlorophyll content was significant when compared between control values and values of

treatment with the highest concentration of Al3+, respectively, with values of 11.5 mg/mL and 9

mg/ml in the sensitive genotype; 11.9 mg/mL and 12.2 mg/mL in the intermediate genotype; and

11.6 mg/mL and 12.2 mg/mL in tolerant genotype. Chlorophyll content in tolerant and intermediate

seedling was not affected by increasing Al3+ level, but in sensitive seedlings it showed a decrease

at the two highest Al3+ levels. In ALA-D activity, when compared between the control and treatment

with higher concentrations of aluminum, respectively, showed values 3.59 nmolPGB/min/mg of

protein and 2.84 nmolPGB/min/mg of protein for sensitive genotype; 3.59 nmolPGB/min/mg of

protein and 4.24 nmolPGB/min/mg of protein in the intermediate genotype; 4.20 nmolPGB/min/mg

of protein and 4.19 nmolPGB/min/mg of protein in tolerant genotype. ALA-D activity in sensitive

seedlings showed a continuous inhibition with increasing Al3+  level, whereas in intermediate

seedlings the activity increased only upon addition of Al3+  level exceeding 20 mg/L Al2(SO4)3. The

ALA-D activity in tolerant seedlings was not affected by increasing Al3+ level. Moreover, tolerant

and intermediate seedlings showed higher ALA-D activity than sensitive seedlings.

Conclusão:

Al-exposure caused a severe inhibition of ALA-D activity in sensitive seedlings. Thus, the reduced

chlorophyll content observed in the present study may be attributed to reduced chlorophyll synthesis

because Al3+ inhibits the ALA-D activity. Al3+ may also be interfering with heme biosynthesis and

chlorophyll formation by interacting with functional &ndash;SH groups of sulfhydryl-requiring

enzymes like ALA-D (Biol. Plantarum. 45, 85, 2002; Tox. and Ap. Pharm. 200, 169, 2004).

Apoio Financeiro:

Al-exposure caused a severe inhibition of ALA-D activity in sensitive seedlings. Thus, the reduced

chlorophyll content observed in the present study may be attributed to reduced chlorophyll synthesis

because Al3+ inhibits the ALA-D activity. Al3+ may also be interfering with heme biosynthesis and

chlorophyll formation by interacting with functional &ndash;SH groups of sulfhydryl-requiring

enzymes like ALA-D (Biol. Plantarum. 45, 85, 2002; Tox. and Ap. Pharm. 200, 169, 2004).

Comitê de Ética:

The research is conducted with plants.