Princípios Básicos da Oximetria de Alta Resolução

Paulo Silveira

Roberta Martins

Orientadora: Alexandra Latini

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINADEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICAMétodos Analíticos em Bioquímica

Prof. Alcir Dafré

Respiração Mitocondrial

Substratos para Respiração Mitocondrial

Transporte de Substratos

Inibidores para Respiração Mitocondrial

Oxímetro

Oxygraph-2k(Oroborus Instruments)

Aula PráticaAmostra: Concentrado de Mitocôndrias de Fígado de Ratos

Técnica:

Reagentes

10µl de piruvato + 10 µl de malato 2mM

25 µl ADP 0,25M4 µl Rotenona 1mM

20 µl Succinato25 µl ADP 0,25M

5 µl Cianeto

Reagentes Consumo de Oxigênio (Marks Statistics)

10µl de piruvato + 10 µl de malato 2mM

 

25 µl ADP 0,25M  4 µl Rotenona 1mM  

20 µl Succinato  25 µl ADP 0,25M  5 µl Citocromo C  

Resultados Aula Prática

Estágio III: Quantidade de Oxigênio consumido na presença de substratos e ADP.

Estágio IV: Quantidade de Oxigênio consumido após a exaustão dos substratos e ADP.

Controle Respiratório (RCR):

RCR ADP/Pir+Mal = RCR ADP/Succinato=

Resultados Aula Prática