BACTERIOLOGIA

Goiânia2014

Prof. Me. Farm. Rodrigo Caixeta

Faculdade Unida de Campinas

Curso de Farmácia

FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA

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RESPOSTAS:

1) Oculares 7) Base

2) Canhão 8) Fonte de Luz

3) Objetiva 9) M(i/a)crométrico

4) Mesa 10) Pinça e Charriot

5) Condensador 11) Plug da Fonte

6) Diafragma 12) Braço

13) Revólver

FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA

F – Ponto Focalf – Distância Focal

Olho Humano25 cm ou

10 pol

Potencial de Amplitude

FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA

Ex1. Uma espécime é observada ao microscópio de luz (campo claro) em uma lente objetiva de 40X e a ocular do microscópio é 10X.

a) Qual é a amplitude da imagem observada?

b) Qual é o tamanho real de um microrganismo observado, com medida de 0,002 cm?

A amplitude revela a magnitude da imagem virtualAmplitude = Ocular x ObjetivaOcular: 10X Temos que: A = 40 x 10Objetiva: 40X Então.... A = 400X

Com a amplitude, é possível revelar o tamanho do microrganismoTemos, a partir do item (a) que: A = 400XEntão a imagem real foi ampliada em 400 vezes.Se na imagem virtual a régua mede 0,2 cm, o tamanho real é 400 vezes menor, ou seja, 0,002 400 = 0,0005 cm

0,0005 cm

5,0 x 10-4 cm

5 mm

MICRORGANISMO TAMANHO MÉDIO

VÍRUS 0,05 mm – 0,9 mm

BACTÉRIAS 0,3 mm – 2,0 mm

FUNGOS 2,0 mm – 10 mm

10-2

FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA

RESOLUÇÃOErnst Abbé

RESOLUÇÃO

FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIA

FUNDAMENTOS DA MICROSCOPIAÍNDICE DE REFRAÇÃO (n): É a variação da velocidade da luz em diferentes meios.

Ar

Água

1

2

nágua > nar

𝑛 =𝐶

𝑣

ESTRUTURAS BÁSICASa) Membrana Plasmáticab) Parede Celularc) Nucleóided) Citoplasmae) Mesossomosf) Ribossomosg) DNA Cromossomal

ESTRUTURAS ACESSÓRIASa) Cápsulab) Flágeloc) Plasmídiod) Cíliose) Pili sexual ....

PREPARO DOS ESPÉCIMES

FIXAÇÃO

COLETA

COLORAÇÃO

- Pele, anexos e mucosas- Líquidos corporais e Secreções- Ambiente

a) Por aquecimento e ar secob) Reação química

a) Exame Diretob) Diferencialc) Específica

FIXAÇÃO

Pipeta Micrométrica

Tubos para cultivo

Solventes Orgânicos

Placas de Petri e Meios de Cultura EPI e EPC

Fonte de Calor

Papel estraza

Caneta marcadora

Ponteiras

FIXAÇÃO

• Etanol (Álcool 90-95%)

• Ácido Acético

• Mercúrio Clorado

• Formaldeído (Formol 4%)

• Glutaraldeído

• Acetona

COMO PREPARAR UMA SOLUÇÃO?

1) Determinar soluto e solvente

2) Estabelecer condições de dissolução

3) Colocar aos poucos o soluto ao solvente

4) Agitar levemente até completa dissolução

UNIDADES DE SOLUÇÃO

Semelhante DISSOLVE

Semelhante

FUNDAMENTOS DA COLORAÇÃO

1. Corantes Básicos (Catiônicos)

Possuem grupos positivos e são geralmentevendidos na forma de sais de cloreto.

CORANTES USUAIS

Azul de Metileno

Fucsina Básica

Cristal Violeta

Safranina

Verde Malaquita

FUNDAMENTOS DA COLORAÇÃO

2. Corantes Ácidos (Aniônicos)

Possuem grupamentos negativos, comocarboxilas (-COOH) ou hidroxilas fenol (Ar-OH).

CORANTES USUAIS

Eosina

Rosa Bengala

Fucsina Ácida

EFEITO DO pH NOS CORANTES IÔNICOS

FUNDAMENTOS DA COLORAÇÃO

3. Corantes de Solubilização

Ligam-se covalentemente e podem serlipossolúveis ou hidrossolúveis seletivamente.

CORANTES USUAIS

Reagente de Schiff (PAS)

Sudam III

COLORAÇÃO DE GRAM (1884)

COLORAÇÃO DE GRAM

A PAREDE CELULAR - Peptidoglicano

NAM

NAG

Alanina

Ácido Diaminopimélico

Ácido Glutâmico

A PAREDE CELULAR GRAM+• 20 – 80 nm• Homogênea

Ácido Teicóico

Ácido Lipoteicóico

A PAREDE CELULAR GRAM-• 2 – 7 nm• Heterogênea

Lipoproteína de Braun

LPS

COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN (1882)

• Confeccionar o esfregaço seguindo as técnicas atuaisde biossegurança;

• Cobrir a lâmina com fucsina fenicada (o mordente é o ácido fénico);• Aquecer a lâmina até à emissão de vapores (é importante não

deixar ferver);• Aguardar 5 a 8 minutos;• Lavar com água corrente;• Cobrir a lâmina com álcool-ácido 3% até descorar totalmente o

esfregaço;• Lavar com água corrente;• Cobrir a lâmina com azul de metileno durante 1 minuto;• Lavar com água corrente;• Secar;• Observar.

COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN

A PAREDE CELULAR BAAR+

Arabinogalactana

LAM

Ácidos Micólicos

MORFOLOGIA BACTERIANA

1. Formas e Arranjos

a) Cocos: Esféricas ou arredondada

- Diplococos, Estreptococos, Estafilococos, Sarcina

b) Bacilos ou bastão: Alongadas ou extensas

- Cocobacilos, Bacilos curvos, Bastonetes

c) Vibrios ou vibriões: Curvados em “vírgula”

d) Micelares: Filamentoso e longo, multinucleados

e) Espirilo e Espiroquetas: Espiraladas helicoidais

f) Pleomórficas: letras chinesas, sem forma

FIGURA 1

COCOS - ESTREPTOCOCOS

FIGURA 2

BACILOS - CADEIA

FIGURA 3

ESPIRILOS - CÁPSULA

FIGURA 4

COCOS - ESTAFILOCOCOS

FIGURA 5

VIBRIÕES

FIGURA 6

EM RAQUETE

MICELARES

FIGURA 7

CÁPSULA

• São importantes por:

- Resistir à fagocitose

- Depósito de nutrientes

- Eliminação de Substâncias

- Protege desidratação

FLAGELO

FLAGELO

PLASMÍDIOS

• Plasmídios Conjuntivos

• Plasmídios Não-Conjuntivos

• Plasmídeo F

• Plasmídeo R

• Degradativos

• Virulência

ESPOROS

ALGINATO

• Formação de Biofilmes

ÁcidoAlgínico

- É uma associação simbiótica- Altamente Resistente- Comunicação- Harmônico

Pseudomonas aeruginosa