Post on 17-Jan-2016
description
www.profiva.com.br
GENÉTICA FORENSES
www.profiva.com.br
Combined DNA Index System
www.profiva.com.br
CODISCombined DNA Index System
• Combina a ciência forense + tecnologia eletrônica
Implantado pelo FBI 1998
• criminosos• evidências coletadas na cena do crime• Entre outros
DNA extraído de
Todos os estados americanos podem ter acesso ao Banco de DNA
www.profiva.com.br
Sociedade Internacional de Genética Forense (ISFG)
Avaliam:
• Reprodutibilidade e exatidão das metodologia utilizadas
O FBI acrescenta
• Controle do laboratório• Realização de periódicos testes de
proficiências ( a cada 180 dias)• Auditorias anuais
www.profiva.com.br
No Brasil
Os testes de proficiência são realizados pelo grupos _ ISFG
• Espanhol• Português
Esses testes constituem:
• Analise de amostras de sangue o outros fluidos biológicos que simulam um caso forense
www.profiva.com.br
Para analise do DNA forense
www.profiva.com.br
Material de coleta
www.profiva.com.br
Cronologia
1985_ Alec Jeffreys• Desenvolve as
sondas multi-locús para a caracterização de vinculo genético
1988_ FBI• Começa a
realizar analises por sondas
1991_ STR• Marcador
fluorescentes são descritos pela primeira vez
1998_ FBI• Cria o CODIS
1999_ Brasil• Resolução SSP-
194 em 2/Ago
2000_ Projeto Genoma• Finaliza o
sequênciamento• Concluído em
Abril de 2003
2004_ SENAP • Online
protocolos de padronização de exame de DNA em pericia criminal
www.profiva.com.br
Os testes de DNA podem ser utilizados:
Teste de paternidade•Caracterização de vínculos genéticos
Desastres em massa• Identificação de fragmentos humanos
Investigação histórica
Identificação de pessoas desaparecidas
Identificação de militares
Banco de DNA de criminosos
Banco de evidencias biológicas
www.profiva.com.br
Amostras Biológicas para analise forense
Sangue
Esfregaços bucais
Saliva
Ossos
Dentes
Tecidos
Órgãos
Cabelo
Sêmen
www.profiva.com.br
Importante
Polimorfismo Genético É a coexistência de alelos múltiplos em um lócus cromossômico; regiões do genoma nas quais existem variações entre as pessoas.
Polimorfismo de sítio de restrição (RFLP)
Polimorfismos de inserção/deleção (indels)
www.profiva.com.br
Recuperação de DNA em amostras de tecidos e fluidos
Amostra (tecidos e fluidos)
Quantidade recuperada Análise de RFLP Análise de STR
1mL de sangue 20 a 40mg SIM SIM
Manchas de sangue seco de 1cm3 200ng NÃO SIM
Sêmen 150 a 300mg por mL SIM SIM
Sêmen (esfregaço vaginal pós-coito)
0 a 3mg (DNA dos espermatozóides) SIM SIM
Cabelo com raiz (contendo bulbo capilar)
1 a 750ng por fio NÃO SIM
Saliva 1 a 10mgpor mL SIM SIM
Retirado de “Os exames de DNA nos Tribunais”, Revista Ciência Hoje (vol. 29, nº 169 - março/2001)
www.profiva.com.br
OBS: Quantas regiões são necessárias?
www.profiva.com.br
STRs
www.profiva.com.br
Qual a importância desses polimorfismos?
Fonte de variabilidade;
• “DNA fingerprint”;Permitem construir um perfil genético indivíduo-específico
importante em Genética Forense
www.profiva.com.br
Alec Jeffreys, 1985
DNA fingerprint
Revolucionou a análise do DNA
Caracteriza o vinculo genético
Regiões polimórficas do tipo VNTR
• Uma fração de DNA repetido consiste de regiões denominadas mini-satélites ou repetição em tandem de número variável (VNTR – “variable number of tandem repeats”).
• Os VNTRs exibem uma enorme variabilidade e são constituídos de 9 à 100 pares de bases repetidos sequencialmente em loci cromossômicos.
www.profiva.com.br
Por que analisar tais polimorfismos no DNA?
Determinação de paternidade;
Resolução de casos criminais envolvendo:
Estupro;Homicídio;Rapto;Troca ou abandono de crianças.
www.profiva.com.br
DE ONDE PODE SER EXTRAÍDO O DNA?
Sangue padrão-ouro;
células epiteliais da mucosa oral: saliva, pontas de cigarro, selos e envelopes, gomas de
mascar, copos, tampas de caneta mordidas,...;
Pêlos e fios de cabelo (com ou sem o bulbo capilar);
Unhas;
Esfregaços;
www.profiva.com.br
Manchas de material biológico: líquido seminal, urina, saliva, sangue;
Tecidos de biópsias cirúrgicas;
Ossadas (carbonizadas ou não);
Tecidos mumificados ou congelados;
Células deixadas por impressão digital;
Dentes;
outras
www.profiva.com.br
Métodos disponíveis para utilização:
VNTRs estudados com sondas multilocais;
STRs estudados com PCR;
DNA mitocondrial (mtDNA);
STRs do Cromossomo Y;
Técnicas mais recentes.
www.profiva.com.br
VNTRs estudados com sondas multilocais
Princípio do método: após clivagem por endonucleases, cada indivíduo tem um padrão de bandas específico com tamanhos determinados pela presença, ou não, do sítio da enzima e pela quantidade de repetições em tandem. Para que possa-se visualizar, esses fragmentos devem ser hibridizados a sondas radioativas de seqüência invariável.Técnica de custo razoável;
DNA não degradado;
Quantidade suficiente de DNA;
Várias dificuldades inerentes à técnica.
www.profiva.com.br
STRs estudados com PCR
Princípio do método: Reação de PCR utilizada para copiar extensivamente várias regiões de STR, fornecendo fragmentos de tamanhos diferentes visualizados por eletroforese em gel de poliacrilamida ou por seqüenciamento
Vantagem sobre a técnica de VNTR: como o DNA é “amplificado”, a amostra a ser analisada pode ter uma quantidade inicial muito menor.
Mesmo existindo contaminação por DNA de outras espécies, a técnica de PCR é específica o suficiente para amplificar apenas o DNA humano
www.profiva.com.br
Características
importantes:Tamb
ém conté
m regiõe
s polimórficas que permitem a “individualização
”
Descendent
es recebem
apenas da
mãe permi
te traçar
a linhag
em materna de uma
pessoa
É mais resistente à degradação que o DNA nucle
ar
Taxa mutaci
onal do
mtDNA é 5-10 vezes maior que a
do DNA
nuclear
poucos mecanismos
de reparo permit
em que as variaç
ões nos
nucleotídeos sejam acumuladas
Princípio do método: Reação de PCR com o objetivo de
copiar extensivamente regiões polimórficas presentes no DNA
mitocondrial, analisado posteriormente por
sequenciamento
mtDNA
www.profiva.com.br
www.profiva.com.br
mtDNA
• Utilizado na identificação de corpos em grandes desastres comparar a seqüência de interesse com a obtida nos possíveis irmãos ou ascendentes maternos;
• Identificação de maternidade sem o pai (p/ filhos e filhas)
• Não identifica um indivíduo específico;
• Estudos históricos ou evolutivos.
www.profiva.com.br
STRs crY
Características importantes:• Também contém regiões polimórficas que permitem a “individualização”;
• Homens recebem apenas do pai permite traçar a linhagem paterna de um homem;
• Crossing-over com o crX em regiões homólogas entre os 2 cromossomos.Identificação de paternidade sem o pai (p/
filhos);
Elucidação de estupro (mistura de DNA);
Não identifica um indivíduo específico;
Estudos históricos ou evolutivos;
www.profiva.com.br
Novas técnicas foram desenvolvidas
Analise de Repeti ções curtas ou• STRs
Com gel de• poliacri la
mida corado por prata
Leituras• Laser
• Com indicadores marcados com fl uoróforos.
www.profiva.com.br
Técnicas mais recentes
SNPs
• Minissequenciamento;• São muito numerosos;• Baixa taxa de mutação;• Requer maior nº de marcadores;
Indels
Estudados em produtos de amplificação muito curtos (50pb ou menos).
Vantagem sobre STRs em estudos de DNA extremamente degradado (ex: cadáver em estado avançado de decomposição ou carbonizado)
www.profiva.com.br
Referenciasinteressantes
http://www.sspds.ce.gov.br/noticiaDetalhada.do?tipoPortal=1&codNoticia=1452&titulo=Reportagens&action=detail
http://super.abril.com.br/cotidiano/dna-nao-prova-mais-nada-626306.shtml
http://cienciacontraocrime.blogspot.com.br/2009/08/falsificacao-de-dna.html