TCNICAS DE CULTURA EM MICOLOGIA
Prof. Carlos Fernando dos Santos CRBM 3158
TCNICAS DE CULTURAPREPARO DE MEIOS DE CULTURA
gar Sabouraud Clorafenicol (SAB)Meio de enriquecimento - Semeia vrios tipos de fungos. Na microbiologia meio seletivo
gua destilada.......1000ml(isentas de elementos nutricionais)
Peptona................10gcarne degradados)
(Peptona de carne pedaos de
Dextrose...............40g (Carboidratos) gar-gar.............20g (15 a 20g, por litro) Clorafenicol...........50mg* pH.......................4,0 a 5,0
(Antibitico que inibe o crescimento bacteriano ou gentamicina 60mg)
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gar Sabouraud Clorafenicol (SAB)
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gar Batata Dextrose (BDA)(Meio de enriquecimento, infuso da batata, no bom usar quando se quer crescimento de microorganismo)
gua destilada.........500ml Infuso de batata.....500ml Glicose....................10g (Fonte de carboidrato) gar-gar.............15g (Dar consistncia) Clorafenicol...........50mg* (Inibir o crescimentobacteriano)
pH.......................4,0 a 5,0
(pH cido)
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gar Batata Dextrose (BDA)
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gar Czapek (CZK)(Enriquecimento, para fungos presentes no solo e diferencial, quando quer crescer fungos geoflico(afinidade com a terra))
gua destilada.............................1000ml Sacarose......................................30g (fonte decarboidrato)
Nitrato de sdio...........................3g Fosfato dibsico de potssio........1,0g Sulfato de magnsio....................0,5g Cloreto de potssio......................0,5g Sulfato de ferro............................0,01g gar-gar....................................15g Clorafenicol.................................50mg/L* pH...............................................4,0 a 5,0
TCNICAS DE CULTURAPREPARO DE MEIOS DE CULTURA gar
Czapek (CZK)
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gar Mycosel (MYC)(Seletivo para dermatfilos)
gua destilada...................1000ml Peptona.............................10g Glicose...............................10g gar-gar..........................15g Ciclo-heximida...................0,4g (Inibe ocrescimento de fungos saprofitos)
Clorafenicol.......................0,05g pH.....................................4,0 a 5,0
(cido)
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gar Mycosel (MYC)
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gar Infuso de Crebro e Corao Bovino (BHI)(Meio seletivo, para fungos que crescem em tecidos profuntos)
gua destilada............................1000ml Infuso de Crebro e Corao(Difco)............................37g gar-gar...................................20g Clorafenicol.................................0,05g pH...............................................7,4 (pHbsico)
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gar Infuso de Crebro e Corao Bovino (BHI)
IMPORTANTE Incubao a 35C!
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Meios Semi-slidos CaldosSemi-slidos
Caldos
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Observaes Importantes
Ferver meios que contm gar-gar Adicionar o antibitico somente aps fervura do meio. Desprezar meios que queimarem Autoclavao ideal =121C por 20 min.
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ASSEPSIA E ESTERILIZAO Vidrarias Detergentes neutros Autoclave 121C/20min Meios de cultura Autoclave 121C/20min Bancadas lcool 70% Hipoclorito de sdio Cmara de fluxo laminar lcool 70%, Luz UV 20 min. Filtro de ar milipore*
TCNICAS DE CULTURAASSEPSIA E ESTERILIZAO
Hipoclorito de Sdio
Desinfeco Pervia da Bancada Bico de Bunsein
TCNICAS DE CULTURADESINFECO
Vidrarias Meios de cultura utilizados Filtro milipore Caixas de descarte (Descarpack)* Autoclave 121C durante 20 minutos.
TCNICAS DE CULTURADESINFECO E ESTERILIZAO
Autoclave 121C durante 20 minutos
Interior do Autoclave
Termmetro Barmetro
Autoclave Vertical
TCNICAS DE CULTURACINTICA DO CRESCIMENTO FNGICO LevedurasFisso binria / Gemulao Colnias circulares com bordas variveis
Cicatriz gemular
Bordos Diferencialdos
Fisso binria / Gemulao
TCNICAS DE CULTURACINTICA DO CRESCIMENTO FNGICO Fungos
Filamentososde maturao distintas
Centrfugo Zonas
TCNICAS DE CULTURAENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SLIDAS
Caldo YG 25ml Balo de 250ml Rolha de gaze + algodo 25g da amostra a ser analisada Crescimento de 5-7 dias Agitao constante(*) Temperatura ambiente(*)
TCNICAS DE CULTURAENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SLIDAS
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Tcnica de pique central em placa de petri Tcnica de piques em gradiente em PP. Tcnica de estrias em tubo com meio inclinado
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
Pique Central
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS
TCNICAS DE CULTURAISOLAMENTO DE FUNGOS PS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO
Placas de petri com gar SAB ou BDA Ala de platina em alquota Cmara de fluxo laminar esterilizadalcool 70% Luz UV 20 min.
Piques em gradiente na placa de petri
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOSPiques em Gradiente
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOSPique em Meio Inclinado
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE LEVEDURAS
Tcnica de estrias em placa de petri Tcnica de estrias em tubo com meio inclinado
TCNICAS DE CULTURASEMEIO DE LEVEDURAS
Tcnica de estrias em placa de petri Tcnica de estrias em tubo com meio inclinado
TCNICAS DE CULTURAISOLAMENTO DE FUNGOS PS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO
Cmara de fluxo laminar esterilizada
lcool 70% Luz UV 20 min.
OBRIGADO!
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