Isolamento e caracterização de células mononucleares de medula óssea de cães. Fernanda de Lima BrandãoIniciação Científica (Voluntária) 2013Orientador: Rosangela Locatelli Dittrich; Co-orientador: Harald Fernando Vicente de Brito; Colaborador: Tobias Fernandes Filho.

Introdução/Objetivos: A terapia com células-troncoestá consolidada como uma opção de tratamento, sendo geralmente utilizadas células mesenquimais de tecido adiposo. A terapia com células mononu-cleares de medula óssea é uma alternativa ao cultivo de células mesenquimais. O objetivo destetrabalho foi comparar o efeito do anticoagulante no rendimento de células-tronco e caracterizar fenotipicamente por citometria de fluxo as células isoladas da medula óssea de cães.

Método: Foram coletados 8 mL de medula óssea em 2 mL de CPDA-1 e outros 8 mL em 1 mL de heparinae 1 mL de PBS. As amostras foram diluídas em DMEM (1:1) e divididas em doze tubos com Histopaque 1119 e 1077 e isoladas em gradiente ficoll. As amostras foram marcadas com e incubadas com anticorpo CD44 e CD9 e ressuspendidas em 400L de PBS para análise em citometria de fluxo.

Resultados/Discussão: O rendimento para as amostras coletadas com heparina foi de 3,64x104 (±3,17), e para as amostras coletadas com CPDA-1 foi de 3,02x104 (±2,32). Na citometria de fluxo, o rendimento das células com heparina e CPDA-1 foram semelhante s, tanto nas células marcadas apenas com CD4, como nas células marcadas apenas com CD9. Nas amostras duplo marcadas o rendimento foi diferente, sendo 5,012% (±0,728%) para CPDA-1 e 2,228% (±0,699%) para heparina.  A molécula de CD44 é relacionada como marcadora característica de células mesenquimais derivadas damedula óssea. CD9 regula a ativação e agregação de células. A dupla marcação é reportada para caracterização fenotípica de células-tronco mesenquimais em cães e em outras espécies,sendo que a caracterizaçãofenotípica é consistente mesmo em condições diferentes de isolamento e cultivo.

Conclusões: Os resultados do presente trabalho indicam possibilidades promissoras na utilização de células mononucleares em substituição ao cultivo de células mesenquimais para terapia celular, podendo ser utilizado CPDA-1 ou heparina para coleta da medula óssea.

Referências: Jones E.A., Kinsey S.E., English A., Jones R.A.,Straszynski L., Meredith D.M., Markham A.F., JackA., Emery P., McGonagle D. (2002). Gimble J.M., Katz A.J., Bunnell B.A. (2007) Adipose-Derived Stem Cells for RegenerativeMedicine.