IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA
Cultivo de microorganismo
Meios de cultura - Associação qualitativa e quantitativa de substâncias que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento de microrganismos fora do seu meio natural.
Condições ambientaispHPressão osmóticaUmidadeTemperaturaAtmosfera (aeróbia e anaeróbia)
Classificação dos meios
Cultivo de microorganismoTipos de meios
Líquidos - sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, utilizados para ativação das culturas, repiques de microrganismos, provas bioquímicas, dentre outros;
semi-sólidos, quando a quantidade de ágar é de 0,075 a 0,5 %;
Sólidos - contém agentes solidificantes, principalmente ágar (cerca de 1 a 2,0 %);
Classificação dos meios
Cultivo de microorganismo
Classificação dos meios Seletivo – Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: ágar Salmonella-Shigella (SS) e ágar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sódio. A maioria deles é também diferencial, permitindo diferenciar as colônias (sólidos) dos microrganismos.
Classificação dos meios
Cultivo de microorganismo
Classificação dos meiosDiferencial - quando contém substâncias que
permitem estabelecer diferenças entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), Ágar MacConkey para a diferenciação de enterobactérias, Ágar sangue, agar Baird-Parker para isolamento e diferenciação de cocos Gram positivos (sólidos).
Classificação dos meios
Cultivo de microorganismo
Classificação dos meiosEnriquecimento - proporcionam nutrientes adequados
ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos números ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (líquidos), Caldo Tioglicolato para Clostridium perfringens.
1º Cultura
Observação das características das colônias em relação:• Tamanho• Forma• Textura• Cor• Hemólise (Ágar sangue)
IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA
Lactobacillus plantarum
Staphylococcus aureusStreptomyces albus
Mycobacterium Tuberculosis
Mycobacterium smegmatis Mycobacterium marinum
Bacillus thuringiensis
Bacillus anthracis em placas de ágar bicarbonato e ágar sangue
2º Observação das células
As colônias isoladas são coradas pelo método de Gram
IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA
Bacillus anthracis
3º Identificação bioquímica/metabólica
Geralmente necessita de 24 horas de incubação.
IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA
Identificação convencional
Pesquisa de enzimas•Pesquisa de enzimas a partir das colónias: catalase
Metabolismo glicídico•Estudo da utilização de vários substratos como fonte de carbono•Pesquisa de enzimas
Metabolismo proteico•Utilização do triptofano•Hidrólise da ureia
Os testes mais importantes identifica o metabolismo bacteriano
Identificação de enzimasPesquisa da Catalase: é indispensável na identificação de cocos gram positivos.Os estafilococos são catalase +, enquanto que os estreptococos são catalase –Enzimas hemolíticas – Hemólise alfa ou beta
Metabolismo glicídicoA maioria das bactérias utiliza os hidratos de carbono hidrolizando-os até à formação de ácidos com consequente alteração do pH do meio.Em alguns casos essa hidrólise conduz à formação de gases.
Metabolismo proteico e enzimas Produção de gás sulfídrico: a degradação de aminoácidos sulfurados ou peptonas origina este composto, que ao reagir com o citrato de ferro ou acetato de chumbo vai formar manchas de cor negra no meio ágar.
Produção de indolA degradação do triptofano dá origem ao indol, que após um período de 24h, reagindo com um composto específico (reagente de Kovacs), vai originar um composto de cor amarelo-avermelhado.
Pesquisa de ureaseAs bactérias com urease vão hidrolisar a ureia, com produção de compostos de amónia que vão alcalinizar o meio.
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