7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
1/40
Anlise FitoqumicaPreliminar
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO JOO DEL-REICURSO DE FARMCIA
DISCIPLINA: FITOQUMICA
Professora: Luciana Alves R. dos Santos Lima
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
2/40
Introduo
Anlise Fitoqumica Preliminar
Avaliar a presena de algumas classes de metablitossecundrios em uma planta
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
3/40
Introduo
Para algumas substncias, em certos vegetais, pode-se realizarreaes de caracterizao diretamente sobre os tecidos do materialvegetal.
A caracterizao de um determinado grupo de substncias presentesem um vegetal s pode ser feita aps sua extrao com um solventeadequado.
A caracterizao dos principais grupos de substncias nos vegetaistem sido conseguida pela realizao de reaes qumicas queresultem no desenvolvimento ou mudana de colorao e/ouprecipitao caractersticos.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
4/40
Introduo
Para algumas reaes, o extrato pode ser empregadodiretamente, enquanto para outras, o solvente deve ser
previamente retirado.
As reaes podem ser realizadas em tubos de ensaio ou pordeteco cromatogrfica em placas com reagentesespecficos.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
5/40
Introduo
As reaes feitas diretamente com o extrato bruto podemascarar o resultado.
O fracionamento do extrato e o teste com as fraes obtidaspossibilita reaes mais ntidas.
Alguns metablitos podem no ser detectados no extrato, massim nas fraes.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
6/40
Introduo
Um dos primeiros roteiros de anlise sistemtica de misturascomplexas, foi proposto em 1850 pelo qumico belga J. S. Stase modificado pelo farmacutico alemo F. J. Otto.
Partio de substnciasentre duas fasesimiscveis, uma aquosa eoutra orgnica
Formao de sais comdiferenas de solubilidade emrelao s bases ou aoscidos que lhes deram origem
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
7/40
Introduo
O mtodo proposto porStas e Otto adequado
para substncias comoalcaloides, por exemplo
Muitas substncias sosensveis a cidos e bases, o
que impede o uso destemtodo (cumarinas)
Atualmente, com o avano dos mtodos de extrao eisolamento, na maioria das vezes, desnecessrio submeterextratos vegetais a tratamentos qumicos preliminares
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
8/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
1. Cumarinas:O O O
O
O
O1
2
3
45
6
7
8
3
5
6
8
1
2
4
7
2
3
45
6
7
81
AB
Cumarinas Cromonas Xantonas
Aparecem manchas de cores como azul, amarela e roxa, sobao da luz UV (365 nm), que podem ser realadas apsexposio ao vapor de amnio, ou revelao com KOH a 5% emMeOH
Deteco em cromatografia em camada delgada (CCD)
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
9/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
1. Cumarinas:O O O
O
O
O1
2
3
45
6
7
8
3
5
6
8
1
2
4
7
2
3
45
6
7
81
AB
Cumarinas Cromonas Xantonas
Figura 1: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para as amostras vegetais (A, B, C e Dp) e tinturas (D,
E, F e Tp). Pc: cumarina padro. Eluente: Tolueno-DCM-Acetona (45:25:30). Revelador: KOH a 5% emMeOH / UV365nm.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
10/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
1. Cumarinas:O O O
O
O
O1
2
3
45
6
7
8
3
5
6
8
1
2
4
7
2
3
45
6
7
81
AB
Cumarinas Cromonas Xantonas
O O OH
OH
O
O O
HO- H+
amarela
Em solues alcalinas, desenvolvem colorao amarela, devidoao rompimento do anel lactnico, que revertida pela adio de
soluo cida.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
11/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:
Substncias oxidantes podem ser empregadas para acaracterizao de polifenis, tais como o cloreto frrico (FeCl3),que d a colorao azul ou verde-azulada.
So substncias redutoras e, portanto, oxidam-se com facilidade,resultando em substncias coradas devido ao elevado grau deconjugao.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
12/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromticos:
Reao de cianidina, Shinoda ouhidrogenao: consiste em adicionar umpequeno pedao de magnsio a soluoalcolica cida da substncia.
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
13/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromticos:
- Reao citro-bricaou Reativo de Wilson:
acetona
anidridoactico
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
14/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromticos:
- Reao com H2SO4 concentrado:os compostos flavnicos formamsais de oxnio com cido sulfricoconcentrado.
flavonasflavonis
flavanonas
chalconasauronas
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
15/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromticos:
- Reao de Marini-Bettolo:o pentacloreto de antimnioem tetracloreto de carbonoforma precipitados.
chalconas
flavonas
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
16/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromatogrficos em CCD:
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C2. Polifenis:
A presena de flavonoides no extrato vegetal bruto pode sercaracterizada pelo aparecimento de fluorescncias sob a
incidncia de luz UV (254 e 365 nm)
O adsorvente pode ser slica gel, poliamida ou celulose.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
17/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromatogrficos em CCD:
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C
Figura 2: Fluorescncias de
flavonoides no UV aps aplicaodo revelador NP/PEG.
NP / PEG: intensificaas fluorescncias dosflavonoides quandoobservadas no UV a254 nm.
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
18/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Flavonoides:
Ensaios cromatogrficos em CCD:
Reagente de Folin-Ciocalteau seguido da exposio aos vapores deamnia serve para a deteco de flavonoides, aparecendo manchasazuladas ou acinzentadas.
Ncleo fundamentaldos flavonoides
O
O
2
3
45
6
7
89
10
1'2'
3'
4'
5'
6'
A
B
C2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
19/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
b) Taninos:
OOH
OH
OH
OOG
OG
OG
OG
OG
OH
OH
OH
O
OOH
OH
2
6
2'
6'
A
B
C
R1
R2
R3
R4
2
6
2'
6'
A
B
C
R1
R2
R3
R4
G =
2
6
2'
6'R1
Taninos hidrolisveis Taninos condensados
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
20/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
b) Taninos:
Vrios mtodos conhecidos e tradicionais so usados para oreconhecimento de taninos.
Teste com soluo degelatina a 1%, contendo 10%de NaCl: fornece precipitadoou mesmo turvao.
Precipitao com alcaloides,podendo ser usado solues decinchonina, cafena ou estricninaa 1-2%.
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
21/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
b) Taninos:
Ensaios cromticos:
Reao com cloretofrrico (FeCl3):
taninoshidrolisveis
ou glico
taninoscondensadosou catquico
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
22/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
b) Taninos:
Ensaios cromticos:
Reativo de Stiasny: uma
soluo de taninos mantida sob refluxo com HClconcentrado e formol por 30minutos.
Tanino condensadoou catquico:
precipita
Tanino hidrolisvelou glico: filtrado
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
23/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
c) Antraquinonas:
O
O
2
3
45
6
7
8 1
9,10-antraquinona
Ensaios cromticos:
Reao de Borntragr: em solues alcalinasos compostos antraquinnicos adquiremintensa colorao violeta a prpura, inclusivecom bases fracas como NH4OH.
Pode-se tambm borrifar uma soluo aquosa alcalina sobre asuperfcie do vegetal, para caracterizar a presena de derivados
hidroxiantracnicos.
2. Polifenis:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
24/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:
Como os resultados falso-positivos so bastante comuns paraessas reaes, previamente o material a ser analisado deve sersubmetido a extraes cido-base.
As reaes gerais para alcaloides baseiam-se na formao decomplexos insolveis (precipitados).
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
25/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:
Os alcaloides podem ser detectados por diversos mtodos:
Observao da extinode luz UV em 254 nm, emplacas de slica gel comindicador de fluorescncia.
Deteco de fluorescncia em 365nm pode ser muito til para diversosalcaloides, como por exemplo, osalcaloides do esporo-de-centeio.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
26/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:
As reaes geraisempregam
Reagente deDragendorff :
precipitados laranja-avermelhados
Reagente de Mayer:precipitados brancos
Iodo-platinato depotssio: manchas
violeta a azulacinzentadas
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
27/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
Figura 3: Reaes com o reagente de Dragendorff em placa e em tubo de ensaio.O aparecimento de manchas em tons laranja em CCD e a presena deprecipitados laranja-avermelhados indicam a presena de alcaloides.
3. Alcaloides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
28/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
- Alcaloides tropnicos:
3. Alcaloides:
Reao desenvolvida por Vitali e Gerard
0,0001 mg de atropina, hiosciamina eescopolamina tratada com HNO3concentrado e ao resduo, adiciona-se soluo de KOH em EtOH.
Desenvolve-se coloraoprpura, passando avermelho escuro e,finalmente incolor.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
29/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
- Alcaloides tropnicos:
O
OH
HO
NH
O
ONO2
HO
NH
O2N
O
OH
O
NH
O2N
K+
-
HNO3(95%)
KOH/EtOH
prpura
Reao de Vitali, mecanismo segundoAuterhoff (1981).
3. Alcaloides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
30/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
- Alcaloides indlicos:
3. Alcaloides:
Desenvolve-se colorao laranja a marrom.
Reagente de Ehrlich, que consiste na soluo de cloreto dep-dimetilaminobenzaldedo a 5% em etanol.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
31/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
Figura 4: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para alcaloides. Eluente: AcOEt-Ciclohexano-MeOH(70:15:15). Reveladores: UV254nm,, Soluo de iodo-KI (revelador A), Reagente de Ehrlich (revelador B).Pontos: 1. cafena, 2. lidocana, 3. cocana, 4. fenacetina, 5. benzocana, 6. amostra.
3. Alcaloides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
32/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
Figura 5: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para alcaloides. Eluente: AcOEt-Ciclohexano-MeOH(70:15:15). Reveladores: UV254nm,, Soluo de iodo-KI (revelador A), Reagente de Ehrlich (revelador B),Iodo-platinato acidificado (revelador C). Pontos: 1. cafena, 2. lidocana, 3. cocana, 4. fenacetina, 5.benzocana, 6. amostra.
3. Alcaloides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
33/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
Para a deteco de esteroides insaturados, tambm pode serempregada a reao de Salkowsky (cido sulfrico concentrado).
Reao de Liebermann-Burchard: anidrido actico e cidosulfrico concentrado.
Colorao verde ou azulpara esteroides.
Colorao vermelha, rosa,prpura ou violeta para terpenos.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
34/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Saponinas:
O
OHH
N
H
H
RO
COOR
Saponina esteroidal
Grupo espirosolano
Saponina triterpnica
Tipo b-amirina
4.Triterpenos e esteroides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
35/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
a) Saponinas:
Para detectar a presena de saponinas,emprega-se o teste de formao de
espuma, estvel na presena de cidosminerais diludos.
Agitao
4.Triterpenos e esteroides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
36/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
b) Glicosdeoscardiotnicos:
OH
CH3 OH
CH3
CH3
OH
OH
H
O
O
O
O
O
O O
HO
A B
C D1
4 6
9
11
13
15
17
Resduos de acar
Ncleo esteroidal
Anellactnico
Estrutura glicosdeoscardiotnicos(Digoxina)
4.Triterpenos e esteroides:
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
37/40
Caracterizao de algumas classes
de compostos por mtodos qumicos
b) Glicosdeos cardiotnicos:
A deteco da presena de glicosdeos cardiotnicos:
4.Triterpenos e esteroides:
Ncleo esteroidal(Liebermann-Burchard)
Lactona insaturadaem C-17
Acares
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
38/40
Caracterizao de algumas classesde compostos por mtodos qumicos
b) Glicosdeos cardiotnicos:
Figura 6: Lactona a, b-insaturadaaps revelao com reagente deKedde.
4.Triterpenos e esteroides:
Reagente de Kedde (soluo etanlica docido 3,5-dinitrobenzoico e soluoetanlica de KOH a 10%):
Aparecimento demanchas rosadasna placa de CCD.
Deteco da lactonainsaturada.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
39/40
Caracterizao de algumas classesde compostos por mtodos qumicos
b) Glicosdeos cardiotnicos:
4.Triterpenos e esteroides:
Reagente de Keller-Killiani (cido acticoglacial, cloreto frrico e cido sulfricoconcentrado):
Forma-se um anel vermelho pardo e asoluo actica colorao azul-esverdeada
Deteco de acares.
7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar
40/40
Referncias
SIMES, C. M. O. et al. Farmacognosia: da planta aomedicamento. Rio Grande do Sul: UFRGS, 2004.
ABREU MATOS, F. J. Introduo fitoqumica experimental.Fortaleza: Edies UFC.
WAGNER, H. & BLADT, S. Plant Drug Analysis. Berlin:Springer, 1996.
Top Related