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MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL 358010
PROTOCOLO DE PRÁCTICA
Nombre de curso Microbiología Ambiental
Código de curso 358010
Créditos del curso 3Valor de esta actividadpráctica
150 Puntos ( 60 puntos calificados por virtual, 90puntos calificados por tutor de Laboratorio)
Nombre del director decurso Jorge Alejandro Rodríguez Palacios
Correo institucional deldirector del curso
Contacto del director decurso
Teléfono fijo y teléfono celular
CEAD al que pertenece ZCBOY- CEAD Tunja
Espacio donde se debedesarrollar la práctica
Laboratorios CEAD o convenios
Objetivos de la práctica
- Normas de Bioseguridad en el Laboratorio
Entender las normas de bioseguridad necesariaspara el trabajo en laboratorio.Identificar los implementos de protecciónpersonal.
- Técnicas de aislamiento de microorganismosManipulación de microorganismos en medios decultivo.Recuento de Microorganismos por medio dediluciones.
-Técnicas de tinciónColoración de Gram ( Bacterias)Tinción de Azul de lactofenol (Hongos)
- Técnicas de interés en Ingeniería AmbientalFiltración por membrana para coliformes fecalesy E.coli
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Justificación de lapráctica
El estudiante pondrá en práctica los conocimientosadquiridos en el curso, reforzando los temas vistos enel aula virtual, destrezas y habilidades para lamanipulación de materiales, equipos, reactivos ymicroorganismos.
Competencias adesarrollar
El estudiante desarrolla destrezas y habilidades para lamanipulación de materiales, equipos, reactivos ymicroorganismos en el laboratorio.
Duración de la práctica. 8 horas
Mecanismo mediante elcual se evaluará lapráctica:
A través de la rúbrica de evaluación la cual vaadjunta al final del presente protocolo, debe ser lamisma del aula virtual
METODOLOGÍA
El componente práctico del curso de Microbiología Ambiental está dividido en dosfases, la primera denominada Actividad 3 Experimentación I, que hace referencia ala fase que desarrollará cada estudiante de manera individual en el campus virtualy será calificado por el tutor virtual.
La segunda fase de la práctica hace referencia a la actividad 4 experimentación II,que será guiada por el tutor de práctica en los distintos laboratorios de la rednacional de laboratorios.
A continuación se relaciona la guía de la fase II actividad 4 experimentación II, parael tutor de práctica y los estudiantes.
PRACTICA FASE II ACTIVIDAD 4 EXPERIMENTACIÓN II (Laboratorio)
Los estudiantes deben consultar por su cuenta propia y basada en las referenciasbibliográficas entregadas en el curso la información necesaria para las siguientesprácticas. El tutor práctico guiará y despejará las dudas a los estudiantes en ellaboratorio
PRACTICA 1- BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Los laboratorios de microbiología están regidos por normas de seguridad e higieneque deben cumplirse a cabalidad para garantizar la protección contra infeccionesde los estudiantes u otro personal que labora en estas instalaciones, así comogarantizar la calidad de las técnicas y la confiabilidad de los resultados.
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Los estudiantes deberán identificar las normas de bioseguridad en el laboratorio unavez ingresen al mismo.
El tutor práctico dará una breve explicación sobre las normas con las que cuentanen el laboratorio donde se esté desarrollando la práctica.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICASBENSON, HAROLD J. Microbiological applications: Laboratory Manual in GeneralMicrobiology. McGraw – Hill. U.S.A. 1998.COLLINS, C. H. and M LYNE, PATRICIA. Traducción del inglés por José MaríaTarazonaVilas. Métodos microbiológicos. Editorial ACRIBIA, S. A. ZARAGOZA (España).1989.OMS – Organización Mundial de la Salud. Manual de bioseguridad en el laboratorio.Ginebra. 2005.
IMPORTANTE: LOS ESTUDIANTES DEBEN LEER Y CUMPLIR LAS NORMASDE LABORATORIO, EL INCUMPLIMIENTO DE LAS MISMAS ACARREARÁ LASANCIÓN DE LA NOTA PRÁCTICA.
PRÁCTICA No. 2RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DEMICROBIOLOGIA
Realizar una descripción de los materiales que utilizarán en la práctica, esto incluye
equipos y materiales de vidrio. Realizar un boceto de cada uno y una brevedescripción.
PACTICA No 3MÉTODOS DE SIEMBRA –PARTE ALa inoculación de medios de cultivo para la recuperación, mantenimiento y/oaislamiento de microorganismos, es un procedimiento fundamental e importante.Debe tenerse cuidado con las técnicas de siembra microbiana para evitar en lo
posible la contaminación por otros microorganismos diferentes al deseado.MATERIALES1. Microorganismos previamente aislados ( Bacterias y hongos)2. Agar nutritivo en caja de Petri3. Agar PDA4. Asa redonda5. Gradilla6. Mechero
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7. Incubadora8. Vinipel9. Marcador de vidrioPROCEDIMIENTO1. Desinfectar el área de trabajo, prender el mechero y preparar el material detrabajo.2. Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento para el caso debacterias.
3. Para el caso de Hongos tomar con el asa recta el microorganismo y por punciónsembrar en la caja de Petri con medio PDA.
4. Incubar a 37° por 24 horas para bacterias y a 25° por 8 días para hongos.
5. Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja yenvolverla en papel vinipel..6. Desinfectar el área de trabajo, apagar el mechero y entregar el material
MÉTODOS DE SIEMBRA –PARTE B
En esta etapa los estudiantes utilizarán una de las técnicas de siembra más usadasen laboratorio, que permite el recuento de microorganismos en una muestra comoaguas, suelos etc. La técnica a realizar en este punto hace referencia a losrecuentos de microorganismos utilizando diluciones seriadas en base 10, donde sedispersa la población de microorganismos permitiendo conocer el númeroaproximado en una muestra.
MATERIALES
1. Muestra de suelo o agua residual.2. Frascos con solución salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
3. Tubos tapa rosca con 9 ml de solución salina o agua peptonada al 0.1% (6
tubos)
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4. Cajas de Petri con agar Nutritivo, Chromocult o King B.( 6 cajas)5. Pipetas de vidrio o pipeta automática. ( 100 microlitros y 1000 microlitros)6. Rastrillos.
PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solución salina oagua peptonada.
2. Realizar diluciones seriadas desde 10-1 hasta 10-6 3. Tomar las 6 cajas de Petri con agar y marcar 2 con dilución 102, 2 cajas con
dilución 104, 2 cajas con dilución 106
4. Sembrar por duplicado las diluciones 10-2 10-4 10-6 tomando 0,1 ml de cadadilución por superficie, con ayuda del rastrillo homogenizar la microgota sobre
la superficie del agar sin romperlo.
5. Incubar por 24 horas a 37°C y realizar el recuento. 6. Realizar los cálculos donde se toman las diluciones donde se encuentrenentre 30 y 300 colonias para realizar el recuento, sacar promedio y aplicar la
fórmula: Número de colonias x Factor de dilución x 10 (factor de corrección)
El resultado es informado en UFC ( unidades formadoras de colonia)/ g o ml
de la muestra.
PRACTICA 4. TECNICAS DE TINCIÓN
Parte A Tinción de Gram para bacterias.
Para poder observar al microscopio los distintos tipos de microorganismos existen
distintos tipos de coloraciones o tinciones que tienen afinidad con ciertas partes de
la célula y permite diferenciarlas y observar algunos órganos de las células. Para el
caso de bacterias la técnica más usada es la tinción de Gram, donde se permite
clasificar las bacterias en Grampositivas (violetas) y Gramnegativas (Fucsias).
MATERIALES
1. Muestras de Microorganismos, ( practica aislamiento)
2. Colorantes para tinción de Gram (Cristal violeta, lugol. Alcohol acetona,Fucsina de Gram)
3. Aceite de inmersión
4. Microscópio.
5. Asas redondas
PROCEDIMIENTO
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1. Tomar las colonias de bacterias que los estudiantes sembraronanteriormente ( técnicas de aislamiento) y realizar un frotis en una lámina
portaobjetos, colocando una gota de agua y con ayuda del asa redonda
homogenizar para expandir el frotis en la lámina.
2. Dejar secar al aire libre la muestra, una vez se encuentre seca, fijar al calorla muestra en el mechero ( se coloca 3 veces rápidamente sobre el fuego la
lámina) 3. Una vez se encuentra la muestra fijada se procede a colocarle varias gotas
de cristal violeta, dejando por un minuto y luego lavar en el grifo (solo para
quitar el exceso de colorante. 4. Colocar unas gotas de lugol, dejar por un minuto y lavar. 5. Colocar una gota de alcohol acetona, dejar por 15 minutos, lavar. 6. Colocar unas gotas de Fucsina de Gram, dejar por un minuto, lavar y dejar
secar la muestra. 7. Una vez se encuentra seca la muestra agregar una gota de aceite de
inmersión y observar en el microscópio en el objetivo de 100x. 8. Observar las morfologías ( bacilos, cocos, Grampositivos, Gramnegativos)
Parte B Tinción de Azul de Lactofenol para hongos.
Para ver la morfología de los hongos filamentosos se utiliza la tinción de azul de
lactofenol, la cual permite contrastar y ver las diferentes partes de un hongo ( hifa,
conidios, septos, etc)
MATERIALES
1. Muestras de Microorganismos, ( practica aislamiento)
2. Azul de lactofenol.
3. Microscópio
4. Cinta transparente.
5. Asas rectas o agujas de disección.
6. Láminas y laminillas.
PROCEDIMIENTO
1. Tome con una cinta o con las agujas de disección un trozo del hongo ( tomarmicelio, parte algodonosa)
2. En una lámina portaobjetos colocar una gota de azul de lactofenol.
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3. Si tomó la muestra con aguja de disección, ponerla en contacto sobre la gotae ir desglosando las hifas, colocarle una lámina portaobjetos, si utilizó la cinta
transparente sólo debe colocarla sobre la gota sin necesidad de laminilla
cubreobjetos.
4. Llevar al microscópio y observar en el objetivo de 40x. 5. Observar las estructuras y anotarlas para el informe.
PRACTICA 5 ALGUNAS TECNICAS APLICADAS EN MICROBIOLOGÍAAMBIENTAL.
La microbiología enfocada en la parte ambiental ha permitido diagnosticar eimplementar nuevas alternativas para el desarrollo agrícola, en el ámbito de laingeniería ambiental y la industria.
Con los conocimientos adquiridos en el curso y teniendo un conocimiento básico dela microbiología, los estudiantes realizaran las siguientes pruebas que actualmentese utilizan a nivel mundial y específicamente en el país.
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLESLos indicadores de contaminación son utilizados para medir el grado decontaminación o afectación de cuerpos de agua, agua de consumo etc, en Colombiapara el caso de aguas potables la normatividad exige un valor de 0 unidadesformadoras de colonia en 100 ml de agua muestreada para el caso de coliformes
totales como indicador.
Para esta prueba si el laboratorio de su CEAD, UDR, CERES no tiene los elementosnecesarios para realizarla, deberán consultar cual es la normativa vigente y quéotros indicadores (microorganismos) se utilizan en el ámbito de contaminación deaguas.
Materiales
1. Equipo de filtración por membrana (equipo millipore de plástico)
2. Membrana de nitrocelulosa de 0.45 micrometros para filtración.
3. Jeringa (para hacer vacío)4. Cajas de Petri con agar Chromocult para coliformes.
Procedimiento
1. Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inoculará con una asada
de cultivo de E. coli, agitar muy bien.
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2. Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtración y
con la ayuda de la jeringa realizar el vacío para permitir el paso del
agua de un lado al otro.
3. Con unas pinzas estériles retirar la membrana y colocarla sobre el
agar Chromocult, la parte de la cuadrícula debe ir mirando haciaarriba.
4. Incubar por 24 horas a 37° c y observar el número de colonias con las
características típicas de E. coli y coliformes totales (consultar la
coloración en este medio, se encuentra por internet)
NOTA: SI NO CUENTAN CON LOS MATERIALES DEBEN CONSULTAR LANORMATIVIDAD Y CÓMO SE INFORMAN LOS RESULTADOS, DEBENREALIZAR LOS DIBUJOS CORRESPONDIENTES A LA ACTIVIDAD.
PRODUCTOS A ENTREGAR
Los estudiantes deben entregar un informe de la práctica realizada con lassiguientes condiciones:
El documento debe tener la estructura básica de un informe de laboratorio, unabreve introducción sobre la práctica, el procedimiento realizado, las fotografías obocetos de lo observado, conclusiones y referencias bibliográficas con normas APA.No debe exceder el número de 8 páginas, la forma de entrega deben coordinarlacon el tutor de práctica.
EVALUACION
# temevaluado
Valoraciónbaja
ValoraciónMedia
ValoraciónAlta
MáximoPuntaje
1
Desarrollo del
Quiz
El estudianteno presentóel desarrollodelaspreguntas
El estudiantepresentó eldesarrollo delas preguntas,pero estascarecen deargumentos oprofundización.
El estudiantepresentó eldesarrollo detodas las
preguntas demaneraargumentada.
10
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Puntos =0 Puntos= 5 Puntos=10
2
Estructura delInforme
El grupo notuvo en
cuenta lasnormas
básicas paraconstrucciónde informes
Aunque eldocumento
presenta unaestructura
base, la mismacarece dealgunos
elementos delcuerpo
solicitados
El documentopresenta una
excelenteestructura
10
Puntos=0 Puntos= 5 Puntos= 10
3
Redacción yortografía
Eldocumentopresenta
deficienciasen redacción
y erroresortográficos
No hay erroresde ortografía yel documentopresenta una
medianaarticulación de
las ideas y laestructura delos párrafos
La redacción esexcelente, lasideas están
correlacionadasy el cuerpo del
texto escoherente ensu totalidad.
10
Puntos= 0 Puntos= 5 Puntos= 10
4
Referencias
Eldocumentono presentareferencias
bibliográficas
N.A
El documentopresenta
referenciasbibliográficassegún normas
APA
10
Puntos= 0 N.A 10
5
Asistencia yparticipación al
laboratorio
El estudianteno asisitió allaboratorio
en sutotalidad
El estudianteasistió al
laboratorio ylas sesiones
programadas,pero noparticipó
El estudianteasistió a las
sesiones en sutotalidad yparticipó
activamente
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activamente enlas mísmas.
Puntaje=0 Puntaje= 20 Puntos= 50
Total de puntos posibles 90
ACTIVIDADES DEL TUTOR PRÁCTICO
METODOLOGÍA
El tutor de práctica, debe entrar en contacto desde el inicio del períodoacadémico con el director de curso, con el objetivo de conformar la red detutores, la cual se trabajará desde los correos institucionales.
En el laboratorio el tutor deberá garantizar que se cuenten con parte o latotalidad de los materiales descritos en la guía para desarrollar los puntos.
EL INFORME DE LABORATORIO SERÁ ENTREGADO AL TUTOR PRÁCTICO,EL TUTOR PRÁCTICO REALIZARÁ LA EVALUACIÓN CORRESPONDIENTE ALA PRÁCTICA, ÉL SERÁ EL ENCARGADO DE EVALUAR Y ENTREGAR LOSPUNTOS CORRESPONDIENTES A LA ACTIVIDAD AL DIRECTOR DEL CURSO,TENIENDO EN CUENTA LO DESCRITO EN LA RUBRICA DE CALIFICACIÓN.
El tutor práctico deberá realizar un Quiz para evaluar los conocimientos adquiridosen la práctica. La metodología y las preguntas son de libre autonomía del tutor y
deberán ceñirse a la rúbrica de calificación adjunta.
1. Selección del sitio de práctica
El tutor debe coordinar con su zona, CEAD, UDR, CCAV la disponibilidad delaboratorios.
2. Aseguramiento logístico para el desarrollo de la práctica.El tutor práctico debe cerciorarse con el personal de laboratorio sobre ladisponibilidad de los materiales necesarios para la realización del mismo.
3. Seguimiento de la prácticaEl tutor debe llevar a cabo el rol de orientador y verificar el desarrollo de lapráctica acorde a la guía suministrada y a la rúbrica de evaluación.
Adicionalmente debe evaluar el proceso de aprendizaje de los estudiantespor medio del quiz, igualmente debe coordinar con los estudiantes larecepción del informe práctico, su calificación y retroalimentación.
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4. EvaluaciónEl tutor realizará la evaluación de acuerdo a la rúbrica.
PRODUCTOS A ENTREGAR
El tutor de prácticas deberá elaborar un informe sobre el desarrollo de lasactividades del componente práctico el cual debe ser entregado al directorde curso. Dicho informe estará compuesto por los siguientes formatosdiligenciados
Formato 1: Datos generales de la práctica
CONTROL Y SEGUIMIENTO AL DESARROLLO
DEL COMPONENTE PRÁCTICO
Nombre del tutor
Correo del tutor
Contacto deltutor
Teléfono fijo y teléfono celular
CEAD al cualpertenece eltutor
Curso
Fecha derealización
Día:_____ Mes: _______________ Año:_________
Lugar donde se
desarrolló lapráctica
Temasabordados en lapráctica
Materiales yequiposempleados en lapráctica
Observaciones
Costoaproximado
Transporte: ________________________________________
Materiales y equipos: ________________________________
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Formato 2: registro de asistencia de los estudiantes a las actividades prácticas
REGISTRO DE ASISTENCIA DE ESTUDIANTES
A LAS ACTIVIDADES PRÁCTICAS
No NOMBRES APELLIDOS CODIGO FIRMA12345678910
1112131415161718192021
22232425
Datos del tutor
Nombre: _________________________________________
Cédula: ____________ Firma: ________________________Correo:
___________________________________________Teléfono fijo: _____________ Celular: __________________
AnexosEvidencias del desarrollo de la práctica (Fotografías)
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Formato 3: Reporte de calificaciones obtenidas por los estudiantes
REPORTE DE CAL IFICACIONES
Curso: ________________________________ __________Código:__________________________
_______________Título de la práctica:
_______________________________ ________________________________ ________________
CEAD: _______________________________ _________Fecha:
_______________________________ _________Tutor:
_______________________________ __________Firma: __________________ Cédula:
________________
No
Puntaje del tem de larúbrica de evaluación
obtenido
Justificación de lacalificaciónotorgada al
trabajoNombres
Apellidos
Código
1 2 3 4 5Total
1
2
3
4
5
67
8
9
10
11
12
1
314
15
16
Muchos éxtitos!!!!
Si ustedes tienen más de5 ítems en la rúbrica de
evaluación, deben
colocar más columnas enesta parte
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