Vila RealVerão de 2010 6 a 10 de Setembro de 2010.
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Ocupação científica de Jovens Estágio de Verão Doença de Alzheimer – na descoberta da cura Andreia Filipa Martins Tibério Andreia Marisa Bilé Silva Diogo Alexandre Antunes Carapito Marta Cristina Morais Reis Orientadores Maria Manuel Oliveira Francisco Peixoto Romeu Videira Sónia André Vila Real Verão de 2010 6 a 10 de Setembro de 2010
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Ocupação científica de JovensEstágio de Verão
Doença de Alzheimer – na descoberta da cura
Andreia Filipa Martins Tibério Andreia Marisa Bilé Silva Diogo Alexandre Antunes Carapito Marta Cristina Morais Reis
Orientadores Maria Manuel
Oliveira Francisco Peixoto
Romeu Videira Sónia André
Vila Real Verão de 2010
6 a 10 de Setembro de 2010
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Objectivos
Estudo da influência da tacrina na bioenergética mitocondrial;
Estudo da influência da tacrina e dos seus derivados na actividade da
acetilcolinesterase
em homogeneizado de cérebro;
Determinação do IC50 da tacrina;
Avaliação da actividade antioxidante dos compostos em estudo pelo
método ABTS.
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Estratégia experimental
Esquema I– Procedimento experimental.
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Remoção do cérebro(homogeneizado)
Quantificação da proteína
(método do biureto)
Avaliação da actividade antioxidante da tacrina e
do seu derivado(método do ABTS)
Determinação da actividade da
acetilcolinesterase na presença de tacrina e de
um derivado (método de Ellman)
Remoção de células hepáticas
(Isolamento de mitocôndrias)
Efeito da tacrina e de um derivado na respiração
mitocondrial
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Tacrina e derivados
Figura 1 – Estrutura dos dois compostos utilizados: tacrina (a) e derivado (b).
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N
NH2
N
N
NC
NH2
H3CO(b)
(a)
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Figura 2 – Avaliação do consumo de oxigénio em mitocôndrias isoladas de fígado.
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Resultados
BIOENERGÉTICA
MITOCONDRIAL
Estado 2 – Após adição de
succi- nato;
Estado 3 – Após a adição de
ADP. Registam-se estímulos dos
esta- dos 2 e 3
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Figura 3 – Gráfico de Michaelis-Menten da AChE na presença e ausência de inibidor (P0 e P10).
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Resultados
ACTIVIDADE DA ACHE
A tacrina (P0) e o seu derivado
(P10) inibem a actividade da
AChE.
Vmax. 0,0004895 0,0004868 0,0005806Km 4,247 4,599 4,277
Tabela I – Valores de Vmax e de Km.
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Resultados
ACTIVIDADE
ANTIOXIDANTE
% Inibição com
ABTS
Composto Concentração (nM)
% de inibição
P0 71,6 1,3
P0 572 2,3
P10 196 1,2
P10 1572 2,5T abela II– Taxa de inibição dos diversos compostos.
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Conclusões
A administração de tacrina provoca um aumento do consumo de
oxigénio a nível hepático;
Tanto a tacrina como os seus derivados inibem a actividade da AChE;
Tanto a tacrina como os seus derivados apresentam actividade
hepatotóxica;
Considerando a actividade máxima da tacrina pode calcular-se o IC50 (a
quantidade necessária para inibir a actividade da AChE em 50%) cujo
valor é de 36,526 nM;
A tacrina (P0) e P10 não apresentam actividade antioxidante
significativa.
Questões?
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