QUESTÃO CENTRAL

Como extrair e visualizar a molécula de

DNA?

TEORIA:

Teoria CelularPRINCÍPIOS:

Nas células eucarióticas o DNA encontra-se no núcleo.As células vegetais possuem parede celular.A maceração destrói as paredes celulares e as membranas plasmáticas.Os detergentes emulsionam as gorduras.A filtração retém alguns constituintes maiores e é permeável a moléculas como o DNA.O NaCl dissolvido na água dissocia-se em Na+ e Cl-.O DNA em solução possui carga negativa devido à ionização do grupo fosfato.O álcool desidrata as moléculas de DNA, precipitando-as.A fuchscina do reagente de Schiff retoma a cor vermelha em contacto com o DNA na reacção de FeulgenCONCEITOS:

CONHECIMENTO ADQUIRIDO Uma vez que o DNA das células vegetais está localizado nos núcleos, para poder ser extraído é necessário destruir numa primeira fase as paredes celulares e as membranas plasmáticas e, posteriormente, os invólucros nucleares. A primeira fase é conseguida com a maceração do material biológico utilizado. Os detergentes emulsionam as gorduras logo vão terminar a destruição das membranas plasmáticas e desfragmentar as membranas nucleares. Para fazer a separação do DNA dos fragmentos celulares entretanto formados utiliza-se a técnica da filtração. O grupo fosfato confere ao DNA uma carga negativa que é neutralizada com a ligação ao Na+ , resultante da dissociação do NaCl em água. Ao impedir a repulsão eléctrica entre moléculas carregadas negativamente, este processo permite que as moléculas de DNA se agreguem de modo a formar filamentos espessos e compridos (logo mais visíveis). O álcool, à temperatura utilizada (aproximadamente -20ºC) tona o DNA insolúvel. Quando adicionado lentamente ao filtrado promove a precipitação do DNA. Como o DNA precipitado é menos denso que a água, os filamentos de DNA acumulam-se no topo da camada do filtrado e ascendem lentamente à camada superior. A reacção de Feulgen, específica para o DNA permite corar os filamentos obtidos pois a Fuchsina do Reagente de Schiff retoma a cor vermelha na presença do DNA.

TRANSFORMAÇÕES E REGISTOS

VERTENTE CONCEPTUAL VERTENTE METODOLÓGICA

ACONTECIMENTOS/OBJECTOS Filamentos de DNATriturou-se o Quivi com uma solução de água destilada, sal e detergente. Filtrou-se o produto obtido

sucessivamente por papel de filtro e algodão hidrófilo. Adicionou-se álcool refrigerado.Os filamentos obtidos foram corados pela reacção de Feulgen mergulhando sucessivamente em água destilada, ácido clorídrico, novamente água destilada e reagente de Schiff .