UPCII M Microbiologia Teórica 25 e 26 2º Ano 2015/2016.
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UPCII M MicrobiologiaTeórica 25 e 26
2º Ano2015/2016
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Sumário Capítulo XX. Doenças Periodontais
Definições O papel da placa bacteriana nas doenças
periodontais Teorias da placa
Agentes etiológicos das patologias periodontais Virulência dos agentes microbianos associados
à doença periodontal Mecanismos imunopatogénicos de destruição
de tecidos em doença periodontal
9-12-20152 T25 e26 MJC
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Doenças periodontaisSAÚDE
GENGIVITE
PERIODONTITE
PERIODONTITEAVANÇADA
9-12-20153 T25 e26 MJC
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Periodontite Crónica
+ comum Associada a factores locais
Microbiota variável Progressão lenta
Agressiva Severidade independente de factores locais
Aumento de A. actinomycemcomitans Progressão rápida Com padrão familiar
Leucócitos polimorfonucleares Macrófagos hiper-responsivos (↑Prostaglandinas, ↑ IL1-β).
Necrotizante Em indivíduos com outras patologias sistémicas (HIV) trench-mouth
Peri-implantite
LOCALIZADA
GENERALIZADA
1ºs molares e produção aumentada de anticorpos
Outros dentes e pouca produção de anticorpos
9-12-20154 T25 e26 MJC
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Doença periodontal Patologia infeciosa oportunista Envolve fatores do hospedeiro:
Genéticos Envolvidos na resposta imune Envolvidos em patologia sistémicas como diabetes
Higiene oral Associada às espécies microbianas presentes
Hábitos “sociais” Principalmente os que afetam a resposta imunológica
como tabaco e alcoolismo
9-12-2015T25 e26 MJC 5
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Placa bacteriana e patologia periodontal Hipótese da placa
não específica (até 70’s) Idade Índices de placa Limiar de resposta
Hipótese da placa específica (meio dos 70’s) Excepções ao anterior
(por vezes no mesmo paciente)
Estudos de cultivo com resultados diferentes
9-12-20156 T25 e26 MJC HIPÓTESE ECOLÓGICA
KEYSTONE PATHOGENS
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Placa bacteriana e patologia periodontal
CULTURAVS.
TÉCNICASMOLECULARES
9-12-20157 T25 e26 MJC
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Placa bacteriana e patologia periodontal
Hipótese da placa específica (meio dos 70’s) Excepções ao anterior
(por vezes no mesmo paciente)
Estudos de cultivo com resultados diferentes
Associação de A.a a periodontite agressiva
Bastonetes
(G+) Coc
-ci(G+
)
Bastonetes
(G-)
Coc-ci
(G-)
Facultativos
Anaeróbios
9-12-20158 T25 e26 MJC
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Hipótese ecológica da placa
FC PHProfun
-didade e
Sangra-
mento
Profun-
didade e
Sangra-
mento
BIOLOGICALCOMPLEXESSOCRANSKY
9-12-20159 T25 e26 MJC
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Implicações na Terapêutica ??? Como é feita actualmente? Como deverá ser feita?
9-12-201510 T25 e26 MJC
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9-12-2015T25 e26 MJC 11
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9-12-2015T25 e26 MJC 12
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Progressão do ecossistema até à doença periodontal
9-12-2015T25 e26 MJC 13
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Adesão das bactérias peridontopatogenicas P.gingivalis
Fim A e Mfa Internalin J Hemaglutininas
Aggregatibacter FLP tipo IV (genes tad) Aae e ApiA (adesão especifica às células epiteliais) EmaA adesão ao colagénio
T. denticola OMP Msp (ligação a MMPs e células)
9-12-2015T25 e26 MJC 14
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Adesão das bactérias peridontopatogenicas F. nucleatum
RadD outras bactérias FadA ligação às células epiteliais
T. forsythia BspA adesina para outras bactérias, células do
hospedeiro e matriz
9-12-2015T25 e26 MJC 15
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Invasão das células epiteliais P. gingivalis
Integrinas Ação sobre o citoesqueleto Inibição da apoptose
Como resultado da invasão por peridonto patogénicas as células epiteliais podem acionar a secreção de interleucinas.
9-12-2015T25 e26 MJC 16
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Estabelecimento da etiologia Postulados de Koch?
Dificuldades no cultivo Presença em Indivíduos/locais saudáveis Dificuldades de identificação Falta de modelo animal
9-12-201517 T25 e26 MJC
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Alternativas Associação Eliminação Resposta do hospedeiro Patogenicidade em modelos animais Factores de virulência Porphyromonas gingivalis
Aggregatibacter actinomycemcomitans
9-12-201518 T25 e26 MJC
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A. actinomycetemcomitans P. gingivalis
Associação>Crónicas e LAP (Tecidos do hospedeiro)
25% saudáveis> Lesões periodontais
EliminaçãoLesões tratadas (=0) Lesões recorrentes (>)
Lesões tratadas (=0)Lesões recorrentes (>)
Resposta> de Ac no FC e soro LAP > de Ac no FC e soro
(Perio)
ModeloRoedores Roedores e primatas
não humanos
Factores de virulênciaVer à frente
9-12-2015 T1319
T25 e26 MJC
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Aggregatibacter actinomycemcomitans Anaeróbio Facultativo Não móvel Bastonete G- Números aumentados em LAP e periodontite
crónica Existe também em lesões tratadas e em locais
saudáveis Existem 5 serótipos (a-e) Serótipo b associado a locais com patologia Estirpes que produzem leucotoxina associadas
a LAP9-12-201520 T25 e26 MJC
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Porphyromonas gingivalis Anaeróbio Não móvel Bastonete G- Associada a lesões 25% locais saudáveis têm Há diferentes estirpes
9-12-201521 T25 e26 MJC
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Virulência dos agentes periodontais Complexa
Modulação da resposta do hospedeiro Multifactorial Espécies mais estudadas:
P. gingivalis A. actinomycemcomitans T. denticola E. corrodens F.nucleatum P. intermedia T. forsythia
Há mecanismos comuns a estas e outras espécies Factores de virulência:
Moléculas Mecanismos
9-12-201522 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis Proteases
Nutrição Efeitos em proteínas importantes do hospedeiro
Gingipains (proteases de cisteina) R(arginina) K (lisina)
prtT (proteases de cisteina tipo strep) Periodontain (inibidor de serpins -protease alfa1) Trp (pz-peptidase) tipo papaina Aminopeptidases Peptidase tipo conversora de endotelina Prolil dipeptidil peptidase IV (digestão de matriz extracelular)
9-12-201523 T25 e26 MJC
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Hemaglutininas Nas fimbrias Na LPS Em lípidos de superfície Como domínios de proteases HagA-C
Medeiam ligação a epitélio e eritrócitos
Adesão ↔hemaglutinação ↔ fimbriação ↔ proteólise
9-12-201524 T25 e26 MJC
Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis
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Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis LPS
Ácidos gordos mais longos e ramificados Menos propriedades endotóxicas
Fimbrias ~45kDa Fimbrilina (FimA) 67kDa (fimbrias menores) Adesão colonização e destruição periodontal Vacinação com FimA protege contra reabsorção
óssea Vesículas
Típicas de G- Veículos de entrega dirigida de toxinas (LPS,
hemaglutininas, proteases)
9-12-201525 T25 e26 MJC
Comparados com enterobacterias
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Cápsula polissacárida Seis serótipos existentes Encapsuladas menos fagocitadas mais virulentas Cápsula mascara LPS
9-12-201526 T25 e26 MJC
Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis
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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis
Adesão, colonização e formação de biofilme Biofilme Agregação intergénica com:
Streptococci orais e Actinomyces naeslundii Fusobacterium Treponema denticola e Tanerella forsythia
Fimbrias Células epiteliais Fibroblastos Células endoteliais Matriz extracelular (fibronectina e fibrinogénio) Prps e estaterina Hidroxiapatite coberta de saliva FimA inibida por S. cristatus inibida a formação de biofilme SspB de S.gordonii interage com P.gingivalis
9-12-201527 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis
Invasão das células epiteliais FimA e integrinas Arranjos do
citoesqueleto Sinalização MAPK
Alteração [Ca++] Transcrição de IL8
Produção de proteases digestoras da matriz extracelular
9-12-201528 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis
Invasão das células endoteliais Presença em placas ateroscleróticas Invasão in vitro de endotélio Estímulo de citocinas e CAMs Mediada por FimA Fica no autofagosoma que não matura
9-12-201529 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis
Proteolítica Degradação de matriz extracelular Degradação de mediadores químicos do hospedeiro Degradação de receptores do hospedeiro (C5a)
Activação Prototrombina Proteina C Factor X Kallikrein-kinin Neutrófilos
9-12-201530 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis
Resposta inflamatória Promoção
Activação de citocinas e quimocinas PMN Monócitos Células epiteliais
Inibição IL-1ra IL-4 Degradação de citocinas Antagonismo na produção de IL-8 (factores de
transcrição) Diminuição de TLR expressos à superficie
9-12-201531 T25 e26 MJC
IL-1beta, TNF-alfa, IL-6 e IL-8
Inflama-ção
e reabsor-ção óssea
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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis
Reabsorção óssea, destruição óssea e inibição da formação de osso Interferência na regulação da actividade de
osteoblastos e osteoclastos. Activação de osteoclastos por LPS IL-1beta,
prostaglandina E2 (PFGE2) e TNF-alfa aumenta produção de proteases do hospedeiro que destroem tecido conjuntivo e osso e inibem sintese de colagénio pelos osteoblastos.
9-12-201532 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Moléculas e organelos) –A.actinomycemcomitans
Toxinas Leucotoxinas (específicas para espécie e para células-
monócitos, neutrófilos e alguns linfócitos) Forma poros na membrana plasmática
Citotoxinas (Cytolethal Distending Toxin /Immunosupressive Factor) Distende células Pára ciclo celular Rearranja actina Causa apoptose
LPS Polissacárido O antigénio imunodominante Reabsorção ósseas, agregação plaquetária, necrose da pele Liga hemoglobina Activa macrófagos ↓IL-1alfa e TNF ↑ citocinas proinflamatórias e anti inflamatórias
9-12-201533 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Moléculas e organelos) – A.actinomycemcomitans
9-12-2015T25 e26 MJC 34
Moléculas que se ligam ao Fc Inactivação da região Fc dos anticorpos inactivação da
fagocitose Inactivação do complemento
Vesículas Leucotoxina, LPS e bacteriocinas
Material extracelular Glicoproteína adesiva Indutora de reabsorção óssea
Fimbrias 54kDa e 6.5kDa Flp Papel na adesão
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Factores de virulência (Mecanismos) – A.actinomycemcomitans Adesão
Mais eficiente em células com fimbrias Coadesão e coagregação apenas com
Fusobacterium Adesão não específica
Locus tad formação de longas fibrilas e pili Adesão específica a células epiteliais
Fimbrias ExAmMat Vesículas Adesinas (aae)
Adesão a matriz extracelular OMPs ligam colagénio e fibronectina 9-12-201535 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Mecanismos) – A.actinomycemcomitans Invasão de células epiteliais
Escapa a fagocitose Transita entre células vizinhas Localiza-se nos pólos positivos do microtúbulos
9-12-201536 T25 e26 MJC
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Factores de virulência (Mecanismos) – A.actinomycemcomitans Interferência com defesas do hospedeiro
Ligação a factores quimiotáticos (inibição de neutrófilos) Receptores de adesão Ligação ao endotélio Inibição e resistência ao H2O2 e outras defensinas do
hospedeiro Reabsorção óssea
SAM GroEL actua em osteoclastos e osteoblastos
LPS Provoca a libertação de cálcio
Microvesículas Apoptose
Activação de caspases
9-12-201537 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – Treponema denticola Proteínas de superfície
Msp com actividade formadora de poros (porina) e adesão (adesina)
Proteases Proteases tipo quimiotripsina (dentilisina) Adesão celular, destruição tecidular e invasão dos tecidos
Proteínas ligadoras de ferritina e hemoglobina Mobilidade e quimiotaxia
Mutantes imóveis não infectam hospedeiro Adesão
À matriz extracelular, células epiteliais e endoteliais Coagregação com P.gingivalis e Fusobacterium
9-12-201538 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – Treponema denticola Invasão de tecidos
Não invade as células propriamente ditas mas sim os tecidos Modulação da resposta do hospedeiro
Inactiva monocitos e neutrófilos
9-12-201539 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – E. corrodens Pili tipo IV
Espécies com pili corroem o agar das placas Exopolisacarídeo
Ligado à supressão imunológica LPS
Actividade hemaglutinadora adesão a células epiteliais
Reabsorção óssea OMPs
Efeitos citotoxicos em macrófagos Induz agregação plaquetária Consome complemento
9-12-201540 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – E. corrodens Adesão
Células epiteliais, macrofagos e eritrócitos Lectin Like substance (EcLS) Liga-se a Streptococcus sanguis e Actinomyces
viscosus Indução de citocinas proinflamatórias
IL-6, IL-8 e PGE2 Inibição do crescimento
Esgota lisina do meio convertendo para cadaverina inibe crescimento de células epiteliais
9-12-201541 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – Fusobacterium nucleatum Toxinas
Butirato, propionato e amónia matam e inibem profliferação de fibroblastos
Coagregação Muito prevalente com várias espécies de
anaeróbios obrigatórios colonizadores tardios Adesão
Adere fortemente a fibronectina, e colagénio. Adere especificamente a PMNs, Macrófagos,
linfócitos, fibroblastos e células epiteliais
9-12-201542 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – Prevotela intermedia Fimbrias
Vários tipos e tamanhos Hidrolases
Proteases de Igs Hemolisinas e hemaglutininas Coagregação
Muito especifica com Actinomyces Adesão
A células epiteliais A colagénio tipo I, fibrinogénio, laminina e IgG.
Invasão de células epiteliais Indução de citocinas inflamatórias
9-12-201543 T25 e26 MJC
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Factores de virulência – Tanerella forsythia Hidrolases
Protease tipo tripsina Protease de cisteina especifica para arginina Sialidase
Coagregação Com P.gingivalis e S. cristatus
Adesão BspA liga a fibrinogénio e fibronectina Liga-se a eritrocitos, fibroblastos e leucocitos
9-12-201544 T25 e26 MJC
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Destruição tecidular em Perio Mediada pelo sistema imunitário Causada directamente por factores de
virulência dos MO
9-12-201545 T25 e26 MJC
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Lesão inicial Histologicamente é uma resposta inflamatória
aguda Alterações vasculares Degradação do colagénio Alterações nas células epiteliais Infiltração dos tecidos por neutrófilos
Infiltrado de células linfóides dominadas por linfócitos T
Perda de colagénio Migração do epitélio (retração gingival)
9-12-201546 T25 e26 MJC
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Lesão estabelecida Linfócitos B predominam Células plasmáticas MNP Neutrófilos infiltram-se no epitélio
9-12-201547 T25 e26 MJC
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Lesão avançada Células plasmáticas predominam Perda de tecido conjuntivo Perda óssea
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Neutrófilos Barreira ao nível do epitélio juncional Patologias raras (neutropenias) periodontite
precoce e severa Mas c/ MO mediadores de destruição celular
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Factores genéticos de predisposição Genes de controlo da função dos neutrófilos
IL1 e TNF Receptores FC nas célula fagociticas
9-12-201550 T25 e26 MJC
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Modelos animais da periodontite Não há nenhum ideal
Primatas Semelhança anatómica MI semelhante Desenvolvem perio com idade Histopatologia diferente Provoca-se perio aumentando a deposição de placa
bacteriana Estudos para o desenvolvimento de vacinas e dos
factores que controlam a perda óssea
9-12-201551 T25 e26 MJC
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Modelos animais da periodontite
Roedores Ratinhos (mice)
Várias diferenças quer na dentição quer na flora Economia Conhecimento genético de estirpes Estudos do papel dos vários determinantes
imunológicos Determinação de patogenicidade e factores de
virulência
9-12-201552 T25 e26 MJC
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Modelos animais da periodontite
Roedores Ratos (Rats)
Dentes maiores manipulação mais fácil Utilização de espécie gnotobióticas para ver efeitos de
infecção por um único agente Estudos de vacinação
9-12-201553 T25 e26 MJC
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Bibliografia
Capítulo 12 até p 261
Capítulo 33
9-12-201554 T25 e26 MJC
Capítulo 22-23
Artigos de Keystone pathogens (P.gingivalis e Filifactor allocis)