UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO CURSO DE GRADUAÇÃO EM...
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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA DICIPLINA DE GENÔMICA II AULA PRÁTICA: AULA PRÁTICA: PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO Helena Strelow Thurow Pelotas, abril de 2011
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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTASCENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO
CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIADICIPLINA DE GENÔMICA II
AULA PRÁTICA:AULA PRÁTICA:PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTOPCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO
Helena Strelow Thurow
Pelotas, abril de 2011
PCR-RFLPPCR-RFLP
Fragmento amplificado: 199pb
Sitio da Enzima BstUI: CGCG
digestão digestão ––AciIAciI ou ou SfcISfcI
DNADNA PCRPCR eletroforeseeletroforese anan áá lise em gellise em gel
eletroforeseeletroforeseEnzymatic cleavageEnzymatic cleavage
BstBstUU II
DNADNA PCRPCR ElectrophoresisElectrophoresis
ElectrophoresisElectrophoresis
Enzy
me
Agarose gel Agarose gel analysisanalysis
Agarose gel Agarose gel analysisanalysis
199p199pbb
Amplificação do fragmento do SNP Amplificação do fragmento do SNP Arg72Pro Arg72Pro
199p199pbb
113p113pbb
86pb86pbArgArg
ProArg
ProPro
ArgArg
ArgArg
ArgArg
ArgArg
ProPro
ProArg
ProPro
ArgArg
ArgArg
ArgArg
ArgArg
Genotipagem das amostras para o SNP Genotipagem das amostras para o SNP Arg72ProArg72Pro
ArgininaArginina
ProlinaArginina
ProlinaProlina
SEQUENCIAMENTOSEQUENCIAMENTO
Pré-
mix
Prim
er
DN
A
vortex +
sequenciamento
2ul 2ul 2ul
PURIFICAÇÃOPURIFICAÇÃO
SEQUENCIAMENTOSEQUENCIAMENTO
PRÓXIMAS ETAPAS...PRÓXIMAS ETAPAS...
