'Tiooligosacáridos con unidades furanósicas. Síntesis ...A los Docentes y Profesores con quienes...

Di r ecci ó n:Di r ecci ó n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Intendente Güiraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293

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Tesis Doctoral

Tiooligosacáridos con unidadesTiooligosacáridos con unidadesfuranósicas. Síntesisfuranósicas. Síntesis

diasteroselectiva y estudios dediasteroselectiva y estudios deinhibición de una furanosil hidrolasainhibición de una furanosil hidrolasa

Repetto, Evangelina

2010

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Repetto, Evangelina. (2010). Tiooligosacáridos con unidades furanósicas. Síntesisdiasteroselectiva y estudios de inhibición de una furanosil hidrolasa. Facultad de CienciasExactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

Cita tipo Chicago:

Repetto, Evangelina. "Tiooligosacáridos con unidades furanósicas. Síntesis diasteroselectiva yestudios de inhibición de una furanosil hidrolasa". Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.Universidad de Buenos Aires. 2010.

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ÓSICAS. NHIBICIÓÓN

−╉Nuestra recompensa se encuentra en el esfuerzo y no en el resultado. Un esfuerzo total es una victoria completa╊ − M. Gandhi. Dedico esta tesis a mi mamá y a mi papá por estar siempre para mí y ser mis ╉fans╊ número な. A mi hermano, de quien estoy orgullosa porque es una gran persona y soy feliz por ser su hermana. A Ro, con quien ya perdí la cuenta de cuantas cosas y momentos compartimos juntos, y éste al igual que tantos otros, es de los dos. Gracias por elegirme. A mi familia. A mi abuela, que la extraño. A Vero, que merece una ╉dedicación aparte╊ porque se transformó en una gran amiga, con la capacidad de escucharme, aconsejarme y hacer que estos años no hayan costado trabajo, ya que fueron compensados con risas, charlas y una amistad que será para siempre. A mis amigos. A Shoco y a Monita, compañeras de estudio.

Al Dr. Oscar Varela, quien me brindó la posibilidad de realizar mi Tesis en su laboratorio y siempre estuvo presente, no sólo como director sino también como persona, preocupándose por mí.

Quiero agradecer a las Instituciones y personas que hicieron posible la realización de este trabajo. A la ANPCyT y a CONICET por las becas que me han otorgado. Al Departamento de Química Orgánica 岫FCEyN岻. A Lau y Adri por brindarme su ayuda desde el primer día y compartir su experiencia conmigo. A mis amigos en el laboratorio: Lore por estar al comienzo de mi trabajo y dejar sus cosas para hacer mis espectros y ayudarme; Romi por ser super compañera, siempre dispuesta a dar una mano y preocuparse por mí; Ale, que no se cómo mantiene su paciencia y buen humor a pesar de vivir rodeado por nosotras; Chili y Dani que aportan locura, alegría y música al trabajo y Sil, que también compartió con nosotros el laboratorio. A Brenda, Guillermo, Sebastián, Valeria, Eleonora, Andrea, Lucía y todos aquellos con quienes compartí turnos de laboratorio y charlas de pasillo. A Carla por ayudarme con la parte de inhibición enzimática. A los Docentes y Profesores con quienes compartí turnos de TP. Al plantel no docente del Departamento, en especial a Maripi, Olga, Sergio y Nancy. A Mery por los microanálisis y por soportar que la persigamos por los pasillos. A José y especialmente a Gernot por los espectros de RMN のどど MHz. A las Dras. Perillo y Salerno de la FFyB por haberme dado la posibilidad de empezar a trabajar en química orgánica. A mis amigas y amigos de la vida. A Vale por escucharme y estar siempre que la necesito. A Vani por tantos años de amistad. A Sofía por hacerme reir.

TIOOLIGOSACÁRIDOS CON UNIDADES FURANÓSICAS. SÍNTESIS DIASTEROSELECTIVA Y ESTUDIOS DE INHIBICIÓN DE UNA FURANOSIL HIDROLASA. En el área de la glicobiología la búsqueda de nuevos inhibidores enzimáticos ha conducido al desarrollo de glicomiméticos como, por ejemplo, los tiooligosacáridos. Éstos son análogos de oligosacáridos naturales en los cuales el átomo de oxígeno interglicosídico se ha sustituido por azufre y suelen ser reconocidos por enzimas e inhibir su actividad biológica. Dado que prácticamente no se encuentran ejemplos de tiodisacáridos y tiooligosacáridos de azúcares furanósicos, se planteó como objetivo general de esta Tesis el diseño y síntesis de tiodisacáridos constituidos por al menos una unidad pento o hexofuranosa y su evaluación como inhibidores de una が‐galactofuranosidasa de Penicillium fellutanum. La galactofuranosa es constituyente de polisacáridos de micobacterias como el Mycobacterium tuberculosis, causante de la tuberculosis. La Galf es esencial para la sobrevida o virulencia de varios microorganismos patogénicos, pero por el momento no se ha encontrado en mamíferos. Dado que la degradación de glicoconjugados de Galf en algunos microorganismos es resultado de la acción de una が‐galactofuranosidasa, ésta es un blanco adecuado para la acción de inhibidores. Por las razones enunciadas precedentemente, en este trabajo se desarrollaron metodologías generales de síntesis de tiooligosacáridos de azúcares furanósicos, en particular de Galf. Como paso clave para la construcción diastereoselectiva del enlace tioglicosídico se emplearon: i岻 Adiciones conjugadas de な‐tioaldosas a azúcares aceptores de Michael; ii岻 Reacciones de trans‐tioglicosilación; iii岻 Reacciones de sustitución nucleofílica y iv岻 Reacciones de apertura de tiiranos de azúcares. Así, se han obtenido tiodisacáridos con unidades furanósicas localizadas tanto en el extremo reductor como el no reductor. También se presenta una síntesis satisfactoria de un tiodisacárido formado por dos azúcares furanósicos. Asimismo, se ha descrito una nueva metodología, basada en la apertura de tiiranos de azúcares por una な‐tioaldosa, para la construcción de ditiotrisacáridos ramificados con unidades furanósicas. Palabras clave: tiodisacáridos, tiooligosacáridos, tiofuranosas, inhibidores enzimáticos, ‐galactofuranosidasa.

THIOOLIGOSACCHARIDES WITH FURANOSE UNITS. DIASTEROSELECTIVE SYNTHESIS AND INHIBITION STUDIES OF A FURANOSYL HIDROLASE. In the area of the Glycobiology the search for new enzyme inhibitors has led to the development of glycomimetics that resemble the global structure of a related sugar, but exhibit improved drug‐like properties. For example, the replacement of the oxygen atom of the interglycosidic linkage by a sulfur atom leads to thiooligosaccharides, which may act as inhibitors of the enzymes that participate in the metabolism of the natural analogues. As practically no examples are found of thiodisaccharides and thiooligosaccharides of furanose sugars, we propose as a main goal of this Thesis the design and synthesis of thiodisaccharides formed at least by one penta or hexafuranose unit. The resulting glycomimetics have been evaluated as inhibitors of a が‐galactofuranosidase from Penicillum fellutanum. Galactofuranose is a sugar component of polysaccharides from many microorganisms. They include mycobacterium, such as M. tuberculosis, the agent of tuberculosis. This sugar is essential for the survival or virulence of pathogenic microorganisms, but it has not yet been found in mammals. As the degradation of Galf containing polysaccharides is the result of the activity of a が‐galactofuranosidase, this enzyme is a convenient target for inhibition. In view of the previous considerations, in this work we have developed general methodologies for the synthesis of thiooligosaccharides constituted by furanose sugars, in particular by Galf. As key step for the diasteroselective construction of the thioglycosidic linkage were employed: i岻 Conjugate addition of な‐thioaldoses to sugar enones as Michael acceptors; ii岻 Trans‐thioglycosylation reactions; iii岻 Nucleophilic substitution reactions, and iv岻 Sugar thiirane ring‐opening. The procedures employed led to thiodisaccharides having a furanose unit as a reducing or non‐reducing end. A convenient synthesis of a thiodisaccahride formed by two furanose units is reported. Furthermore, branched‐chain dithiotrisaccharides have been prepared through a new synthetic route, based on the ring‐opening of a thiirane group of a sugar derivative by a な‐thioaldose. Keywords: thiodisaccharides, thiooligosaccharides, thiofuranoses, enzyme inhibitors, ‐galactofuranosidase.

CAPITULO な Glicobiología de azúcares furanósicos.

Capítulo な. Introducción

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Glicobiología de azúcares furanósicos. La química de los hidratos de carbono se encuentra fuertemente conectada con la química orgánica, farmacéutica y medicinal. Los hidratos de carbono son biomoléculas esenciales para la vida, cuyo rol no sólo se limita al almacenamiento de energía, sino que también son elementos claves en una gran variedad de procesos biológicos tales como señalización y adhesión celular, crecimiento y diferenciación, angiogénesis, comunicación intercelular e incluso son moléculas blanco 岫targets moleculares y celulares岻. La gran variedad de propiedades que poseen los hidratos de carbono se relaciona con sus estructuras, que pueden incluir polímeros lineales o estructuras complejas ramificadas o conjugadas con otro tipo de moléculas. En este caso forman parte de glicoproteínas, glicolípidos y otros glicoconjugados, que pueden encontrarse en todos los sistemas vivos. En las glicoproteínas, por ejemplo, el fragmento glicosídico puede ser pequeño 岫puede consistir solo en una unidad de monosacárido岻 o puede ser más grande incluso que la fracción proteica. Estructuralmente, los monosacáridos pueden encontrarse en configuraciones piranósica o furanósica y las uniones pueden darse en distintas posiciones, originando un gran número de posibles uniones glicosídicas entre monómeros. La capacidad de crear estructuras complejas y diferentes tipos de uniones es una propiedad estructural única de los hidratos de carbono con respecto, por ejemplo, a los péptidos y ácidos nucleicos, cuya consecuencia es la gran diversidad funcional en los sistemas biológicos, como se mencionó anteriormente. La conformación también es un aspecto que influye en la actividad biológica. La conformación de glicósidos queda determinada principalmente por la estereoquímica de la unión glicosídica, la configuración de los grupos sustituyentes y la posibilidad de pseudorrotación en los anillos piranósicos o furanósicos.


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Mayoritariamente los monosacáridos se encuentran en la forma hexopiranósica.な Sin embargo, durante las últimas décadas, las biomoléculas que contienen constituyentes hexofuranósicos han atraído la atención debido a: Su presencia en varios microorganismos, incluso algunos de ellos patogénicos Ausencia en mamíferos En razón de estas propiedades, los análogos y derivados de glicofuranosas son candidatos promisorios para nuevas drogas.に Sin embargo, los mecanismos detallados de la biosíntesis y metabolismo de conjugados de glicofuranósidos no han sido aún completamente elucidados. Se ha descripto que en estos procesos participan enzimas clásicas como las hidrolasasぬ y transferasas,ね,の y también se han sumado las mutasas,は,ば que catalizan la interconversión entre azúcares piranósicos y furanósicos. No obstante, pocas de estas enzimas han sido aisladas y estudiadas excepto algunas relacionadas con estructuras galactofuranósicas. Desde el punto de vista químico, una hexosa determinada muestra grandes diferencias dependiendo de si se encuentra como piranosa o furanosa. Es bien conocido que los hexopiranósidos están más favorecidos ╉termodinámicamente╊ que los furanósidos correspondientes, básicamente porque las interacciones estéricas se minimizan en los anillos de seis miembros.ぱ Además, los efectos ╉estereoelectrónicos╊, en particular el efecto anomérico, tienden a estabilizar las agliconas con orientación axial. Es por esto que los ゎ‐D‐piranósidos en la conformación ねCな son generalmente más estables que sus correspondientes anómeros が, ecuatoriales 岫Fig.な岻. Sin embargo, debido a su flexibilidad, en los furanósidos los efectos anoméricos no son capaces de favorecer a los anómeros ゎ más que a los が, ya que este efecto es posible en ambos casos. Como consecuencia, el solapamiento de orbitales en los furanósidos no es tan eficiente como en los piranósidos y, generalmente, no puede explicar la mayor estabilidad de un anómero sobre el otro.


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Figura. な. Conformaciones estabilizadas por efecto anomérico. De todos modos, por estudios realizados principalmente en nucleósidos, se ha establecido que el equilibrio entre las conformaciones de baja energía tipo Norte 岫la conformación T ó twist que se encuentra en el hemisferio norte del ciclo pseudorrotacional岻 o Sur 岫el twist opuesto del hemisferio sur岻 depende de los efectos anomérico y/o interacciones gauche que involucran a los oxígenos O‐に o O‐ぬ.ひ‐なな Por la baja energía de interconversión, la conformación de un furanósido se describe principalmente como un promedio entre las conformaciones sobre y twist.に,なに‐なの Esta flexibilidad justifica en parte porque la manipulación de grupos funcionales en compuestos furanósicos se encuentra más limitada en comparación con sus análogos piranósicos. Los polisacáridos compuestos por residuos furanósicos son constituyentes importantes de glicoconjugados de bacterias,なは,なば protozoos,なぱ hongosなひ y plantas.にど También se han identificado en glicopéptidos, glicolípidos y nucleótidos. Entre las pentosas, la ribosa y la arabinosa son los azúcares más comúnmente encontrados en forma furanósica. La ribofuranosa, forma parte de los ácidos nucleicos, y la arabinofuranosa se encuentra en bacterias del suelo, hongos y plantas.にな La D‐galactosa es la hexosa más abundante en forma furanósica en polisacáridos naturales. La mayoría de los ejemplos se encuentran en micobacterias, donde también es posible hallar unidades arabinofuranósicas. En particular, las estructuras de glicoconjugados que incluyen la unidad D‐Galf en configuración anomérica な,に‐trans 岫が‐D‐Galf岻 se han

ゎ‐D‐piranosa が‐D‐furanosa ゎ‐D‐furanosa

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4C11E E1


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encontrado en varios microorganismos, no necesariamente patogénicos y también en algunos organismos pluricelulares.な A diferencia de muchos monosacáridos que se encuentran en la naturaleza en una única forma enantiomérica, la Araf puede encontrarse en glicoconjugados tanto en su forma D como L. Además, en los polisacáridos prevalece la configuración anomérica ゎ. En cambio, la Galf solo se encuentra en la naturaleza como D‐Galf, y ambas formas ゎ y が‐Galf son producidas por diversos microorganismos, aunque los enlaces が‐Galf son los que predominan. Se han identificado algunos polisacáridos que contienen residuos ゎ‐D‐Galf pero son más raros. El residuo D‐Galf puede estar conectado con otras unidades piranósicas, como D‐Manp, D‐Glcp o D‐Galp, o incluso N‐acetil‐D‐galactosamina 岫D‐Galp‐NAc岻 o glucosamina 岫D‐Glcp‐NAc岻; L‐ramnosa 岫L‐Ramp岻, D‐fructosa 岫D‐Frup岻 o también a unidades galactofuranósicas a través de una unión O‐glicosídica 岫な蝦に岻, 岫な蝦ぬ岻, 岫な蝦の岻 o 岫な蝦は岻, siendo estas dos últimas las más comunes.な Se han encontrado unidades de Galf en numerosas estructuras consideradas esenciales para la virulencia en muchos organismos patogénicos. Otros azúcares furanósicos que pueden encontrarse aunque más escasamente en bacterias y plantas son D‐Glcf, D‐Fucf o incluso D‐Manf. な En la Tabla な se reseña la presencia de が‐D‐Galf en microorganismos. A continuación se describe el tipo de estructuras que incluyen a la が‐D‐Galf en microorganismos 岫micobacterias, protozoos, hongos y bacterias岻 y en plantas y otros eucariotas.


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Tabla な. Unidades de が‐D‐Galf en oligosacáridos naturales de distintos microorganismos.*

*Fuente: Carbohydr. Res. にどどぱ, ぬねぬ, なぱひば‐なひにぬ岫Las referencias indicadas corresponden a este trabajo岻

Unión glicosídica Microorganismo岫s岻 Unión glicosídica Microorganismo岫s岻


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な. Micobacterias La pared celular en estas especies está constituida principalmente por un lipoarabinomanano 岫LAM岻 y un arabinogalactano 岫AG岻, en el cual todos los residuos de galactosa y arabinosa están presentes como anillos furanósicos 岫Fig. にa岻.なは,にに La porción AG comprende una cadena linear de aproximadamente ぬど unidades alternadas de D‐Galf unidas が‐岫な蝦の岻 y が‐岫な蝦は岻岫Fig. にb岻. Se ha propuesto que cada cadena de galactano contiene に o ぬ cadenas de arabinanos y que la posición de unión es el O‐の de la unidad Galf. El ╉core╊ de la pared celular de las micobacterias consiste en una capa lipídica externa 岫ácido micólico岻 unida a peptidoglicano a través del AG, y es única para micobacterias y Actinomicetes. Si se inhibe la formación de dicha pared celular es factible inhibir el crecimiento microbiano, hecho que ha potenciado el desarrollo de nuevos inhibidores.にぬ Se mencionó que las células de los mamíferos carecen de la habilidad de biosintetizar y/o metabolizar glicofuranósidos, por lo cual las enzimas involucradas en estos procesos metabólicos en bacterias, hongos y protozoos son un excelente blanco para el desarrollo de nuevas terapéuticas. La inhibición de glicofuranosidasas es también de utilidad para avanzar en el conocimiento de los roles biológicos y fisicoquímicos de los glicofuranósidos y de los mecanismos biológicos conectados con ellos. En particular, la inhibición de las enzimas que ensamblan polifuranósidos evitaría la proliferación de micobacterias, incluido el agente causante de la tuberculosis, el Mycobacterium tuberculosis.に,にね

Figurpertearabin に. Los eucaprotque iTantfosforesidbiosiGIPLadhealimTryp

Figura にa. Esquemnecen los nogalactano d

Protozoresiduos dariotas comozoarios dinfecta a mto en L. molípido 岫GIPduos de Gaintética coL岻 actúan cesión de mentario depanosoma o

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mbién estánanosoma Leishmaniamillones de en T. cruperficie se ra が‐D‐Galf‐e destacarores de virhuésped, aresponsabnia a mamíf

Arabino

Capítulo な.Introducción

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una eubactegénero Mycobacterias.

n presentecruzi y Lia son los apersonas euzi, el lipofrelacionan f‐岫な蝦ぬ岻‐Mar que ambrulencia inasí como table de la feros huésp

Glucolípidos

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Figura ぬ. Fragmento del ╉core╊ de LPG encontrado en la superficie de Leishmania. ぬ. Hongos Los hongos son otros microorganismos reconocidos como causa de ciertas infecciones, especialmente en pacientes inmunodeficientes y aquellos tratados con agentes inmunosupresores. Se ha observado que durante el crecimiento de hongos se producen exopolisacáridos 岫EPS岻 con propiedades inmunogénicas. Por ejemplo, los EPS de especies de Aspergillus y Penicillium poseen una cadena principal compuesta por ゎ‐D‐manopiranósidos unidos 岫な蝦に岻 y 岫な蝦は岻, la cual contiene cadenas laterales de ね a など unidades de residuos が‐D‐Galf unidos 岫な蝦の岻岫Fig. ね岻.なひ También se ha purificado un nuevo galactofuranano a partir de quince especies de Eupenicilliumぬな y se estudió la estructura de un heteropolisacárido rico en unidades de Galf unidas 岫な蝦に岻 y 岫な蝦の岻 en Talaromyces helicus.ぬに En algunas de estas especies la unidad galactofuranósica parece ser el determinante antigénico.


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8-11 Figura ね. Estructura del ╉core╊ galactomanano del EPS producido por Aspergillus y Penicillium. En algunos microorganismos, la degradación de glicoconjugados que contienen unidades de Galf es promovida, por una が‐galactofuranosidasa. La más conocida es la exo が‐D‐galactofuranosidasa, que se purificó por primera vez a partir de un cultivo de Penicillum fellutanum.ぬぬ Luego, se describió también, en Helminthosporium sacchariぬね y otras especies de Penicillium y Aspergillus.ぬの,ぬは El rol de esta enzima en P. fellutanum es liberar galactosa, por despolimerización de un glicopéptido extracelular, para utilizarla como fuente de carbono, durante el crecimiento del hongo.ぬぬ La が‐D‐galactofuranosidasa es un blanco importante si consideramos que durante la diferenciación del Trypanosoma cruzi del estadío invasivo al infectivo, la cantidad de glicoconjugados que contienen unidades de Galf, disminuye críticamente.ぬばね. Bacterias Si bien se han encontrado glicoconjugados que incluyen unidades de D‐Galf en configuración anomérica な,に‐trans en muchos microorganismos, no necesariamente patogénicos 岫incluyendo bacterias Gram negativas y más raramente, Gram positivas岻, en ciertas ocasiones los glicoconjugados que


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contienen unidades de D‐Galf aparecen como esenciales para la virulencia de muchos organismos patogénicos. Entre estos glicoconjugados se encuentran los lipopolisacáridos 岫LPS岻 antigénicos 岫antígeno O岻 de un creciente número de bacterias Gram negativas, como la Escherichia coli K‐なにぬぱ,ぬひ岫Fig. のa岻 o la E. coli Oなはね enteroinvasiva,ねど así como también se presentan en la unidad repetitiva galactan‐I del antígeno O de Klebsiella pneumoniaeねな岫Fig. のb岻. También puede encontrarse Galf en polisacáridos extracelulares o capsulares de una gran variedad de bacterias Gram negativas y Gram positivas.ねに‐ねの Además es importante señalar que la estructura が‐D‐Galf‐岫な蝦は岻‐ゎ‐D‐Galp se ha encontrado en exopolisacáridos de bacterias beneficiosas para los humanos tales como Lactobacullis rhamnosus, aislado de la flora intestinal humanaねは o Streptococcus thermophilus producido en leche descremada.ねば

Figura の. Estructuras de glicoconjugados de bacterias Gram negativas, que contiene unidades de Galf. a. Unidad repetitiva del glicano del antígeno O del LPS de Escherichia coli K‐なに. b. Unidad repetitiva del antígeno O de Klebsiella pneumoniae. Cabe destacar que las unidades de Galf en configuración な,に‐cis se encuentran algunas veces presentes en los oligosacáridos mencionados anteriormente, como también en el caso de algunas cepas de Clostridium thermocellumねぱ岫Fig. は岻 y otras bacterias y hongos como, Adopus dedicuus.ねひ

D‐galactan I unidad repetitiva


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OH Figura は. Fragmento del celulosoma de Clostridium thermocellum, que contiene α‐D‐Galf. の. Plantas y otros organismos eucariotas Se han encontrado diferentes hexofuranósidos en plantas, algas y líquenes, como así también en esponjas marinas, estrellas de mar y arcaebacterias.な Glicomiméticos. Se mencionó anteriormente el rol importante que desempeñan los hidratos de carbono en eventos de reconocimiento que inician respuestas inmunológicas a infecciones bacterianas y virales. También participan en distintos procesos de señalización que ocurren en enfermedades como el cáncer, la diabetes o procesos inflamatorios. Estas actividades biológicas únicas, han potenciado la búsqueda de nuevos análogos con propiedades biológicas mejoradas, respecto de los compuestos originales y con la capacidad de acelerar 岫como iniciadores o activantes岻 o inhibir la actividad enzimática. Nos estamos refiriendo a ╉compuestos miméticos de hidratos de carbono╊, en los cuales su estructura molecular nos recuerda a un azúcar natural, pero con alteraciones capaces de modificar su actividad biológica y metabolismo. Con este objetivo, se han incrementado los esfuerzos en cuanto a diseño, síntesis y evaluación de glicomiméticos como inhibidores enzimáticos. Dado que la conformación de un oligosacárido depende principalmente del enlace glicosídico, muchas de las modificaciones estructurales que se realizan sobre ellos, involucran al átomo del enlace interglicosídico. Particularmente, se han sintetizado análogos


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que contienen átomos de carbono o heteroátomos como azufre e incluso nitrógeno, como herramientas útiles para estudiar procesos enzimáticos. Estos análogos de los O‐sacáridos han atraído la atención por su estabilidad frente a la hidrólisis y por su actividad, en muchos casos, como inhibidores enzimáticos.のど En relación con la bioquímica de los poliglicofuranósidos, las enzimas que pretenden inhibirse son las mutasas y glicosidasas. Inhibidores de mutasas: hasta hoy la enzima más estudiada involucrada en la biosíntesis de hexofuranósidos es la UDP‐Galp mutasa, la cual cataliza la isomerización de UDP‐Galp a UDP‐Galf.な Se diseñan inhibidores para entender mejor este proceso y para el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas contra tuberculosis, lepra, y otras enfermedades causadas por infecciones micobacterianas. Los inhibidores pueden agruparse en dos familias: la de los que conservan la unidad furanósica 岫Fig. ばa y ばb岻 y la de los análogos en los cuales el oxígeno del anillo de cinco miembros ha sido reemplazado por otro elemento 岫N, S, Se岻のな‐のの岫Fig. ばc y ばd岻.

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OH Figura ばc. Análogos pirrolidínicos de Galf.

Figuraばa. C‐análogo de UDP‐Galf . Figura. ばb. Análogos fluorados de UDP‐Galf.


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Figura ばd. Iones amonio, sulfonio y selenio, análogos de Galf. Inhibidores de hidrolasas: los tioglicósidos son generalmente resistentes a la hidrólisis ácida y enzimática.な Como su estructura se asemeja a la del sustrato natural, son reconocidos por enzimas que en muchos casos son incapaces de metabolizarlos, por lo cual actúan como inhibidores de las mismas al bloquear el sitio activo. Los tioglicósidos inhibidores de glicopiranosidasas se han utilizado para investigar, mediante rayos X, la estructura del complejo enzima‐sustrato. Además, estos tioglicósidos, pueden utilizarse en la síntesis convergente de oligosacáridos. Se han utilizado tioglicósidos de Galf, para inhibir galactofuranosidasas, un target importante para el diseño de nuevas drogasのは,のば岫Fig. ぱ岻.

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Figura ぱ. Inhibidores de exo‐が‐D‐galactofuranosidasa de Penicillum fellutanum. Los tiooligosacáridos se han empleado como sondas convenientes para estudios de inhibición enzimática.のぱ‐はな Además, existen antecedentes acerca de la actividad de un buen número de tiooligosacáridos como inhibidores competitivos de glicosidasas y también como targets específicos para estudios de inhibición enzimática. En la mayoría de los casos se trata de tiodisacáridos constituidos por unidades piranósicas. Los estudios más completos de inhibición de glicosil


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hidrolasas por tiooligosacáridos, se realizaron con derivados unidos 岫な蝦ね岻 mediante azufre de la serie celobiosa 岫が‐glucopiranosil‐岫な→ね岻‐が‐glucopiranosa岻 y maltosa 岫ゎ‐glucopiranosil‐岫な→ね岻‐ゎ‐glucopiranosa岻, con celulasas y ゎ‐amilasas de varios orígenes 岫Fig. ひ岻.はに O

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OH

SC6H4NO2HO

Figura ひ. Derivados unidos 岫な蝦ね岻 mediante azufre, de la serie celobiosa y maltosa. En cuanto a los tiodisacáridos, la mayoría de los casos, actúan como inhibidores competitivos de las glicosil hidrolasas.のは,はぬ Aunque con cierta frecuencia pueden actuar como inhibidores mixtos. En contraposición, hasta el inicio de esta tesis no se encontraron ejemplos de tioologosacáridos con unidades furanósicas como inhibidores enzimáticos.

CAPITULO に Síntesis de tiooligosacáridos.

Capítulo に. Introducción

15

Síntesis de tiooligosacáridos. Los tioologosacáridos se presentan como inhibidores valiosos ya que son tolerados por la mayoría de los sistemas biológicos, sin participar generalmente de los procesos metabólicos. El átomo de azufre interglicosídico, puede actuar como aceptor de enlace de hidrógeno, el cual, de la misma forma que el sustrato natural, podría jugar un rol importante en la unión con ligandos. Los S‐glicósidos que contienen un átomo de azufre en el anillo o aquellos en los cuales el S se encuentra en el enlace interglicosódico de un disacárido, poseen propiedades únicas, como por ejemplo la solubilidad en agua, la cual difiere en general de otros derivados de monosacáridos funcionalizados convencionalmente. Las diferencias en la actividad biológica entre tioglicósidos y sus análogos oxigenados dependen de sus diferencias electrónicas, siendo el azufre menos electronegativo y más polarizable.はね Además el azufre puede oxidarse a niveles superiores, aunque forma enlaces C噺S con cierta dificultad, en contraste con el oxígeno que forma enlaces C噺O estables. La facilidad con la que los tioles se oxidan a disulfuros es también una diferencia notable con respecto a los alcoholes. También, las diferencias en actividad biológica entre S‐ y O‐glicósidos, se basan en diferencias de tipo geométricas, conformacionales y de flexibilidad. Cabe mencionar que se han llevado a cabo estudios conformacionales en ね‐tiomaltosa,はの,ははね‐tiogalabiosa,はば S‐ゎ‐L‐fucosil‐岫な蝦ぬ岻‐ぬ‐tio‐D‐acetilglucosamina,はぱゎ,ゎ‐tiotrealosaはひ y tiogangliósidos.ばど Estos estudios han demostrado que el enlace tioglicosídico provee un alto grado de flexibilidad entre las unidades glicosídicas y que por ello estas moléculas poseen más confórmeros que sus análogos naturales.ばな Se observó para los tiodisacáridos libres en solución que al interaccionar con las proteínas, pueden cambiar fácilmente su conformación y entonces son capaces de ubicarse mejor en el sitio catalítico. Además, por cristalografía de rayos X del metil ね‐tio‐ゎ‐maltósido, se confirmó que, dado que el enlace C伐S es más largo que el enlace C伐O 岫~ど,ね Å岻, la distancia espacial entre los carbonos interglicosídicos de los dos residuos también es mayor en el tioanálogo 岫~ど,ぬの Å岻.ばに Como consecuencia de estos factores, las moléculas modificadas muestran generalmente alteraciones en sus propiedades de unión respecto de las naturales.


16

En contraposición con toda la información con que se cuenta acerca de la importancia de los azúcares azufrados 岫tioazúcares岻 y el número considerable de S‐glicósidos sintéticos, existen en la naturaleza pocos ejemplos de tioglicósidos. Dentro de ellos, los ╉glucosinolatos╊ pueden encontrarse en vegetalesばぬ y otros pocos tioazúcares han sido aislados de distintas fuentes naturales. Por ejemplo, la S‐adenosil‐L‐metionina se ha identificado como la sustancia intermediaria que participa en la trasferencia enzimática de un grupo metilo de la metionina a diversos sustratos en sistemas biológicos.ばね Su análogo de configuración xilo furanosa se ha aislado del molusco Doris verrucosa.ばの Además, el átomo de azufre puede estar incorporado en el anillo, como es el caso la の‐tio‐D‐manosa, el primer ejemplo de un tioazúcar natural aislado de la esponja marina Chlatria pyramida.ばは El potencial de los tiooligosacáridos como posibles agentes terapéuticos ha impulsado la síntesis y estudio de su actividad biológica. Existen distintas rutas para sintetizar tiooligosacáridos. La formación del enlace tioglicosídico puede ocurrir a través de mecanismos de S‐glicosilación promovida por base 岫tipo SNに岻, promovida por ácido 岫tipo SNな岻 o S‐alquilación de tioles anoméricos a través de mecanismos de tipo SNに. En general estas reacciones dan buenos rendimientos, aunque la formación de disulfuros 岫vía oxidación por el oxígeno del aire岻 es la principal reacción competitiva. También existen otras alternativas tales como reacciones SNに’, adiciones de Michael de tiolatos a enonas de azúcares y el uso de epóxidos intermediarios como agentes alquilantes. Podríamos dividir estas aproximaciones sintéticas en cuatro grupos:ばば I. Adiciones de Michael o tipo Michael de tioles de azúcares a aceptores insaturados. II. Desplazamiento nucleofílico de buenos grupos salientes por parte de azúcares que contienen un sustituyente tiol. III. Apertura de anillos de aziridinas y oxiranos por tioazúcares. IV. Acoplamientos de tioazúcares catalizados por enzimas.


17

Sin embargo, estas estrategias han sido aplicadas principalmente a los tiooligosacáridos constituidos por unidades en configuración piranósica, mientras que se encuentran escasos ejemplos de tiooligosacáridos que contengan un azúcar furanósico como constituyente. I. Adiciones de Michael o tipo Michael de tioles de azúcares a aceptores insaturados. Las enonas de azúcares son bloques de construcción útiles por poseer grupos carbonilo y olefina, que permiten llevar a cabo una importante variedad de reacciones conocidas. La enona de azúcar más conocida es la levoglucosenona que ha sido ampliamente utilizada como sintón quiral en la síntesis tanto de hidratos de carbono como de otras moléculas.ばぱ La adición de Michael de な‐tioaldosas a enonas derivadas de hidratos de carbono constituye una estrategia útil para obtener tiodisacáridos.のぱ,ばひ,ぱど Por ejemplo, la adición del derivado per‐O‐acetilado de な‐tio‐ゎ‐L‐fucosa 岫に岻 a la levoglucosenona 岫な岻 en benceno y en presencia de cantidades catalíticas de EtぬN condujo al tiodisacárido ぬ con un ひな% de rendimiento. La adición resultó altamente diasteroselectiva debido a la estructura rígida del biciclo de な y el impedimento estérico en la cara superior del anillo piranósico debido a la presencia del puente な,は‐anhidro. Por posterior reducción del grupo carbonilo de ぬ con L‐Selectride, seguido por la apertura del anillo な,は‐anhidro por acetólisis y O‐desacetilación se sintetizó el tiodisacárido ね, un ぬ‐desoxi análogo de tiodisacáridos que contienen glucosa como extremo reductor.ばぱ O

SH

OAc

OAcAcO

H3CO

O

O

O

S

OAc

OAcAcO

H3C

O

O

OEt3N

C6H6

+

O

S

OH

OHHO

H3C

O

OH

OH

OH

1 2 3 4


18

La misma metodología se utilizó para preparar ね‐S‐岫が‐D‐glucopiranosil岻‐ぬ‐desoxi‐ね‐tio‐D‐glucopiranosa 岫ぬ‐desoxitiocelobiosa, ば岻 a partir de な y el な‐tioazúcar の. El acoplamiento de éstos produjo el tiodisacárido は, el cual condujo a ば por reducción del grupo carbonilo con L‐Selectride y posterior acetólisis y O‐desacetilación.ぱな O

O

O

O

O

O

Et3N

C6H6

+

1 5 6 7

O

AcOAcO

OAc

SH

OAc OAcO

AcO

OAc

S

OAc

OHO

HO

OH

OH

OS

OH

OHOH Witczak y col. también llevaron a cabo esta clase de adiciones conjugadas de な‐tioazúcares, tales como に, の u ぱ a la isolevoglucosenona 岫ひ岻 seguidas por reducción del grupo carbonilo en C‐ね, lo cual constituyó un método conveniente 岫に pasos岻 para sintetizar ぬ‐desoxi‐岫な蝦に岻‐に‐S‐tiodisacáridos.ぱに

5

OAcO

AcO

OAc

SH

OAc

8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

O

SH

OAc

OAcAcO

H3C

2 La isolevoglucosenona se sintetizó a partir de D‐glucal,ぱぬ y se le adicionó el な‐tioazúcar correspondiente, por ejemplo ぱ, para dar など. Por reducción del grupo carbonilo con L‐Selectride, acetólisis del puente anhidro 岫varias condiciones岻 y O‐desacetilación obtuvieron に‐S‐岫が‐D‐galactopiranosil岻‐に‐tio‐ぬ‐desoxi‐D‐glucopiranosa 岫なな岻. O

O

O

O

Et3N

CH3CN

+

9 10 11

OAcO

AcO OAcS

OAc8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

OO

OHO

HO OHS

OH

OHO

OH

OH


19

II. Desplazamiento nucleofílico de buenos grupos salientes por parte de azúcares que contienen un sustituyente tiol. Este método de síntesis aprovecha la menor basicidad y mayor nucleofilia del átomo de azufre en comparación con el de oxígeno. El enlace tioglicosídico se forma por ataque de un tiol, convenientemente activado, a un centro nucleofílico de otro derivado de azúcar 岫Esq. な岻ぱね principalmente por reacciones de tipo SNに. O

RORO

XOR

OR

ORO

ROSH

OR

OR

ORO

ROSR'

OR

OR

NaHS

R'X, BaseX =

O NH

CCl3X = Cl ó Br

R'SH, Base

R'SH, H+

X = Cl ó Br ó OTf

Esquema な. Síntesis de tioglicósidos por desplazamiento nucleofílico. 岫Chem. Rev. にどどは, などは, なはど‐なぱば岻. Si esta reacción ocurre entre una な‐tioaldosa y otro azúcar con su centro anomérico activado convenientemente 岫por ejemplo, un haluro de glicosilo岻, se obtienen tiodisacáridos unidos 岫な蝦な岻.ぱの

12

O

AcOAcO

OAc

SAcAcO

O

AcOAcO

OAc

Cl

OAc

13

O

HOHO

OH

SHO

+

14 15 O

HO OH

OH

OH

O

HOHO

OH

SHO

NaOMe

Na También puede ocurrir una reacción similar entre un haluro de glicosilo y un tioazúcar, donde el grupo tiol se encuentre en otra posición diferente a la anomérica, produciendo el correspondiente tiodisacárido, como en la secuencia que se muestra a continuación en la cual se obtuvo un tiodisacárido unido 岫な蝦ね岻.ぱの


20

16

O

AcOAcS

OAc

OMeAcO

17

O

HOS

OH

OMeHO

NaOMeO

AcOAcO

OAc

Cl

OAc

+

14 18

O

HOHO

OH

SHO O

HO

OH

OMeHO

Na

Una alternativa consiste en el desplazamiento nucleofílico de otros grupos salientes adecuados, diferentes de los haluros, como los sulfonatos 岫ej: trifluorometansulfonato o triflato, p‐toluensulfonilo o tosilo岻, que no se encuentren en la posición anomérica, por un tiolato anomérico. Esto permite la formación estereocontrolada de tiooligosacáridos.のひ,ぱは

13

O

HOHO

OH

SHO

+

Na

19

O

AcO

OTf OAc

OMeAcO

18

O

HOHO

OH

SHO O

HO

OH

OMeHO En los casos descriptos, se utilizó HMPA como solvente, para incrementar la nucleofilicidad del tiolato. También pueden construirse enlaces tioglicosídicosばな a través del acoplamiento one pot de una な‐tioaldopiranosa peracilada con un derivado triflato, en presencia de cisteamina 岫に‐aminoetanotiol岻. La cisteamina desacetila selectivamente el azufre y activa el tiol resultante por formación del anión sulfuro.ぱば

O

AcOAcO

OAc

S

AcO

cisteamina

+

22

21

O

BzO

OTf OBz

OMeBzO

O

AcO

OAc

AcO

SAc

20

O

AcOAcO

OAc

S

AcO

O

AcO

OAc

AcO

SO

BzO

OBz

OMeBzO

DTE

HMPA


21

En este caso también se agregó ditioeritritol 岫DTE岻 al medio de reacción para mantener el sulfuro en su forma reducida. En algunos casos, según la estereoquímica y la naturaleza de los grupos protectores presentes en el azúcar que contiene el grupo triflato, la cisteamina, utilizada para S‐desacetilar, puede conducir a bajos rendimientos de tiooligosacáridos debido a la formación de productos secundarios insaturados por eliminación de ácido tríflico. Por ello, puede reemplazarse por dietilamina.ぱぱ También pueden utilizarse な‐tioaldosas, en lugar de な‐tioacetatos, para la introducción del azufre glicosídico. 23a R1 = OAc, R2 = H23b R1 = H, R2 = OAc

O

AcOAcO

OAc

R1AcO

O

AcOAcO

OAc

BrAcO

O

AcOAcO

OAc

SC(NH)NH2

AcO

HBr

AcOH

(NH2)2CS

O

AcOAcO

OAc

SH

AcO

K2CO3

24 25 5

R2

La な‐tioglucosa per‐O‐acetilada の, se preparó a partir de la mezcla anomérica de glucosa pentaacetato にぬa y にぬb, vía el correspondiente bromuro de glicosilo にね. Éste se convirtió en la sal de isotiouronio 岫にの岻 y finalmente en condiciones básicas, se obtuvo の,ぱひ el cual podrá atacar nucleofílicamente, en medio básico 岫NaH ó KOH岻 a otro azúcar con un grupo triflatoひど o haluroひな y generar el nuevo enlace tioglicosídico. III. Apertura de anillos de aziridinas y oxiranos por tioazúcares. Los epoxiazúcares, son utilizados con frecuencia en el campo de los hidratos de carbono, como compuestos de partida en la síntesis de azúcares modificadosひに岫halo, amino, azido, desoxi derivados岻. También se han utilizado como intermediarios reactivos en la síntesis de oligosacáridos. Por ejemplo, se epoxidaron glicales para obtener precursores de oligosacáridos estereorregulares y derivados sustituidos convenientemente 岫╉the glycal assembly method╊岻.ひぬ


22

También se describió la utilización de に,ぬ‐anhidro azúcares como intermediarios para obtener oligosacáridos comunes con unidades de Araf なぬ,ひね o Galf. ひの Si nos referimos a disacáridos unidos mediante enlaces S‐glicosídicos, los ejemplos son muy escasos. El grupo de Hashimoto y col.ひは sintetizó tiodisacáridos con una unidad de ゎ‐L‐fucopiranosa en el extremo no reductor, unida 岫な蝦は岻, 岫な蝦ね岻, y 岫な蝦ぬ岻 a に‐acetamido‐に‐desoxi‐が‐D‐glucopiranósido y 岫な蝦に岻 a が‐D‐galactopiranósido. El paso clave de esta síntesis fue la apertura de un anillo aziridina u oxirano, utilizando el compuesto には como nucleófilo. Por acoplamiento entre には y la aziridina にば, en presencia de metóxido de sodio a reflujo y posterior acetilación, se obtuvo el tiodisacárido にぱ y su isómero ゎ‐岫な蝦に岻 con configuración D‐altro 岫にひ岻. Por desprotección de にぱ se obtuvo finalmente el tiodisacárido ぬど. Por otro lado, el acoplamiento entre には y な,は:に,ぬ‐dianhidro‐D‐talopiranosa 岫ぬな岻 condujo al compuesto de configuración D‐galacto tiofucosilado en el C‐に岫ぬに, ぱば%岻 y el isómero D‐ido fucosilado en el C‐ぬ岫ぬぬ, ば%岻. El tiodisacárido unido 岫な蝦に岻 se convirtió en el が‐glicósido ぬね. En este último ejemplo se pone de manifiesto la utilidad de la reacción de apertura de epóxidos para la construcción de tiooligosacáridos. 26

OMe

AcOOAc

SAc

1) NaOMe/MeOH

28

27

OAc

OMe

AcOOAc

S

OAc

+

2) Ac2O, C5H5N

O

N

HO

OH

OAll

Ts

OAcO

OAc

OAll

NHTs

30

OMe

HOOH

S

OH

OHO

OH

OPr

NHAc

29

OAcO

AcO

OAll

S

NHTs

O

OAcMe

OAc

OAc

+


23

26

OMe

AcOOAc

SAc

3231

OAc

OHOO

O OMe

AcOOAc

S

OAc

OAcOOAc

O

OMe

AcOOAc

S

OAc

OAcO

O

OAc

OMe

HOOH

S

OH

O

HO

HO OH

OAll

+

33

34

+1) NaOMe/MeOH

2) Ac2O, C5H5N

Además, en nuestro laboratorio, se diseñó una ruta sintética para obtener tiodisacáridos unidos 岫なぬ岻 y 岫なね岻 por apertura de ぬ,ね‐epóxidos por una な‐tioaldopiranosa. Los epóxidos precursores se prepararon a partir de enonas de azúcares mediante dos pasos de reacción altamente diasteroselectivos: reducción del carbonilo seguido de epoxidación.ひば

O

OAc

OOCHMe2

35

O

OAc

OHOCHMe2

O

OAc

OH

OCHMe2

O

OH

OHOCHMe2

+ +

39

OOOAc

OCHMe2

HO

40

+ O

O

OAc

OCHMe2

HO

3736 38

NaBH4

Ce3+

m-CPBACHCl3


24

40

O

O

OAc

OCHMe2

HO

5

OAcO

AcO

OAc

SH

OAc

O

OAc

OCHMe2

AcO

AcOOAcO

AcO

OAc

S

OAc

O

OAc

OCHMe2

AcO

OAcO

AcO

OAc

S

OAc

OAc

++

1) LiOMe/MeOH2) AcOH, Ph=7

3) Ac2O, C5H5N

41 42

En particular, en esta tesis, nos interesan los epóxidos como precursores de tiiranos, ya que el método más importante de síntesis de estos anillos es la conversión de epóxidos con exceso de tiourea o tiocianatos inorgánicos.ひぱ El mecanismo para la reacción con tiourea se describe a continuación:ひひ,などど C

CO S C

NH2

NH2

HC

C

O

S C

NH2

NH2

+

C

C

O

SC

NH2

NH2

+

C

CH

O

S

C

NH2

NH2

++

C

CS O C

NH2

NH2

I I I

III El último paso, el clivaje de III seguido por la ciclación, es posible si el enlace O伐C está debilitado por la presencia de grupos atractores de electrones, como en el caso de sales de O‐uronio o cianatos; en caso contrario, si al átomo de oxígeno se une un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo, no ocurre la ciclación.などど No hay prácticamente antecedentes de apertura de anillos tiiranos para obtener tiooligosacáridos. Sólo se informó que en condiciones básicas, el fenil な,に‐ditio‐ゎ‐D‐manopiranósido ねね produjo el な,に‐tiirano ねは que luego por oligomerización controlada condujo a una familia de tiooligo‐ゎ‐D‐manopiranósidos 岫ねぱ伐のど岻 en una única reacción. Por otra parte, si el tiirano ねは reaccionaba con otros tiolatos, como por ejemplo のな, se obtenía una mezcla de productos 岫のに伐のね岻.などな


25

O

OHS

O

OCH3

SAcO

OPh

AcOO

SPh

SAcAcO

OAc

AcO

O

SPh

SHO

OH

HO

Na

OHOH

NaOCH3

MeOH

lento

43 44 45 46

O

OHS

OHOH

O

SPh

SHHO

HO

HO

O

SPh

SHO

HO

HO

OSH

HO

HO

HO

O

SPh

SHO

HO

HO

OS

HO

HO

HO

OSH

HO

HO

HO

51

52

54

46

47

48 49 n =150 n = 2

+ +n

O

SPh

OAcAcO

S

AcO

O

SPh

OHHO

S

HO

53

OS

HO

HO

HO

OOH

HO

S

HO

SPh

OOH

HO

S

HO

SPhO

SPh

OHHO

S

HO

++O

OHHO

S

HO

SPh

SPh

O

SPh

SHO

OH

HO

Na

45

Na

IV. Acoplamientos de tioazúcares catalizados por enzimas Pueden construirse enlaces tioglicosídicos mediante la utilización de enzimas tales como las glicosidasas mutantes llamadas ╉tioglicoligasas╊. En ellas, el residuo ácido/base catalítico de la glicosidasas comunes, se ha reemplazado por un residuo catalíticamente inactivo. Es por esto que se necesitan donores de glicosilo activados, como los dinitrofenil glicósidos, para que se pueda formar el intermediario glicósido‐enzima. Además, se requieren aceptores fuertemente nucleofílicos que no necesiten catálisis básica. Dos glicosidasas mutantes que se han utilizado son: Abg EなばなA, la が‐glucosidasa de Agrobacterium sp. y ManにA EねにひA, la が‐manosidasa de Cellulomonas fimi.などに También se han utilizado glicosiltransferasas para sintetizar tiooligosacáridos, que catalizan la transferencia de un residuo de monosacárido desde un donor azúcar


26

nucleótido activado a un carbohidrato aceptor que contiene un tiol. Como ejemplos de estas enzimas podemos mencionar una ゎな,ぬ‐galactosiltransferasa y una がな,ぬ‐N‐acetil‐glucosaminiltransferasa de Neisseria meningitidis.などぬ Se han descripto ejemplos de métodos de construcción de enlaces S‐glicosídicos, según la clasificación que se realizó al comenzar este capítulo. Mediante estos procedimientos se sintetizaron distintos tiooligoscáridos constituidos por unidades de azúcares piranósicos. Pero ¿qué ejemplos encontramos en la literatura de compuestos tioglicosilados que contengan unidades de configuración furanósica? Realmente, estos ejemplos son muy escasos. Podemos mencionar que la な,に:の,は‐di‐O‐isopropiliden‐ぬ‐O‐triflil‐ゎ‐D‐gulofuranosa 岫のの岻 se convirtió en el derivado ゎ‐岫に蝦ぬ岻‐sialil‐ぬ‐tiogalactofuranósico 岫のば岻, que luego de la desprotección dio origen al isómero galactopiranósico como producto mayoritario 岫のぱ岻.などね En este caso la reacción de acoplamiento queda incluída en el grupo II, debido a que ocurre el desplazamiento nucleofílico de un triflato 岫reacción tipo SNに岻.

57

EtOAc, H2O

55 56

O

OOTfO

O

OCMe2

CMe2

OAcHN

OAc

CO2Me

SAc

AcOOAc

OAc

OAcHN

OAc

CO2Me

S

AcOOAc

OAc

O

OO

O

OCMe2

CMe2

+

KSAc, K2CO3, TBAHSO4

OAcHN

OAc

CO2Me

S

AcOOAc

OAc

O

OHOAc

AcO OAc

58 Asimismo, se informó la síntesis por condensación entre un derivado convenientemente protegido de ぬ’‐tiotimidina y un ribofuranósido activado, de un gliconucleósido que contiene una unión tioglicosídica.などの Así, el tionucleósido はど, obtenido a partir de のひ, condensó con la な‐O‐acetil‐に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosa 岫はな岻 para dar はに, con un はば% de rendimiento. Por desprotección de はに se obtuvo はぬ.


27

59 R = TBDPS

O

OBzOBz

BzO OAc

O

OH

RO T

SnCl4, CH2Cl2, 0 °C

O

SH

RO T

62 63

O

OBzOBz

BzO

O

S

RO T

O

OHOH

HO

O

S

HO T

61

60

Además, el grupo de Defaye y col.などは describió la síntesis de tiodisacáridos que contenían una unidad fructofuranósica. Así, por condensación catalizada por un ácido de Lewis 岫SnClね岻, entre la な,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐bencil‐D‐fuctofuranosa 岫はね岻 y la に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranosa 岫はの岻, en CHにClに y posterior desprotección, obtuvieron な‐tiosucrosa はは岫ó な‐tiosacarosa, が‐D‐Fruf‐な‐tio‐ゎ‐D‐Glcp岻 y su anómero ゎ‐D‐Fruf‐な‐tio‐ゎ‐D‐Glcp 岫はば岻. De forma similar, la に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐が‐D‐glucopiranosa 岫ぱ岻 reaccionó con はね para obtener な‐tioisosucrosa はぱ岫ゎ‐D‐Fruf‐な‐tio‐が‐D‐Glcp岻 y su anómero が,がはひ. O

OBn

BnO OH

64

BnOCH2OBn

O

SHAcO

AcO

OAc

AcO

65

O

S

HO

HO

OH

HO

67

O

OH

HO

HO

CH2OH

O

HO

HO

OH

HO

66

O

OH

HOS

HO

CH2OH

++

O

OBn

BnO OH

BnOCH2OBn

OSH

AcO

AcO

OAc

AcO+

O

HOHO

OH

HO

O

OH

HO

S

HO

CH2OH

O

OH

HO

HO

CH2OH

O

HOHO

OH

HO

S+

64 8

6968

CAPITULO ぬ Objetivos de la Tesis.

Capítulo ぬ. Introducción

29

Objetivos de la Tesis. Por tratarse de los componentes mayoritarios de la biomasa renovable y por sus propiedades bioquímicas destacables, los hidratos de carbono han despertado un inusitado interés en la comunidad científica. Los hidratos de carbono 岫azúcares岻 forman parte de los reservorios de energía en seres vivos, la cual es liberada por procesos metabólicos y también participan en procesos de reconocimiento celular, adhesión, inmunodeterminación, etc. Asimismo, los hidratos de carbono forman parte de glicoproteínas, glicolípidos y ácidos nucleicos, todas ellas moléculas esenciales para la vida. Una característica importante de los monosacáridos es la alta densidad de estereocentros en relación al número relativamente bajo de carbonos 岫en general, cinco o seis岻, por lo cual son precursores quirales útiles en la síntesis de productos bioactivos y productos naturales complejos. En el área de la glicobiología la búsqueda de nuevos inhibidores enzimáticos y miméticos de azúcares estables a la acción de enzimas hidrolíticas ha conducido al desarrollo de análogos de oligosacáridos en los cuales el oxígeno interglicosídico se ha sustituido por azufre u otros heteroátomos. Los tioglicósidos resultantes son glicomiméticos usualmente resistentes a los procesos metabólicos.はに,ばな También suelen ser reconocidos por enzimas y al alojarse en sus sitios activos pueden inhibir la actividad biológica de las mismas. En particular, numerosos tiooligosacáridos han sido descriptos como potentes inhibidores de glicosidasas. Por estos motivos la síntesis de tiooligosacáridos ha atraído considerable atención. En la literatura se describen numerosas rutas generales para enlazar mediante un átomo de azufre unidades de azúcares de configuración piranósica.ばな,ばば,ぱね Dada la importancia de los tiooligosacáridos como inhibidores enzimáticos y que prácticamente no se encuentran ejemplos de tiodisacáridos y tiooligosacáridos de azúcares furanósicos se planteó como objetivo general de esta tesis el diseño y síntesis de tiodisacáridos constituidos por al menos una unidad furanósica 岫pentofuranosa o hexofuranosa岻 para ser evaluados como posibles inhibidores enzimáticos.

Capítulo ぬ. Introducción

30

Los azúcares en configuración furanósica se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. La ribofuranosa forma parte de los ácidos nucleicos y la arabinofuranosa se encuentra en bacterias del suelo, hongos y plantas.にな La arabinosa y la galactosa son constituyentes en estructuras furanósicas de polisacáridos de micobacterias, en particular de Mycobacterium tuberculosis, el agente causante de la tuberculosis.なに La Galf es esencial para la sobrevida o virulencia de varios microorganismos patogénicosなば,などば pero está ausente en mamíferos. La degradación de los glicoconjugados que contienen Galf, es llevada a cabo en algunos microorganismos, por una が‐D‐galactofuranosidasa, la cual es un blanco interesante para la acción de inhibidores de la misma. Se presume que la inhibición de las enzimas involucradas en la biosíntesis o degradación de dichos polifuranósidos evitaría la proliferación de las micobacterias, protozoarios u hongos. Además, estos inhibidores serían inocuos para los mamíferos, ya que éstos no procesan Galf. Por estos motivos, en este trabajo, se desarrollaron metodologías generales de síntesis de tiooligosacáridos que contengan azúcares furanósicos, en particular Galf y Araf. Las unidades furanósicas podrían localizarse tanto en el extremo reductor como el no reductor de los tiodisacáridos. También se propone sintetizar tiodisacáridos constituidos exclusivamente por azúcares furanósicos. Específicamente se evaluarán metodologías para la síntesis de tiodisacáridos con unidades furanósicas, que involucran las siguientes reacciones claves: Adición conjugada de な‐tioaldosas a azúcares aceptores de Michael. Reacciones de trans‐tioglicosilación. Reacciones de sustitución nucleofílica. Reacciones de apertura de tiiranos de azúcares por una な‐tioaldosa.

Bibliografía. Introducción

31

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CAPITULO ね Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada

Capítulo ね. Resultados y Discusión

39

Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada ね.な. Introducción. Las enonas de azúcares son bloques de construcción quirales, útiles para la síntesis de productos naturales y moléculas biológicamente activas.な Su utilidad se debe a que poseen un reducido número de grupos funcionales hidroxilo y de estereocentros, en comparación con los correspondientes monosacáridos. Además, poseen una insaturación olefínica conjugada con un grupo carbonilo, sobre el cual pueden llevarse a cabo una gran variedad de reacciones.に La más popular de las enonas es la levoglucosenona 岫な,は‐anhidro‐ぬ,ね‐didesoxi‐が‐D‐glicero‐hex‐ぬ‐enopiranosid‐に‐ulosa岻, que ha sido ampliamente utilizada como un sintón quiral en la síntesis de hidratos de carbono y otras moléculas.ぬ Se ha estudiado la adición de Michael de tioles a la levoglucosenonaね,の y como se reseñó en el capítulo に, el grupo de Witczakは describió una aproximación sintética elegante de 岫な蝦ね岻‐S‐tiodisacáridos, basándose en la adición de Michael de な‐tioazúcares a levoglucosenona e isolevoglucosenona. En nuestro laboratorio se estudió la adición de tioles a enonas de azúcares 岫dihidropiranonas岻 con configuración en el carbono anomérico opuesta a la de levoglucosenona. Las dihidropiranonas como, ぬの o ばな, se prepararon en un único paso a partir de per‐O‐acetil‐に‐acetoxiglicales derivados de hexosas mediante una glicosidación promovida por tetracloruro de estaño.ば Esta reacción, descripta por nuestro grupo, permitió acceder a cantidades de enonas en escala preparativa sin necesidad de recurrir a sucesivos pasos de protección selectiva, oxidación y eliminación en monosacáridos comunes. O

OAcAcO

AcO

OAc

O

OAc

O OCHMe2

O

OAc

O OCH2Ph

7035 71

Me2CHOH

SnCl4

PhCH2OH

SnCl4


40

O

OAc

O OCH2Ph

71

O

OAc

O OCHMe2

35

O

OAc

O OCH2Ph

O

OAc

O OCHMe2

RSRS

73a R = Et

73b R = Me2CH

73c R = PhCH2

RSH

Et3N, CH2Cl2

RSH

Et3N, CH2Cl2

72a R = Et

72b R = Me2CH

72c R = PhCH2 Las enonas ぬの y ばな experimentaron adiciones な,ね altamente diasteroselectivas de tioles comunes en posición anti con respecto al sustituyente anomérico. La alta diasteroselectividad para la adición conjugada de tioles al sistema carbonílico ゎ,が insaturado de ぬの y ばな se justificó por el impedimento estérico ejercido por el sustituyente anomérico axial, el cual induce el ataque al C‐ね por la cara opuesta.ぱ También citaremos como antecedentes las adiciones de Michael sobre la enona ばな de las な‐tioaldosas の u ぱ para obtener ばね o ばの, respectivamente. Estos compuestos se redujeron y O‐desacetilaron para obtener ばは y ばば, tiodisacáridos con configuración ぬ‐desoxi‐ゎ‐D‐galacto en el extremo reductor. O

OAc

O OCH2Ph

71

OAcO

R2

OAc

S

OAc O

OAc

OCH2PhO

5 u 8

Et3N

R1

OHO

R2

OH

S

OH O

OH

OCH2PhOH

R1

74 R1 = H, R2 = OAc

75 R1 = OAc, R2 = H

76 R1 = H, R2 = OH

77 R1 = OH, R2 = H Similarmente la enona ぬの reaccionó con los mismos tioazúcares の y ぱ mencionados anteriormente, para dar las ぬ‐desoxi‐ね‐S‐glicosil‐ね‐tiohexopiranosid‐に‐ulosas 岫ばぱ y ばひ岻 con rendimientos mayores al ぱど%.ひ Por reducción del grupo carbonilo de ばぱ y ばひ se produjo la mezcla de diasteroisómeros esperados, siendo los productos mayoritarios ぱど y ぱね y los minoritarios ぱな y ぱの. Todos ellos se desacetilaron para transformarse en los correspondientes tiodisacáridos libres ぱに, ぱぬ, ぱは y ぱば.


41

O

OAc

O OCHMe2

35

OAcO

OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2O

Et3N, CH2Cl2

OAc

OAcO

AcO

OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2OH

80 R = OAc

82 R = H

OAcO

AcO

OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2

OH

81 R = OAc

83 R = H

+

OAcO

AcO OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2

OH84 R = OAc

86 R = H

OAcO

AcO OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2

OH

85 R = OAc

87 R = H

+

5

OAcO

AcO

OAc

SH

OAc 8

OAcO

AcO OAc

SH

OAcO

AcOAcO

OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2O

Et3N, CH2Cl2

7978

También se describió otra metodología para sintetizar los mismos compuestos ばぱ y ばひ, a partir de sales de isotiouronio, las cuales se prepararon por el procedimiento descripto por el grupo de Ibatullin.など‐なに Dichas sales de isotiouronio se convirtieron en tioglicósidos, tiooligosacáridos y glicosiltioésteres. Los tiodisacáridos ó tiooligosacáridos se prepararon por reacción de un bromuro de S‐glicosil isotiourea con un derivado triflato en la posición ね de un monosacárido, mediante una reacción promovida por EtぬN.なに Esta base convertía la S‐glicosil isotiourea en な‐tioaldosa, la cual desplazaba nucleofílicamente al grupo saliente 岫triflato岻 en C‐ね del otro monosacárido, para generar el enlace tioglicosídico en un proceso ╉one‐pot╊. Dado que las adiciones de Michael llevadas a cabo en nuestro laboratorio también eran promovidas por EtぬN, se exploró el acoplamiento in situ de las sales de glicosil isotiourea にの y ぱぱ con el aceptor de Michael ぬの. Estas glicosilisotioureas se prepararon fácilmente a partir del bromuro de tetra‐O‐acetil‐ゎ‐D‐galactopiranosilo, o de su análogo de configuración ゎ‐D‐gluco y tiourea.なぬ En este caso los tiodisacáridos ばぱ y ばひ se obtuvieron también con rendimientos mayores al ぱど%.


42

O

OAc

O OCHMe2

35

OAcO

R2

OAc

S

OAc O

OAc

OCHMe2O

Et3N

R1

78 R1 = H, R2 = OAc

79 R1 = OAc, R2 = H

OAcO

R2

OAc

OAc

R1

+

25 R1 = H, R2 = OAc

88 R1 = OAc, R2 = H

S NH2

NH2.Br

CH2Cl2

ね.に. Tiodisacáridos con unidades furanósicas en el extremo no reductor. Hasta aquí, junto con los casos citados en el capítulo に, se realizó una revisión de trabajos en los cuales se han sintetizado tiodisacáridos mediante adiciones de Michael. En todas las metodologías descriptas se han utilizado な‐tioazúcares en configuración piranósica. Pero no se encontraban ejemplos en literatura de adiciones de Michael para generar tiodisacáridos con unidades furanósicas. En esta tesis se describe como primer ruta de síntesis de tiodisacáridos, la reacción de Michael sobre la enona ぬの岫に‐propil は‐O‐acetil‐に,ぬ‐didesoxi‐ゎ‐D‐glicero‐hex‐ぬ‐enopiranosid‐に‐ulosa岻 de donores de glicosilo en configuración furanósica 岫な‐tiofuranosas岻. Se utilizó la enona ぬの como molécula aceptora para la adición な,ね y se fue variando la configuración del azúcar donor: arabinosa, ribosa, xilosa y galactosa, todas ellas en configuración furanósica 岫Fig. など岻.

O

OAc

O OCHMe2

35

O

BzO

OBz

BzO

OBzO

OBzOBz

BzO OAc

O

OBz

OBz

BzO

OBz

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

Arabinofuranosa

Galactofuranosa

Ribofuranosa

Xilofuranosa

Aceptor de Michael

Donores (convenientemente funcionalizados)

Figura など.


43

Este método para construir enlaces tioglicosídicos requería tranformar los azúcares furanósicos peracilados 岫que se muestran en la Fig. など岻 en las correspondientes sales de isotiouronio, como precursores de な‐tioaldosas. Sin embargo, los procedimientos que suelen ser satisfactorios para sintetizar な‐tiopiranosas, no resultaron adecuados para las な‐tiofuranosas, las cuales autocondensaban para dar disulfuros y producían otras reacciones secundarias.なね Por eso no se pudo obtener la な‐tiofuranosa con el grupo tiol libre en C‐な listo para reaccionar con la enona o con otro aceptor de tioglicosilo. Se consideró entonces utilizar las sales de isotiouronio 岫ó S‐glicosilisotioureas岻 de furanosas como な‐tiofuranosas enmascaradas. Se sabía que para las piranosas, sus derivados de S‐glicopiranosil isotiourea pueden preparase fácilmente partiendo de な,に‐trans‐glicopiranosil acetatos.など‐なに También en nuestro laboratorio habíamos encontrado que las な‐tioaldopiranosas, generadas in situ a partir de los derivados de S‐glicopiranosil isotiourea, podían ser atrapados por una enona de azúcar para dar el correspondiente tiodisacárido.ひ Se comenzó trabajando con la な‐O‐acetil‐に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosa 岫ぱひ岻, que es un producto asequible comercialmente. La misma se trató con tiourea y FぬB.OEtに para dar la S‐glicosilisotiourea ひど. La configuración en el carbono anomérico de ひど se asignó mediante su espectro de RMN‐なH 岫Fig. なな岻, realizado a partir de una fracción del crudo a la que simplemente se le evaporó el solvente. Dicho espectro mostraba un valor de Jな’,に’ 噺ぬ,ば Hz, lo cual sugiere una configuración anomérica が. 岫Esta asignación se justificará posteriormente en el análisis de los espectros de los tiodisacáridos que se obtienen como productos de la adición岻. El tratamiento de ひど con EtぬN condujo a la formación in situ de la tioaldofuranosa ひな, como intermediario no aislado, que se adicionó な,ね a la enona ぬの para dar los tiodisacáridos ひに y ひぬ.


44

O

OBzOBz

BzO OAc

89

F3B.OEt2, CH3CN

O

OBzOBz

BzO SC(NH)NH2O

OBzOBz

BzO SH

(NH2)2CS Et3N

9190 O

OBzOBz

BzO SH

91

O

OAc

O OCHMe2

35

Et3N+S

O

OAc

O OCHMe2

93

O

OBzOBz

BzO

S

O

OAc

O OCHMe2

92

O

OBzOBz

BzO

+

Figura ななa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻 de ひど con supresión del pico de agua. 5.05.56.06.57.07.58.08.59.0 ppm

H-5b

H-2,3 H-1

2 x NH2

H-aromáticos

H-5a

H-4

O

OBzOBz

BzO SC(NH)NH2


45

Figura ななb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DMSO‐dは岻 de ひど. En el esquema に se muestran los pasos de reacción factibles que conducen a la な‐tioaldofuranosa ひな a partir del azúcar peracilado ぱひ. O

OBzOBz

BzO OAc

89

O

OBzOBz

BzO S

O

OBzOBz

BzO SH

Et3N

91

90

F3B.OEt2

O

OOBz

BzO

O

Ph

C

NH2

NH2S C

NH2

NH2

O

OBzOBz

BzO S

Et3NCOCH3

H2N NH2

OO

OBzOBz

BzO S C

NH2

NH2

OC

CH3

O

Et3N

O

OOBz

BzO

O

C

Ph

OAc

F3B

+

-

[F3BOAc] AcO

Et3NBF3

+

Esquema に. Mecanismo propuesto para la reacción de azúcares peracetilados con tiourea, catalizada por FぬB.OEtに. La adición resultó ser altamente diasteroselectiva, y tuvo lugar en ambos casos por la cara superior de la enona, opuesta a la que contiene al sustituyente anomérico.

708090100110120130140150160170 ppm

63.70

71.71

74.24

81.36

84.18

128.17

134.29

164.46

164.77

165.47

166.68

C-1 C-5

C-2,3,4 PhCO

C-aromáticos

SC(NH2)2


46

La mezcla de tiodisacáridos se separó por columna cromatográfica, aunque se observaron pequeñas cantidades de enona de partida, posiblemente debido a que la reacción retro‐Michael tenga lugar durante el proceso cromatográfico. La configuración del estereocentro en el C‐ね de los compuestos ひに y ひぬ se estableció como R, debido a que sus espectros de RMN‐なH mostraron constantes de acoplamiento pequeñas entre el H‐ね y los protones del metileno adyacente, H‐ぬ axial y H‐ぬ ecuatorial 岫cabe aclarar que dichos hidrógenos, vecinos al grupo carbonilo, ocupan en realidad una posición cuasi axial y cuasi ecuatorial respectivamente, pero se nombrarán de aquí en más como H‐ぬax y H‐ぬec岻. Así, se observó para ひに: Jぬec,ね噺に,ど, Jぬax,ね噺ね,ば Hz; y para ひぬ: Jぬec,ね噺に,ど, Jぬax,ね噺ぬ,ぱ Hz. Estos valores indicaban que el enlace C‐ね伐H‐ね bisectaba el ángulo formado por los H‐ぬax y H‐ぬec y establecía una configuración ゎ‐D‐treo para el fragmento hexopiranosid‐に‐ulosa. Dado que se observaron diferencias sustanciales para las constantes de acoplamiento de los protones anoméricos de las unidades な‐tiofuranósicas de ひに y ひぬ, se infirió que había ocurrido un proceso de anomerización durante el transcurso de la reacción, dando origen al tiodisacárido minoritario ひぬ.

Figura なにa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ひに. 1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

5.55 ppm

3.153.20 ppm 2.822.842.86 ppm

H-3’

H-1’

H-1,5,4’, 5’a,5’b

H-4 H-3ec H-3ax

H-6a,6b iPr

CH3CO

(CH3)2CHO

H-aromáticos

3.85 ppm

H-2’

H-3ec H-3ax

H-1’

H-4 S

O

OAc

O OCHMe2

O

OBzOBz

BzO


47

Figura なにb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ひに. El compuesto ひに mostraba en su espectro de RMN‐なH 岫Fig. なにa岻 un doblete a の,のに ppm para el H‐な’ con un Jな’,に’ 噺ぬ,ば Hz, igual al observado en el espectro de RMN‐なH de la sal de tiouronio ひど, que le dio origen. El compuesto ひぬ presentaba, en cambio, un doblete a の,ひは ppm para H‐な’ 岫Fig. なぬa岻 con un valor de constante de acoplamiento mayor 岫Jな’,に’ 噺は,ど Hz岻. La configuración anomérica de los ribofuranósidos se asignó en base a los desplazamientos químicos relativos y las constantes de acoplamiento de los protones anoméricos.なの Así, el H‐な’ de ひに resonaba a campos más altos que el H‐な’ de ひぬ岫Jな’,に’ 噺は,ど Hz岻 y con un menor valor de Jな’,に’ 岫ぬ,ば Hz岻 la cual sugería que ひに era el anómero が. Estas asignaciones fueron posteriormente confirmadas mediante experimentos NOE en los correspondientes compuestos reducidos などば y などひ, que serán detallados más adelante.

30405060708090100110120130140150160170180190200 ppm

20.73

21.78

23.27

42.75

44.82

64.36

64.39

68.40

71.69

72.60

75.55

80.43

84.23

97.90

128.44

133.64

165.10

165.24

166.08

170.44

198.95

C-1 C-1’ C-4’ C-5’,6 C-4

C-3 C-2 MeCO

PhCO

C-aromáticos

C-2’,3’, Me2CHO

(CH3)2CHO CH3CO

C-5


48

Figura なぬa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ひぬ. Figura なぬb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ひぬ. También se estudiaron las mismas condiciones de tioglicosilación con otros azúcares, para poder evaluar si este camino sintético podía considerarse un método general de obtención de tiodisacáridos con unidades furanósicas en el

C-1 C-1’ C-4’

C-6 C-4 C-3

C-2 MeCO

PhCO

C-aromáticos

C-2,3’, Me2CHO

(CH3)2CHO CH3CO

C-5’

C-5

30405060708090100110120130140150160170180190200 ppm

20.72

21.77

23.27

44.90

48.63

63.51

64.30

68.53

70.91

71.75

72.02

78.98

88.76

98.01

128.44

133.54

165.12

165.63

166.10

170.41

199.45

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

3.65 ppm

5.956.00 ppm3.203.25 ppm 3.00 ppm

H-3’

H-1’ H-4 H-3ec

H-3ax H-6a,6b

iPr

CH3CO

(CH3)2CHO

H-aromáticos

H-2’

H-5’b

H-1,4’,5,5’a

H-1’ H-4

H-3ax H-3ec

S

O

OAc

O OCHMe2

O

OBzOBz

BzO


49

extremo no reductor. Se continuó con la D‐arabinosa, y para obtener la Araf completamente protegida se llevó a cabo su benzoilación directa, a alta temperatura.なは Se obtuvo una mezcla de anómeros ゎ y が, que se separó por recristalización. O

BzO

OBz

BzO

OBz

O

BzO

OBz

BzO OBz

+BzCl, C5H5N

70 °C

94a 94b

D-arabinosa

Se condujo la reacción de la な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosa 岫ひねa岻 con tiourea y FぬB.OEtに, como catalizador, para dar la correspondiente sal de isotiouronio ひの. Nuevamente, mediante su espectro de RMN‐なH 岫Fig. なねa岻 pudo asignarse la configuración del centro anomérico de ひの. En este caso resultó ser ゎ, lo cual era de esperar, pues los sustituyentes de C‐な y C‐に guardan una relación な,に‐trans 岫J な Hz岻.なは,なば En el espectro de RMN‐なぬC 岫Fig. なねb岻, la señal correspondiente al C‐な, se corrió a campos más altos 岫a ぱば,ぱ ppm岻 con respecto a ひねa, hecho que suele observarse cuando ocurre tioglicosilación de furanosas per‐O‐aciladas.なぱ,なひ

Figura なねa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻 de ひの con supresión del pico de agua. 5.05.56.06.57.07.58.08.59.0 ppm

5.75 ppm

4.754.804.854.90 ppm

H-5b

H-2

H-1

2 x NH2

H-4

H-3

H-aromáticos

H-5a

O

BzO

OBz

BzO

SC(NH)NH2


50

Figura なねb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DMSO‐dは岻 de ひの. Como la benzoilación de la D‐arabinosa produjo también el anómero が岫ひねb岻, se llevó a cabo la reacción con este compuesto y tiourea, bajo las mismas condiciones utilizadas para el anómero ゎ. Se obtuvo la misma sal de tiouronio ひの, con buen rendimiento. Por lo tanto pudo utilizarse la mezcla anomérica ひねa y ひねb para la síntesis de ひの. O

BzO

OBz

BzO

OBz

O

BzO

OBz

BzO OBz

94a 94b

O

BzO

OBz

BzO

SC(NH)NH2

(NH2)2CS

F3B.OEt2, CH3CN

(NH2)2CS

F3B.OEt2, CH3CN

95 A partir de estos resultados, se pudo concluir que el procedimiento descripto por Ibatullin para obtener glicosil isotioureas a partir de piranosas な,に‐trans puede extenderse a furanosas per‐O‐benzoiladas, incluso cuando éstas posean la configuración な,に‐cis. Siguiendo con la secuencia, se trató al compuesto ひの, crudo, con EtぬN para promover la formación de la な‐tioAraf como donor de tioglicosilo. Luego de adicionar la enona ぬの a la mezcla de reacción se obtuvo el tiodisacárido ひは. En concordancia con resultados previos, la adición de Michael del tiol nucleofílico,

C-1 C-3 C-5

C-2,4 PhCO

C-aromáticos

708090100110120130140150160170 ppm

63.13

77.31

81.90

82.81

87.85

128.72

134.65

165.22

165.43

165.96

167.05

167.92

SC(NH2)2


51

obtenido a partir de la sal de tiouronio, a la enona ぬの resultó altamente diasteroselectiva, y tuvo lugar únicamente por la cara opuesta a la que contenía al sustituyente anomérico. O

BzO

OBz

BzO R1

94a R1 = H, R2 = OBz

94b R1 = OBz, R2 = H

95 R1 = H, R2 = SC(NH)NH2

O

OAc

O OCHMe2

35

Et3N+ S

O

OAc

O OCHMe2

96

R2

O

BzO

OBz

BzO

a

a: (NH2)2CS, F3B.OEt2, CH3CN La configuración del nuevo estereocentro de C‐ね, generado como consecuencia de la adición conjugada, se estableció como R, en base al espectro de RMN‐なH de ひは岫Fig. なのa岻. El H‐ね se encuentra acoplado con los protones del metileno adyacente, con constantes de acoplamiento pequeñas 岫Jぬec,ね噺な,ぱ, Jぬax,ね噺ね,ば Hz岻, en forma análoga a lo observado para los tiodisacárido ひに y ひぬ. Además, el pequeño valor de la constante de acoplamiento entre H‐な’ y H‐に’ 岫Jな’,に’ な Hz岻 indicaba nuevamente una estereoquímica な,に‐trans 岫configuración anomérica ゎ岻 para la unidad furanósica.

Figura なのa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ひは. 1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-1’,3’ H-2’

H-1,5,4’,5’a,5’b

H-4 H-3ec H-3ax

H-6a,6b iPr

CH3CO

(CH3)2CHO

H-aromáticos

3.03.13.2 ppm

5.65 ppm

3.8 ppm

H-3ax H-3ec H-4

H-1’

H-3’

S

O

OAc

O OCHMe2

O

BzO

OBz

BzO


52

Figura なのb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ひは. Decidimos también utilizar la な,に,ね,の‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐xilopiranosa 岫ひば岻 asequible comercialmente, como ejemplo de otra pentofuranosa con relación な,に‐cis entre los sustituyentes de C‐な y C‐に. A partir de ひば se obtuvo la correspondiente sal de isotiouronio 岫ひぱ岻 por reacción con tiourea y el catalizador FぬB.OEtに. En su espectro de RMN‐なH 岫Fig. なはa岻 se observó que la supresión del pico de agua afectó las señales de los hidrógenos H‐のa y H‐のb. Se acopló ひぱ con la enona ぬの, promoviendo la reacción con EtぬN para obtener, en forma similar a lo descripto para la ribofuranosa, la mezcla de anómeros ひひ y などど. O

OBz

OBz

BzO R1

97 R1 = H, R2 = OBz

98 R1 = SC(NH)NH2, R2 = H a: (NH2)2CS, F3B.OEt2, CH3CN

O

OAc

O OCHMe2

35

Et3N+S

O

OAc

O OCHMe2

100

O

OBz

OBz

BzO

a

S

O

OAc

O OCHMe2

99

O

OBz

OBz

BzO

+R2

30405060708090100110120130140150160170180190200 ppm

20.71

21.75

23.25

44.18

48.47

63.22

64.37

68.53

71.71

77.66

80.98

83.25

89.62

97.95

128.34

133.66

165.37

165.61

166.11

170.46

199.24

C-1 C-1’

C-2’, 4’,3’

C-2 MeCO PhCO

C-aromáticos

Me2CHO

C-5,6,5’ C-4

C-3

(CH3)2CHO CH3CO


53

Figura なはa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻 de ひぱ con supresión del pico de agua. Figura なはb. Espectro de RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, DMSO‐dは岻 de ひぱ. La relación entre los productos ひひ y などど cada vez que se repitió la reacción, fue variable 岫de な,ね:な a ね:な岻, siendo siempre el anómero が岫な’,に’‐trans岻 el producto mayoritario. Esta mezcla no pudo separarse por cromatografía en columna y a su vez quedó impurificada con restos de la enona de partida 岫ぬの岻, como en el caso de

6.45 ppm

H-2 H-1

2 x NH2 H-4

H-3

H-aromáticos

H-5a,5b

4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

H-1 O

OBz

OBz

BzO SC(NH)NH2

C-1 C-3 C-5

C-2,4

C-aromáticos

SC(NH2)2

PhCO


54

los tiodisacáridos descriptos anteriormente. En la Fig. なば se muestran algunas de las señales características del espectro de RMN‐なH de la mezcla de ひひ y などど.

Figura なば. Señales características del espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de la mezcla de ひひ y などど. Finalmente, la reacción se extendió a una hexofuranosa, la な,に,ぬ,ね,は‐penta‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosa 岫などな岻, producto de la benzoilación de D‐galactosa a alta temperatura.にど Como se contaba con la experiencia del caso de la Araf, en la cual la reacción podía llevarse a cabo tanto a partir de azúcares de configuración な,に‐trans como な,に‐cis, se decidió utilizar la mezcla de anómeros. Por reacción de などな con tiourea en presencia de FぬB.OEtに como catalizador, se obtuvo la S‐galactofuranosil isotiourea などに. El crudo de reacción se trató con EtぬN para promover la conversión in situ de などに en el tioazúcar などぬ, el cual se adicionó a la posición ね de la hex‐ぬ‐enopiranosid‐に‐ulosa ぬの para dar el tiodisacárido などね como producto mayoritario, acompañado por el tiodisacárido diasteroisomérico などの. O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

O

OBz

OBz

OBz

SH

OBz

(NH2)2CS

F3B.OEt2, CH3CN

Et3N

101 102 103

6.00 ppm 5.48 ppm

3.03.23.43.63.8 ppm

H-1’α

J1’,2’ = 6,0 Hz

H-1’β

J1’,2’ = 1,4 Hz

H-4 (99) H-4 (100)

H-3ax (99) H-3ec (100)

H-3ec (99)

H-3ax (100)


55

El espectro de RMN‐なH de la glicosil isotiourea などに岫Fig. なぱa岻 presentaba el singulete característico del H‐な de un furanósido con relación entre los sustituyentes な,に‐trans 岫J な Hz岻,なぱ,なひ que corresponde en este caso a la configuración anomérica が.

Figura なぱa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻 de などに. Figura なぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DMSO‐dは岻 de などに. 708090100110120130140150160 ppm

64.05

70.90

77.61

81.86

83.51

88.19

128.82

134.80

165.32

165.51

166.00

166.07

168.09

C-1 C-3 C-5 C-2,4

PhCO

C-aromáticos

SC(NH2)2

C-6

5.05.56.06.57.07.58.08.59.0 ppm

4.84.95.0 ppm

H-6b

H-2

H-1

2 x NH2

H-4

H-3

H-aromáticos

H-5

H-6a O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz


56

O

OAc

O OCHMe2

35

O

OBz

OBz

OBz

SH

OBz

Et3N+

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2+

103 104 105 Nuevamente, la adición resultó ser altamente diasteroselectiva y ocurrió principalmente por la cara superior de la enona, lado opuesto al sustituyente anomérico axial 岫relación などね:などのぬ:な岻. La mezcla de tiodisacáridos diasteroisoméricos se separó mediante una columna cromatográfica. No obstante, como se había mencionado anteriormente para los tiodisacáridos derivados de Ribof, Araf y Xilof, los compuestos などね y などの se encontraban ligeramente contaminados con la enona de partida. La configuración del estereocentro en C‐ね del tiodisacárido などね se estableció como R, debido a que su espectro de RMN‐なH 岫Fig. なひa岻 mostraba constantes de acoplamiento pequeñas entre el H‐ね y los protones del metileno adyacente 岫Jぬec,ね噺に,ね, Jぬax,ね噺の,ど Hz岻 y también con el H‐の岫Jね,の噺に,ね Hz岻. Además, el pequeño valor de la constante de acoplamiento entre H‐な’ y H‐に’ 岫Jな’,に’ な Hz岻 indicaba una configuración が‐D‐Galf para el extremo no reductor del tiodisacárido. Del espectro de RMN‐なH de などの岫Fig. にどa岻 se dedujo que la configuración en el C‐ね es la opuesta 岫S岻 a la de などね. Ambos compuestos difieren en los valores de las constantes de acoplamiento entre el H‐ね con H‐ぬax y H‐ぬec 岫Jぬec,ね噺の,ど, Jぬax,ね噺なに,ぱ Hz岻 y entre el H‐ね y H‐の岫Jね,の噺など,ぱ Hz岻. Los valores de J indicados corresponden a などの. La configuración ね‐岫S岻 indicaba que una cantidad minoritaria del な‐tioazúcar se había adicionado por la cara inferior de la enona, a pesar del impedimento estérico ejercido sobre esta cara por el sustituyente isopropilo. Sin embargo, dado que la señal del H‐な’ continuaba siendo un singulete ancho, con Jな’,に’ な Hz, se concluyó que el carbono anomérico del extremo no reductor había mantenido su configuración 岫が‐D‐Galf岻.


57

Figura なひa. Espectro de RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻 de などね. Figura なひb. Espectro de RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻 de などね.

(CH3)2CHO H-aromáticos

CH3CO

H-5’ H-6a

H-2’

H-4 iPr

H-3’,1’

H-3ax H-3ec

H-4’,5, 6’a,1,6’b

H-6b

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2

C-1

C-2’,4’ C-4

Me2CHO, 5,5’,6,6’

(CH3)2CHO CH3CO

C-1’ MeCO

C-3’

PhCO

C-aromáticos

C-2 C-3


58

Figura にどa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de などの. Figura にどb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de などの. En la Tabla に se destacan los valores que corresponden a las constantes de acoplamiento que definen que el ataque del tiol, generado in situ, a la enona ぬの se produjo por la cara superior de ésta.

19

8.

98

05

17

0.

52

79

16

5.

95

09

16

5.

63

41

16

5.

39

81

16

5.

37

79

13

3.

66

95

12

8.

36

45

97

.7

27

8

87

.9

20

08

2.

70

27

81

.8

06

2

77

.6

40

4

71

.8

02

97

0.

32

67

70

.1

71

66

3.

60

61

63

.2

35

4

42

.9

25

54

2.

69

64

23

.1

75

22

1.

72

59

20

.7

14

8

( p p m)

02 04 06 08 01 0 01 2 01 4 01 6 01 8 02 0 0

C-1

C-2’,4’

C-3,4 C-6,6’

Me2CHO, 5’,5’

(CH3)2CHO CH3CO

C-1’

MeCO

C-3’

PhCO

C-aromáticos

C-2

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

5.70 ppm

3.383.403.423.443.463.48 ppm 2.902.953.003.05 ppm

H-3ec

H-aromáticos

H-3’

H-3ax

CH3CO

(CH3)2CHO

H-1’

H-4 H-5’

H-6a

H-2’

H-4

iPr

H-3’ H-1’

H-3ax H-3ec

4.54.64.74.8 ppm

H-1

H-4’

H-5 H-6b

H-6’a

H-6’b

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2


59

Tabla に. Constantes de acoplamiento diagnósticas de la configuración de C‐ね para los compuestos ひに, ひぬ, ひは, ひひ, などど y などね. Compuesto Jぬec,ね岫Hz岻 Jぬax,ね岫Hz岻ひにに,どね,ばひぬに,どぬ,ぱひはな,ぱね,ばひひな,ぱね,ひなどどな,ぱね,ばなどねに,ねの,ど Para todos los compuestos listados en la Tabla に, los valores de J son muy similares, a excepción del compuesto などの, que no se incluyó en esta tabla, ya que corresponde al compuesto obtenido por el ataque de la な‐tio‐Galf por la cara inferior de la enona. Por este motivo las constantes de acoplamiento en este caso resultaron mayores 岫Jぬec,ね噺の,ど y Jぬax,ね噺なに,ぱ Hz岻. Es importante mencionar que los tiodisacáridos de las series Ribo, Ara, Gal y Xilo, obtenidos mediante esta metodología, fueron difíciles de aislar en forma completamente pura, ya que siempre estaban acompañados por pequeñas cantidades de enona de partida. Se mencionó que, durante la purificación por cromatografía en columna, la acidez de la sílica gel parece suficiente para catalizar la reacción inversa a la adición, es decir la retro‐Michael. También en todos los casos resultó complicada la elección del solvente adecuado para eluir la columna cromatográfica, ya que los anómeros ゎ y が tenían Rf similares por CCD. Pero una vez encontrado el solvente de elución apropiado, se desarrolló la columna en forma rápida, para tratar de minimizar dicha reversión. Se verificó que, repitiendo la cromatografía en columna del tiodisacárido ひは varias veces, la proporción de


60

enona remanente aumentaba al mantener la mezcla de reacción en contacto con la sílica por tiempos más prolongados. Incluso, para evitar el contacto de los tiodisacáridos funcionalizados con un grupo carbonilo en C‐に con el adsorbente, se intentó continuar la síntesis con el crudo de reacción y efectuar el paso siguiente de reducción del carbonilo. Sin embargo, dado que se obtenía una mezcla de productos mayor, se complicaba aún más la separación cromatográfica. ね.ぬ. Reducción de tiodisacáridos. Para obtener los ぬ‐desoxi tiodisacáridos análogos de disacáridos conocidos, se condujo el siguiente paso de síntesis, que consistió en la reducción del grupo carbonilo de las に‐ulosas sintetizadas 岫ひに, ひぬ, ひは, y などね岻 con borohidruro de sodio. También se llevó a cabo la reducción con un reductor más voluminoso, el K‐Selectride, como se describirá más adelante. En primera instancia, se redujeron los tiodisacáridos con extremo no reductor de configuración ribo, ひに y ひぬ. Cada uno de ellos se trató con borohidruro de sodio, a 伐なぱ °C utilizando THF como solvente. La reducción se llevó a cabo a baja temperatura para mejorar la selectividad en favor del epímero mayoritario. Era de esperar, y luego se verificó experimentalmente, que la aproximación del hidruro fuese controlada por el sustituyente anomérico vecino al carbonilo. La configuración de los estereocentros C‐に y C‐ね en el extremo reductor, pudo establecerse fácilmente mediante los espectros de RMN‐なH de los productos. NaBH4, THF

+

SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc

SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

S

O

OAc

O OCHMe2

92

O

OBzOBz

BzO

106 107


61

Como era previsible, la reducción del grupo carbonilo de ひに produjo los tiodisacáridos epiméricos などは y などば, con el grupo hidroxilo libre en la posición に. Estos compuestos se separaron en forma eficiente por columna cromatográfica. El isómero などば, producto mayoritario de la reducción, poseía la configuración ゎ‐D‐xilo, en la unidad hexopiranosa. Esto se justificó en base a su espectro de RMN‐なH 岫Fig. になa岻, en el cual la señal del H‐に mostraba valores pequeños de constantes de acoplamiento con H‐な岫Jな,に噺ぬ,ぱ Hz岻 y H‐ぬec 岫Jに,ぬec 噺ね,ぬ Hz岻, mientras que con el H‐ぬax daba un valor de J mayor 岫Jに,ぬax 噺なな,の Hz岻, lo cual indicaba que el HO‐に se dispone en posición ecuatorial. El hecho que la señal de H‐ね aparezca como un singulete ancho, con constantes de acoplamiento pequeñas con los H‐ぬec, H‐ぬax y H‐の, confirmaba la configuración asignada al esterocentro de C‐ね del tiodisacárido precursor ひに. En el espectro RMN‐なぬC de などば岫Fig. になb岻 se observó el corrimiento de la señal correspondiente al C‐に, de なひぱ,ひ a はば,ぱ ppm, en concordancia con la reducción del grupo carbonilo. Obviamente, se registraron los mismos cambios para el otro diateroisómero 岫などは岻.

Figura になa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de などば. 1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

2.25 ppm3.954.00 ppm

H-3ec

H-aromáticos

H-3’ H-3ax H-2

CH3CO

(CH3)2CHO

H-1’ H-4

H-5’a, 4’,5’b

H-2’ H-1

iPr

H-2

iPr

H-5,6a,6b

H-3ec SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc


62

Figura になb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de などば. Un análisis similar para el compuesto などは indicó que le correspondía configuración ゎ‐D‐lixo. En el espectro de RMN‐なH 岫Fig. ににa岻 se observaban constantes de acoplamiento pequeñas para H‐に y H‐ね con sus respectivos protones acoplados, lo cual indicaba la configuración asignada al extremo reductor.

Figura ににa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de などは. H-3ax,3ec

H-aromáticos

H-3’

H-1’

H-4 H-2’

H-1

iPr

4.04.14.24.34.44.54.64.74.84.9 ppm

H-6b H-6a H-5

H-5’b

H-5’a,4’ 3.43.53.63.7 ppm

H-4 H-2

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-2

CH3CO

(CH3)2CHO

30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.78

21.99

23.25

34.22

43.26

64.22

64.50

65.15

67.81

70.79

72.78

75.79

80.20

85.41

96.80

128.49

133.63

165.23

165.30

166.14

170.54

C-1 C-4’

C-3

C-6,5,5’

C-3’, Me2CHO,2

(CH3)2CHO CH3CO

C-1’

MeCO

C-4

C-aromáticos

PhCO

C-2’

SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc


63

Figura ににb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de などは. Para el otro producto de adición de Michael, el tiodisacárido ひぬ, se obtuvo el tiodisacárido などひ como resultado de la reducción y un compuesto muy minoritario, que por analogía con la reacción de reducción de ひに descripta anteriormente 岫Rf apenas mayor岻, sería el producto minoritario de la reducción 岫などぱ岻. Pero como la cantidad obtenida fue muy pequeña no se analizó la estructura del mismo. En cambio, el compuesto などひ se caracterizó completamente. Sus espectros de RMN‐なH y RMN‐なぬC se muestran en la Fig. にぬ. +

S

O

OAc

O OCHMe2

93

O

OBzOBz

BzO

S

O

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc

NaBH4, THF

108 (no se caracterizó)

S

O

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

109

30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.71

21.48

23.14

29.78

39.34

64.31

64.88

67.61

67.89

69.41

72.63

75.64

80.42

84.49

98.85

128.43

133.62

165.13

165.25

166.08

170.49

C-1 C-4’ C-3

C-6,5’

(CH3)2CHO CH3CO

C-1’

MeCO

C-4

C-aromáticos

PhCO

C-2’,3’ Me2CHO

C-2,5


64

Figura にぬa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de などひ. Figura にぬb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de などひ. Para los compuestos de esta serie, la configuración anomérica de la unidad Ribof del extremo no reductor se determinó en base a datos espectroscópicos 岫Tabla ぬ岻 y

30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.75

21.93

23.19

36.15

46.09

60.38

63.60

64.75

67.87

70.89

71.18

72.18

79.03

89.22

96.84

128.42

133.52

165.15

165.63

166.16

170.50

C-1 C-4’ C-3

C-2’,3’, Me2CHO (CH3)2CHO

CH3CO C-1’

MeCO

C-4

C-aromáticos

PhCO

C-6,5’

C-2

C-5

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

2.35 ppm 2.10 ppm

H-3’ H-1’

H-4

H-3ec H-3ax

H-5

iPr

H-aromáticos

H-2’ H-5’b

H-4’,5’a

H-3ax H-3ec

H-1

H-6a H-6b,2

4.054.104.154.204.25 ppm

(CH3)2CHO

CH3CO

OH

S

O

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc


65

se confirmó por experimentos NOESY de los productos mayoritarios などば岫Fig. にね岻 y などひ岫Fig. にの岻. Tabla ぬ. Constantes de acoplamiento diagnósticas de la configuración anomérica de la unidad Ribof, del extremo no reductor, de los compuestos ひに, ひぬ, などは, などば y などひ. Compuesto δ H‐な’ 岫ppm岻 Jな’,に’ 岫Hz岻 δ C‐な’ 岫ppm岻 Configuraciónひにの,のにぬ,ばぱね,にな’,に’‐trans 岫が岻などはの,はねぬ,はぱの,ねな’,に’‐trans 岫が岻などばの,のなぬ,ばぱね,のな’,に’‐trans 岫が岻ひぬの,ひはは,どぱぱ,ぱな’,に’‐cis 岫ゎ岻などひの,ひぬは,どぱひ,にな’,に’‐cis 岫ゎ岻 Para el tiodisacárido などば se observó una correlación NOE característicaにな entre H‐な’ y H‐ね’, que no se detectaba para などひ岫Esq. ぬ岻. Esta correlación indicaba que ambos protones se ubicaban en la misma cara del anillo furanósico 岫configuración anomérica が岻. En forma similar, la correlación NOE entre H‐な’ y H‐ぬ’ en などひ岫no observada en el espectro NOESY de などば岻 indicó una configuración anomérica ゎ para などひ. Estos resultados confirmaron las asignaciones realizadas previamente para las configuraciones anoméricas de ひに y ひぬ, precursores de などば y などひ respectivamente. SR

O

OBzOBz

BzO

H1'H4'

H1'

O

OBzOBz

BzO

SR

H2'H3'

107 109


66

Esquema ぬ. Correlaciones NOE entre H‐な’伐H‐ね’ en el compuesto などば y entre H‐な’伐H‐に’ y H‐な’伐H‐ね’ en el compuesto などひ.

Figura にねa. Espectro NOESY de などば.

Figura にねb. Espectro NOESY ampliado de などば. Correlación entre los hidrógenos な’ y ね’, que confirma configuración が en el extremo no reductor 岫anillo furanósico岻.

ppm

2.53.03.54.04.55.05.56.0 ppm

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

H-4’

H-1’

H-4’

H-1’,H-4’

H-1’

H-3’ H-2’ H-1

H-5’a H-5’b

H-3’

H-2’

H-1

H-5’b

H-5’a

ppm

4.64.74.84.95.05.15.25.35.45.55.65.75.85.96.06.1 ppm

4.6

4.8

5.0

5.2

5.4

5.6

5.8

6.0


67

Figura にのa. Espectro NOESY de などひ.

Figura にのb. Espectro NOESY 岫ampliado岻 de などひ. Correlación entre los hidrógenos な’ y に’, な’ y ぬ’, que confirma configuración ゎ en el extremo no reductor 岫anillo furanósico岻.

ppm

2.53.03.54.04.55.05.56.0 ppm

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

ppm

4.64.74.84.95.05.15.25.35.45.55.65.75.85.96.06.1 ppm

4.6

4.8

5.0

5.2

5.4

5.6

5.8

6.0

H-4’

H-1’

H-4’

H-1’,H-3’

H-1’ H-3’ H-2’

H-1

H-5’a

H-5’b

H-3’

H-2’

H-1

H-5’b

H-5’a

H-1’,H-2’


68

En el caso del tiodisacárido ひに, se llevó a cabo la reducción del grupo carbonilo, utilizando tri‐sec‐butilborohidruro de potasio 岫K‐Selectride岻にに un reductor más voluminoso. El objetivo de este cambio de agente reductor, consistía en incrementar la relación entre los productos en favor del tiodisacárido con configuración ゎ‐D‐xilo などば. Pero no se obtuvieron resultados favorables, es decir que con K‐Selectride se obtuvo mezcla de productos de reducción del grupo carbonilo en posición に, en forma análoga a cuando se utilizó borohidruro de sodio y además la técnica requería mayores cuidados debido a que esta reducción debía llevarse a cabo a muy baja temperatura 岫伐ばは °C岻, y demandó entre seis y ocho veces más tiempo de reacción. Por estos motivos, se decidió continuar utilizando el método de reducción ya descripto, con borohidruro de sodio en THF. El derivado ね‐S‐Araf‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひは岻 también se redujo con borohidruro de sodio para dar los tiodisacáridos epiméricos ななど y ななな. S

O

OAc

O OCHMe2

96

O

BzO

OBz

BzO

S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAcNaBH4, THF +

110 111 El diasteroisómero mayoritario resultó ser el tiodisacárido ななな, que al igual que en la serie ribo, presentaba la configuración ゎ‐D‐xilo para la hexopiranosa. Esta configuración se evidenció en el espectro de RMN‐なH 岫Fig. にはa岻 de ななな.


69

Figura にはa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ななな. Figura にはb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ななな. El protón unido al nuevo estereocentro 岫H‐に岻 mostraba constantes de acoplamiento pequeñas con H‐な岫Jな,に噺ぬ,ぱ Hz岻 y con H‐ぬec 岫Jに,ぬec 噺ぬ,ひ Hz岻, como era de esperar para una relación gauche entre el H‐に y estos protones adyacentes. La constante de acoplamiento mayor para el H‐に con H‐ぬax 岫Jに,ぬax 噺なに,ぱ Hz岻, confirmaba nuevamente que el HO‐に se disponía en posición ecuatorial.

30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.76

21.97

23.24

35.69

45.70

63.37

64.54

64.89

67.83

70.87

77.99

81.18

83.21

90.00

96.81

128.35

133.70

165.40

166.18

170.67

C-1

C-2’,4’, 3’

C-3 C-5,6,2

Me2CHO (CH3)2CHO CH3CO

C-1’ MeCO

C-5’ C-4 PhCO

C-aromáticos

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-2’ H-2

H-2

H-3ec

3.954.004.05 ppm 2.102.152.202.252.30 ppm

H-3ax

H-aromáticos

H-3’

H-5, 6a,6b

H-3ec iPr

CH3CO

(CH3)2CHO

H-1’

H-4

iPr H-3ax

4.84.9 ppm

H-1 H-5’a H-4’

H-5’b

S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc


70

En cambio, en el espectro de RMN‐なH 岫Fig. にばa岻 del epímero ななど, las constantes de acoplamiento entre H‐に y H‐な, H‐ぬa y H‐ぬb, resultaron ser todas pequeñas 岫Jな,にな Hz, Jに,ぬa 噺ぬ,ど Hz, Jに,ぬb 噺ぬ,ひ Hz岻, en concordancia con una orientación axial para el HO‐に岫configuración ゎ‐D‐lixo岻.

Figura にばa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ななど. Figura にばb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ななど. 30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.78

21.52

23.20

31.80

42.43

63.33

65.05

67.74

68.03

69.51

77.85

81.52

83.20

89.75

98.90

128.40

133.79

165.39

165.65

166.20

170.62

C-1’ C-4

PhCO

C-aromáticos

C-1 C-2’, 4’,3’ C-5,2,6,5’

C-3 MeCO

Me2CHO (CH3)2CHO CH3CO

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

3.503.553.603.65 ppm 2.352.402.45 ppm

H-1’,3’

H-3ax,3ec iPr

CH3CO

(CH3)2CHO

H-aromáticos

H-2’

H-3ax H-3ec

H-4 H-2

OH

OH H-2

4.44.54.64.74.84.9 ppm

H-1 H-5’a,4

H-5’b H-5

H-6a H-6b

S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc


71

Se mencionó anteriormente que con los azúcares de configuración xilo, los productos obtenidos en la adición conjugada no lograron separarse por cromatografía en columna. También se había intentado la reducción de la mezcla para ver si era posible separar los compuestos resultantes en un paso posterior, pero al incrementarse la cantidad de productos obtenidos 岫cuatro岻 dificultó aún más la separación por cromatografía en columna. Por este motivo no se continuó trabajando con la serie xilo. Por otra parte, se describió que en la reacción entre la enona ぬの y la perbenzoil‐Galf 岫などな岻 se obtuvieron dos productos de adición conjugada 岫などね y などの岻. Uno de ellos correspondía al ataque del な‐tioazúcar, generado in situ, por la cara superior de la に‐ulosa, siendo éste el mayoritario 岫などね岻; mientras que el minoritario correspondía al producto de ataque por la cara inferior de la misma 岫などの岻. El compuesto mayoritario 岫などね岻, se redujo siguiendo la metodología ya descripta. O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2

+

104

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

112 113

NaBH4, THF O

OCHMe2

OHOAc O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OCHMe2HO

OAc

La reducción del grupo carbonilo dio origen a los tiodisacáridos ななに y ななぬ, en relación aproximada な:は. Ambos se separaron en forma efectiva por cromatografía en columna. El diasteroisómero mayoritario ななぬ poseía configuración ゎ‐D‐xilo, ya que su espectro de RMN‐なH 岫Fig. にぱa岻 mostraba para H‐に, valores pequeños de constantes de acoplamiento con H‐な岫Jな,に噺ぬ,ば Hz岻 y H‐ぬec 岫Jに,ぬec 噺ね,ぬ Hz岻, mientras que con H‐ぬax mostraba un valor de J mayor 岫Jに,ぬax 噺なな,の Hz岻 indicando que el HO‐に se disponía en posición ecuatorial. El hecho que la señal de H‐ね apareciera como un singulete ancho con constantes de acoplamiento pequeñas con H‐ぬec, H‐ぬax y H‐の, confirmó la configuración que fue asignada para el C‐ね del tiodisacárido precursor などね.


72

En el espectro RMN‐なぬC de ななぬ岫Fig. にぱb岻 se observó el corrimiento de la señal correspondiente al C‐に, de なひぱ,ば a はば,ぱ ppm, y así quedó demostrada la reducción del grupo carbonilo. Un cambio similar en el desplazamiento se observó para el diasteroisómero ななに.

Figura にぱa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ななぬ. Figura にぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ななぬ. 30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.78

22.00

23.24

33.98

43.48

63.52

64.29

65.34

67.84

70.25

70.88

77.77

81.68

82.78

87.58

96.90

128.37

133.66

165.38

165.52

165.70

166.06

170.52

C-1

C-2’,4’, 3’

C-3 C-6,5,6’

Me2CHO, 5’,2

(CH3)2CHO CH3CO

C-1’ MeCO C-4

PhCO

C-aromáticos

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-3ec

H-aromáticos

H-3’

H-3ax

iPr

CH3CO

(CH3)2CHO

H-1’

H-4 OH H-5’

H-2’ H-1

4.24.34.44.54.64.74.8 ppm

H-4’

H-6’a,6’b H-5,6a

H-6b,2 1.92.02.12.2 ppm

H-3ec H-3ax

OH O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OCHMe2HO

OAc


73

Un análisis similar del espectro de RMN‐なH 岫Fig. にひa岻 de ななに, indicaba que al extremo reductor le correspondía la configuración ゎ‐D‐lixo, ya que se observaron constantes de acoplamiento pequeñas para H‐に y H‐ね con sus respectivos protones acoplados.

Figura にひa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de ななに. Figura にひb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de ななに.

C-1

C-2’,4’, 3’

C-3 C-6,6’

Me2CHO, 5’,5,2

(CH3)2CHO CH3CO

C-1’ MeCO C-4

PhCO

C-aromáticos

30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.74

21.50

23.16

29.60

39.38

63.36

65.18

67.54

67.87

69.45

70.13

77.68

81.95

82.82

86.72

98.97

128.44

133.72

165.36

165.52

165.69

166.09

170.52

1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-3ax,3ec

H-aromáticos

CH3CO

H-3’

H-1’

H-5’

H-2’ H-1

H-4’, 6’a,6’b

H-4

iPr H-6b H-6a H-5

4.04.14.24.34.4 ppm

H-2

(CH3)2CHO

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OCHMe2

OHOAc


74

En la Tabla ね se destacan los valores de las constantes de acoplamiento características para los productos mayoritarios de cada reducción. Tabla ね. Constantes de acoplamiento diagnósticas de los compuestos などば, などひ, ななな y ななぬ. J 岫Hz岻などばなどひなななななぬ Jな,にぬ,ぱぬ,ぱぬ,ぱぬ,ば Jに,ぬax なな,のなに,どなに,ぱなな,の Jに,ぬec ね,ぬぬ,ぱぬ,ひね,ぬ Jぬax,ねぬ,はぬ,ばの,な Jぬec,ねぬ,のぬ,ぱぬ,ひぬ,の Jぬax,ぬec なぬ,どなに,のなに,ぱなぬ,ど En todos los casos los valores de las constantes de acoplamiento listadas son prácticamente de igual magnitud, confirmando la disposición ecuatorial para el grupo hidroxilo de la posición に. En la Tabla の se indica la relación entre productos isoméricos lixo:xilo, que se obtuvieron por reducción de las ulosas con borohidruro de sodio. Como ya se mencionó, la selectividad observada sugiere que la aproximación del hidruro al grupo carbonilo presente en C‐に, es controlado por el grupo isopropilo en posición axial, presente en el estereocentro adyacente C‐な. En la reducción de ひぬ la diasteroselectividad resultó mayor que la determinada para el resto de los tiodisacáridos. El compuesto ひぬ difería de los restantes en que su estereoquímica era な,に‐cis para el anillo tiofuranósico, mientras que en aquellos era な,に‐trans. Por lo tanto, la configuración anomérica de la tiofuranosa podría influir en el curso estereoquímico de la reducción. Sin embargo, en todos los casos 岫gal, ara, ribo岻 la reducción del grupo carbonilo resultó diasteroselectiva y dio origen a los ね‐S‐


75

glicofuranosil‐ね‐tio‐ゎ‐D‐xilo‐hexopiranósidos correspondientes como productos principales. Tabla の. Relación entre isómeros lixo:xilo, obtenidos por reducción de los compuestos ひに, ひぬ, ひは y などね. Tiodisacárido de partida Productos de reducción Relación lixo:xilo ひにな:ね岫などは:などば岻ひぬな:ば岫などぱ:などひ岻ひはな:ね岫ななど:ななな岻などねな:は岫ななに:ななぬ岻ね.ね. Obtención de tiodisacáridos libres. El último paso en este camino sintético consistió en obtener los disacáridos libres, para que luego pudiese ser evaluada su posible actividad biológica como inhibidores enzimáticos. Sólo se desprotegieron los tiodisacáridos obtenidos con mayor rendimiento, es decir a などば, ななな y ななぬ. Para desacilar estos tiodisacáridos, se sometieron a agitación a temperatura ambiente con una mezcla de MeOH:EtぬN:HにO ぬ:な:ぬ. Una vez obtenidos los respectivos isopropil glicósidos 岫ななね, ななの y ななは岻 se los purificó por elución a través de una columna rellena de resina de intercambio iónico mixta para desionizarlos y luego a través de una mini columna de fase reversa. Las Figuras ぬど伐ぬに muestran los respectivos espectros de RMN de los tiodisacáridos libres ななね伐ななは.


76

SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

107

SO

OHOH

HO

O

OCHMe2HO

OH

114

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

Figura ぬどa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de ななね. Figura ぬどb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de ななね. 253035404550556065707580859095100 ppm

20.57

22.40

32.17

42.93

62.06

62.63

63.96

70.26

70.55

71.16

75.16

84.46

86.56

96.08

C-1

C-4’

C-3’, Me2CHO,5

C-3

C-2

C-6

(CH3)2CHO

C-1’ C-2’ C-4 C-5’

1.52.02.53.03.54.04.55.0 ppm

3.903.954.004.054.104.15 ppm

4.95.0 ppm

2.052.10 ppm

3.603.653.70 ppm

H-1’

H-3ec

(CH3)2CHO

H-1

H-3ec H-3ax

H-3ax

H-2,2’

iPr, H-4’ H-3’

H-5

H-1 H-1’

H-4

H-5’a

H-6a,6b,5’b

SO

OHOH

HO

O

OCHMe2HO

OH


77

S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

111

S

O

HO

OH

HO

O

OCHMe2HO

OH

115

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

Figura ぬなa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de ななの. Figura ぬなb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de ななの. 253035404550556065707580859095 ppm

20.53

22.35

33.76

44.73

60.74

62.51

64.15

70.47

70.54

75.85

81.61

82.38

89.68

96.04

C-1 C-4’

C-5, (CH3)2CHO

C-3 C-2

C-6

(CH3)2CHO C-1’

C-2’ C-3’

C-5’

C-4

1.52.02.53.03.54.04.55.0 ppm

4.95.05.1 ppm

3.753.803.853.903.954.004.054.104.15 ppm

2.052.102.15 ppmH-1’

H-5

H-3ec

H-4

(CH3)2CHO

H-1’

H-1

H-1

H-2,4’,2’

H-3ec H-3ax

H-3ax

H-6a,6b,5’b

iPr H-3’ H-5’a

S

O

HO

OH

HO

O

OCHMe2HO

OH


78

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

113

O

OCHMe2HO

OAc O

OH

OH

OH

S

OH

116

O

OCHMe2HO

OH

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

Figura ぬにa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de ななは. Figura ぬにb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de ななは. 253035404550556065707580859095100 ppm

21.33

23.16

33.34

44.29

63.54

63.73

64.93

71.11

71.17

71.31

77.12

82.17

82.36

88.76

96.85

C-1 C-4’,2’

C-5,5’, Me2CHO

C-3 C-2 C-6,6’

(CH3)2CHO

C-1’ C-3’ C-4

1.52.02.53.03.54.04.55.0 ppm

2.052.10 ppm

H-1’

H-3ec

(CH3)2CHO

H-1

H-3ec H-3ax

H-3ax

4.90 ppm5.12 ppm

H-1’

H-1

3.43.53.63.73.8 ppm

H-4 H-6’a,6’b H-5’

H-6a,6b

3.903.954.004.054.104.15 ppm

H-2’,iPr H-4’ H-3’,2

H-5

O

OH

OH

OH

S

OH

O

OCHMe2HO

OH


79

En los espectros de los tiodisacáridos desprotegidos 岫ななね, ななの y ななは岻 se observó que, a diferencia de los compuestos que les dieron origen 岫などば, ななな y ななぬ岻, el H‐ぬ axial se encontraba a campos más bajos que el H‐ぬ ecuatorial. En la Tabla は se resumen los valores de las constantes de acoplamientos para los H‐ぬax y H‐ぬec con sus hidrógenos vecinos, cuyas magnitudes son muy similares en los tres casos. Tabla は. Constantes de acoplamiento diagnósticas de los compuestos ななね, ななの y ななは. J 岫Hz岻ななねななのななは Jな,にぬ,ばぬ,ばぬ,ば Jに,ぬax なに,どなに,ぱなに,ど Jに,ぬec ね,ぬぬ,ひね,は Jぬax,ねぬ,はね,どぬ,ば Jぬec,ねぬ,のぬ,ひぬ,の Jぬax,ぬec なぬ,ななに,のなぬ,にね.の. Evaluación de la actividad inhibitoria. Se evaluó la actividad inhibitoria de los tiodisacárido ななね, ななの y ななは, contra una exo が‐D‐galactofuranosidasa aislada a partir Penicillium fellutanum, según protocolo ya descripto.なぱ El ね‐nitrofenil が‐D‐galactofuranósidoにぬ se utilizó como sustrato y la D‐galactono‐な,ね‐lactona como inhibidor de referencia 岫ICのどど,どに mM岻.なぱ La reacción enzimática se llevó a cabo en presencia de cada uno de los tiodisacáridos en concentraciones comprendidas entre ど,に y など mM y para medir la actividad galactofuranosidasa se determinó la cantidad de ね‐nitrofenol liberado a partir de ね‐nitrofenil が‐D‐galactofuranósido. 岫Fig. ぬぬ岻.


80

Figura ぬぬ. Efecto de la concentración de tiodisacárido en la actividad enzimática de la exo が‐D‐galactofuranosidasa de Penicillum fellutanum. Cada punto deriva del experimento realizado por triplicado. El compuesto ななは, que posee una unidad de Galf resultó un débil inhibidor de la enzima. Los tiodisacáridos con unidades de Ribof 岫ななね岻 y Araf 岫ななの岻 no demostraron actividad inhibitoria.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

116

D-galactno 1,4-lactona

Bibliografía. Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada.

81

Bibliografía. な. Lichtenthaler, F. W. in Atta‐ur‐Rahman 岫Ed.岻, Natural Product Chemistry なひぱひ, pp. ににば岫Springer Verlag: Heidelberg岻. に. Becker, B. J. Carbohydr. Chem. にどどど, なひ, にのぬ–にぱね. ぬ. Witczak, Z. J. in Atta‐ur‐Rahman 岫Ed.岻, Studies in Natural Products Chemistry, Vol. なね, Elsevier, Amsterdam, なひひね, にはぱ–にぱに. ね. Shafizadeh, F.; Furneaux, R. H.; Stevenson, T. T. Carbohydr. Res. なひばひ, ばな, なはひ–なひな. の. Essig, M. G. Carbohydr. Res. なひぱは, なのは, ににの–にぬな. は. Witczak, Z. J.; Sun, J.; Mielguj, R. Bioorg. & Med. Chem. Lett. なひひの, の, になはひ–になばね. ば. De Fina, G.; Varela, O.; Lederkremer, R. M. Synthesis なひぱぱ, ぱひな–ぱひぬ. ぱ. Uhrig, M. L.; Varela, O. Aust. J. Chem. にどどに, のの, な–は. ひ. Uhrig, M. L.; Manzano, V. E.; Varela, O. Eur. J. Org. Chem. にどどは, なはに–なはぱ. など. Ibatullin, F. M.; Selivanov, S. I.; Shavva, A. G. Synthesis にどどな, ぬ, ねなひ–ねにに. なな. Ibatullin, F. M.; Shabalin, K. A.; Jänis, J. V.; Shavva, A. G. Tetrahedron Lett. にどどぬ, ねね, ばひはな–ばひはね. なに. Ibatullin, F. M.; Shabalin, K. A.; Jänis, J. V.; Selivanov, S. I. Tetrahedron Lett. にどどな, ねに, ねのはの–ねのはば. なぬ. Horton, D. Methods Carbohydr. Chem. なひはぬ, に, ねぬぬ–ねぬば. Horton, D.; Wolfrom, M. L. J. Org. Chem. なひはに, にば, なばひね–なぱどど. なね. Turnbull, W. B.; Field, R. A. J. Chem. Soc. Perkin Trans. なにどどど, なぱのひ–なぱはは. なの. Szekeres, G. L.; Bardos, T. J. J. Med. Chem. なひばに, なの, なぬぬぬ–なぬぬね. なは. Gandolfi‐Donadío, L.; Gallo‐Rodriguez, C.; Lederkremer, R. M. Can. J. Chem. にどどは, ぱね, ねぱは–ねひな. なば. Gadikota, R. R.; Callam, C. S.; Wagner, T.; Del Fraino, B.; Lowary, T. L. J. Am. Chem. Soc. にどどぬ, なにの, ねなのの–ねなはの.

Bibliografía. Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada.

82

なぱ. Marino, C.; Mariño, K.; Miletti, L.; Manso Alves, M. J.; Colli, W.; Lederkremer, R. M. Glycobiology なひひぱ, ぱ, ひどな–ひどね. なひ. Lopez, G.; Daniellou, R.; O’Donohue, M.; Ferrières, V.; Nugier‐ Chauvin, C. Bioorg. Med. Chem. Lett. にどどば, なば, ねぬね–ねぬぱ. にど. D’Accorso, N. B.; Thiel, I. M. E.; Sch“ller, M. Carbohydr. Res. なひぱぬ, なにね, なばば–なぱね. にな. Rosemeyer, H.; Tóth, G.; Golankiewicz, B.; Kazimierczuk, Z.; Bourgeois, W.; Kretschmer, U.; Muth, H.‐P.; Seela, F. J. Org. Chem. なひひど, のの, のばぱね–のばひど. にに. Uhrig, M. L.; Varela, O. Carbohydr. Res. にどどに, ぬぬば, にどはひ–にどばは. にぬ. Varela, O.; Marino, C.; Lederkremer, R. M. Carbohydr. Res. なひぱは, なのの, にねば伐にのな.

CAPITULO の Síntesis de 岫な→は岻 tiodisacáridos mediante reacciones de transtioglicosilación.

Capítulo の. Resultados y Discusión

83

Síntesis de 岫な蝦は岻 tiodisacáridos mediante reacciones de transtioglicosilación. の.な. Introducción. En el capítulo anterior describimos la síntesis de ぬ‐desoxi‐岫な蝦ね岻‐tiodisacáridos, mediante reacciones de adición conjugada な,ね岫adiciones de Michael岻 de sales de tiouronio generadas in situ, a enonas. Como continuación de esos estudios se planteó como objetivo la síntesis de 岫な蝦は岻‐tiodisacáridos con una unidad furanósica en su extremo no reductor, por ser análogos a los disacáridos naturales encontrados en una gran variedad de microorganismos, entre ellos, las micobacterias. Esta ruta sintética consistió en la obtención de tiodisacáridos, mediante reacciones de tioglicosilación promovidas por catalizadores como el tetracloruro de estaño 岫SnClね岻 y el dicloruro de dioxomolibdeno 岫MoOにClに岻. El SnClね se había empleado eficazmente para la síntesis de O‐glicósidos. En なひばば Hanessian y col.な describieron un método eficiente para preparar が‐D‐ribofuranósidos y が‐D‐glucopiranósidos con buenos rendimientos a partir de los respectivos monosacáridos per‐O‐acetilados. Previamente habían descripto O‐glicosilaciones estereocontroladas, utilizando este mismo catalizador, en aldofuranosas y piranosas, e inclusive en amino azúcares.に‐の Por ejemplo, por tratamiento de la が‐D‐glucosa pentaacetato 岫にぬb岻 o la な‐O‐acetil‐に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosa 岫ぱひ岻 con cantidades equimoleculares de SnClね y un alcohol 岫ROH岻, en CHにClに; por períodos cortos y a temperatura ambiente o menor, se obtenían los respectivos glicósidos con alta pureza anomérica. Se sintetizaron así varios derivados de が‐D‐ribofuranósidos 岫ななぱ岻 y se aplicó este método a la síntesis de disacáridos como la な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐O‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosil岻‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫ななひ岻.


84

O

OBzOBz

BzO OAc

89

+ ROH

O

OBzOBz

BzO OR

118 R = Me, 2-propil, etil,

bencil, neopentil, ciclohexil

AcO O OAcAcO

OAc

OAc

+ ROHAcO O OR

AcO

OAc

OAc

117 R = Me, 2-propil, etil,

bencil, neopentil, ciclohexil

23b

O

O

O

O

OBzOBz

BzO O

O

O

CMe2

Me2C

119 Al igual que otros métodos de glicosilación en estas series, la presencia de un grupo éster participante en C‐に, induce la formación estereoselectiva de な,に‐trans‐glicósidos.は‐ひ Esta alta estereoselectividad puede atribuirse a la participación anquimérica del sustituyente del C‐に para estabilizar la carga generada en el C‐な, por la eliminación con el ácido de Lewis, del sustituyente anomérico. El ión aciloxonio resultante 岫o un intermediario ortoesterな岻 bloquea una de las caras del C‐な e induce el ataque del donor‐OH por la cara libre, para dar el glicósido な,に‐trans. O

OBzBzO

BzO OAcO

OBzO

BzO

Ph

O

O

OBzO

BzO

Ph

O

O

OBzO

BzO

Ph

O OR

SnCl4

O

OBzBzO

BzO OR

ROH

ROH

89 118

AcOSnCl4


85

Vach y Lederkremer emplearon esta estrategia para sintetizar disacáridos derivados de galactofuranosa. Mediante la glicosilación catalizada por SnClね de la perbenzoil Galf 岫などな岻 con に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐D‐galactono‐な,ね‐lactona 岫なにど岻 o su derivado は‐O‐tritilado 岫なにな岻, se obtuvo la perbenzoil が‐D‐galactofuranosil‐岫な蝦は岻‐D‐galactono‐な,ね‐lactona なにに con excelente rendimiento 岫ひな%岻, un intermediario clave en la síntesis de disacáridos con ambas unidades en configuración furanósica.など O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

SnCl4

101

CH2Cl2

O

OBz

OBz

OBz

O

OR

120 R = H

121 R = Ph3C

+

O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

O

OBz

OBz

OBz

O

122 El compuesto なにに es precursor de が‐D‐Galf‐岫な蝦は岻‐D‐Galf y también se sintetizaron derivados de が‐D‐Galf‐岫な蝦の岻‐D‐Galf, siguiendo esta misma metodología.なな Por ejemplo la glicosilación catalizada por SnClね de la perbenzoil Galf 岫などな岻 con la lactona parcialmente protegida なにぬ, condujo al disacárido なにね岫ばど%岻 acompañado, como producto secundario, por el trisacárido なにの, resultante de la glicosilación de ambos hidroxilos 岫HO‐ぬ y HO‐の岻. O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

SnCl4

101

CH2Cl2

O

OBz

OH

OH

O

OBz

123

+

O

OBz

OBz

OBz

BzO

OBz

O

OBz

OH

O

O

124

O

OBz

OBz

OBz

BzO

OBz

O

OBz

O

O

O

125

O

OBz

OBz

OBz

OBz

+

Se utilizaron otros aceptores de Galf, por ejemplo la N‐acetil glucosamina, que produjo los disacáridos が‐D‐Galf‐岫な蝦ね岻‐D‐GlcNAcなに岫なにば岻 y が‐D‐Galf‐岫な蝦は岻‐D‐GlcNAc 岫なにひ岻.なぬ


86

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

101

+

HO O

OBn

BzO

AcHN

OBz

O O

OBn

BzO

AcHN

OBz

O

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

101

+

HO O

OBn

BzO

AcHN

OH

HO O

OBn

BzO

AcHN

OO

OBz

OBz

OBz

OBz

126 127

128 129

SnCl4

CH2Cl2

SnCl4

CH2Cl2

En los trabajos citados se demostró la utilidad del SnClね para promover la síntesis de な,に‐trans glicofuranósidos a partir de precursores peracetilados. Sin embargo, se encontró sólo un caso del uso de este método para preparar な‐tio‐が‐D‐galactofuranósidos. Éstos se prepararon por reacción de la perbenzoil Galf 岫などな岻 con alquil, bencil y aril tioles, en presencia de SnClね. Al igual que en el caso de la O‐glicosilación, sólo se obtuvieron los anómeros がなぬど伐なぬね con buenos rendimientos 岫ぱの伐ひの%岻.なね O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

101

O

OBz

OBz

OBz

SR

OBz

SnCl4, CH2Cl2

RSH

130 R = nPr

131 R = iPr

132 R = CH2Ph

133 R = Ph

134 R = 4-NO2-Ph Otro catalizador, recientemente descripto, que resultó altamente diasteroselectivo en la tioglicosilación de glicósidos peracetilados, es el dicloruro de dioxomolibdeno 岫MoOにClに岻, una especie oxometálica del grupo VIb. En el año にどどの se empleó al MoOにClに como un catalizador eficiente para la reacción de acilación de alcoholes, aminas y tioles, con anhídridos, la cual tenía lugar con buenos rendimientos y alta quimioselectividad.なの Se atribuyó la actividad catalítica al carácter anfotérico de la unidad Mo噺O, y se propuso el siguiente mecanismo de acilación.


87

R XH R' O R'

O O

RX R'

O

+1mol% MoO2Cl2

CH2Cl2X = O, NH, S91-100%

R' O R'

O O

Mo

OCl

ClO

Mo

OCl

ClO

R'

O

O

R'

O

O

R

H- MoO2Cl2

- R'CO2H R' O

O

R

Un año más tarde, se verificó la utilidad del MoOにClに como un nuevo catalizador neutro y estereoselectivo, para reacciones de tioglicosilación.なは Entre なぱ especies oxometálicas examinadas, el MoOにClに resultó el catalizador más reactivo en la tioglicosilación de azúcares per‐O‐acetilados con tioles para dar tioglicósidos con exclusivo diasterocontrol な,に‐trans. AcO O OAcAcO

AcO

OAc

3 mol% MoO2Cl2

CH2Cl2

+ R SHAcO O SRAcO

AcO

OAc

Se emplearon tioles alifáticos y aromáticos con diversos sustituyentes. Los benceno tioles con sustituyentes en posición に resultaron menos reactivos 岫にど h岻, y dieron rendimientos más bajos 岫ねば伐はね%岻, que los análogos sustituidos en la posición ね岫なは h, ぱは伐ひど%岻. Los que contenían grupos donores de electrones como 伐CHぬ o 伐OCHぬ fueron menos reactivos 岫なは h, ぱは伐ひど%岻 que los sustituidos con grupos atractores de electrones como 伐Cl 岫など h, ひね伐ひの%岻. En cuanto a los tioles alifáticos, los rendimientos disminuían a medida que aumentaba el impedimento estérico 岫Et PhCHに t‐Bu岻. La diasteroselectividad se atribuyó, también en este caso , a la asistencia anquimérica del grupo acilo de C‐に. Se extendió esta metodología a otros monosacáridos peracetilados derivados de galactosa, manosa, ribosa, xilosa y arabinosa. En el caso de la manosa, la tioglicosilación demandaba tiempos de reacción mayores y los rendimientos resultaron menores. Finalmente se demostró la aplicación práctica del método en


88

la síntesis de が‐岫な蝦は岻‐tiodisacáridos. Así, por tratamiento de la な,に,ぬ,ね,は‐penta‐O‐acetil‐が‐D‐glucopiranosa 岫にぬb岻 con metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐bencil‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なぬの岻 se obtuvo el tiodisacárido なぬは con ばね% de rendimiento. AcO O OAcAcO

AcO

OAc

10 mol% MoO2Cl2

CH2Cl2+

AcO OS

AcO

AcO

OAc

BnO O

OMe

BnO

BnO

SH

BnO O

OMe

BnO

BnO

23b 135 136 の.に. Tiodisacáridos con unidades furanósicas en el extremo no reductor. Tioglicosilaciones promovidas por SnClね. Teniendo en cuenta los antecedentes mencionados en la introducción, se decidió utilizar catalizadores de estaño y molibdeno, para llevar a cabo reacciones de glicosilación para obtener 岫な蝦は岻‐tiodisacáridos con unidades furanósicas en el extremo no reductor. Como donores de glicosilo se utilizaron derivados per‐O‐acilados de arabinosa, galactosa y ribosa, todos ellos en configuración furanósica. Como tioles se emplearon derivados de は‐tioazúcares piranósicos, de configuración D‐galacto y D‐gluco. Como derivado de la は‐tio‐D‐glucosa, se utilizó el metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なぬひ岻,なば el cual se sintetizó a partir del precursor なぬば.なぱ Por tratamiento de なぬば con tiocianato de potasio en DMF a reflujo se obtuvo なぬぱ, luego de ser purificado mediante cromatografía en columna, se redujo utilizando zinc en ácido acético a reflujo para dar なぬひ. BzO O

OMe

BzO

BzO

Cl

KSCN

DMF

137 139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SCN

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

Zn

AcOH

138


89

También se preparó un tioanálogo de なぬひ, de configuración galacto, para el cual se debió desarrollar un método de síntesis conveniente, a partir del metil ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねど岻. Se tosiló selectivamente el hidroxilo primario de なねど,なひ y luego se benzoiló obteniéndose el compuesto なねな convenientemente protegido, al cual se le aplicó una síntesis análoga a la descripta para なぬひ. Se trató なねな con tiocianato de potasio en DMF a reflujo, y se obtuvo el tiociano derivado なねに岫のの%岻 y también compuesto de partida sin reaccionar 岫にね%岻. La baja reactividad de este tosilato frente a la sustitución, podría deberse a que el nucleófilo que ataca, se encuentra impedido por el sustituyente de C‐ね, que se dispone en posición axial, siendo un efecto comúnmente observado para los は‐O‐sulfonatos de galactósidos.にど Finalmente, la reducción de なねに con zinc en ácido acético a reflujo produjo el compuesto deseado なねぬ. OH

O

OMe

HO

HO

OH

1) TsCl, C5H5N

2) BzCl

140 142

KSCN

DMF

141

BzO

O

OMe

BzO

BzO

OTs BzO

O

OMe

BzO

BzO

SCN BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

Zn

AcOH

143 Habiendo sintetizado los compuestos なぬひ y なねぬ, se utilizó la tetra‐O‐acetil‐ゎ‐L‐Araf 岫なねね岻, como primera opción de monosacárido donor de glicosilo, para llevar a cabo la reacción de tioglicosilación promovida por SnClね. Los motivos por los cuales se eligió este azúcar fueron: ‐ es asequible comercialmente ‐ tiene la misma estereoquímica que la が‐D‐Galf. Este primer método de tioglicosilación consistió en disolver el azúcar per‐O‐acetilado en CHにClに anhidro, activarlo con SnClね y luego adicionar el は‐tioazúcar なぬひ. Se dejó proceder la reacción a baja temperatura para dar el tiodisacárido ゎ‐L‐Araf‐岫な蝦は岻‐が‐D‐Glcp 岫なねの岻 con のど% de rendimiento.


90

SnCl4

CH2Cl2

145139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OAc

OAc

AcO

OAc

144

Figura ぬねa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なねの. Figura ぬねb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なねの. 30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.70

20.76

31.65

55.51

62.88

70.15

71.24

72.13

72.35

77.34

79.68

81.80

88.93

96.67

128.25

133.49

165.54

165.72

165.81

169.52

169.97

170.63

C-1 C-1’

C-4’

C-5’ PhCO

C-aromáticos

C-3’

C-2’ C-6

C-4,2,5,3

MeCO

CH3CO

CH3O

2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-3’

H-1’ H-4’,5’a, 5,5’b

H-6a

CH3CO

H-aromáticos

H-2’

H-1’

H-2,1

H-6b

H-2’

H-3

H-4’

5.15.25.35.45.55.6 ppm

CH3O

H-2

H-1

H-3’

H-4

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO


91

En forma análoga, al partir del tiol なねぬ se obtuvo el tiodisacárido ゎ‐L‐Araf‐岫な蝦は岻‐が‐D‐Galp 岫なねは岻 con はな% de rendimiento. O

OAc

OAc

AcO

OAcSnCl4

CH2Cl2

143 146144

BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO La configuración del centro anomérico de la unidad L‐Araf en ambos tiodisacáridos 岫なねの y なねは岻 se estableció como ゎ, en base a sus espectros de RMN‐なH 岫Fig ぬねa y Fig ぬのa岻. Éstos mostraron constantes de acoplamiento pequeñas entre el H‐な’ y el H‐に’ 岫Jな’,に’ な Hz岻 característico, como ya se explicó en el capítulo anterior, de な,に‐trans tiofuranósidos. Una vez más, la asistencia anquimérica del sustituyente acetilado de C‐に justificaba la alta diasteroselectividad de la reacción en favor del isómero な,に‐trans. En forma análoga, en ambos espectros de RMN‐なぬC 岫Fig. ぬねb y Fig. ぬのb岻 también se observaban desplazamientos característicos para las señales del C‐な’ en configuración ゎ‐L‐Araf 岫なねの: ぱぱ,ひ ppm; なねは: ぱぱ,ば ppm岻.

Figura ぬのa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なねは. 2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

4.34.4 ppm

H-1’

H-5 H-5’b

H-6a

H-1

H-aromáticos

H-2’

H-3,4

H-6b H-2

H-4’,5’a

H-3’

CH3CO

CH3O

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO


92

Figura ぬのb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なねは. El procedimiento descripto se extendió a la preparación de un tiodisacárido con una unidad Galf como extremo no reductor. El derivado perbenzoilado de Galf 岫などな岻 reaccionó con los は‐tiopiranósidos なぬひ y なねぬ en presencia de SnClね, para dar los tiodisacáridos なねば y なねぱ respectivamente. SnCl4

CH2Cl2

147139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz101

O

OBz

OBz

OBz

OBz

SnCl4

CH2Cl2

148143

BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz101

O

OBz

OBz

OBz

OBz Nuevamente la reacción resultó diasteroselectiva, en favor de la configuración anomérica が para el enlace tioglicosídico de ambos tiodisacáridos, según lo observado en el espectro de RMN‐なH 岫Fig. ぬはa y Fig. ぬばa岻 en las cuales constantes de acoplamiento entre H‐な’ y H‐に’ resultaron pequeñas 岫Jな’,に’ な Hz岻. Asimismo, en

C-1

C-1’

C-4’

C-5’ PhCO

C-aromáticos

C-3’

C-2’ C-6

C-4,5, 2,3 CH3O MeCO

CH3CO

2030405060708090100110120130140150160170 ppm

20.69

31.09

55.66

62.69

68.42

69.29

69.95

70.66

77.19

79.75

81.72

88.70

97.41

128.21

133.55

165.48

165.72

166.06

169.49

169.98

170.55


93

los espectros de RMN‐なぬC 岫Fig. ぬはb y Fig. ぬばb岻 los valores de desplazamiento para cada C‐な’ 岫なねば: ぱひ,に ppm y なねぱ: ぱひ,ど ppm岻, también confirmaba la configuración が en la unidad furanósica de なねば y de なねぱ.

Figura ぬはa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なねば. Figura ぬはb. Espectro de RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻 de なねば.

5.25.35.4 ppm

3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

6.06.2 ppm

H-3’

H-4

H-4’,6’a, 6’b

H-5

H-2’

H-6a

H-1

CH3O

H-aromáticos

H-1’

H-2

H-6b

H-5’ H-3

C-1

C-4’

C-6’ PhCO

C-aromáticos

C-3’ C-2’

C-6

C-4,2,5, 3,5’

CH3O C-1’

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz


94

Figura ぬばa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なねぱ. Figura ぬばb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なねぱ. El tiodisacárido なねば también se sintetizó a partir de un derivado な‐O‐acetil‐per‐O‐benzoiliado de Galf que se describirá más adelante, obteniéndose un rendimiento similar 岫のひ%岻, para este método sintético promovido por SnClね.

405060708090100110120130140150160 ppm

30.69

55.67

63.16

68.45

69.34

70.15

70.41

70.80

77.69

81.28

82.56

89.03

97.40

128.20

133.59

165.29

165.45

165.69

165.73

165.88

C-1

C-4’

C-6’ PhCO

C-aromáticos

C-3’

C-2’ C-6

C-4,5,5’, 2,3 CH3O

C-1’

3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

H-6a

H-1

CH3O

H-aromáticos

H-6b

4.54.64.74.8 ppm

H-4’ H-5

H-6’a H-6’b

5.65.75.85.96.0 ppm

H-5’

H-4,1’

H-2 H-3

H-2’

H-3’

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz


95

の.ぬ. Tiodisacáridos con unidades furanósicas en el extremo no reductor. Tioglicosilaciones promovidas por MoOにClに. El segundo método de tioglicosilación consistió en utilizar el catalizador novedoso MoOにClに, que había resultado efectivo para promover tioglicosilaciones de な‐O‐acetil piranosas.なは Nuevamente se utilizaron は‐tioazúcares de configuración gluco y galacto, y derivados acilados de Araf, Galf y además de Ribof, que no se había utilizado para la reacción con SnClね. Este método de tioglicosilación consistió en disolver el MoOにClに en CHにClに anhidro, bajo atmósfera de argón y adicionar una solución, en el mismo solvente, del azúcar furanósico per‐O‐acilado. Luego de agitar a temperatura ambiente durante など min se agregó el tioazúcar y se dejó que la reacción proceda a temperatura ambiente. En primer lugar, se llevó a cabo la reacción de la な‐O‐acetil‐に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosa 岫ぱひ岻, comercial, ya utilizada anteriormente. Como agente de tioglicosilación utilizamos el は‐tioazúcar de configuración gluco 岫なぬひ岻. Se obtuvo así el tiodisacárido なねひ con alta diasteroselectividad y un rendimiento aceptable 岫のに%岻. O

OBzOBz

BzO OAc

149139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

89

MoO2Cl2

CH2Cl2

O

OBzOBz

BzO


96

Figura ぬぱa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なねひ. Figura ぬぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なねひ. Se utilizó en segunda instancia un は‐tioazúcar de configuración galacto: la な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのぬ岻. Este precursor no puede utilizarse en presencia de SnClね debido a que este ácido de Lewis promueve la

405060708090100110120130140150160170 ppm

31.59

55.55

64.02

70.25

70.78

72.09

72.20

72.51

75.72

79.92

86.93

96.72

128.20

133.48

165.45

165.76

166.13

C-1 C-1’

C-4’ C-5’

PhCO

C-aromáticos

C-3’,4, 2,5,3

C-2’

C-6 CH3O

3.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

5.75.85.9 ppm 2.93.03.1 ppm

H-3’ H-1’ H-4 H-4’,5’a

H-5 H-5’b H-6a H-1

CH3O

H-aromáticos

H-2’

H-1’

H-2 H-6b

H-6a H-6b

H-3

H-2’ H-3’

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBzOBz

BzO


97

hidrólisis de los grupos protectores isopropilidén. El tiol なのぬ se sintetizó según metodología ya descriptaにな a partir de galactosa 岫なのど岻. Me2CO

H

151150

HO

O

OH

HO

HO

OHO

O

O

O

O

OH

1) TsCl, C5H5N

2) KSAc, DMF

O

O

O

O

O

SAc

153152

O

O

O

O

O

SH

H2N(CH2)2SH

CH3CN

El tiol なのぬ, reaccionó con el azúcar ぱひ, en presencia de MoOにClに para dar el tiodisacárido なのね, con un rendimiento relativamente bajo 岫ぬひ%岻. O

OBzOBz

BzO OAc

+

89

MoO2Cl2

CH2Cl2

S

153

O

O

O

O

O

SH

154

O

O

O

O

O

O

OBzOBz

BzO

Figura ぬひa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なのね.

5.6 ppm

4.604.654.70 ppm

H-3’ H-1’

H-4’

H-5

H-5’b

H-6a

H-1

H-aromáticos

H-2’

H-1’

H-2,4

H-6b

H-5’a H-3

H-1

2.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

(CH3)2C

S

O

O

O

O

O

O

OBzOBz

BzO


98

Figura ぬひb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なのね. A continuación y, a modo de comparación entre ambos catalizadores, se llevó a cabo la reacción entre los azúcares furanósicos per‐O‐acilados などな y なねね con el donor de tioglicosilo de configuración gluco 岫なぬひ岻 según las siguientes reacciones: MoO2Cl2

CH2Cl2

O

OAc

OAc

AcO

OAc

144 145139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

147139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

101

O

OBz

OBz

OBz

OBz

MoO2Cl2

CH2Cl2

X

Por reacción de なねね y なぬひ se obtuvo nuevamente el tiodisacárido なねの岫はの%岻, según se confirmó por espectroscopía de RMN‐なH y なぬC, pero la reacción para obtener なねば, a partir de などな y なぬひ, resultó prácticamente infructuosa. El bajo rendimiento en esta última se atribuyó al hecho de que el compuesto などな posee un

30405060708090100110120130140150160 ppm

24.40

24.91

25.93

26.03

30.47

64.49

68.37

70.46

70.84

71.55

72.65

75.66

80.01

86.33

96.53

108.65

109.34

128.34

133.44

165.10

165.24

166.21

C-1 C-1’

C-4’ C-5’

PhCO

C-aromáticos

C-3’,4, 2,3

C-2’

C-6 (CH3)2C

(CH3)2C

C-5


99

grupo benzoiloxi como sustituyente anomérico, en lugar de un grupo acetiloxi, como es el caso de なねね o los ejemplos previamente descriptos en piranosas. Para confirmar esta hipótesis se sintetizó la な‐O‐acetil‐per‐O‐benzoil‐Galf 岫なのの岻. Se utilizó SnClね para la activación anomérica in situ de などな y se agregó anhídrido acético como nucleófilo, obteniéndose el な‐O‐acetil derivado なのの con buen rendimiento 岫ばぱ%岻. SnCl4

Ac2O

155

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz101

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz El espectro de RMN‐なH de なのの crudo indicaba que el anómero が era el producto mayoritario. Al integrar el área de las señales correspondientes a cada uno de los H‐な岫anómero が: は,のに ppm, Jな,にな Hz; anómero ゎ: は,はは ppm, Jな,に噺ね,ぱ Hz岻 se obtuvo una relación が:ゎの:な. También se dedujo una relación similar a partir del espectro de RMN‐なぬC, que mostró en la región anomérica la resonancia del C‐な a ひひ,ね ppm 岫anómero が岻 y a ひぬ,ね ppm 岫anómero ゎ岻. El anómero が se obtuvo como único diasteroisómero mediante recristalización de EtOH del crudo de reacción. Los espectros de RMN‐なH y なぬC de なのの‐が se muestran en las Fig. ねどa y ねどb.

Figura ねどa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 del anómero が de なのの. 2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

6.52 ppm 4.754.80 ppm

H-5

H-4 H-6a H-6b

CH3CO H-aromáticos H-1

H-2

H-1

H-3

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz


100

Figura ねどb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 del anómero が de なのの. Teniendo el derivado de Galf なのの, se repitió la reacción con el MoOにClに y el tioazúcar なぬひ y en este caso sí se obtuvo el tiodiscárido なねば con buen rendimiento 岫のは%岻. S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz147139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz155

MoO2Cl2

CH2Cl2

También se llevó a cabo esta síntesis con las furanosas な‐O‐acetiladas, なねね y なのの, con el tioazúcar de configuración galacto 岫なのぬ岻, pero en ambos casos los rendimientos resultaron bastante bajos 岫tiodisacárido なのは: にど%, tiodisacárido なのば: ぬば%岻, en concordancia con lo observado para el tiodisacárido con la unidad de ribofuranosa なのね. Las figuras ねな y ねに ilustran los respectivos espectros de RMN‐なH y なぬC de なのは y なのば respectivamente.

CH3CO

30405060708090100110120130140150160170 ppm

21.06

63.54

70.13

77.40

81.32

83.58

99.38

128.34

133.67

165.23

165.48

165.73

166.03

169.18

C-1 C-4

PhCO

C-aromáticos

C-2 C-6

C-3

MeCO C-5


101

MoO2Cl2

CH2Cl2

O

OAc

OAc

AcO

OAc

144

+

O

OAc

OAc

AcO

S

153

O

O

O

O

O

SH

156

O

O

O

O

O

+

SO

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz

155

O

OBz

OBz

OBz

OBz

MoO2Cl2

CH2Cl2

153

O

O

O

O

O

SH

157

O

O

O

O

O

Figura ねなa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なのは. 1.52.02.53.03.54.04.55.05.5 ppm

5.455.50 ppm

H-4’,5’a,2, 4,5’b

H-1’

H-5 H-6a

H-1

H-2’

H-1’

H-6b H-3

(CH3)2C

H-3’

H-1

CH3CO

O

OAc

OAc

AcO

S

O

O

O

O

O


102

Figura ねなb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なのは.

Figura ねにa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なのば. 1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

5.75 ppm

4.604.654.704.754.80 ppm

H-5’

H-1’

H-5

H-6’b

H-6a

H-1

H-aromáticos

H-2’

H-1’

H-2,4

H-6b

H-6’a H-3 H-4’

(CH3)2C

H-3’

CH3CO

30405060708090100110120130140150160170 ppm

20.74

20.77

24.44

24.91

25.96

26.02

30.86

62.81

68.18

70.43

70.85

71.68

77.33

79.75

81.81

88.25

96.50

108.61

109.32

169.54

170.05

170.57

C-1 C-1’

C-4’

C-5’

C-2, 3,4

C-2’ C-6

(CH3)2C

(CH3)2C

C-3’

MeCO

C-5

SO

OBz

OBz

OBz

OBz

O

O

O

O

O


103

Figura ねにb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なのば. En las glicosilaciones que dieron bajos rendimientos, principalmente cuando el は‐tioazúcar utilizado era なのぬ岫な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa岻, se observó la formación de disulfuros, constituidos por dos unidades piranósicas, provenientes de la oxidación del tiol correspondiente. Probablemente, cuando el grupo tiol se encuentra más impedido, como ocurre en なのぬ岫por el sustituyente de C‐ね axial岻, la reacción de glicosilación se hace más lenta y aumentan los productos secundarios. En todos los espectros de RMN‐なH de los tiodisacáridos se detectó la desaparición de la señal correspondiente al HS, que se observaba en el tiol de partida en la zona de な,ぱど ppm como un doble doblete acoplado con los H‐はa y H‐はb. Además, en el espectro de RMN‐なぬC, se observó el corrimiento de la señal de los carbonos C‐な’ 岫de la unidad furanósica岻 a campos más altos como consecuencia de la unión con el átomo de azufre, y un corrimiento menor del C‐は岫unidad piranósica岻 a campos más bajos. Estos desplazamientos químicos característicos se muestran representados en la Tabla ば.

C-1

C-1’ C-6’ PhCO

C-aromáticos

C-2,4, 3,5’

C-2’,4’ C-6

(CH3)2C (CH3)2C C-5

C-3’

30405060708090100110120130140150160170 ppm

24.45

24.90

25.96

26.02

30.52

63.52

68.30

70.31

70.46

70.84

71.66

77.94

81.47

82.59

88.44

96.52

108.64

109.37

128.32

133.51

165.27

165.49

165.67

166.03


104

Tabla ば. Señales características en los espectros de RMN‐なH y なぬC de los tiodisacáridos なねの, なねは, なねば, なねぱ, なねひ, なのね, なのは y なのば.

O

OAc

OAc

AcO

OAc

O

OBzOBz

BzO OAc

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz

143

BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

153

O

O

O

O

O

SH

139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

155

101

144

89

C-6 = 24,8 ppm C-6 = 26,2 ppm

H-1 = 6,86; C-1 = 94,2 ppm

H-1 = 6,79; C-1 = 99,8 ppm

H-1 = 6,68;C-1 = 93,3 ppm

H-1 = 6,53; C-1 = 99,3 ppm

H-1 = 6,43;

C-1 = 98,4 ppm

H-1 = 6,20;

C-1 = 99,3 ppm

149:

H-1' = 5,70;

C-1' = 87,0;

C-6 = 32,6 ppm

154:

H-1' = 5,61;

C-1' = 86,3;

C-6 = 30,5 ppm

148:

H-1' = 5,89;

C-1' = 89,0;

C-6 = 30,7 ppm

145:

H-1' = 5,61;

C-1' = 88,9;

C-6 = 31,7 ppm

157:

H-1' = 5,75;

C-1' = 88,4;

C-6 = 30,5 ppm

147: ídem

146:

H-1' = 5,52;

C-1' = 88,7;

C-6 = 31,1 ppm

147:

H-1' = 5,93;

C-1' = 89,2;

C-6 = 31,3 ppm

156:

H-1' = 5,42;

C-1' = 88,2;

C-6 = 30,9 ppm

C-6 =38,3 ppm

の.ね. Obtención de tiodisacáridos libres. Siguiendo la metodología descripta en el capítulo anterior, se prepararon los tioazúcares libres como último paso de estas síntesis. Así, la desacilación de los tiodisacáridos なねの, なねは, なねば, なねぱ, なのね y なのば se llevó a cabo por agitación a temperatura ambiente con una mezcla de MeOH:EtぬN:HにO ぬ:な:ぬ. Se obtuvieron los tiodisacáridos libres puros 岫なのぱ伐なはな岻 luego de eluirlos a través de una columna


105

rellena con resina de intercambio iónica mixta 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻 para desionizarlos y a través de una mini columna de fase reversa. A continuación se esquematizan las reacciones que condujeron a los tiodisacáridos libres mencionados y se presentan los correspondientes espectros de RMN‐なH y なぬC. Derivados de Araf:

145

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

158

O

OH

OH

HO

S

HO O

OMe

HO

HO

146

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

159

O

OH

OH

HO

S

HO

O

OMe

HO

HO

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

Figura ねぬa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de なのぱ. 3.03.54.04.55.0 ppm

3.53.63.73.83.94.0 ppm

H-3’

H-1’

H-5’b

H-6a

H-1

H-2’,4’

H-4

H-6b

H-5’a,5 H-2

CH3CO

H-3

O

OH

OH

HO

S

HO O

OMe

HO

HO


106

Figura ねぬb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de なのぱ.

Figura ねねa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de なのひ con supresión del pico de agua. 3.03.54.04.55.0 ppm

3.63.73.83.9 ppm

H-1’

H-5’a

H-6a H-1

H-4’,2’,5,4,3’

H-6b

H-2,3

CH3O

H-5’b

35404550556065707580859095100 ppm

32.38

55.14

60.59

71.20

71.84

72.66

72.89

75.81

81.40

82.22

89.44

99.17

C-1 C-1’ C-2’,4’

C-5’ C-3’ C-6 CH3CO

C-3,4, 5,2

O

OH

OH

HO

S

HO

O

OMe

HO

HO


107

Figura ねねb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de なのひ. Derivados de Galf:

147

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

160

S

HO O

OMe

HO

HO

O

OH

OH

OH

OH

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

148

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

161

S

HO

O

OMe

HO

HO

O

OH

OH

OH

OH La desbenzoilación del tiodisacárido なねば dio el tiodisacárido libre なはど, el cual es un tioanálogo del disacárido が‐D‐Galf‐岫なは岻‐D‐Glcp componente del antígeno O de Escherichia coli K‐なに.にに,にぬ El antígeno O, una unidad repetitiva de polisacárido que compone el lipopolisacárido 岫LPS岻, es la principal superficie antigénica de muchas

405060708090100 ppm

31.41

55.21

60.57

67.96

69.44

70.18

70.73

75.77

81.32

82.24

89.18

99.44

C-1 C-1’

C-2’,4’ C-5’

C-3’

C-6

CH3O

C-4,5, 2,3


108

bacterias Gram negativas, entre ellas E. coli. Los glicoconjugados que contienen Galf parecen ser esenciales para la virulencia en bacterias Gram‐negativas.にに

Figura ねのa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de なはど. Figura ねのb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de なはど.

405060708090100 ppm

32.39

55.21

62.77

70.38

71.21

71.96

72.63

72.91

76.03

81.05

81.32

89.42

99.20

C-1 C-1’ C-4’ C-6’

C-3’ C-2’

C-6 CH3O

C-3,4,5,2,5’

3.03.54.04.55.0 ppm

5.2 ppm

3.53.63.73.83.94.0 ppm

H-3’

H-1’

H-4’

H-5

H-6’a

H-6a

H-1

H-2’

H-4 H-6b

H-5’

H-2

CH3O

H-1’

H-6’b S

HO O

OMe

HO

HO

O

OH

OH

OH

OH


109

Figura ねはa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻 de なはな con supresión del pico de agua. Figura ねはb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻 de なはな. Además resultaba interesante sintetizar el tiodisacárido が‐D‐Galf‐S‐岫なは岻‐は‐tio‐D‐Galp 岫なはぬ岻, debido a que la unidad が‐D‐Galf‐岫なは岻‐D‐Galp se encontró en la

405060708090100 ppm

31.40

55.24

62.73

67.95

69.45

70.12

70.31

70.86

76.03

80.97

81.31

89.14

99.46

C-1 C-1’ C-4’ C-6’

C-3’ C-2’

C-6 CH3O

C-4,5,5’, 2,3

3.03.54.04.55.0 ppm

3.63.73.83.94.0 ppm

H-3’

H-1’

H-6’a

H-6a H-1

H-2’,4, 5,4’

H-6b

H-5’

H-2,3

CH3O

H-6’b

S

HO

O

OMe

HO

HO

O

OH

OH

OH

OH


110

naturaleza, como constituyente del exopolisacárido de Lactobacillus rhamnosusにね y Streptococcus thermophilus.にの Este disacárido también se obtuvo por hidrólisis parcial de polisacáridos de Mycoplasma mycoidesには y Mycobacterium tuberculosis.にば Por otro lado, el tiodisacárido なはぬ sería útil para investigar la influencia del cambio de configuración del extremo reductor, con respecto a なはど, en la inhibición de la が‐galactofuranosidasa. S

O

OBz

OBz

OBz

OBz157

O

O

O

O

O

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

S

O

OH

OH

OH

OH162

O

O

O

O

O

TFA

H2O

SO

OH

OH

OH

OH

163

OH

O

OH

HO

OH

Para ello, se desbenzoiló el tiodisacárido なのば para dar el derivado なはに parcialmente protegido, al cual se trató con TFA para hidrolizar los grupos acetales. Sin embargo, esta desprotección no resultó satisfactoria debido a que las condiciones acídicas necesarias para la hidrólisis de las funciones isopropilidén produjo la degradación parcial del enlace tioglicosídico. La hidrólisis mencionada no se pudo evitar, incluso utilizando condiciones más suaves como una mezcla de ácido acético:THF:agua の:な:な a はの °C o en las condiciones de la reacción de acetólisis, en las cuales los enlaces tioglicosídicos entre unidades piranósicas, son estables.にぱ Es sabido que los furanósidos son mucho más lábiles a los ácidos que los análogos piranósicos.にひ La purificación de なはぬ de sus monosacáridos constituyentes no resultó factible.


111

Figura ねばa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻 de なはに. Figura ねばb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻 de なはに.

C-1 C-1’

C-4’

C-6’

C-4,5’, 3,2

C-2’

C-6 (CH3)2C

(CH3)2C C-5

C-3’

30405060708090100110 ppm

24.58

25.14

26.31

26.45

31.32

64.58

69.81

71.91

72.18

72.28

72.85

78.54

83.21

83.91

90.73

97.94

109.89

110.31

2.02.53.03.54.04.55.0 ppm

H-3

H-1’

H-5

H-6a

H-1

H-3’

H-6b

H-6’a,6’b

H-4

(CH3)2C

H-2

H-2’ H-4’

3.73.83.94.0 ppm

H-5’

SO

OH

OH

OH

OH

O

O

O

O

O


112

Derivados de Ribof Se había sintetizado el tiodisacárido なのね, que también tenía en el extremo reductor una unidad de Galp protegida con grupos isopropilidén, en forma análoga al tiodisacárido なのば. Se probó desproteger totalmente なのね pero tampoco fue posible. Sólo se logró obtener el compuesto parcialmente desprotegido なはね análogo a なはに. MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

S

154

O

O

O

O

O

O

OBzOBz

BzOS

164

O

O

O

O

O

O

OHOH

HO

Figura ねぱa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻 de なはね. 1.52.02.53.03.54.04.55.05.5 ppm

H-1’

H-6a H-1

H-6b

(CH3)2C

3.84.04.24.44.6 ppm

H-3 H-5’a

H-5,2’,4’ H-3’

H-5’b

H-2,4 S

O

O

O

O

O

O

OHOH

HO


113

Figura ねぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻 de なはね. の.の. Evaluación de la actividad inhibitoria. Se evaluó la actividad inhibitoria de los tiodisacáridos derivados de Araf y Galf 岫なのぱ, なのひ, なはど, なはな y なはに岻 contra la exo が‐D‐galactofuranosidasa aislada a partir Penicillium fellutanum, según protocolo ya descripto.なね Se utilizó el ね‐nitrofenil が‐D‐galactofuranósidoぬど como sustrato y la D‐galactono‐な,ね‐lactona como inhibidor de referencia 岫ICのどど,どに mM岻.なね La reacción enzimática se llevó a cabo en presencia de los tiodisacáridos mencionados en concentraciones comprendidas dentro del siguiente rango: ど,に a など mM. Se determinó la cantidad de ね‐nitrofenol liberado a partir de ね‐nitrofenil が‐D‐galactofuranósido, como medida de la actividad galactofuranosidasa 岫Fig. ねひ岻. El tiodisacárido なのぱ no resultó activo, y los compuestos なはな y なはに fueron los más activos, si bien mostraron actividad inhibitoria débil 岫IC な mM岻 comparada con la lactona 岫ICのどど,どに mM岻. Este resultado indicaba que los tiodisacáridos constituídos por una unidad が‐D‐Galf unida mediante azufre a galactosa en configuración piranósica 岫なはな岻 o incluso sustituida con grupos isopropilidén 岫なはに岻 son capaces de interactuar con la enzima e inhibirla débilmente. Probablemente por esta razón el tiodisacárido ゎ‐L‐Araf‐

30405060708090100110 ppm

24.56

25.15

26.31

26.37

31.53

63.84

69.54

71.85

72.18

72.81

72.85

77.09

86.16

89.72

97.94

109.89

110.30

C-1 C-1’ C-4’ C-5’

C-2,3, 3’,4

C-2’ C-6 (CH3)2C

(CH3)2C C-5


114

岫なは岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐Galp‐OMe 岫なのひ岻, relacionado estructuralmente con なはな岫L‐Ara y D‐Gal tienen idéntica configuración para todos los estereocentros del anillo furanósico岻, mostró un nivel de actividad similar a なはな y なはに.

Figura ねひ. Efecto de la concentración de tiodisacárido en la actividad enzimática de la exo が‐D‐galactofuranosidasa de Penicillum fellutanum. Cada punto deriva del experimento realizado por triplicado. El tiodisacárido なのぱ岫Araf‐岫な蝦は岻‐Glcp岻, que tiene en su extremo no reductor una unidad de Araf, al igual que なのひ岫Araf‐岫な蝦は岻‐Galp岻, pero posee una unidad de Glcp en lugar de Galp en el extremo reductor, no resultó activo. El tiodisacárido なはど岫Galf‐岫な蝦は岻‐Glcp岻, con una estructura similar a なのぱ岫Araf‐岫な蝦は岻‐Glcp岻 y なはな岫Galf‐岫な蝦は岻‐Galp岻, mostró una actividad inhibitoria intermedia entre ellos. Puede concluirse entonces que la presencia de una unidad de Glcp en el extremo reductor, disminuye la actividad inhibitoria de estas moléculas y que los tiodisacáridos constituidos por が‐D‐Galf o ゎ‐L‐Araf unidas mediante S a una unidad de Galp mostraron mayor actividad unhibitoria Estos resultados concuerdan con la alta especificidad observada para esta enzima.ぬな

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

158

159

160

161

162

D-galactono 1,4-lactona

Bibliografía. Síntesis de 岫な蝦は岻 tiodisacáridos mediante reacciones de transtioglicosilación.

115

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CAPITULO は Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución nucleofílica.

Capítulo は. Resultados y Discusión

117

Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución nucleofílica. は.な. Introducción. En el capítulo に se describieron tiodisacáridos sintetizados mediante reacciones de tipo SNに. En ellas se utilizaron な‐tioacetatos y な‐tioaldosas como fuentes de aniones sulfuros, capaces de sustituir buenos grupos salientes en otra molécula de azúcar. Pero además, existen antecedentes de este tipo de reacciones a partir de sales de isotiouronio que ocurren en un único paso 岫╉one pot╊岻, sin necesidad de aislar la な‐tioaldosa generadaな,に por la base 岫EtぬN岻 que también promueve la S‐alquilación. Este procedimiento se aplicó satisfactoriamente en la síntesis de derivados ね‐tio‐ゎ‐celobiósidos y metil ね‐tio‐ゎ‐lactósidosな y de otros tiooligosacáridos.に En el primer caso, el metil ね‐tiocelobiósido 岫なはの岻 y el metil ね‐tiolactósido 岫なはは岻 se prepararon a partir de las sales de isotiouronio にの y ぱぱ previamente descriptas, mediante una reacción promovida por EtぬN, con un ligero exceso del triflato にな. Anteriormente, otro grupo había fracasado en el intento de sintetizar なはは por acoplamiento de la sal de sodio de la な‐tio‐が‐D‐Galp con el triflato にな en HMPA.ぬ O

AcOR2

OAc

OAc

R1

25 R1 = H, R2 = OAc

88 R1 = OAc, R2 = H

S NH2

NH2.Br

+

21

O

BzO

OTf OBz

OMeBzO

OAcO

R2

OAc

OAc

R1

SO

BzO

OBz

OMeBzO

165 R1 = H, R2 = OAc

166 R1 = OAc, R2 = H

Et3N

CH3CN

Como se mencionó, esta misma metodología se utilizó para obtener, en forma estereoselectiva, di, tri, tetra y pentasacáridos 岫なはひa‐d y なばなa‐d岻 a partir de sales de isotiouronio 岫なはばa‐d岻 como precursores. En general se emplea un ligero exceso de triflato 岫なはぱ, な,に,ぬ‐tri‐O‐benzoil‐ね‐O‐triflil‐が‐L‐Arap o なばど, に,ぬ,は‐tri‐O‐benzoil‐ね‐O‐triflil‐ゎ‐D‐Galp岻 debido a que los mismos pueden descomponer en condiciones básicas, por eliminación del grupo triflato, y consecuente formación de productos secundarios insaturados durante el paso de acoplamiento. Esta reacción no deseada depende fuertemente de la configuración del enlace glicosídico. Por razones estéricas los grupos な‐benzoiloxi o な‐metoxi en posición axial disminuyen


118

la descomposición del triflato y este hecho da cuenta de los rendimientos bajos de productos de acoplamiento de los análogos de なはぱ y なばど que poseen el sustituyente de C‐な en disposición ecuatorial.ね

O

BzO

OTf

OBzBzO

OAcO

AcO

OAc

SO

BzO

BzO

Et3N, CH3CN

S NH2

NH2.Br

n

167a n = 0

167b n = 1

167c n = 2

167d n = 3

O

BzO

OTf

OMeBzO

Et3N, CH3CN

OAcO

AcO

OAc

SO

BzO

BzO

S

n

O

BzO

OBzBzO

OAcO

AcO

OAc

SO

BzO

BzO

S

n

O

BzO

OMeBzO

169a n = 0, 169b n = 1, 169c n = 2, 169d n = 3

168 170

171a n = 0, 171b n = 1, 171c n = 2, 171d n = 3 は.に. Reacciones SNに a partir de monosacáridos con grupo saliente tosilo ó triflato. En base a estos antecedentes, decidimos conducir como reacción modelo la síntesis de un derivado peracetilado de la に‐tiosoforosa 岫なばね岻, análogo de la soforosa 岫が‐D‐Glcp‐岫な蝦に岻‐Glcp岻 Los enlaces glicosídicos 岫なに岻 se encuentran en numerosas secuencias oligosacarídicas, en sistemas biológicos específicos. Por ejemplo, la soforosa mencionada es conocida por su actividad regulatoria en la producción de enzimas celulolíticas en Trichoderma reesei.の,は La に‐tiosoforosa fue sintetizada en tres oportunidades por distintos grupos.ば‐ひ Dos de ellos utilizaron la に‐tiosoforosa peracetilada, obtenida mediante reacciones de tipo SNに, como intermediario en la obtención del producto final desprotegido. El primer antecedente consistió en una reacción de sustitución entre la sal de sodio de la に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐が‐D‐glucopiranosa 岫なばに岻 y な,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐に‐O‐trifluorometansulfonil‐が‐D‐manopiranosa 岫なばぬ岻, en presencia de un catalizador de transferencia de fase, el


119

な,ば,など‐trioxa‐ね,なぬ‐diazaciclopentadecano 岫Kryptofix® にな岻.ば La reacción procedía a temperatura ambiente y se obtenía un rendimiento del tiodisacárido なばね de aproximadamente ぬど%. +

172 173 174

O

AcOAcO

OAc

S

OAc

NaO

AcOAcO

OAc

OAc

OTf

O

AcOAcO

OAcS

OAc

O

AcOAcO

OAc

OAcKryptofix® 21

THF

Una opción apenas diferente, fue descripta por el grupo de Defaye y col.,ぱ que se basaba en la reacción entre los precursores なばに y なばぬ en DMF a temperatura ambiente, la cual produjo el tiodisacárido なばね con のぱ% de rendimiento. +

172 173 174

O

AcOAcO

OAc

S

OAc

NaO

AcOAcO

OAc

OAc

OTf

O

AcOAcO

OAcS

OAc

O

AcOAcO

OAc

OAcDMF

Utilizamos el mismo triflato なばぬ para llevar a cabo la reacción de sustitución y como nucleófilo seleccionamos la sal de isotiouronio にの. Para ello, se sintetizó にの mediante procedimiento ya descripto;な mientras que el triflato なばぬ se preparó a partir de D‐manosa.ば,など Estas síntesis se ilustran en el siguiente esquema. 23

O

AcOAcO

OAc

OAcAcO

O

AcOAcO

OAc

BrAcO

O

AcOAcO

OAc

SC(NH)NH2

AcO

HBr

AcOH

(NH2)2CS

24 25 O

HOHO

OH

OH

HOO

AcOAcO

OAc

OAc

HOAc2O, HClO4

PBr3, NaCO3H2O

O

AcOAcO

OAc

OAc

OTf

C5H5N,CH2Cl2

Tf2O

176175 173 La glicosil isotiourea にの se disolvió en acetonitrilo anhidro y se agregó なばぬ y EtぬN como catalizador, y se dejó reaccionar a temperatura ambiente para obtener el


120

tiodisacárido なばね. Sin embargo, además de este producto, se obtuvo disulfuro なばば, formado por la unión な,な entre dos moléculas de la な‐tioaldosa proveniente de la sal de isotiouronio, lo cual ocasionó una disminución importante en el rendimiento de なばね.

O

AcOAcO

OAc

SC(NH)NH2

AcO

25

+

173

174O

AcOAcO

OAc

OAc

OTfO

AcOAcO

OAcS

OAc

O

AcOAcO

OAc

OAc

O

AcOAcO

OAc

S

AcO

O

OAcOAc

AcO

S

AcO

+

177

Et3N

CH3CN

Se llevó a cabo la misma reacción pero en ausencia del triflato なばぬ y efectivamente se comprobó la formación del disulfuro なばば. Para evitar la formación de este subproducto se condujo la reacción entre にの y なばぬ en presencia de ditiotreitol 岫DTT岻. Este compuesto, o su análogo ditioeritritol 岫DTE岻, se utilizan frecuentemente para impedir la formación de enlaces disulfuro intra e intermoleculares. なな Aunque en este caso no se observó la formación del disulfuro なばば, el rendimiento de なばね fue bajo 岫~にの%岻. No intentamos optimizar el rendimiento porque esta reacción se utilizó solamente como modelo para extenderla luego a furanosas. O

AcOAcO

OAc

SC(NH)NH2

AcO

25

+

173174

O

AcOAcO

OAc

OAc

OTf

O

AcOAcO

OAcS

OAc

O

AcOAcO

OAc

OAcEt3N, DTT

CH3CN


121

Figura のどa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なばね. Figura のどb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なばね. Dado que fue posible obtener el tiodisacárido なばね a partir de una glicosil isotiourea, aplicamos esta misma metodología con una sal de isotiouronio de un azúcar furanósico. Así, se intentó la reacción entre la sal de isotiouronio de la Galf 岫などに岻 y el mismo triflato 岫なばぬ岻, para obtener なばぱ, pero los resultados no fueron positivos. Aunque se evaluaron distintas condiciones 岫Tabla ぱ岻, en todos los casos,

17

0.

58

95

17

0.

52

21

17

0.

21

20

16

9.

77

39

16

9.

55

14

16

9.

35

59

16

9.

16

05

16

8.

79

65

92

.2

68

8

83

.8

02

47

5.

95

62

73

.7

51

97

3.

61

04

72

.5

45

37

0.

78

60

68

.7

70

56

8.

04

93

61

.9

89

36

1.

63

21

49

.0

74

1

20

.7

42

72

0.

70

90

20

.6

88

82

0.

64

83

20

.6

07

92

0.

59

44

20

.5

20

3

( p p m)

2 03 04 05 06 07 08 09 01 0 01 1 01 2 01 3 01 4 01 5 01 6 01 7 01 8 01 9 0

C-1 C-1’

C-2 C-6,6’

C-3,4,5, 2’,3’,4’,5’

MeCO

CH3CO

( p p m)

2 . 02 . 22 . 42 . 62 . 83 . 03 . 23 . 43 . 63 . 84 . 04 . 24 . 44 . 64 . 85 . 05 . 25 . 45 . 6

( p p m)

4 . 6 44 . 6 84 . 7 24 . 7 64 . 8 04 . 8 44 . 8 84 . 9 24 . 9 65 . 0 05 . 0 45 . 0 85 . 1 25 . 1 65 . 2 0

( p p m)

3 . 6 53 . 7 03 . 7 53 . 8 03 . 8 53 . 9 03 . 9 54 . 0 04 . 0 54 . 1 04 . 1 54 . 2 04 . 2 54 . 3 04 . 3 5

H-4

H-6a, 6’a

CH3CO

H-1’

H-6’b, 6b

H-2’ H-3,3’ H-4’

H-2

H-5

H-1

H-5’

O

AcOAcO

OAcS

OAc

O

AcOAcO

OAc

OAc


122

se obtuvieron monosacáridos derivados de Galf hidroxilados 岫伐OH岻, O‐acetilados 岫伐OAc岻 ó S‐acetilados 岫伐SAc岻 en la posición anomérica. Como se describe a continuación, en ciertas condiciones, se obtuvo una molécula de glucosa な,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetilada‐に‐O‐benzoilada resultado de la sustitución del triflato en la posición に por un benzoato. +

173

O

AcOAcO

OAc

OAc

OTfO

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

102

CH3CN

Et3N

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

AcOAcO

OAc

OAc

178

X

Tabla ぱ. Condiciones de reacción para obtener el tiodisacárido なばぱ. Ensayo な Ensayo に Ensayo ぬ Ensayoね Galf などにど,どば mmol ど,どば mmol ど,どば mmol ど,なの mmol Solvente ど,ぬ mL DMF な,の mL CHぬCN ど,の mL DMF ど,の mL DMFDTT なな mg 岫な岻なな mg 岫な,ど岻なな mg 岫な,ど岻にぬ mg 岫な,ど岻EtぬN なに µL 岫な,に岻なの µL 岫な,の岻などど µL 岫など岻ねに µL 岫に岻 Triflato なばぬぬば mg 岫な,な岻 Sin triflato ぬど mg 岫ど,ひ岻ばひ mg 岫な,な岻T 岫°C岻, tiempo 岫h岻にの °C; にね h はど‐ぱど °C; ぱ h, にの °C; なは h にの °C; ぬ h にの °C; の hねの °C; ぬ h にの °C; な,の h はの °C; に h En las condiciones del Ensayo な se obtuvo la に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐Galf 岫con el HO‐な libre岻 según espectroscopia de RMN‐なH y なぬC. Además, parte de este producto se acetiló y se realizaron espectros de RMN‐なH y なぬC. Estos espectros coincidieron con los del compuesto なのの, previamente sintetizado, confirmando que se trataba del derivado O‐acetilado en la posición anomérica.


123

En el Ensayo に se obtuvo un producto de diferente Rf que el obtenido en el Ensayo な. Como en este ensayo no se había agregado el triflato なばぬ, se pensó que podría tratarse del tiol などぬ, entonces este producto se trató inmediatamente con anhídrido acético esperando obtener la な‐S‐acetil‐に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐な‐tio‐が‐D‐Galf, pero los datos espectroscópicos que se observaron no se correspondían con los informados en literatura para este compuesto.なに En base a los datos espectrales se asignó el disulfuro unido 岫な蝦な岻 como estructura factible para este producto. Como resultado de los Ensayos ぬ y ね se obtuvo un producto de configuración glucopiranósica que resultó ser producto de sustitución del grupo triflato de なばぬ, por benzoato. Cabe mencionar que había BzO.BFぬ‐ en el medio de reacción, remanente de la preparación de la sal de isotiouronio. La causa de estos resultados desfavorables se atribuyó al impedimento estérico de la posición に de la manosa, por lo cual decidimos llevar a cabo la misma reacción con un triflato menos impedido. Para ello se sintetizó, a partir de なのな, el derivado な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐O‐triflil‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なばひ岻,なぬ,なね con el grupo saliente sulfonilo de alcohol primario.

151

O

O

O

O

O

OH O

O

O

O

O

OTf

179

CH2Cl2, 0 °C

N Tf2O,

Por reacción de la sal de isotiouronio de la Galf con el triflato なばひ, en presencia de EtぬN, se obtuvo el tiodisacárido なのば, aunque también con bajo rendimiento 岫には%岻. Este producto ya había sido sintetizado por otro método 岫Capítulo の岻, por lo cual quedó fácilmente corroborada su identidad.


124

O

O

O

O

O

OTf

179

O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

Et3N

102

+

DMF

SO

OBz

OBz

OBz

OBz

157

O

O

O

O

O

Se concluyó que la sal de isotiouronio de la Galf producía la な‐tioaldosa nucleofílica intermediaria para la reacción de sustitución, y que con un grupo triflato en la posición は de una hexosa menos impedida, se producía el acoplamiento. Por lo tanto aplicamos esta metodología a derivados tosilato o triflato, también en la posición は, pero de una unidad galactofuranósica. Esta reacción conduciría a un tiodisacárido constituido por dos unidades furanósicas, análogo de Galf‐が‐岫な蝦は岻‐Galf, unidad encontrada en glicoconjugados de diversos microorganismos, entre ellos, Aspergillus, Mycobacterium, Penicillum y Trichoderma. Se propuso estudiar la reacción con el metil に,ぬ,の‐tri‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐tosilo‐ゎ‐D‐galactofuranósido 岫なぱの岻 o el metil に,ぬ,の‐tri‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐triflil‐ゎ‐D‐galactofuranósido 岫なぱは岻. Para obtener estos compuestos, se planteó el siguiente esquema retrosintético, en el cual el ácido D‐galacturónico 岫なぱど岻 sería el sustrato de partida.

183b

OH

O

OH

HO

OH

COOH

O

OH

OH

OH

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

181

185

182 180

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf186 El primer paso de esta síntesis consistió en obtener, a partir de ácido D‐galacturónico 岫なぱど岻, el metil glicósido de configuración furanósica なぱな, como mezcla de anómeros. Esta reacción había sido descripta por Marino y Lederkremer.なの El compuesto なぱな tenía un grupo éster en la posición は, que luego


125

sería reducido para obtener el hidroxilo terminal libre, previa protección de los hidroxilos restantes con cloruro de ter‐butil dimetilsililo 岫TBSCl岻. Se eligió esta opción de grupos protectores ya que se contaba con antecedentes que indicaban que la protección con grupos acetatos o benzoatos, no era eficiente debido a la migración del grupo protector del C‐の al C‐は, en el momento de llevar a cabo la reducción del éster.なは Así, se sintetizó el metil glicósido なぱな岫el anómero が era mayoritario岻 y se convirtieron los grupos hidroxilos en silil ésteres con TBSCl/imidazol. En las figuras のなa y のなb se muestran los espectros de RMN‐なH y なぬC del compuesto totalmente protegido なぱに.

180

OH

O

OH

HO

OH

COOH O

OH

OH

OH

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

181 182

Dowex 50 (H+)

MeOH

TBSCl imidazol

CH3CN

Figura のなa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱに. 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

4.744.76 ppm

H-1

CH3O

H-3,4 H-5 H-2

CH3CO2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

H-1β

H-1α

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe


126

Figura のなb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱに. Se evaluaron diversos agentes reductores para el siguiente paso de síntesis. Se comenzó probando con reductores suaves como LiBHねなば o BHぬ:S岫CHぬ岻に,なぱ los cuales no resultaron adecuados para reducir el éster de なぱに. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

182

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

LiBH4, MeOH/Et2OT amb.

ó

LiBH4, MeOH/THF50 °C

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

BH3:S(CH3)2

THF, 50 °CXX

183182 Cuando se utilizó LiHねAl como agente reductor, resultó difícil ajustar las condiciones de reacción: cantidad de agente reductor, temperatura y tiempo. Un exceso del agente reductor superior a な,に moles, a temperatura ambiente o incluso a ど °C y por tiempos prolongados 岫な h o más岻 conducía a la desililación parcial de la posición の de なぱぬ para dar なぱね. Una vez optimizadas las condiciones de reacción se obtuvieron los siguientes productos.

170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

17.82

17.87

18.49

25.69

25.72

25.92

51.94

55.01

72.14

79.25

84.33

85.43

109.52

172.05

-4 -5 ppm

-5.06

-4.92

-4.52

-4.49

-4.37

-4.13

C-1

C-4 C-5

C-3

C-2

C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

CH3CO2 (CH3)3CSiMe2


127

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH183a182

LiH4Al

THF, -18 °C

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH183b 184

+ +

No pudo evitarse la pérdida del grupo sililo protector del C‐の岫なぱね岻, pero con tiempos de reacción cortos se lograba obtener principalmente los productos con el C‐は libre 岫なぱぬb, de configuración が, en forma mayoritaria岻. En esta etapa, los productos se separaron eficientemente mediante cromatografía en columna. Como se verá más adelante el compuesto なぱね resultaría útil para otra vía de síntesis y su obtención se podía favorecer aumentando el tiempo de reacción.

Figura のにa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱぬa. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

4.80 ppm

3.73.83.94.04.14.2 ppm

H-1

CH3O

H-3 H-2

(CH3)2SiBut

H-4

(CH3)3CSiMe2

H-1α

HO

H-5 H-6a H-6b

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH


128

Figura のにb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱぬa. En el espectro de RMN‐なH de なぱぬa 岫Fig. のにa岻 se observaban, entre otras señales, un triplete a に,ぬね ppm correspondiente al HO acoplado con los H‐はa y H‐はb y un doblete para el H‐な岫ね,ばば ppm岻 con un Jな,に噺ぬ,ぱ Hz, indicativo de configuración ゎ. Además, esto se confirmó mediante su espectro de RMN‐なぬC 岫Fig. のにb岻 en el cual se observaba la señal del carbono anomérico a などぬ.の ppm.

Figura のぬa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱぬb. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

4.75 ppm

H-1

CH3O

H-3

H-2

(CH3)2SiBut

H-4

H-1β

H-5

H-6a,6b

(CH3)3CSiMe2

HO

3.73.83.94.04.1 ppm

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.81

-4.70

-4.56

-4.47

-4.21

-3.85

17.86

18.24

18.30

25.75

25.90

25.92

55.93

64.49

72.80

76.66

78.60

85.42

103.55

C-1 C-4 C-5

C-3

C-2 C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH


129

Figura のぬb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱぬb. En el espectro de RMN‐なH de なぱぬb 岫Fig. のぬa岻 la señal correspondiente al HO aparecía a に,ぬの ppm y la del H‐な a ね,ばね ppm con Jな,にな Hz confirmando la configuración anomérica が. En el espectro de RMN‐なぬC de なぱぬb 岫Fig. のぬb岻 la señal del carbono anomérico aparecía desplazada a campos más bajos, en comparación con la de なぱぬa 岫などひ,に ppm岻, coincidente con la configuración anomérica asignada. Las diferencias más notorias en el espectro de RMN‐なH de なぱね岫Fig. のねa岻 con respecto a los anómeros なぱぬa y なぱぬb, previamente descriptos, resultaron ser la aparición de dos señales correspondientes a hidroxilos libres 岫に,はに y に,にぬ ppm岻 y sólo dos señales correspondientes a los grupos protectores silil ésteres de las posiciones に y ぬ, en la zona de campos más altos. La configuración anomérica resultó が, con valores de desplazamientos y constante de acoplamiento 岫Jな,に岻 análogos a los observados para なぱぬb.

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.85

-4.65

-4.49

-4.43

-4.40

-4.08

17.82

17.87

18.37

25.69

25.71

26.00

54.82

64.53

72.53

79.41

83.75

86.84

109.21

C-1

C-4

C-5

C-3

C-2 C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut


130

Figura のねa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱね. Figura のねb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱね. En ciertas oportunidades, cuando se dejó proceder la reacción por mayor tiempo y la temperatura alcanzó los ど °C, se observó la migración del grupo sililo protector

110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.92

-4.67

-4.30

17.82

17.88

25.69

25.75

55.07

65.35

69.79

79.15

83.11

84.90

109.71

C-1 C-4 C-5 C-3

C-2

C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

4.8 ppm

4.04.1 ppm

H-1

CH3O

H-3 H-2

5-HO

(CH3)2SiBut

H-4

(CH3)3CSiMe2

H-5,6a, 6b

H-1β

6-HO

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH


131

del C‐の al C‐は, en forma análoga a lo que ocurre con acetatos o benzoatos y se obtuvieron なぱぬa’ y なぱぬb’, con el hidroxilo de la posición の libre O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTBS

183a'182

LiH4Al

THF, -18 a 0 °C

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTBS

183b'

+

Figura ののa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱぬa’. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

4.14.24.3 ppm

4.664.68 ppm

H-1

CH3O

H-3

H-4,5, 6b

H-2

HO

(CH3)2SiBut

H-1α

H-6a

(CH3)3CSiMe2

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTBS


132

Figura ののb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱぬa’.

Figura のはa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱぬb’. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

4.054.10 ppm

H-1

CH3O

H-3 H-2

HO

(CH3)2SiBut

H-1β

H-4

(CH3)3CSiMe2

H-5,6a, 6b

4.75 ppm

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-5.45

-4.63

18.17

25.35

25.74

25.85

56.21

63.52

69.86

75.64

79.05

81.66

103.15

C-1 C-4 C-5

C-3

C-2 C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut (CH3)3CSiMe2

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTBS


133

Figura のはb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱぬb’. Los espectros de RMN‐なH de なぱぬa’ y なぱぬb’ 岫Fig. ののa y のはa岻 resultaron bastante similares a los de sus análogos hidroxilados en la posición は, excepto en el desplazamiento de las señales correspondientes a los HO‐の que además, como era de esperar eran dobletes, dado que la señal del H‐の aparecía acoplada con el protón del hidroxilo y a valores de δ mayores a に,のど ppm 岫なぱぬa’: に,ぱど ppm y なぱぬb’: に,のば ppm岻. En los espectros de RMN‐なぬC de なぱぬa’ y なぱぬb’ 岫Fig. ののb y のはb, respectivamente岻 se observaba que la señal correspondiente al C‐の se desplazaba levemente a campos más altos 岫con respecto a los mismos carbonos en なぱぬa y なぱぬb岻. Estas asignaciones se confirmaron por acetilación de los grupos HO de los compuestos なぱぬb, なぱぬb’ y なぱね. Como era de esperar la acetilación produjo un desplazamiento a campos bajos de los protones vecinos y también se observó un efecto menor en los espectros de RMN‐なぬC. Los desplazamientos mencionados se listan en la Tabla ひ.

110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-5.46

-5.36

-4.94

-4.71

-4.64

-4.30

17.84

17.89

18.25

25.71

25.76

25.86

54.86

64.06

70.30

79.17

82.75

83.35

109.43

C-1

C-4 C-5

C-3

C-2 C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut


134

Tabla ひ. Señales características en los espectros de RMN‐なH de los compuestos なぱぬb, なぱぬb’ y なぱね. Compuestos acetilados derivados de: なぱぬb なぱぬb’ なぱね δ H‐のぬ,ばぬの,どばの,ぬど δ H‐はa ね,にどぬ,ばねね,ぬね δ H‐はb ぬ,ひばね,にな δ C‐のばど,のばな,ばはひ,に δ C‐ははは,ねはな,どはぬ,に

Se prepararon los sulfonil derivados de なぱぬb como aceptores de tioglicosilo. A partir de なぱぬb, por reacción con cloruro de tosilo en piridina anhidra, se sintetizó なぱの y con anhídrido tríflico en CHにClに anhidro, se obtuvo なぱは. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

186183b

C5H5N, T amb.

TsCl

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

185

CH2Cl2, 0 °C

N Tf2O,


135

Figura のばa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱの. Figura のばb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱの. La tosilación de なぱぬb se verificó por comparación de su espectro de RMN‐なH 岫Fig. のぬa岻 con el del derivado なぱの岫Fig. のばa岻, dado que se observó un desplazamiento a campos más bajos de las señales de H‐はa 岫ど,ねな ppm岻 y H‐はb 岫ど,にぱ ppm岻. De manera similar, en el espectro de RMN‐なH de なぱは岫Fig. のぱa岻 se observó que la introducción del grupo triflato en el hidroxilo primario de なぱぬb produjo una

C-1 C-4,2

C-5

C-3 CH3Ph

C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-aromáticos

150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.88

-4.63

-4.60

-4.45

-4.12

-4.00

17.78

17.86

18.26

21.61

25.70

25.75

25.90

54.91

70.50

71.34

79.39

84.11

84.44

109.27

128.00

129.80

132.97

144.75

7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

3.94.04.1 ppm

H-1

CH3O

H-3 H-4 H-5 H-6b,2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

H-aromáticos

H-6a

CH3Ph

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs


136

desprotección aún mayor para H‐はa 岫ど,ひな ppm岻 y H‐はb 岫ど,ばど ppm岻. Para ambos derivados, なぱの y なぱは, sus espectros de RMN‐なぬC 岫Fig. のばb y のぱb岻 mostraban el corrimiento de la señal correspondiente al C‐は a campos ligeramente más bajos, en comparación al compuesto de origen 岫なぱぬb岻.

Figura のぱa. Espectro de RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻 de なぱは. Figura のぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻 de なぱは.

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

(CH3)3CSiMe2

H-6a

H-6b H-5

H-2,3,4

C-1

C-4

C-5

C-3

C-2

C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut


137

En la Tabla など se listan algunas señales de espectros de RMN‐なH y valores de constantes de acoplamiento características para los compuestos なぱぬb, なぱぬb’, なぱね, なぱの, なぱは y なぱぬa. Tabla など. Señales y constantes de acoplamiento características en los espectros de RMN‐なH de los compuestos なぱぬb, なぱぬb’, なぱね, なぱの, なぱは y なぱぬa. Compuesto δ H‐ね岫Jぬ,ね岻 δ H‐の岫Jね,の岻 δ H‐はa岫Jの,はa岻 δ H‐はb 岫Jの,はb岻 J con HOなぱぬb ぬ,ひぱ岫ね,ひ岻ぬ,ぱひ岫ね,ひ岻ぬ,ばな岫の,ど岻ぬ,はば岫の,ど岻は,ぬ岫Jは,HO岻なぱぬb’ ね,どど岫ぬ,ど岻ぬ,ばぬ伐ぬ,はどの,ひ岫Jの,HO岻なぱねぬ,ひね岫の,ば岻ぬ,ばは伐ぬ,はぱば,ば岫Jの,HO岻ば,ば岫Jは,HO岻なぱのぬ,ばひ岫の,ば岻ぬ,ひぱ岫ぬ,ば岻ね,なに岫ぬ,に岻ぬ,ひの岫ば,に岻 ‐ なぱはぬ,ひに岫~ね,に岻ね,なね岫~ね,に岻ね,はに岫ぬ,ぬ岻ね,ぬば岫ば,ば岻 ‐ なぱぬa ぬ,ぱぬ岫ね,ぱ岻ぬ,ぱの岫ね,ぱ岻ぬ,はひ岫ね,ぱ岻ぬ,はに岫ね,ぱ岻は,ね岫Jは,HO岻

Primeramente se estudió la reacción de la glicosil isotiourea などに con el derivado tosilado なぱの. Como catalizador se utilizó EtぬN y como solvente se empleó tanto DMF como acetonitrilo. Como no se obtuvieron resultados satisfactorios se decidió aplicar la misma metodología a partir del derivado triflato 岫なぱは岻, considerando que éste es un mejor grupo saliente 岫mejor nucleófugo岻. Sin embargo, tampoco en este caso la reacción produjo el tiodisacárido deseado なぱば.


138

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

185

O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

Et3N

102

+

DMF ó CH3CNS

O

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

X

187

Et3N

DMF ó CH3CN

X

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf

186

O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

102

+

Los resultados obtenidos parecían indicar que la concentración y/o nucleofilia del tiol formado in situ a partir de la sal de tiouronio de la unidad furanósica, no eran suficientes para que ocurra la sustitución. Para comprobar esta hipótesis se llevó a cabo la reacción con un tiol piranósico. La diferencia con la な‐tiofuranosa es que la de configuración piranósica es estable y puede aislarse. Además es factible activar el tiol como sulfuro de sodio nucleofílico, por tratamiento con NaH. Cuando se intentó la reacción del tosilato なぱの con el derivado de la な‐tio‐Galp 岫なぱぱ岻 en acetonitrilo como solvente los resultados no fueron satisfactorios. Sin embargo, la misma reacción en DMF produjo el tiodisacárido buscado なぱひ, con buen rendimiento 岫ぱは%岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

185

18-crown-6+

DMF

S

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

1898

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

188

OAcO

AcO OAc

S

OAc

NaNaH

OAcO

AcO OAc

OAc

THF


139

Figura のひa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なぱひ. Figura のひb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なぱひ. は.ぬ. Activación del centro anomérico de la Galf como halogenuro de glicosilo. A efectos de sintetizar tiodisacáridos con una unidad furanósica en el extremo no reductor mediante esta metodología, se estudió la reacción entre un derivado

170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.88

-4.43

-4.31

-4.23

-4.01

-3.47

17.84

17.86

18.25

20.58

20.65

20.66

20.74

25.75

26.00

32.45

55.07

61.22

67.04

67.18

71.71

71.84

74.53

79.60

83.66

84.03

84.62

109.08

169.44

170.07

170.19

170.27

C-1 C-3’,5,5’,

2’,4’ C-2, 4,1’

C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-3

C-6’ MeCO

CH3CO

5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

4.454.50 ppm4.70 ppm

4.004.054.104.15 ppm

H-4’

CH3O

H-3’

(CH3)2SiBut

(CH3)3CSiMe2

H-1

H-6’a,6’b

H-1’

CH3CO

H-3 H-2 H-4

H-2’ H-5,5’ H-6a H-6b

H-1 H-1’

S

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc


140

bromuro de glicosilo de configuración Galf y un tiol en la posición は de un derivado de Glcp ó Galp. Esta reacción produciría los tiodisacáridos Galf ‐岫な蝦は岻‐Glcp 岫なねば岻 y Galf ‐岫な蝦は岻‐Galp 岫なのば岻. O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

Br

OBz

+ RSH

O

OBz

OBz

OBz

SR

OBz Se sintetizó a partir de la perbenzoil Galf 岫などな岻, el correspondiente bromuro, por reacción con TMSBr.なひ Una vez obtenido éste, se lo hizo reaccionar con las は‐tioazúcares なぬひ o なのぬ como se reseña en la Tabla なな. Primeramente se utilizó なぬひ, de configuración Glcp y protegida con grupos benzoatos. Se llevó a cabo la reacción a partir de なぬひ generando previamente el nucleófilo con NaH y se agregó luego el bromuro なひど. No se obtuvo el tiodisacárido esperado pues no se registró reacción. O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

Br

OBz

TMSBr

101 190

BzO O

OMe

BzO

BzO

SHS

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

139 147

+

NaH

THFX

CH2Cl2

Se intentó el acoplamiento de なひど con el tiol なのぬ, de configuración Galp. X

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

Br

OBz

TMSBr

101 190 153

O

O

O

O

O

SHS

O

OBz

OBz

OBz

OBz

157

O

O

O

O

O

+Et3N

THF ó CH3CNCH2Cl2


141

Las reacciones entre el bromuro なひど con el tiol なのぬ se condujeron en presencia de EtぬN y con THF o acetonitrilo como solventes. Tabla なな. Condiciones de reacción para obtener los tiodisacárido なねば ó なのば. Ensayo な Ensayo に Ensayo ぬ Galf bromuro なひどど,なな mmol ど,なな mmol ど,なな mmol Solvente ね mL THF ね mL THF ね mL CHぬCN Base NaH 岫な,に岻 EtぬN ねの µL 岫ぬ岻 EtぬN ぬど µL 岫に岻Tiol なぬひ岫Glcp岻はぱ mg 岫な,に岻なのぬ岫Galp岻ぬの mg 岫な,に岻なのぬ岫Galp岻ぬの mg 岫な,に岻 T 岫°C岻 y tiempo 岫h岻にの °C; に.の h にの °C; な h にの °C; な h Ninguna de las condiciones estudiadas resultaron adecuadas para la reacción, en la cual se obtenía el derivado hidroxilado en la posición anomérica de la Galf, proveniente de la hidrólisis del bromuro de glicosilo なひど. Esto se confirmó mediante espectroscopía de RMN‐なH y なぬC. Por lo tanto esta ruta de síntesis quedó descartada. は.ね. Activación del centro anomérico de la Galf como tricloroacetimidato. Como un intento adicional de síntesis de tiodisacáridos por S‐glicosilación mediante reacciones de sustitución nucleofílica, se utilizó el método del tricloroacetimidato. Este es un compuesto de partida en el cual la posición anomérica se activa por catálisis ácida suave en el paso de glicosilación. El método del tricloroacetimidato se utilizó ampliamente para llevar a cabo glicosilaciones de glicopiranósidos.にど Además, existen reportes acerca de la preparación y glicosilación de un ribofuranosil tricloroacetimidatoにな y un manofuranosil tricloroacetimidato,にに y algunos antecedentes de derivados galactofuranósicos. El


142

grupo de Roy y col.にぬ consideró que, frente a la amplia utilización de tricloroacetimidatos piranósicos como donores de glicosilo, la posibilidad de utilizar tricloroacetimidatos furanósicos en reacciones de glicosilación aparecía como una opción altamente promisoria. Sintetizaron por primera vez el に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐は‐O‐bencil‐が‐D‐galactofuranosil tricloroacetimidato y lo utilizaron como donor en la síntesis de disacáridos con unidades de Galf. De forma similar, existen publicaciones más recientes acerca de la utilización de este método para preparar galactofuranosil disacáridos.にね‐には En base a estos antecedentes se sintetizó un tricloroacetimidato de configuración galactofuranósica a partir de la perbenzoil Galf 岫などな岻.にぬ,にね El primer paso consistió en hidrolizar el benzoato anomérico de などな para obtener なひな. Luego de purificarlo por cromatografía en columna 岫ひひ%岻 se lo trató con tricloroacetonitrilo en condiciones básicas para dar el derivado なひに como anómero mayoritario, con muy buen rendimiento 岫ひば%岻. En su espectro de RMN‐なH la señal para el H‐な aparecía a campos bajos 岫は,ばな ppm岻 con una constante de acoplamiento Jな,に隼な Hz, indicando la configuración anomérica が. O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

OH

OBz

O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

Ac2O, HBr/AcOH

CH2Cl2, 0 °C

CCl3CN, K2CO3

101 191 192

CH2Cl2, T amb

CCl3

NH

Hasta aquí sintetizamos el donor de glicosilo 岫なひに岻. Era necesario sintetizar el tioazúcar cuyo grupo tiol actuaría como aceptor. A efectos de sintetizar el tiodisacárido Galf‐岫な蝦は岻‐Galf se preparó un は‐tiol derivado de Galf a partir de compuestos descriptos previamente. Se llevó a cabo la reacción de sustitución a partir del derivado は‐O‐ tosilado de Galf 岫なぱの岻, así como también a partir del compuesto なぱは, sustituido por triflato en la posición は. Los rendimientos resultaron similares en ambos casos pero la reacción con el triflato なぱは era mucho más rápida, entonces se optimizó la síntesis


143

utilizando este compuesto como precursor. En los espectros de RMN‐なH y なぬC de なひぬ岫Fig. はど岻 se observaron las señales características del tioacetato 岫RMN‐なH: に,ぬの ppm SCOCHぬ, なぬC: なひの,ぬ SCOCHぬ y ぬど,ね ppm SCOCHぬ岻. KSCOCH3

DMF, 70-80 °C

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs185

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SAc193

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf186

KSCOCH3

CH3CN, 0 °C

Figura はどa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なひぬ. 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-3 H-2 H-4

H-5

H-6a

(CH3)3CSiMe2

H-6b

SCOCH3

3.94.04.1 ppm

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SAc


144

Figura はどb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なひぬ. Por sustitución SNに del triflato de なぱは por tioacetato de potasio se obtuvo el compuesto なひぬ. Éste se S‐desacetiló con una solución de metóxido de sodio a baja temperatura para producir なひね. Cabe destacar que se intentó llevar a cabo la reacción de S‐desacetilación con cisteamina pero no se observó formación del producto なひね, con el tiol libre. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf

186

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SAc

193

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SH

194

KSCOCH3

CH3CN, 0 °C

NaOMe/MeOH

CH2Cl2, -15 °C

200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.88

-4.58

-4.48

-4.42

-4.03

-3.90

17.81

17.86

18.28

25.70

25.72

25.99

30.45

32.57

55.01

71.71

79.83

84.21

85.55

109.27

195.31

C-1 C-4

C-5

C-3

C-2 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-6 SCOMe

SCOCH3


145

Figura はなa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なひね. Figura はなb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なひね. El espectro de RMN‐なH de なひね岫Fig. はなa岻 mostraba un claro desplazamiento a campos más altos de las señales correspondientes a los H‐はa y H‐はb 岫に,ばひ y に,のぱ ppm, respectivamente岻. Este mismo efecto también se observó en su espectro de RMN‐なぬC 岫Fig. はなb岻 para la señal del C‐は岫にば,ひ ppm岻.

110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.83

-4.48

-4.45

-4.12

-3.97

-3.87

17.85

18.31

18.35

25.75

26.05

27.93

54.94

74.42

79.80

84.20

84.96

109.18

C-1

C-4 C-5

C-3

C-2 C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

H-1

CH3O

H-3

H-2 H-4

H-5

H-6a,6b

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

1.50 ppm

3.853.903.954.004.05 ppm

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SH


146

Teniendo el tiol なひね, se procedió al acoplamiento con el imidato なひに.にぬ En primera instancia se disolvieron aceptor y donor en CHにClに anhidro a baja temperatura y en presencia de molecular sieves 岫MS岻 en polvo 岫ね Å岻 para eliminar humedad, debido a la sensibilidad del imidato. La glicosidación procedió en presencia de TMSOTf como catalizador ácido de Lewis. O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

MS, TMSOTf

192 194

CH2Cl2, -18 °C

CCl3

NH

+S

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

O

OBz

OBz

OBz

OBz

195

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SH

Figura はにa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なひの. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

4.72 ppm5.62 ppm

H-3’

H-1’

H-4’,6’a, 6’b,1 H-2’

H-6a

H-1

CH3O

H-aromáticos

H-1’

H-2,5

H-6b H-5’

H-3,4

(CH3)2SiBut

(CH3)3CSiMe2 S

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

O

OBz

OBz

OBz

OBz


147

Figura はにb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なひの. Se obtuvo el tiodisacárido protegido なひの con un rendimiento del ねば%, en las mejores condiciones ensayadas, constituido por dos unidades de galactofuranosa unidas 岫なは岻, análogo a los compuestos descriptos en el capítulo な, que se encuentran en una gran variedad de microorganismos. En este capítulo se pone de manifiesto que, para los sistemas estudiados, es factible la glicosilación del grupo tiol que reemplaza al grupo hidroxilo de una unidad de Galf, por un derivado de Galf anoméricamente activado. Esta metodología es más conveniente que la alternativa basada en una reacción SNに entre la な‐tioGalf 岫generada in situ a partir de la glicosil isotiourea岻 y un buen grupo saliente en otro derivado adecuado de Galf. La metodología descripta se aplicó satisfactoriamente para la primera síntesis de un tiodisacárido constituido por dos unidades de galactosa en configuración furanósica.

C-1

C-6’ PhCO

C-aromáticos

C-6

C-5,5’

CH3O

C-1’,4,2, 2’,4’,3,3’

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.87

-4.44

-4.40

-4.26

-3.97

-3.71

17.79

17.86

18.25

25.70

25.75

25.98

33.66

55.00

63.52

70.31

71.50

77.85

79.73

81.47

82.65

84.43

84.51

88.14

109.14

128.32

133.52

165.16

165.43

165.65

165.98

Bibliografía. Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución nucleofílica.

149

Bibliografía. な. Ibatullin, F. M.; Selivanov, S. I.; Shavva, A. G. Synthesis にどどな, ぬ, ねなひ–ねにに. に. Ibatullin, F. M.; Shabalin, K. A.; Jänis, J. V.; Selivanov, S. I. Tetrahedron Lett. にどどな, ねに, ねのはの–ねのはば. ぬ. Reed, L. A.; Goodman, L. Carbohydr. Res. なひぱな, ひね, ひな–などど. ね. Moreau, V.; Norrild, J. C.; Driguez, H. Carbohydr. Res. なひひば, ぬどど, にばな–にばば. の. Sternberg, D.; Mandels, G. R. J. Bacteriol. なひぱど, なねね, ななひば–ななひひ. は. Fritscher, C.; Messner, R.; Kubicek, C. P. Exp. Mycol. なひひど, なね, ねどの–ねなの. ば. Hamacher, K. Carbohydr. Res. なひぱね, なにぱ, にひな–にひの. ぱ. Defaye, J.; Guillot, J.‐M. Carbohydr. Res. なひひね, にのぬ, なぱの–なひね. ひ. Petrusová, M.; Lattová, E.; Matulová, M.; Petrus, L.; BeMiller, J. N. Carbohydr. Res. なひひは, にぱぬ, ばぬ–ぱど. など. Deferrari, J. O.; Gros, E. G.; Mastronardi, I. O. Carbohydr. Res. なひはば, ね, ねぬに–ねぬね. なな. Wang, L.‐ X.; Lee, Y. C. J. Chem. Soc., Perkin Trans. I なひひは, のぱな–のひな. なに. Owen, D. J.; von Itzstein, M. Carbohydr. Res. にどどど, ぬにぱ, にぱば–にひに. なぬ. Iriarte Capaccio, C. A. Tesis Doctoral, ╉Síntesis de dihidropiranonas ópticamente activas derivadas de hidratos de carbono. Su uso como dienófilos de cicloadiciones 岷ね髪に峅╊; Departamento de Química Orgánica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, にどどぬ. なね. Binkley, R. W.; Hehemann, D. G. J. Org. Chem. なひばぱ, ねぬ, ぬにねね–ぬにねのなの. Bordoni, A.; Lima, C.; Mariño, K.; de Lederkremer, R. M.; Marino, C. Carbohydr. Res. にどどぱ, ぬねぬ, なぱはぬ–なぱはひ. なは. Mariño, K.; Marino, C.; de Lederkremer, R. M. Anal. Biochem. にどどに, ぬどな, ぬにの–ぬにぱ. なば. Soai, K.; Ookawa, A. J. Org. Chem. なひぱは, のな, ねどどど–ねどどの.

Bibliografía. Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución nucleofílica.

150

なぱ. Orgueira, H. A. Tesis Doctoral, ╉Obtención de monómeros asimétricos bifuncionales a partir de productos naturals abundantes. Su uso para la síntesis de poliamidas quirales╊; Departamento de Química Orgánica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, なひひぱ. Ravid, U.; Silverstein, R. M.; Smith, L. R. Tetrahedron なひばぱ, ぬね, なねねひ–なねのに. なひ. Guillard, J. W.; Israel, M. Tetrahedron Lett. なひぱな, にに, のなぬ–のなは. にど. Schmidt, R. R. In Modern Methods in Carbohydrate Synthesis; Khan, S. H., O’Neill, R. A., Eds.; Harwood Academic Publishers: Amsterdam, なひひは; p にど. Schmidt, R. R.; Kinzy, W. Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. なひひね, のど, にな–なにぬ. にな. Isobe, M.; Takahashi, H.; Goto, T. Tetrahedron Lett. なひひど, ぬな, ばなば−ばなぱ. にに. Fugedi, P.; Liptak, A.; Nanasi, P. Carbohydr. Res. なひぱに, などば, Cの−Cぱ. にぬ. Choudhury, A. K.; Roy, N. Carbohydr. Res. なひひぱ, ぬどぱ, にどば−になな. にね. Gallo‐Rodriguez, C.; Gandolfi, L.; de Lederkremer, R. M. Org. Lett. なひひひ, な, にねの−にねば. にの. Zhang, G.; Fu M.; Ning, J. Carbohydr. Res. にどどの, ぬねど, なのの−なのひ. には. Bohn, M. L.; Colombo, M. I.; Stortz, C. A.; Rúveda E. A. Carbohydr. Res. にどどは, ぬねな, などひは−ななどね. Bohn, M. L.; Colombo, M. I.; Pisano, P. L.; Stortz, C. A.; Rúveda, E. A. Carbohydr. Res. にどどば, ぬねに, にのにに−にのぬは.

CAPITULO ば Reacciones de apertura de tiiranos de azúcares por una な‐tioaldosa.

Capítulo ば. Resultados y Discusión

151

Reacciones de apertura de tiiranos de azúcares por una な‐tioaldosa. En el capítulo は se describió la reducción del metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosiduronato de metilo 岫なぱに岻. Esta reacción condujo a la mezcla anomérica del producto hidroxilado en la posición は岫なぱぬa y なぱぬb岻 y el producto dihidroxilado en las posiciones の y は岫なぱね岻 de configuración anomérica が. Como se mencionó anteriormente, este último resultaría de utilidad en el camino sintético que se describe en este capítulo, como precursor de の,は‐episulfuros 岫tiiranos岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

183a182

LiH4Al

THF, -18 °C

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

183b 184

+ +

El primer paso de síntesis consistió en la obtención del derivado de Galf なひは con el grupo HO de C‐の libre. Para ello se protegió selectivamente el hidroxilo primario de なぱね por tratamiento con cloruro de pivaloílo‐piridina para dar なひは.な Me3CCOCl

C5H5N, 0 °C

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

184

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OPiv

196 Piv = (CH3)3CO

25 °C

En el espectro de RMN‐なH de なひは岫Fig. はぬa岻 se observó la desaparición de la señal del HO‐は y aparición de un singulete a な,にに ppm correspondiente a los metilos del grupo protector pivaloílo 岫COC岫CHぬ岻ぬ岻. Además, las señales de H‐はa y H‐はb se desplazaron a campos más bajos respecto de las mismas señales de なぱね por efecto de la acilación 岫H‐はa: ね,にぬ; H‐はb: ね,どひ ppm岻. En forma análoga, en el espectro de RMN‐なぬC 岫Fig. はぬb岻, se confirmó la protección de la posición は principalmente, por la aparición de las señales a なばぱ,ぬ, ぬぱ,ぱ y にば,に ppm correspondientes al grupo protector mencionado.


152

Figura はぬa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なひは. Figura はぬb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なひは. A continuación, se tosiló el hidroxilo de la posición の, para tener un buen grupo saliente para la subsecuente epoxidación. En el espectro de RMN‐なH de なひば ya no se observaba la señal correspondiente al HO‐の y en cambio se observaron señales características del tosilo 岫H‐aromáticos: ば,ぱぬ y ば,ぬな; CHぬPh: に,ねぬ ppm岻 y el desplazamiento de H‐の a mayor δ debido al efecto desprotector del tosilato.

180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.91

-4.68

-4.64

-4.30

17.83

17.90

25.70

25.76

27.18

38.78

54.87

65.30

67.94

79.13

83.24

83.45

109.52

178.27

C-1

C-4

C-5 C-3,2

COC(CH3)3

C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

COC(CH3)3

COC(CH3)3

0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

3.94.04.14.2 ppm

4.72 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-3 H-2 H-4

H-1

H-5

H-6a

(CH3)3CSiMe2

HO

H-6b

COC(CH3)3

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OPiv


153

TsCl

O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OPiv

197

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OPiv

196

C5H5N, T amb.

En forma análoga se llevó a cabo esta secuencia sintética por acetilación selectiva del HO‐は y posterior tosilación del HO‐の. Se obtuvo así el derivado なひひ. En ambos casos los rendimientos resultaron prácticamente iguales, alrededor del ばど% para el paso de protección del HO‐は岫なひは ó なひぱ岻 y ひど% para el paso de tosilación 岫なひば ó なひひ岻. O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OAc

199

Ac2O, imidazol

CHCl3, T amb

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

184

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OAc

198

TsCl

C5H5N, T amb.

El espectro de RMN‐なH de なひぱ岫Fig. はねa岻 mostraba además de la desaparición de la señal del HO‐は, una señal característica del grupo CHぬCO a に,など ppm. En su espectro de RMN‐なぬC 岫Fig. はねb岻 se observaban dos señales a なばな,ど y にど,ひ ppm, correspondientes a MeCO y CHぬCO, respectivamente. Los espectros de RMN‐なH y なぬC de なひひ eran coincidentes con la estructura propuesta y similares a los del análogo なひば.


154

Figura はねa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de なひぱ. Figura はねb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de なひぱ. Ambos derivados, なひば y なひひ, se trataron con una solución de NaOMe/MeOH, y así, en un único paso de reacción se desprotegió el hidroxilo de la posición は, el cual atacó al C‐の con desplazamiento nucleofílico del tosilo, para dar el の,は‐epóxido de configuración L‐altro 岫にどど岻, por inversión de la configuración del C‐の.

170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.94

-4.70

-4.67

-4.33

17.83

17.88

20.91

25.69

25.74

54.96

66.25

68.21

79.22

83.06

83.79

109.61

170.97

C-1

C-3

C-5 C-4,2 CH3CO C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

MeCO

0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

3.94.04.14.2 ppm (CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-4 H-2

H-3

H-5

H-6a

(CH3)3CSiMe2

HO

H-6b

CH3CO

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OAc


155

O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OAc199

NaOMe/MeOH

O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OPiv197

O

OTBS

OTBS

OMe

O

200

CH2Cl2, 0 °C

NaOMe/MeOH

CH2Cl2, 0 °C

Figura はのa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどど. Figura はのb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどど. 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.88

-4.82

-4.72

-4.45

17.87

17.90

25.69

25.73

45.38

51.98

55.01

81.23

83.45

84.72

110.15

C-1

C-4 C-5 C-2 C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-3

4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

2.82.93.0 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-2, 3

H-4

H-5 H-6a

(CH3)3CSiMe2

H-6b O

OTBS

OTBS

OMe

O


156

El último paso para la obtención del tiirano consistió en tratar el epóxido にどど con tiourea en MeOH anhidro. En esta reacción se recupera la configuración D‐galacto en にどな, de acuerdo al mecanismo descripto en el capítulo に.

201

O

OTBS

OTBS

OMe

O

200

MeOH, T amb

O

OTBS

OTBS

OMe

S

(NH2)2CS

Figura ははa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどな. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-2 H-4

H-5 H-6a

(CH3)3CSiMe2

H-6b H-3

O

OTBS

OTBS

OMe

S


157

Figura ははb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどな. En los espectros de RMN‐なH de にどど岫Fig. はのa岻 y にどな岫Fig. ははa岻, se observó claramente la desaparición de las señales correspondientes a los grupos protectores de las posiciones の y は, además de las señales de los H‐はa y H‐はb a δ característicos, menores a ぬ,どど ppm. También los espectros de RMN‐なぬC 岫Fig. はのb y ははb岻 mostraban apantallamiento de las señales de los carbonos C‐の y C‐は, involucrados en la formación del anillo de tres miembros especialmente para el compuesto にどな, debido a la presencia del átomo de azufre 岫Tabla なに岻. Tabla なに. Señales características en los espectros de RMN‐なH y なぬC de los derivados なひは, なひぱ, にどど y にどな. なひはなひぱにどどにどな δ H‐の岫ppm岻ぬ,ぱぱぬ,ぱひぬ,どばぬ,どね δ H‐はa/H‐はb 岫ppm岻ね,にぬ/ね,どひね,にぬ/ね,なぬに,ぱな/に,ばぬに,ねひ/に,ぬばδ C‐の岫ppm岻はば,ひはぱ,にのに,どぬの,ぬ δ C‐は岫ppm岻はの,ぬはは,にねの,ねにな,ぱ

110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.91

-4.58

-4.57

-4.11

17.79

17.88

21.77

25.68

25.82

35.28

55.10

82.89

84.40

85.57

109.19

C-1

C-4 C-5

C-2

C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-3


158

Como se mencionó en el capítulo に, prácticamente no se cuenta con antecedentes de apertura de tiiranos para sintetizar tioglicósidos constituidos por unidades piranósicas,に,ぬ y no hay antecedentes de tioglicósidos obtenidos por apertura de tiiranos de configuración furanósica. Por lo tanto el procedimiento debió ser optimizado. Se encontró que la apertura del anillo episulfuro tenía lugar satisfactoriamente cuando se utilizaba como nucleófilo la sal de sodio de la な‐tioaldosa 岫なぱぱ岻 y para aumentar la nucleofilia del sulfuro se agregaba al medio de reacción なぱ‐crown‐は. Bajo estas condiciones de reacción optimizadas, la apertura del tiirano de にどな con el tiolato derivado de galactosa 岫なぱぱ岻,ね produjo el tiodisacárido にどに unido 岫な蝦は岻 y con una unidad furanósica como extremo reductor.

18-crown-6, DTT+

THF

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

188

OAcO

AcO OAc

S

OAc

Na

NaH, THF

OAcO

AcO OAc

OAc

201

O

OTBS

OTBS

OMe

S

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

S

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

+

+

2203

202

204

O

AcOOAc

OAc

OAc En la apertura nucleofílica del tiirano no se obtuvo el tiodisacárido にどに como único producto sino que también se aislaron el dímero にどぬ y el disulfuro にどね. La


159

formación de estos productos puede justificarse si se tiene en cuenta que el tiol にどに una vez formado está presente en el medio de reacción como tiolato de sodio. Éste es capaz de formar el disulfuro consigo mismo o con なぱぱ para dar, respectivamente, にどぬ y にどね. La mezcla de reacción se purificó por cromatografía en columna y el orden que se les dio a los compuestos corresponde al orden de elución. Igualmente, cabe aclarar que los productos にどぬ y にどね se obtuvieron en las primeros intentos de síntesis del tiodisacárido にどに, pero una vez ajustadas las condiciones de reacción, se obtuvo prácticamente el tiodisacárido にどに como único producto 岫ひぱ%岻. Los tres compuestos fueron caracterizados mediante espectrocopía de RMN mono y bidimensional. Sus espectros se muestran a continuación.

Figura はばa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどに. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.5 ppm

4.64.7 ppm(CH3)2SiBut

H-1

H-3’

H-6a,5, 6b

(CH3)3CSiMe2

H-2’

CH3O

H-4’

H-1

H-3,4, 6’a,6’b H-2

H-5’ H-1’

H-1’

HS

CH3CO

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc


160

Figura はばb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどに.

Figura はぱa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどぬ. 0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.5 ppm

4.604.65 ppm

(CH3)2SiBut

H-1 H-3’

H-6a,5, 6b

(CH3)3CSiMe2

H-2’

CH3O

H-4’

H-1

H-3,6’a, 6’b,5’,2

H-1’

H-1’

H-4

CH3CO

180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.95

-4.58

-4.33

-4.15

17.80

17.86

20.55

20.64

20.72

25.74

25.79

36.76

41.71

55.05

61.26

67.08

67.24

71.81

74.43

80.24

81.21

83.72

84.33

109.02

169.50

170.00

170.18

170.28

C-1

C-6’ MeCO C-6

C-5

CH3O

C-2,1’, 4,3

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

CH3CO C-5’,3’,

2’,4’

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc2


161

Figura はぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどぬ.

Figura はひa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, 岫CDぬ岻にCO岻 de にどね. 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

H-2’,2’’ 3’,3’’

(CH3)3CSiMe2

H-1’’,1’

CH3O

H-4’’

4’

H-2,3,4,5’, 6’a,6’b,5’’, 6’’a,6’’b

CH3CO

H-6a H-6b

H-5

180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.87

-4.48

-4.22

-4.03

17.85

17.89

20.59

20.66

20.77

25.82

25.85

32.57

53.96

55.10

60.99

67.09

67.61

71.81

74.30

80.03

82.12

84.13

84.54

109.02

169.48

170.01

170.22

170.32

C-1 C-6’ MeCO

C-6 C-5

CH3O

C-1’,2, 4,3

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

CH3CO

C-5’,3’, 2’,4’

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

S

O

AcOOAc

OAc

OAc


162

Figura はひb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, 岫CDぬ岻にCO岻 de にどね. En los tres casos pudo confirmarse que la apertura del anillo tiirano ocurrió por el ataque del tiolato なぱぱ al C‐は de にどな. Además se acetiló una fracción del tiodisacárido obtenido y en el S‐acetato にどの se observó el corrimiento de las señales correspondientes a la posición の a campos más bajos 岫 H‐の: ぬ,ばば; C‐の: ねの,な ppm, Fig. ばど岻 respecto de las mismas señales en にどに岫 H‐の: ぬ,どね; C‐の: ねな,ば ppm, Fig. はば岻.

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

202

S

O

OTBS

OTBS

SAc

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

205

Ac2O

C5H5N

180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.60

-4.21

-3.81

-3.66

18.51

20.51

20.64

20.69

20.77

20.81

26.26

26.31

26.34

33.36

55.17

55.50

62.00

62.19

68.22

68.24

68.29

68.43

72.37

72.50

75.09

75.58

81.65

83.17

84.56

85.51

91.45

109.79

169.86

170.00

170.16

170.53

170.64

170.77

C-1 C-6’, 6’’

MeCO C-6

C-1’’

C-5, CH3O

C-2,1’, 4,3

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

CH3CO C-5’’,5’,3’, 3’’,2’,2’’,4’,

4’’


163

Figura ばどa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどの. Figura ばどb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどの. En base a los resultados satisfactorios que se obtuvieron utilizando este procedimiento para obtener un tiodisacárido con una unidad galactofuranósica diazufrada en el extremo reductor, se llevó a cabo también a partir del tiirano de configuración opuesta para obtener así tiodisacáridos con una unidad

C-1

MeCO C-6

C-5 CH3O

C-2,1’, 3,4

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2 (CH3)2SiBut

CH3CO

C-5’,3’, 2’,4’,6’

SCOMe

200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.97

-4.83

-4.55

-4.17

17.84

17.87

20.59

20.65

20.67

20.78

25.76

25.81

30.93

32.59

45.09

55.18

61.09

67.33

67.46

72.03

74.40

79.30

80.44

82.09

84.54

108.88

169.73

170.02

170.27

170.35

194.94

SCOCH3

5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

3.753.80 ppm

(CH3)2SiBut

H-1 H-3’

(CH3)3CSiMe2

H-2’

CH3O

H-4’

H-5,6’a, 6’b,2,3

H-4 H-6b

H-1’

CH3CO

H-6a

H-5

H-5

SCOCH3

S

O

OTBS

OTBS

SAc

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc


164

altrofuranósica, de configuración L, en dicho extremo. Para ello, fue necesario sintetizar previamente el epóxido にどば, de configuración opuesta en C‐の respecto de にどど. Para sintetizar el epóxido mencionado, se procedió en forma análoga a la descripta para sintetizar にどど, pero en este caso se empleó el derivado tosilado en HO‐は y HO‐の libre. Este compuesto 岫にどは岻 se preparó a partir del precursor なぱね por tosilación selectiva del hidroxilo primario. TsCl

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTs

206

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

184

C5H5N, T amb.

Figura ばなa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどは. 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

3.903.954.004.054.10 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

H-3 H-4 H-5

H-6a,6b

(CH3)3CSiMe2 H-2

CH3O

HO H-aromáticos

CH3Ph

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTs


165

Figura ばなb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどは. Como era de esperar, en el espectro de RMN‐なH de にどは岫Fig. ばなa岻 se observó la desaparición de la señal del HO‐は y la aparición de señales características del grupo tosilo y las señales de los H‐はa y H‐はb se desplazaron a campos más bajos con respecto al compuesto que le dio origen 岫 Hはa y H‐はb: ね,どぱ ppm岻. Este mismo efecto se observó en su espectro de RMN‐なぬC 岫Fig. ばなb岻, en el cual la señal del C‐は se desplazó の ppm. Este compuesto se obtuvo suficientemente puro para proceder la síntesis hasta obtener el tiirano にどぱ, en forma análoga, como ya se mencionó, a la descripta para obtener にどな. O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTs

206 207

O

OTBS

OTBS

OMe

S

208

MeOH, T amb

O

OTBS

OTBS

OMe

O

(NH2)2CSNaOMea/MeOH

CH2Cl2, 0 °C

150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.97

-4.76

-4.67

-4.41

17.81

17.84

21.63

25.68

54.87

67.84

70.69

78.99

82.73

83.37

109.49

127.99

129.84

132.92

144.82

C-1 C-4 C-5 C-2

C-6 CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-3

CH3Ph

C-aromáticos


166

Figura ばにa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどば. Figura ばにb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどば. 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.93

-4.86

-4.60

-4.20

17.87

25.64

25.81

44.22

51.69

55.27

80.11

82.41

84.27

109.38

C-1 C-4 C-5C-2

C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

C-3

0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

3.73.83.94.0 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-2 H-4

H-5 H-6a

(CH3)3CSiMe2

H-6b

H-3

O

OTBS

OTBS

OMe

O


167

Figura ばぬa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどぱ. Figura ばぬb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどぱ. En los espectros de RMN‐なH y なぬC de cada uno de estos compuestos se observaron señales características, análogas a las del epóxido y tiirano de configuración opuesta previamente sintetizados. Los valores de desplazamiento químico de las mismas se informan en la Tabla なぬ.

110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.83

-4.65

-4.56

-4.32

17.88

23.53

25.71

25.76

34.51

54.96

82.66

83.26

89.87

110.39

C-1 C-4

C-5 C-2

C-6

CH3O

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut C-3

0.51.01.52.02.53.03.54.04.5 ppm

3.63.84.0 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

CH3O

H-2

H-4

H-5

(CH3)3CSiMe2

H-6b

H-3

H-6a

O

OTBS

OTBS

OMe

S


168

Tabla なぬ. Señales características en los espectros de RMN‐なH y なぬC de los derivados にどは, にどば y にどぱ. にどはにどばにどぱ δ H‐の岫ppm岻ぬ,ぱひぬ,どひぬ,どね δ H‐はa/H‐はb 岫ppm岻ね,どに岫にH岻に,ぱぬ/に,ばのに,のぬ/に,ぬど δ C‐の岫ppm岻はば,ぱのな,ばぬね,の δ C‐は岫ppm岻ばど,ばねね,ににぬ,の Una vez sintetizado el tiirano にどぱ se llevó a cabo la reacción de glicosilación de なぱぱ para preparar el correspondiente tiodisacárido, en las condiciones descriptas previamente para el análogo にどな. En este caso se obtuvieron dos productos, el tiodisacárido deseado 岫にどひ岻 y el disulfuro 岫になど岻. Ambos se separaron por cromatografía en columna. Luego de ajustar las condiciones, se mejoró el rendimiento para la obtención del tiodisacárido にどひ hasta un ぱね%.

O

AcOOAc

OAc

OAc

18-crown-6, DTT+

THF

S

O

OTBS

OTBS

HS

OMe8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

188

OAcO

AcO OAc

S

OAc

Na

NaH, THF

OAcO

AcO OAc

OAc

208

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

+

209

210

O

OTBS

OTBS

OMe

S

S

S


169

Figura ばねa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de にどひ. Figura ばねb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de にどひ. 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.84

-4.66

-4.39

-4.27

17.82

20.57

20.63

20.66

20.79

25.69

25.71

36.65

42.98

54.73

61.20

67.12

67.56

71.88

74.43

80.73

82.77

85.06

88.97

110.19

169.50

170.04

170.23

170.28

C-1 C-6’

MeCO C-6

C-5

CH3O

C-2,1’, 4,3

(CH3)3CSiMe2

CH3CO

C-5’,3’, 2’,4’

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.5 ppm

4.64.7 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

H-3’

H-6a,5, 6b

(CH3)3CSiMe2

H-2’

CH3O

H-4’

H-1

H-3, 6’a,6’b H-2,

4,5’ H-1’

H-1’

CH3CO

S

O

OTBS

OTBS

HS

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc


170

Figura ばのa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, 岫CDぬ岻にCO岻 de になど. Figura ばのb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, 岫CDぬ岻にCO岻 de になど. Se mencionó que en la etapa de tioglicosilación, el grupo tiol de ぱ se activó para el ataque nucleofílico al anillo tiirano por formación del correspondiente tiolato. Aún así, la configuración anomérica se mantuvo durante la reacción, porque la

180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.52

-4.27

-3.96

-3.75

18.44

18.56

20.53

20.60

20.65

20.68

20.84

20.89

26.22

26.28

32.82

48.89

55.09

62.21

62.26

68.12

68.45

72.48

72.52

75.08

75.19

81.69

82.73

84.84

85.28

86.82

110.38

169.93

170.06

170.17

170.55

170.69

170.73

C-1 C-6’, 6’’

MeCO C-6 CH3O

C-4,1’’, 2,1’,3

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut

CH3CO C-5’’,5’,3’, 3’’,2’,2’’,4’,

4’’

C-5

5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

(CH3)2SiBut

H-1

H-2’,2’’ 3’,3’’

(CH3)3CSiMe2

H-1’

CH3O

H-1’’

CH3CO

H-6a, 6b

H-2,3,4,5’, 6’a,6’b,5’’, 6’’a,6’’b

H-4’’

4’

H-5

O

AcOOAc

OAc

OAc

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc S

S


171

anomerización del glicosiltiolato es muy lenta.の Además en los espectros de RMN‐なH de todos los productos obtenidos se observó una constante de acoplamiento Jな’,に’ 噺など Hz, indicativa de una configuración が piranósica. A partir de los derivados にどに y にどひ obtendríamos los tiodisacáridos libres por desililación con FTBA なM, seguida de desacetilación con MeOH:EtぬN:HにO ぬ:な:ぬ. Una vez obtenidos los productos se purificaron por elución a través de una columna rellena de resina de intercambio iónico mixta para desionizarlos y luego a través de una mini columna de fase reversa. Sin embargo, en base al análisis elemental y los datos espectroscópicos de ambos compuestos, no se obtuvieron los metil glicósidos deseados, sino los disulfuros になな y になに. Por otra parte, los compuestos にどに y にどひ poseen un grupo tiol libre que es suceptible de ser glicosidado. En realidad cuando se diseñó la metodología de apertura del tiirano por una な‐tioaldosa, se previó la posibilidad de obtener tiodisacáridos ramificados en C‐の y C‐は de la Galf.

S

O

OTBS

OTBS

HS

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc209

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc202

S

O

OH

OH

S

OMe

212

S

O

OH

OH

S

OMe

OHO

HO OH

OH211

2) MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

1) FTBA

2) MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

1) FTBA

2

2

O

HOOH

OH

OH Las Figuras ばは y ばば muestran los respectivos espectros de RMN de los disulfuros になな y になに.


172

Figura ばはa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻 de になな. Figura ばはb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻 de になな. 35404550556065707580859095100105110115 ppm

33.53

55.48

55.70

62.76

70.66

71.29

76.16

79.87

80.52

82.45

84.06

87.59

110.03

C-1 C-6’

C-6 C-5

CH3O

C-3 C-4’

C-4

C-1’

C-2

C-2’,5’

C-3’

3.13.23.33.43.53.63.73.83.94.04.14.24.34.44.54.64.7 ppm

H-1

H-3’ H-6a

H-6’b CH3O H-4’

H-3

H-2 H-6’a H-1’ H-5

H-2’,5’

H-6b

H-4

S

O

OH

OH

S

OMe

OHO

HO OH

OH2


173

Figura ばばa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻 de になに. Figura ばばb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻 de になに. Entonces, a partir del tiodisacárido にどに se planteó la síntesis de un tiotrisacárido, incorporando una nueva unidad de Galf en el grupo SH de C‐の. Se consideró incorporar una furanosa porque ésta tendría menor impedimento estérico, ya que el grupo SH está impedido estéricamente por los ésteres de sililo 岫TBS岻

35404550556065707580859095100105110 ppm

31.56

55.38

56.06

62.69

64.30

70.57

71.55

76.18

80.13

80.60

83.33

85.85

87.71

110.35

C-1 C-6’

C-6 C-5

CH3O C-3

C-4’ C-2

C-1’

C-4

C-2’,5’

C-3’

3.13.23.33.43.53.63.73.83.94.04.14.24.34.44.54.64.74.8 ppm

H-1 H-6a

H-6’b

H-4’ H-3

H-2

H-6’a H-1’

H-2’,5’, 3’,5, CH3O

H-6b

H-4

S

O

OH

OH

S

OMe

2

O

HOOH

OH

OH


174

voluminosos de C‐に y C‐ぬ, además de la unidad piranósica peracetilada en la posición は. Como habíamos utilizado con éxito el método del tricloroacetimidato para sintetizar el tiodisacárido Galf‐岫な蝦は岻‐Galf, según se describió en el capítulo anterior, decidimos utilizarlo también en este caso para obtener un tiotrisacárido. Siguiendo la misma metodología, se acopló el tiol にどに con el tricloroacetimidato なひに, descripto previamente. Se agitó la suspensión en CHにClに anhidro de aceptor, donor y molecular sieves 岫MS岻 en polvo 岫ね Å岻 a baja temperatura. La glicosidación procedió en presencia de TMSOTf como catalizador, con la formación del trisacárido になぬ岫にひ%岻. O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

MS, TMSOTf

192

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

202

CH2Cl2, -18 °C

CCl3

NH

+

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAcO

OBz

OBz

OBz

OBz213 En el espectro de RMN‐なH de になぬ岫Fig. ばぱa岻 se observó la desaparición de la señal del HS─ 岫な,ひに ppm岻 y la presencia de señales de la nueva unidad furanósica, principalmente las señales de H‐aromáticos correspondientes a los grupos protectores y una nueva señal para un hidrógeno anomérico de configuración が岫H‐な’’: の,ひの ppm, Jな’’,に’’ 隼な Hz岻.


175

Figura ばぱa. Espectro de RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 de になぬ. Figura ばぱb. Espectro de RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻 de になぬ. El ditiotrisacárido になぬ posee la unidad Galf‐S‐岫な蝦の岻‐Galf cuyo análogo oxigenado es componente de glicoconjugados de microorganismos.

180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 ppm

-4.92

-4.53

-4.26

-4.16

17.74

17.83

20.51

20.56

20.60

20.65

25.72

25.79

33.15

46.28

55.11

61.05

63.73

67.12

67.48

70.40

71.77

74.22

77.66

80.11

81.93

82.39

83.09

83.32

84.43

88.22

108.88

128.31

133.56

165.20

165.40

165.62

165.99

169.49

169.90

170.16

170.25

PhCO

C-aromáticos

MeCO

CH3CO

C-1 C-6’ C-6 C-5

CH3O

C-2,1’,2’’, 4,4’’,3,3’’

(CH3)3CSiMe2

(CH3)3CSiMe2

(CH3)2SiBut C-5’,3’,5’’, 2’,4’,6’’

C-1’’

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

(CH3)2SiBut

H-4’’,6’’a, 6’’b,1,1’

H-6a,5, 6b, CH3O

(CH3)3CSiMe2

H-5’’,1’’, 3’’,2’’,4’,2’,3’

CH3CO

H-aromáticos

H-4,3,6a, 6b,2,5’

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAcO

OBz

OBz

OBz

OBz


176

En este capítulo se ha demostrado la utilidad de los tiiranos derivados de azúcares para obtener ditiotrisacáridos ramificados con enlaces tioglicosídicos, formados sobre dos carbonos vecinos del monosacárido central. El procedimiento descripto constituye una nueva metodología para la obtención de este tipo de ditiotrisacáridos cuyos pasos claves son la apertura nucleofílica de un episulfuro de azúcar por una な‐tioaldosa y la glicosilación del tiol resultante de dicha apertura.

Bibliografía. Reacciones de apertura de tiiranos por una な‐tioaldosa

177

Bibliografía. な. Gandolfi‐Donadío, L.; Gallo‐Rodriguez, C.; de Lederkremer, R. M. J. Org. Chem. にどどぬ, はぱ, はひにぱ−はひぬの. に. Schmidt, R. R. In Modern Methods in Carbohydrate Synthesis; Khan, S. H., O’Neill, R. A., Eds.; Harwood Academic Publishers: Amsterdam, なひひは; p にど. Schmidt, R. R.; Kinzy, W. Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. なひひね, のど, にな–なにぬ. ぬ. Choudhury, A. K.; Roy, N. Carbohydr. Res. なひひぱ, ぬどぱ, にどば−になな. ね. Manzano, V. E.; Uhrig, M. L.; Varela, O. J. Org. Chem. にどどぱ, ばぬ, ばににね−ばにぬの. の. Szilágyi, L.; Varela, O. Curr. Org. Chem. にどどは, など, なばねの−なばばど.

Capítulo ぱ. Experimental.

179

Parte experimental ぱ.な. Instrumentos y métodos generales Las cromatografías en capa delgada analítica 岫CCD岻 se realizaron en láminas de aluminio cubiertas de sílica gel はど Fにのね岫Merck岻 de ど,に mm de espesor. Las mismas se revelaron por exposición a luz UV de にのね nm, y/o por inmersión en una solución de ácido sulfúrico の% en etanol, que contenía ど,の% de p‐anisaldehído, y posterior calentamiento. Para las cromatografías en columna se utilizó como fase fija sílica gel はど岫malla にぬど‐ねどど, Merck岻. Los solventes de desarrollo se indican en cada caso. Los puntos de fusión se determinaron con un aparato Fisher‐Johns y no están corregidos. Los poderes rotatorios se midieron en un polarímetro digital Perkin‐Elmer modelo ぬねぬ en celdas de な dm de longitud a にの °C con la concentración y los solventes indicados en cada caso en particular. Los espectros de resonancia magnética nuclear 岫RMN岻 se adquirieron en un espectrómetro Bruker AC にどど o Bruker AMX‐のどど según se especifica. Para las soluciones en CDClぬ se usó TMS como estándar interno. Los espectros de RMN‐なH fueron completamente asignados mediante experimentos COSY にD. Para asignar los espectros de RMN‐なぬC se realizaron experimentos HSQC にD Los espectros de masa se realizaron en la Université de Picardie Jules Verne, Amiens, Francia y en el UMYMFOR‐CONICET‐FCEyN, UBA. Los microanálisis de los productos nuevos se realizaron por UMYMFOR‐CONICET‐FCEyN y en algunos casos en el INQUIMAE, FCEyN, UBA. ぱ.に. Purificación de solventes Todos los solventes se purificaron por destilación. En algunos casos requirieron un tratamiento adicional para poder emplearlos en las reacciones en condiciones anhidras, como se indica a continuación.


180

Diclorometano: se secó por reflujo sobre PにOの durante に h y luego se destiló. Se guardó sobre tamices moleculares de ぬ Å. Metanol: se secó por tratamiento con Mg/Iに, se reflujó durante な h y se destiló. Se guardó sobre tamices moleculares de ね Å. Piridina y trietilamina: se reflujaron sobre KOH y se destilaron, conservándose luego sobre KOH. Tetrahidrofurano: La solución azul de THF con Na/benzofenona se reflujó durante な h. Luego se destiló el THF y se utilizó. Síntesis ぱ.ぬ.な Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada. に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひに岻 y に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひぬ岻. O

OAc

O OCHMe235

Et3N+

S

O

OAc

O OCHMe293 (36%)

O

OBzOBz

BzO

S

O

OAc

O OCHMe2

92 (45%)

O

OBzOBz

BzO

+

O

OBzOBz

BzO OAc

89

F3B.OEt2, CH3CN

O

OBzOBz

BzO SC(NH)NH2

(NH2)2CS

90Una solución de な‐O‐acetil‐に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosa 岫ぱひ, ぬどど mg, ど,のひ mmol岻, tiourea 岫のど mg, ど,はは mmol岻 y FぬB.OEtに岫ばぱ µl, ど,はに mmol岻 en acetonitrilo anhidro 岫など mL岻 se agitó a reflujo durante な h. La sal de tiouronio resultante ひど, luego de evaporar el solvente, mostró los siguientes datos espectroscópicos: RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺ひ,にば, ひ,なひ岫にs, にH cada uno, に NHに岻, ぱ,どね–ば,ねは岫m, H‐aromáticos岻, は,ねな岫d, なH, Jな,に噺ね,は Hz, H‐な岻, の,ひは, の,ひな岫にt, にH, H‐に, H‐ぬ岻, ね,ひな岫m, なH, H‐ね岻, ね,はば岫dd, なH, Jね,のa 噺ぬ,ば, Jのa,のb 噺なに,に Hz, H‐のa岻, ね,のひ岫dd, なH, Jね,のb 噺ね,の, Jのa,のb 噺なに,に Hz, H‐のb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺なはは,ば岫SC岫NHに岻に岻, なはの,の, なはね,ぱ, なはね,の岫PhCO岻, なぬね,ぬ–なにぱ,に岫C‐aromáticos岻, ぱね,に岫C‐な岻, ぱな,ね, ばね,に, ばな,ば岫C‐に, ぬ, ね岻, はぬ,ば岫C‐の岻. La solución original de ひど en acetonitrilo, se enfrió a


181

−なぱ °C y se le agregó la enona ぬの岫などど mg, ど,ねね mmol岻 y EtぬN 岫ににど µl, な,のぱ mmol岻 en dos fracciones cada ぬど min. Después de に,の h de agitación, la muestra reveló por CCD 岫CHにClに/EtOAc, なの:な岻 la presencia de dos compuestos principales con Rf 噺ど,はど y ど,ねひ. Se llevó a cabo la purificación de la mezcla por columna cromatográfica 岫CHClぬ/EtOAc, ぱど:な→など:な岻 aislándose primero el compuesto menos polar ひに岫なねど mg, ねの%岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どぱ–ば,ぬに岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ぱひ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺の,な, Jぬ’,ね’ 噺は,ど Hz, H‐ぬ’岻, の,はひ岫dd, なH, Jな’,に’ 噺ぬ,ば Hz, H‐に’岻, の,のに岫d, なH, H‐な’岻, ね,ばば岫m, なH, Jね,の噺な,の Hz, H‐の岻, ね,ばね岫br s, なH, H‐な岻, ね,ばな岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ば, Jの’a,の’b 噺なな,は Hz, H‐の’a岻, ね,はば岫m, なH, H‐ね’岻, ね,のぱ岫dd, なH, Jね’,の’b 噺ね,の Hz, H‐の’b岻, ね,にば岫dd, なH, Jの,はa 噺は,ぱ, Jはa,はb 噺なな,の Hz, H‐はa岻, ね,にね岫dd, なH, Jの,はb 噺の,ぬ Hz, H‐はb岻, ぬ,ひひ岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ぱな岫m, なH, H‐ね岻, ぬ,なは岫dd, なH, Jぬax,ね噺ね,ば, Jぬax,ぬec 噺なの,に Hz, H‐ぬax岻, に,ぱぬ岫dd, なH, Jぬec,ね噺に,ど Hz, H‐ぬec岻, に,どぱ岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,なば, な,なに岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひぱ,ひ岫C‐に岻, なばど,ね岫MeCO岻, なはは,な, なはの,に, なはの,な岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひば,ひ岫C‐な岻, ぱね,に岫C‐な’岻, ぱど,ね岫C‐ね’岻, ばの,の岫C‐に’岻, ばに,は, ばな,ば岫C‐ぬ’, MeにCHO岻, はぱ,ね岫C‐の岻, はね,ね, はね,ぬ岫C‐の’, は岻, ねね,ぱ岫C‐ね岻, ねに,ば岫C‐ぬ岻, にぬ,ぬ, にな,ぱ岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. Las siguientes fracciones de la columna correspondían al compuesto mayoritario ひぬ岫ななど mg, ぬは%岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ–ば,ぬど岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ひは岫d, なH, Jな’,に’ 噺は,ど Hz, H‐な’岻, の,ばに岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ね,は, Jに’,ぬ’ 噺は,ね Hz, H‐ぬ’岻, の,はの岫dd, なH, H‐に’岻, ね,ばぱ–ね,ばな岫m, ねH, H‐な, H‐ね’, H‐の, H‐の’a岻, ね,はな岫dd, なH, Jね’,の’b 噺ね,ど, Jの’a,の’b 噺なに,ど Hz, H‐の’b岻, ね,にに岫dd, なH, Jの,はa 噺は,は, Jはa,はb 噺なな,ぬ Hz, H‐はa岻, ね,なぱ岫dd, なH, Jの,はb 噺の,ば Hz, H‐はb岻, ぬ,ひぱ岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO峅, ぬ,はぬ岫m, なH, H‐ね岻, ぬ,にぬ岫dd, なH, Jぬax,ね噺ぬ,ぱ, Jぬax,ぬec 噺なね,ぱ Hz, H‐ぬax岻, に,ひぱ岫dd, なH, Jぬec,ね噺に,ど Hz, H‐ぬec岻, に,どの岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,には, な,なぱ, 岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひひ,の岫C‐に岻, なばど,ね岫MeCO岻, なはは,な, なはの,は, なはの,な岫PhCO岻, なぬぬ,の–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひぱ,ど岫C‐な岻, ぱぱ,ぱ岫C‐な’岻, ばひ,ど岫C‐ね’岻, ばに,ど岫C‐に’岻, ばな,ば岫MeにCHO岻, ばど,ひ岫C‐ぬ’岻, はぱ,の岫C‐の岻, はね,ぬ岫C‐は岻, はぬ,の, 岫C‐の’岻, ねぱ,は岫C‐ね岻, ねね,ひ岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にな,ぱ岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. Los tiodisacáridos ひに y ひぬ aparecían levemente contaminados con ぬの, luego de la elución de la columna cromatográfica.


182

に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひは岻. a岻 A partir de な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosa 岫ひねa岻 O

BzO

OBz

BzO

OBz

94a

O

BzO

OBz

BzO

SC(NH)NH2

(NH2)2CS

F3B.OEt2, CH3CN

95

O

OAc

O OCHMe2

35

Et3N

S

O

OAc

O OCHMe296 (63%)

O

BzO

OBz

BzO

+

A una solución de な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosaな岫ひねa, なねど mg, ど,にの mmol岻 en acetonitrilo anhidro 岫の mL岻, se le adicionó tiourea 岫にな mg, ど,にぱ mmol岻 y FぬB.OEtに岫なはに µl, な,にひ mmol岻. La mezcla se calentó a reflujo por な h hasta comprobar la desaparición del compuesto de partida 岫ひねa岻 y la aparición de un compuesto de Rf 噺ど岫tolueno/EtOAc, ぬ:な岻. En este punto se evaporó el solvente y se obtuvo la sal de isotiouronio ひの como un jarabe, a la cual se le realizó el correspondiente análisis espectroscópico obteniéndose los siguientes resultados: RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺ひ,にひ, ひ,なば岫にs, にH cada uno, に NHに岻, ぱ,どは–ば,ぬの岫m, H‐aromáticos岻, は,はば岫br s, なH, H‐な岻, の,ばね岫br s, なH, H‐に岻, の,ばに岫d, なH, Jぬ,ね噺ね,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ね,ぱぱ岫m, なH, Jね,の噺ぬ,な, Jね,の’ 噺ね,ね Hz, H‐ね岻, ね,ばね岫dd, なH, Jの,の’ 噺なに,ぬ Hz, H‐の岻, ね,ばど岫dd, なH, H‐の’岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺なはば,ひ岫SC岫NHに岻に岻, なはば,ど, なはは,ど, なはの,ね, なはの,に岫PhCO岻, なぬね,は−なにぱ,ば岫C‐aromáticos岻, ぱば,ぱ岫C‐な岻, ぱに,ぱ, ぱな,ひ岫C‐に, ね岻, ばば,ぬ岫C‐ぬ岻, はぬ,な岫C‐の岻. A la mezcla original en acetonitrilo, sin más tratamiento, se la enfrió a −なぱ °C y se le agregó に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ,ね‐didesoxi‐ゎ‐D‐glicero‐hex‐ぬ‐enopiranosid‐に‐ulosa 岫ぬの, ねば mg, ど,にな mmol岻 y EtぬN 岫にぱひ µl, に,どぱ mmol岻 en dos fracciones cada ぬど min. La mezcla se agitó a −なぱ °C por ぬ h. La CCD 岫CHにClに/EtOAc, なの:な岻 reveló la presencia de un producto mayoritario 岫Rf 噺ど,ばの岻 y uno minoritario, correspondiente a la enona ぬの岫Rf 噺ど,のね岻 sin reaccionar. La mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante columna cromatográfica 岫CHClぬ/EtOAc, ひぱ:な岻 para dar el tiodisacárido ひは岫ひね mg, はぬ%岻, levemente contaminado con la enona ぬの. Tiodisacárido ひは: RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺


183

ぱ,など–ば,ばぬ岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,はね岫br s, なH, H‐な’岻, の,はに岫d, なH, Jに’,ぬ’ ど, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ぬ’岻, の,のに岫br s, なH, H‐に’岻, ね,ぱね岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ど, Jの’a,の’b 噺なな,は Hz, H‐の’a岻, ね,ばひ–ね,ばは岫m, にH, H‐ね’, H‐の岻, ね,ばは岫br s, なH, H‐な岻, ね,ばぬ岫dd, なH, Jね’,の’b 噺ね,は Hz, H‐の’b岻, ね,ぬひ岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,ど, Jはa,はb 噺なな,ば Hz, H‐はa岻, ね,ぬは岫dd, なH, Jの,はb 噺の,に Hz, H‐はb岻, ね,どな岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ばは岫m, なH, H‐ね岻, ぬ,にに岫dd, なH, Jぬax,ぬec 噺なね,ひ, Jぬax,ね噺ね,ば Hz, H‐ぬax岻, に,ひね岫dd, なH, Jぬec,ね噺な,ぱ Hz, H‐ぬec岻, に,どば岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,にぱ, な,なひ岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひひ,ぬ岫C‐に岻, なばど,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,は, なはの,ね岫PhCO岻, なぬぬ,ば−なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひぱ,ど岫C‐な岻, ぱひ,は岫C‐な’岻, ぱぬ,ぬ岫C‐に’岻, ぱな,ど岫C‐ね’岻, ばば,ば岫C‐ぬ’岻, ばな,ば岫MeにCHO岻, はぱ,の岫C‐の岻, はね,ね岫C‐は岻, はぬ,に岫C‐の’岻, ねぱ,の岫C‐ね岻, ねね,に岫C‐ぬ岻, にぬ,ぬ, にな,ぱ岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. b岻 A partir de な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐β‐D‐arabinofuranosa 岫ひねb岻 O

BzO

OBz

BzO OBz

94b

O

BzO

OBz

BzO

SC(NH)NH2

(NH2)2CS

F3B.OEt2, CH3CN

95

O

OAc

O OCHMe2

35

Et3N

S

O

OAc

O OCHMe296 (57%)

O

BzO

OBz

BzO

+

El procedimiento que se describió anteriormente para la な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐arabinofuranosa 岫ひねa岻, también se llevó a cabo para realizar la tioglicosidación de ぬの a partir de su análogo de configuración anomérica 岷な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐‐D‐arabinofuranosa, ひねb 岫なねど mg, ど,にの mmol岻峅, reacción que condujo nuevamente a ひは岫ぱの mg, のば%岻.


184

に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐xilofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひひ岻 y に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐xilofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫などど岻. Et3N

F3B.OEt2, CH3CN

(NH2)2CS O

OAc

O OCHMe235

+

S

O

OAc

O OCHMe2

100

O

OBz

OBz

BzO

S

O

OAc

O OCHMe2

99

O

OBz

OBz

BzO

+

O

OBz

OBz

BzO

OBz

97

O

OBzOBz

BzO SC(NH)NH2

98

La sal de isotiouronio ひぱ岷岫RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺ひ,にぱ–ひ,なひ岫にs, にH cada uno, に NHに岻, ぱ,など–ば,ねぱ岫m, にどH, H‐aromáticos岻, は,ねね岫br s, なH, H‐な岻, は,どに岫d, なH, Jぬ,ね噺ね,は Hz, H‐ぬ岻, の,ばぱ岫br s, なH, H‐に岻, の,なに岫c, なH, Jね,の Jね,の’ 噺の,ど Hz, H‐ね岻, ね,はね岫m, にH, H‐の, H‐の’岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺なはば,ば, なはば,ね, なはの,ば, なはね,は岫に岻岫PhCO 髪 SC岫NHに岻に岻, なぬね,は–なにぱ,の岫C‐aromáticos岻, ぱは,ど岫C‐な岻, ぱど,ぱ, ぱど,は岫C‐に, ね岻, ばの,ど岫C‐ぬ岻, はに,の岫C‐の岻峅 se sintetizó de manera habitual a partir del reactivo comercial: な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐xilofuranosa 岫ひば, にどど mg, ど,ぬの mmol岻, tiourea 岫ぬど mg, ど,ぬひ mmol岻 y FぬB.OEtに岫はば µl, ど,のぬ mmol岻 en una solución de acetonitrilo anhidro 岫ば mL岻, sometida a reflujo durante ぬど min. Posteriormente, se enfrió la solución y se hizo reaccionar al compuesto ひぱ con la enona ぬの岫はね mg, ど,にぱ mmol岻 y EtぬN 岫ぬのど µl, に,のに mmol岻 a ど °C durante ぬ,の h, para dar una mezcla な,ね:な岫estimada por RMN‐なH岻 de los tiodisacáridos ひひ y などど. El isómero が‐D‐xilofuranosilo 岫ひひ岻, pudo ser sólo parcialmente purificado por columna cromatográfica utilizando una mezcla de CHClぬ/EtOAc 岫ぱの:な蝦ばど:な岻 como solvente de elución. Datos espectroscópicos seleccionados para ひひ y などど: Compuesto ひひ: RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,ねば岫d, なH, Jな’,に’ 噺な,ね Hz, H‐な’が岻, ね,ばぬ岫br s, なH, H‐な岻, ぬ,ぱば岫m, なH, H‐ね岻, ぬ,にに岫dd, なH, Jぬax,ね噺ね,ひ, Jぬax,ぬec 噺なの,に Hz, H‐ぬax岻, に,ぱは岫dd, なH, Jぬec,ね噺な,ぱ Hz, H‐ぬec岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひぱ,ぱ岫C‐に岻, ひば,ひ岫C‐な岻, ぱの,は岫C‐な’岻, ぱな,は, ばひ,ぱ岫C‐に’, ね’岻, ばの,に岫C‐ぬ’岻, ねの,ぬ岫C‐ね岻, ねに,は岫C‐ぬ岻. Compuesto などど: RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺は,どど岫d, なH, Jな’,に’ 噺は,ど Hz, H‐な’ゎ岻, ね,ばは岫br s, なH, H‐な岻, ぬ,はの岫m, なH, H‐ね岻, ぬ,なひ岫dd, なH, Jぬax,ね噺ね,ば, Jぬax,ぬec 噺なね,ひ Hz, H‐ぬax岻, に,ひば


185

岫dd, なH, Jぬec,ね噺な,ぱ Hz, H‐ぬec岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺ひば,ひ岫C‐な岻, ぱぱ,に岫C‐な’岻, ばぱ,の岫C‐ね’岻, はな,ぱ岫C‐の’岻, ねぱ,な岫C‐ね岻, ねね,は岫C‐ぬ岻. に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫などね岻 y に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi ね‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐eritro‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫などの岻. Et3N

F3B.OEt2, CH3CN

(NH2)2CS

O

OAc

O OCHMe235

+

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

101 102

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2

+

104 (52%) 105 (16%)

A una solución de な,に,ぬ,の,は‐penta‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosaに岫などな, にぱど mg, ど,ねど mmol岻 en acetonitrilo anhidro 岫ぱ mL岻 y atmósfera de argón, se le agregó tiourea 岫ぬね mg, ど,ねの mmol岻 y FぬB.OEtに岫にはど µL, に,どば mmol岻. La mezcla se reflujó durante に,の h, cuando se verificó por CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 el consumo completo del material de partida. Para poder realizar el análisis espectroscópico de la が‐D‐galactofuranosil isotiourea 岫などに岻 obtenida como jarabe, se evaporó el solvente y se realizó RMN‐なH y なぬC; RMN‐なH 岫のどど MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺ひ,ぬね, ひ,にに岫にs, にH cada uno, に NHに岻, ぱ,どね–ば,ぬひ岫m, H‐aromáticos岻, は,ばの岫s, なH, H‐な岻, は,どの岫m, なH, H‐の岻, の,ばぱ岫s, なH, H‐に岻, の,ばね岫d, なH, Jぬ,ね噺ね,ね Hz, H‐ぬ岻, の,どね岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ね,ね Hz, H‐ね岻, ね,ばぱ岫dd, なH, Jの,はa 噺ぬ,の, Jはa,はb 噺なに,ど Hz, H‐はa岻, ね,ばぬ岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,ぬ, Jはa,はb 噺なに,ど Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DMSO‐dは岻: δ 噺なはぱ,な岫SC岫NHに岻に岻, なはは,な, なはは,ど, なはの,の, なはの,ぬ岫PhCO岻, なぬね,ぱ−なにぱ,ぱ岫C‐aromáticos岻, ぱぱ,に岫C‐な岻, ぱぬ,の, ぱな,ひ岫C‐に,ね岻, ばば,は岫C‐ぬ岻, ばど,ひ岫C‐の岻, はね,ど岫C‐は岻. Para continuar la reacción y llevar a cabo la adición de Michael, la mezcla original de preparación de などに se enfrió a ど °C, y se agregó に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ,ね‐didesoxi‐ゎ‐D‐glicero‐hex‐ぬ‐enopiranosid‐に‐ulosa 岫ぬの, ばは mg, ど,ぬぬ mmol岻 y EtぬN 岫のなぱ µl, ぬ,ばに mmol岻 en dos fracciones cada ぬど min. Se agitó la mezcla a baja temperatura durante ぬ h. Mediante CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 se observaron dos productos


186

principales con Rf 噺ど,ぬね岫mayoritario岻 y ど,なは respectivamente. Luego de evaporar el solvente y co‐evaporar con tolueno, se obtuvo un jarabe marrón que se purificó mediante columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひは:ね岻. De las primeras fracciones de la columna se aisló el tiodisacárido などね como producto mayoritario 岫なねの mg, のに%岻. Este producto estaba ligeramente contaminado por la enona ぬの. Tiodisacárido などね: RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,など–ば,なは岫m, にどH, H‐aromáticos岻, は,など岫dt, なH, Jね’,の’ Jの’,は’a 噺ね,ぬ, Jの’,は’b 噺は,ね Hz, H‐の’岻, の,ばど岫bd, なH, Jに’,ぬ’ な,ど, Jぬ’,ね’ 噺ね,ぱ Hz, H‐ぬ’岻, の,はひ岫br s, なH, H‐な’岻, の,のど岫br s, なH, H‐に’岻, ね,ぱど–ね,ばの岫m, ぬH, H‐ね’,の,は’a岻, ね,ばひ岫br s, なH, Jな,にな,ど Hz, H‐な岻, ね,ばね岫dd, なH, Jの’,は’a 噺は,ね, Jは’a,は’b 噺なに,ど Hz, H‐は’b岻, ね,ぬば岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,ぬ, Jはa,はb 噺なな,は Hz, H‐はa岻, ね,にぱ岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,ひ, Jはa,はb 噺なな,は Hz, H‐はb岻, ね,どに岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ばど岫dt, Jぬec,ね噺 Jね,の噺に,ね, Jぬax,ね噺の,ど Hz, H‐ね岻, ぬ,なば岫dd, なH, Jぬax,ね噺の,ど, Jぬax,ぬec 噺なの,に Hz, H‐ぬax岻, に,ぱに岫dd, なH, Jぬec,ね噺に,ね, Jぬax,ぬec 噺なの,に Hz, H‐ぬec岻, に,どの岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,にぱ, な,なぱ岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひぱ,ば岫C‐に岻, なばど,ね岫MeCO岻, なはは,な, なはの,ば, なはの,の, なはの,に岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひぱ,ど岫C‐な岻, ぱは,は岫C‐な’岻, ぱに,は, ぱに,な岫C‐に’,ね’岻, ばば,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばな,ぱ, ばど,に, はぱ,ね岫MeにCHO, C‐の,の’岻, はね,は, はぬ,ね岫C‐は,は’岻, ねの,な岫C‐ね岻, ねに,は岫C‐ぬ岻, にぬ,ぬ, にな,ぱ岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. De las fracciones posteriores de la columna, se obtuvo el compuesto minoritario などの岫ねの mg, なは%岻 como un jarabe; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ–ば,にぱ岫m, にどH, H‐aromáticos岻, は,どぱ岫dt, なH, Jね’,の’ 噺 Jの’,は’a 噺ね,ぬ, Jの’,は’b 噺ば,ど Hz, H‐の’岻, の,ばに岫br s, なH, Jな’,に’ 隼な,ど Hz, H‐な’岻, の,ばど岫bd, なH, Jに’,ぬ’ 隼な,ど, Jぬ’,ね’ 噺ね,ぬ Hz, H‐ぬ’岻, の,ねば岫br s, なH, H‐に’岻, ね,ぱの岫t, なH, Jぬ’,ね’ 噺 Jね’,の’ 噺ね,ぬ Hz, H‐ね’岻, ね,ばひ岫br s, なH, Jな,に隼な,ど Hz, H‐な岻, ね,ばぱ岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,ぬ, Jは’a,は’b 噺なな,ぱ Hz, H‐は’a岻, ね,ばに岫dd, なH, Jの’,は’b 噺ば,ど, Jは’a,は’b 噺なな,ぱ Hz, H‐は’b岻, ね,のひ岫dd, なH, Jの,はa 噺な,ね, Jはa,はb 噺なな,ひ Hz, H‐はa岻, ね,ねば岫dd, なH, Jの,はb 噺の,ど, Jはa,はb 噺なな,ひ Hz, H‐はb岻, ね,ねぬ岫ddd, なH, Jの,はa 噺な,ね, Jの,はb 噺の,ど, Jね,の噺など,ぱ Hz, H‐の岻, ぬ,ひぱ岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ねに岫ddd, なH, Jぬec,ね噺の,ど, Jぬax,ね噺なに,ぱ Hz, H‐ね岻, ぬ,どに岫dd, なH, Jぬax,ね噺なに,ぱ, Jぬax,ぬec 噺なね,は Hz, H‐ぬax岻, に,ぱは岫dd, なH, Jぬec,ね噺の,ど, Jぬax,ぬec 噺なね,は Hz, H‐ぬec岻, に,どは岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,にの, な,なば岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひひ,ど岫C‐に岻, なばど,は岫MeCO岻, なはは,ど, なはの,は, なはの,ね, なはの,ぬ岫PhCO岻, なぬぬ,ば–なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, ひば,ば岫C‐な岻, ぱば,ひ岫C‐な’岻, ぱに,ば岫C‐に’岻, ぱな,ぱ


187

岫C‐ね’岻, ばば,は岫C‐ぬ’岻, ばな,ぱ, ばど,ぬ, ばど,に岫MeにCHO, C‐の,の’岻, はぬ,は, はぬ,に岫C‐は,は’岻, ねに,ひ, ねに,ば岫C‐ぬ,ね岻, にぬ,に, にな,ば岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. ぱ.ぬ.に Reducción del grupo carbonilo 岫ulosa岻 de los tiodisacáridos ひに, ひぬ, ひは y などね. に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐‐D‐lixo‐hexopiranósido 岫などは岻 y に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫などば岻. NaBH4, THF

+

SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc

SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

S

O

OAc

O OCHMe2

92

O

OBzOBz

BzO

106 (6%) 107 (38%) A una solución del tiodisacárido に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひに, ひの mg, ど,なぬ mmol岻 en THF 岫は ml岻, se le agregó NaBHね岫ばど mg, な,ぱね mmol岻 y la mezcla se agitó a −なぱ °C por ぬど min. Luego, la solución se neutralizó con resina Dowex のどW 岫H髪岻, se filtró y se concentró en rotavap, co‐evaporando con MeOH, para eliminar el ácido bórico. La CCD 岫hexano/EtOAc, な:な岻 reveló la presencia de dos compuestos principales de Rf 噺ど,はな y ど,のね. Estos compuestos se separaron parcialmente mediante columna cromatográfica 岫hexano/EtOAc, ばど:ぬど岻. El compuesto menos polar debió ser repurificado a través de una columna seca de silica gel 岫hexano/EtOAc, な:な岻 para obtener el tiodisacárido などは岫は mg, は%岻; 岷峅Dにど噺髪なの,ば岫c 噺ど,ぱ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ–ば,ぬぬ岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ぱひ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺の,ど, Jぬ’,ね’ 噺の,ひ Hz, H‐ぬ’岻, の,ばぬ岫dd, なH, Jな’,に’ 噺ぬ,は Hz, H‐に’岻, の,はね岫d, なH, H‐な’岻, ね,ぱぱ岫br s, なH, H‐な岻, ね,ばぬ岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ひ, Jの’a,の’b 噺なな,に Hz, H‐の’a岻, ね,ばな岫m, なH, H‐ね’岻, ね,のぱ岫dd, なH, Jね’,の’b 噺ね,ど Hz, H‐の’b岻, ね,ねな岫m, なH, H‐の岻, ね,には岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,ひ, Jはa,はb 噺なな,は Hz, H‐はa岻, ね,なは岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,の Hz, H‐はb岻, ぬ,ひね岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,はに岫m, なH, H‐に岻, ぬ,ねな岫m, なH, H‐ね岻, に,ぬど岫m, にH, H‐ぬax, H‐ぬec岻, に,どの岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,にぬ, な,なぱ岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC


188

岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,に, なはの,な岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひぱ,ひ岫C‐な岻, ぱね,の岫C‐な’岻, ぱど,ね岫C‐ね’岻, ばの,は岫C‐に’岻, ばに,は岫C‐ぬ’岻, はひ,ね岫MeにCHO岻, はば,ひ岫C‐に岻, はば,は岫C‐の岻, はね,ひ岫C‐は岻, はね,ぬ岫C‐の’岻, ぬひ,ぬ岫C‐ね岻, にひ,ぱ岫C‐ぬ岻, にぬ,な, にな,の岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬばHねどOなにS: C, はに,ばど; H, の,はひ; S, ね,のに. Encontrado: C, はに,ぬひ; H, の,ばば; S, ね,ねぬ. Las siguientes fracciones de la columna correspondían al tiodisacárido mayoritario などば岫ぬは mg, ぬひ%岻; 岷峅Dにど噺髪ぬば,の岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ–ば,ぬぬ岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ぱば岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺の,な, Jぬ’,ね’ 噺の,ぱ Hz, H‐ぬ’岻, の,はひ岫dd, なH, Jな’,に’ 噺ぬ,ば Hz, H‐に’岻, の,のな岫d, なH, H‐な’岻, ね,ぱひ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ぱ Hz, H‐な岻, ね,ばな岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ね,ど, Jの’a,の’b 噺なな,に Hz, H‐の’a岻, ね,はぱ岫ddd, なH, Jね’,の’b 噺ね,に Hz, H‐ね’岻, ね,のひ岫dd, なH, H‐の’b岻, ね,にの岫ddd, なH, Jね,の噺に,ど, J 噺の,ど, J 噺は,ひ Hz, H‐の岻, ね,なぱ岫m, にH, H‐はa, H‐はb岻, ね,どに岫ddd, なH, Jに,ぬec 噺ね,ぬ, Jに,ぬax 噺なな,の Hz, H‐に岻, ぬ,ひぬ岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO峅, ぬ,ねに岫br s, なH, H‐ね岻, に,にね岫ddd, なH, Jぬec,ね噺ぬ,の, Jぬec,ぬax 噺なぬ,ど Hz, H‐ぬec岻, に,どな岫m, ねH, H‐ぬax, CHぬCO岻, な,にな, な,なぱ, 岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,ぬ, なはの,に岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,の岫C‐aromáticos岻, ひは,ぱ岫C‐な岻, ぱの,ね岫C‐な’岻, ぱど,に岫C‐ね’岻, ばの,ぱ岫C‐に’岻, ばに,ぱ, ばど,ぱ岫C‐ぬ’, MeにCHO岻, はば,ぱ岫C‐に岻, はの,な岫C‐は岻, はね,の岫C‐の岻, はね,に岫C‐の’岻, ねぬ,ぬ岫C‐ね岻, ぬね,に岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にに,ど岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ぱ岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬばHねどOなにS: C, はに,ばど; H, の,はひ; S, ね,のに. Encontrado: C, はに,ぱひ; H, の,はの; S, ね,ねぬ. También se obtuvieron fracciones intermedias de la columna, que contenían una mezcla de los compuestos などは y などば, que no pudieron ser separados efectivamente 岫ぬぬ mg, rendimiento total ぱね%岻. に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫などひ岻. +

S

O

OAc

O OCHMe2

93

O

OBzOBz

BzO

S

O

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc

NaBH4, THF

108 (no se caracterizó)

S

O

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

109 (64%)La reducción de に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐


189

ribofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひぬ, ねの mg, ど,どは mmol岻 con NaBHね se llevó a cabo de la misma forma que se describió para su análogo ひに. Por posterior purificación de la mezcla de reacción a través de una columna cromatográfica 岫hexano/EtOAc, ば:ぬ岻 se obtuvo などひ岫にひ mg, はね%岻 como producto mayoritario; 岷峅Dにど噺髪ひぬ,に岫c 噺ど,は, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どぱ–ば,ぬど岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ひぬ岫d, なH, Jな’,に’ 噺は,ど Hz, H‐な’岻, の,ばね岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺は,は, Jぬ’,ね’ 噺ね,ぬ Hz, H‐ぬ’岻, の,はぬ岫t, なH, H‐に’岻, ね,ひど岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ぱ Hz, H‐な岻, ね,ばは岫br s, なH, H‐ね’岻, ね,ばの岫dd, なH, Jの’a,の’b 噺なに,ぱ, Jね,の’a 噺ぬ,な Hz, H‐の’a岻, ね,はぬ岫dd, なH, Jね,の’b 噺ね,ぱ Hz, H‐の’b岻, ね,にに岫ddd, なH, Jね,の噺な,ば, Jの,はb 噺の,の, Jの,はa 噺ば,ど Hz, H‐の岻, ね,なぬ岫dd, なH, Jはa,はb 噺なな,ね Hz, H‐はa岻, ね,どぱ岫dd, なH, H‐はb岻, ね,どぬ岫m, なH, H‐に岻, ぬ,ひに岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,にぱ岫br s, なH, H‐ね岻, に,ぬね岫ddd, なH, Jに,ぬec 噺 Jぬec,ね噺ぬ,ぱ, Jぬec,ぬax 噺なに,の Hz, H‐ぬec岻, に,など岫ddd, なH, Jぬax,ね噺ぬ,は, Jに,ぬax 噺なに,ど Hz, H‐ぬax岻, に,どぬ岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,ぱは岫d, なH, Jに,HO 噺なに,ど Hz, HO岻, な,にね, な,ぱな岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,は, なはの,に岫PhCO岻, なぬぬ,の–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひは,ぱ岫C‐な岻, ぱひ,に岫C‐な’岻, ばひ,ど岫C‐ね’岻, ばに,に岫C‐に’岻, ばな,に岫C‐ぬ’岻, ばど,ひ岫MeにCHO岻, はば,ひ岫C‐の岻, はね,ば岫C‐は岻, はぬ,は岫C‐の’岻, はど,ね岫C‐に岻, ねは,な岫C‐ね岻, ぬは,な岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にな,ひ岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬばHねどOなにS: C, はに,ばど; H, の,はひ; S, ね,のに. Encontrado: C, はに,ばひ; H, の,ぱな; S, ね,ねに. に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐lixo‐hexopiranósido 岫ななど岻 y に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫ななな岻. S

O

OAc

O OCHMe2

96

O

BzO

OBz

BzO

S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2

OHOAc S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAcNaBH4, THF +

110 (10%) 111 (51%)A una solución del tiodisacárido に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐arabinofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫ひは, なにど mg, ど,なば mmol岻 en THF 岫ば ml岻, se le agregó NaBHね岫はね mg, な,はぱ mmol岻 y la mezcla se


190

agitó a −なぱ °C por ぬど min. Luego, se repitió el tratamiento previamente descripto hasta obtener un jarabe que mostraba, por CCD 岫hexano/EtOAc, な:な岻, dos compuestos de Rf 噺ど,のは y ど,のど. La cromatografía en columna 岫hexano/EtOAc, ば:ぬ岻 de la mezcla dio las primeras fracciones enriquecidas en el compuesto menos polar 岫ななど岻. Éste se purificó posteriormente mediante una columna de sílica gel seca 岫hexano/EtOAc, な:な岻 obteniéndose el tiodisacárido ななど; como un jarabe 岫なに,ど mg, など%岻; 岷峅Dにど噺髪ぱど,ば岫c 噺な,ど, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ–ば,ぬな岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,はは岫s, なH, H‐な’岻, の,はね岫d, なH, Jぬ’,ね’ 噺ね,ね Hz, H‐ぬ’岻, の,のは岫s, なH, H‐に’岻, ね,ぱひ岫br s, なH, H‐な岻, ね,ぱね岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,の, Jの’a,の’b 噺なな,な Hz, H‐の’a岻, ね,ぱな岫m, なH, H‐ね’岻, ね,ばぬ岫dd, なH, Jね’,の’b 噺ね,ぬ Hz, H‐の’b岻, ね,ねな岫ddd, なH, Jね,の噺に,ね, Jの,はb 噺ね,は, Jの,はa 噺ば,の Hz, H‐の岻, ね,ぬば岫dd, なH, Jはa,はb 噺なな,な Hz, H‐はa岻, ね,ぬな岫dd, なH, H‐はb岻, ぬ,ひに岫m, なH, J 噺は,ぬ Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,はに岫m, なH, H‐に岻, ぬ,ねぱ岫d, なH, J 噺ひ,は Hz, HO岻, ぬ,ぬに岫br s, なH, H‐ね岻, に,ねな岫ddd, なH, Jに,ぬa Jぬa,ね噺ぬ,ど, Jぬa,ぬb 噺なの,ど Hz, H‐ぬa岻, に,ぬの岫ddd, な H, Jに,ぬb Jぬb,ね噺ぬ,ひ Hz, H‐ぬb岻, に,どの岫s, ぬH, CHぬCO岻な,にに, な,なは岫にd, は H, J 噺は,ぬ Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,は岫MeCO岻, なはは,に, なはの,は, なはの,ぬ岫PhCO岻, なぬぬ,ぱ–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひぱ,ひ岫C‐な岻, ぱひ,ば岫C‐な’岻, ぱぬ,に岫C‐に’岻, ぱな,の岫C‐ね’岻, ばば,ぱ岫C‐ぬ’岻, はひ,の岫MeにCHO岻, はぱ,ど岫C‐の岻, はば,ば岫C‐に岻, はの,ど岫C‐は岻, はぬ,ぬ岫C‐の’岻, ねに,ね岫C‐ね岻, ぬな,ぱ岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にな,の岷岫CHぬ岻にCHO岻峅, にど,ぱ岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬばHねどOなにS: C, はに,ばど; H, の,はひ; S, ね,のに. Encontrado: C, はに,ぱに; H, の,のひ; S, ね,はぬ. De las siguientes fracciones de la columna, se aisló el compuesto ななな como una espuma 岫はな,ど mg, のな%岻; 岷峅Dにど噺髪ばぬ,な岫c 噺な,ど, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,なな–ば,ぬど岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,はな岫d, なH, Jぬ’,ね’ 噺の,ぬ Hz, H‐ぬ’岻, の,はど岫s, なH, H‐な’岻, の,のの岫s, なH, H‐に’岻, ね,ひに岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ぱ Hz, H‐な岻, ね,ぱね岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ど, Jの’a,の’b 噺なな,は Hz, H‐の’a岻, ね,ばば岫m, なH, H‐ね’岻, ね,ばに岫dd, なH, Jね’,の’b 噺の,ど Hz, H‐の’b岻, ね,ぬに岫dd, なH, Jの,はa 噺ぱ,ば, Jはa,はb 噺なに,に Hz, H‐はa岻, ね,にば岫m, なH, H‐の岻, ね,には岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,ぱ Hz, H‐はb岻, ね,どに岫m, なH, H‐に岻, ぬ,ひの岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ぬぱ岫br s, なH, H‐ね岻, に,にひ岫ddd, なH, Jに,ぬec Jぬec,ねぬ,ひ, Jぬax,ぬec 噺なに,ぱ Hz, H‐ぬec岻, に,どひ岫ddd, なH, Jぬax,ね噺ぬ,ば, Jに,ぬax 噺なに,ぱ Hz, H‐ぬax岻, に,どに岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,には, な,なひ岫にd, はH, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,ば岫MeCO岻, なはは,に, なはの,ね岫PhCO岻, なぬぬ,ば–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひは,ぱ岫C‐な岻, ひど,ど岫C‐な’岻, ぱぬ,に岫C‐に’岻, ぱな,に岫C‐ね’岻, ばぱ,ど岫C‐ぬ’岻, ばど,ひ岫MeにCHO岻, はば,ぱ岫C‐の岻, はね,ひ岫C‐は岻, はね,は岫C‐に岻, はぬ,ね岫C‐の’岻, ねの,ば岫C‐ね岻,


191

ぬの,ば岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にに,ど岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ぱ岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬばHねどOなにS: C, はに,ばど; H, の,はひ; S, ね,のに. Encontrado: C, はに,はね; H, の,はど; S, ね,はに. に‐Propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐lixo‐hexopiranósido 岫ななに岻 y に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫ななぬ岻. O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OAc

O OCHMe2

+

104

O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

112 (6%) 113 (41%)

NaBH4, THF O

OCHMe2

OHOAc O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

O

OCHMe2HO

OAc

Se disolvió la に‐propil は‐O‐acetil‐ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐treo‐hexopiranosid‐に‐ulosa 岫などね, なはぬ mg, ど,なひ mmol岻 en THF 岫の mL岻 y se trató con NaBHね岫のど mg, な,ぬな mmol岻 a −なぱ °C. Se agitó la mezcla durante ぬど min y luego del tratamiento descripto anteriormenete, se obtuvo un jarabe que mostró en la CCD 岫hexano/EtOAc, ば:ぬ岻 dos productos de Rf 噺ど,はど y ど,のぬ. Los mismos se separaron mediante columna cromatográfica 岫hexano/EtOAc, ば:ぬ岻. Eluyó primero el compuesto menos polar ななに岫jarabe, など mg, は%岻; 岷峅Dにど噺 −ぬに,ぬ岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どぱ–ば,にぬ岫m, にどH, H‐aromáticos岻, は,どぱ岫ddd, なH, Jね’,の’ Jの’,は’a 噺ね,に, Jの’,は’b 噺は,ね Hz, H‐の’岻, の,ばば岫br s, なH, Jな’,に’ 隼な,ど Hz, H‐な’岻, の,ばな岫bd, なH, Jに’,ぬ’ 隼な,ど, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ぬ’岻, の,のど岫br s, なH, H‐に’岻, ね,ひに岫br s, なH, Jな,に隼な Hz, H‐な岻, ね,ばひ岫m, ぬH, H‐ね’, は’a岻, ね,ばは岫dd, なH, Jは’a,は’b 噺なな,ひ Hz, H‐は’b岻, ね,ねの岫m, なH, H‐の岻, ね,ぬぱ岫dd, なH, Jの,はa 噺ぱ,ど, Jはa,はb 噺なな,ね Hz, H‐はa岻, ね,にぬ岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,ど Hz, H‐はb岻, ぬ,ひひ岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,はぱ岫br s, なH, H‐に岻, ぬ,にぱ岫br s, なH, H‐ね岻, に,ぬな岫m, にH, H‐ぬax, H‐ぬec岻, に,どの岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,には, な,にど岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,ば, なはの,の, なはの,ね岫PhCO岻, なぬぬ,ば–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひひ,ど岫C‐な岻, ぱは,ば岫C‐な’岻, ぱに,ぱ, ぱに,ど岫C‐に’,ね’岻, ばば,ば岫C‐ぬ’岻, ばど,な岫C‐の’岻, はひ,ね岫MeにCHO岻はば,ひ岫C‐の岻, はば,の岫C‐に岻, はの,に岫C‐は岻, はぬ,ね岫C‐は’岻, ぬひ,ね岫C‐ね岻, にひ,は岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にな,の


192

岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ば岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CねのHねはOなねS: C, はね,なに; H, の,のど. Encontrado: C, はぬ,ひぱ; H, の,のな. Luego eluyó el tiodisacárido mayoritario ななぬ岫aceite incoloro, はの mg, ねな%岻; 岷峅Dにど噺 −にね,ね岫c 噺な,ど, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,なば–ば,にぬ岫m, にどH, H‐aromáticos岻, は,どひ岫bq, なH, Jね’,の’ 噺ね,に, Jの’,は’a 噺 Jの’,は’b 噺の,ど Hz, H‐の’岻, の,はひ岫bd, なH, Jに’,ぬ’ 隼な,ど, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ぬ’岻, の,はの岫br s, なH, Jな’,に’ 隼な,ど, H‐な’岻, の,のど岫br s, なH, H‐に’岻, ね,ひぬ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ね,ばひ岫bt, なH, Jぬ’,ね’ Jね’,の’ 噺ね,の Hz, H‐ね’岻, ね,ばね岫m, にH, H‐は’a, H‐は’b岻, ね,にぱ岫m, にH, H‐の, H‐はa岻, ね,なは岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,の, Jはa,はb 噺なね,ば Hz, H‐はb岻, ね,など岫tt, なH, Jな,に噺ぬ,ば, Jに,ぬec 噺ね,ぬ, Jに,ぬax 噺 Jに,HO 噺なな,の Hz, H‐に岻ぬ,ひの岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ぬぬ岫br s, なH, H‐ね岻, に,にの岫ddd, なH, Jぬec,ね噺ぬ,の, Jに,ぬec 噺ね,ぬ, Jぬax,ぬec 噺なぬ,ど Hz, H‐ぬec岻, に,どね岫ddd, なH, Jぬax,ね噺の,な, Jに,ぬax 噺なな,の, Jぬax,ぬec 噺なぬ,ど Hz, H‐ぬax岻, に,どぬ岫s, ぬH, CHぬCO岻, な,ぱの岫d, なH, Jに,HO 噺なな,の Hz, HO岻, な,にば, な,なひ岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,ば, なはの,の, なはの,ね岫PhCO岻, なぬぬ,ば–なにぱ,ね岫C‐aromáticos岻, ひは,ひ岫C‐な岻, ぱば,は岫C‐な’岻, ぱに,ぱ岫C‐に’岻, ぱな,ば岫C‐ね’岻, ばば,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばど,ひ岫MeにCHO岻, ばど,に岫C‐の’岻, はば,ぱ岫C‐に岻, はの,ね岫C‐は岻, はね,ぬ岫C‐の岻, はぬ,の岫C‐は’岻, ねぬ,の岫C‐ね岻, ぬね,ど岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にに,ど岷岫CHぬ岻にCHO峅, にど,ぱ岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CねのHねはOなねS: C, はね,なに; H, の,のど. Encontrado: C, はね,なひ; H, の,ばぱ. ぱ.ぬ.ぬ Desacilación de los tiodisacáridos などば, ななな y ななぬに‐Propil ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫が‐D‐ribofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫ななね岻. SO

OBzOBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

107

SO

OHOH

HO

O

OCHMe2HO

OH

114 (65%)

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3 Se suspendió el tiodisacárido などば岫はの mg, ど,どひ mmol岻 en una solución de MeOH:EtぬN:HにO, ぬ:な:ぬ岫ぱ mL岻 y se agitó a temperatura ambiente. Luego de ぬ h, la CCD 岫hexano/EtOAc, な:な岻 mostró un compuesto con Rf 噺ど岫UV inactivo岻 y consumo total del compuesto de partida などば岫Rf 噺ど,のね岻. La muestra se concentró, co‐evaporando con tolueno y el residuo, disuelto en な mL agua se eluyó a través de


193

una columna de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻 con ぬど mL de de dicho solvente. La solución desionizada se concentró y el tiodisacárido libre se disolvió en agua 岫な mL岻 y se filtró a través de una mini columna octadecil Cなぱ岫Amprep, Amersham Biosciences岻 con にど mL del mismo solvente. Al evaporar el solvente se obtuvo el tiodisacárido libre ななね岫にに mg, はの%岻 como un sólido cristalino, pf なねひ−なのな °C; 岷峅Dにど噺髪ぬ,の岫c 噺ど,ひ, HにO岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,どね岫d, なH, Jな’,に’ 噺ね,ぱ Hz, H‐な’岻, ね,ぱぱ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ね,なは岫ddd, なH, J 噺に,ど, J 噺の,の, J 噺は,ぱ Hz, H‐の岻, ね,なに岫dd, なH, Jに’,ぬ’ Jぬ’,ね’ の,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,どに岫ddd, なH, Jに,ぬec 噺ね,ぬ, Jに,ぬax 噺なに,ど Hz, H‐に岻, ぬ,ひひ岫dd, なH, H‐に’岻, ぬ,ひに岫ddd; なH, Jね’,の’a 噺ぬ,は, Jね’,の’b 噺の,ぱ Hz, H‐ね’岻, ぬ,ひな岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,はば岫dd, なH, Jの’a,の’b 噺なに,ね Hz, H‐の’a岻, ぬ,はぬ–ぬ,はど岫m, にH, H‐はa, H‐はb岻, ぬ,のぱ岫dd, なH, H‐の’b岻, ぬ,ぬね岫m, なH, H‐ね岻, に,どぱ岫ddd, なH, Jぬax,ぬec 噺なぬ,な, Jぬax,ね噺ぬ,は Hz, H‐ぬax岻, に,どど岫ddd, なH, Jぬec,ね噺ぬ,の Hz, H‐ぬec岻, な,なは, な,どひ岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひは,な岫C‐な岻, ぱは,は岫C‐な’岻, ぱね,の岫C‐ね’岻, ばの,に岫C‐に’岻, ばな,な岫C‐ぬ’岻, ばど,の岫MeにCHO岻, ばど,ぬ岫C‐の岻, はね,ど岫C‐に岻, はに,は岫C‐は岻, はに,な岫C‐の’岻, ねに,ひ岫C‐ね岻, ぬに,に岫C‐ぬ岻, にに,ね, にど,の岷岫CHぬ岻にCHO峅. Análisis calculado para CなねHにはOぱS: C, ねば,ねね; H, ば,ぬひ; S, ひ,どは. Encontrado: C, ねば,ぬぬ; H, ば,ねな; S, ひ,なひ. に‐Propil ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫ゎ‐D‐arabinofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫ななの岻. S

O

BzO

OBz

BzO

O

OCHMe2HO

OAc

111

S

O

HO

OH

HO

O

OCHMe2HO

OH

115 (71%)

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3 El compuesto ななな岫はど mg, ど,どぱ mmol岻 fue sometido al mismo procedimiento de O‐desacetilación que se describió anteriormente. La CCD 岫hexano/EtOAc, な:な岻 mostró un compuesto con Rf 噺ど岫UV inactivo岻 y consumo total del compuesto de partida ななな岫Rf 噺ど,のど岻. La muestra se concentró, co‐evaporando con tolueno y el residuo, disuelto en な mL de agua, se eluyó a través de una columna de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed, はど mL de agua岻.


194

La solución desionizada se concentró y el tiodisacárido libre se purificó por disolución en agua 岫な mL岻 y filtración a través de una mini columna octadecil Cなぱ岫Amprep, Amersham Biosciences, なの mL de agua岻. Por evaporación del solvente se obtuvo el tiodisacárido libre ななの岫にな mg, ばな%岻 como un sólido cristalino; Rf 噺ど,ばぬ岫n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻; pf なばは−なばば °C; 岷峅Dにど噺髪なひは,ど岫c 噺ど,ひ, HにO岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,どひ岫d, なH, Jな’,に’ 噺ね,ば Hz, H‐な’岻, ね,ぱぱ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ね,なに岫ddd, なH, Jね,の噺な,ひ, Jの,はa Jの,はb は,な Hz, H‐の岻, ね,どど–ぬ,ひは岫m, にH, H‐に, H‐ね’岻, ぬ,ひの岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ Hz, H‐に’岻, ぬ,ひな岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ぱば岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ, Jぬ’,ね’ 噺ば,な Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ばぬ岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ど, Jの’a,の’b 噺なに,の Hz, H‐の’a岻, ぬ,はね岫m, にH, H‐はa, H‐はb岻, ぬ,はぬ岫dd, なH, Jね’,の’b 噺の,の Hz, H‐の’b岻, ぬ,ぬぬ岫m, なH, H‐ね岻, に,なぬ岫ddd, なH, Jぬax,ね噺ね,ど, Jぬax,ぬec 噺なに,の, Jに,ぬax 噺なに,ぱ Hz, H‐ぬax岻, に,どに岫ddd, なH, Jに,ぬec Jぬec,ねぬ,ひ Hz, H‐ぬec岻, な,なは, な,どぱ岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひは,ど岫C‐な岻, ぱひ,ば岫C‐な’岻, ぱに,ね岫C‐ね’岻, ぱな,は岫C‐に’岻, ばの,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばど,は, ばど,の岫C‐の, MeにCHO岻, はね,な岫C‐に岻, はに,の岫C‐は岻, はど,ば岫C‐の’岻, ねね,ば岫C‐ね岻, ぬぬ,ぱ岫C‐ぬ岻, にに,ぬ, にど,の岷岫CHぬ岻にCHO岻峅. Análisis calculado para CなねHにはOぱS: C, ねば,ねね; H, ば,ぬひ; S, ひ,どは. Encontrado: C, ねば,ぬに; H, ば,ねの; S, ひ,にぬ. に‐Propil ぬ‐desoxi‐ね‐S‐岫が‐D‐galactofuranosil岻‐ね‐tio‐ゎ‐D‐xilo‐hexopiranósido 岫ななは岻. O

OBz

OBz

OBz

S

OBz

113

O

OCHMe2HO

OAc O

OH

OH

OH

S

OH116 (92%)

O

OCHMe2HO

OH

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

Se suspendió el tiodisacárido ななぬ岫には mg, ど.どぬ mmol岻 en una mezcla de MeOH:EtぬN:HにO, ぬ:な:ぬ岫ぬ mL岻 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ね h, cuando la CCD mostró que se había consumido totalmente el compuesto de partida. La mezcla se concentró, co‐evaporando con tolueno y el residuo se redisolvió en な mL de agua y se eluyó con este mismo solvente 岫のど mL岻 a través de una columna de resina de intercambio iónico Dowex MR‐ぬC mixed bed para eliminar sales. El tiodisacárido ななは岫ひに%岻 mostró un Rf 噺ど,のぱ岫n‐


195

BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻; 岷峅Dにど噺 −ぱぬ,ぬ岫c 噺ど,ぱ, MeOH岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,なに岫d, なH, Jな’,に’ 噺ね,ば Hz, H‐な’岻, ね,ひど岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ね,なは岫m, なH, H‐の岻, ね,どぬ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺ね,ば, Jぬ’,ね’ 噺ば,ね Hz, H‐ぬ’岻, ね,どに岫dt, なH, Jな,に噺ぬ,ば, Jに,ぬec 噺ね,は, Jに,ぬax 噺なに,ど Hz, H‐に岻, ぬ,ひば岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺ね,ば Hz, H‐に’岻, ぬ,ひね岫m, なH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻, ぬ,ひど岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,は, Jぬ’,ね’ 噺ば,ね Hz, H‐ね’岻, ぬ,ばぱ岫ddd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,は, Jの’,は’a 噺ね,は, Jの’,は’b 噺ば,の Hz, H‐の’岻, ぬ,はに岫m, にH, H‐はa, H‐はb岻, ぬ,はな岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,は, Jは’a,は’b 噺なな,は Hz, H‐は’a岻, ぬ,のは岫dd, なH, Jの’,は’b 噺ば,の, Jは’a,は’b 噺なな,は Hz, H‐は’b岻, ぬ,ぬど岫m, なH, H‐ね岻, に,なに岫ddd, なH, Jぬax,ね噺ぬ,ば, Jに,ぬax 噺なに,ど, Jぬax,ぬec 噺なぬ,に Hz, H‐ぬax岻, に,どぬ岫dddd, なH, Jぬec,ね噺ぬ,の, Jに,ぬec 噺ね,は, Jぬax,ぬec 噺なぬ,に Hz, H‐ぬec岻, な,なぱ, な,なな岫にd, はH, J 噺は,に Hz, 岫CHぬ岻にCHO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひは,ひ岫C‐な岻, ぱぱ,ぱ岫C‐な’岻, ぱに,ね, ぱに,に岫C‐に’,ね’岻, ばば,な岫C‐ぬ’岻, ばな,ぬ, ばな,に, ばな,な岫C‐の,の’,MeにCHO岻, はね,ひ岫C‐に岻, はぬ,ば, はぬ,の岫C‐は,は’岻, ねね,ぬ岫C‐ね岻, ぬぬ,ぬ岫C‐ぬ岻, にぬ,に, にな,ぬ岷岫CHぬ岻にCHO峅. Análisis calculado para CなのHにぱOひS.HにO: C, ねね,ばは; H, ば,のな; S, ば,ひば. Encontrado: C, ねの,にの; H, ば,ひに; S, ば,ばぱ. ぱ.ね. Síntesis de 岫な蝦は岻 tiodisacáridos mediante reacciones de transtioglicosilación ぱ.ね.な Síntesis は‐tioazúcares precursores Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐desoxi‐は‐tio‐glucopiranósido 岫なぬひ岻 BzO O

OMe

BzO

BzO

Cl

KSCN

DMF

137 139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SCN

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

Zn

AcOH

138 A una solución del metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoyl‐は‐desoxi‐は‐cloro‐ゎ‐D‐galactopiranósidoぬ岫なぬば, に,どひ g, ぬ,ひぱ mmol岻 en DMF 岫にど mL岻, se le agregó KSCN 岫な,ねぱ g, なの,には mmol岻 y la mezcla se reflujó a なにど °C durante にね h. El análisis por CCD 岫hexano/EtOAc, に:な岻 reveló la presencia de un producto con Rf 噺ど,ねひ y el consumo total del compuesto de partida 岫Rf 噺ど,のぱ岻. Se realizó una extracción agua/CHにClに. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y concentró en rotavap para obtener el compuesto なぬぱ que se purificó mediante columna cromatográfica


196

岫hexano/EtOAc は:な蝦ぬ:な岻. El compuesto se identificó como metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐desoxi‐は‐tiociano‐glucopiranósido 岫な,ぱに g, ぱね%岻, en base a datos de literatura. El compuesto なぬぱ岫な,どど g, な,ぱぬ mmol岻 se disolvió en ácido acético, se le agregó zinc metálico 岫な,ぬな g, にど,どぬ mmol岻 y se lo reflujó a なにど °C durante は h. Se observó mediante CCD la formación de un compuesto de Rf 噺ど,はは岫hexano/EtOAc, に:な岻 correspondiente a なぬひね acompañado por compuesto de partida sin reaccionar 岫なぬぱ岻. La reacción se volcó en agua, se extrajo con CHにClに y sucesivamente con solución saturada de NaHCOぬ y solución saturada de NaCl. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻 y se evaporó el solvente. El residuo se purificó por columna cromatográfica 岫hexano/EtOAc ば:な岻, se recuperó el compuesto de partida para repetir la reacción, la cual continuó resultando incompleta a pesar de ensayar períodos de reacción más prolongados. Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐desoxi‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねぬ岻. OH

O

OMe

HO

HO

OH

1) TsCl, C5H5N

2) BzCl

140 142

KSCN

DMF

141

BzO

O

OMe

BzO

BzO

OTs BzO

O

OMe

BzO

BzO

SCN BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

Zn

AcOH

143 A una suspensión de metil ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねど, な,のど g, ば,ばぬ mmol岻 en piridina anhidra 岫なの mL岻, se le agregó cloruro de tosilo 岫に,にど g, なな,のね mmol岻 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ね días. Luego se agregó cloruro de benzoílo 岫ね,の mL, ぬぱ,ばぬ mmol岻 y se mantuvo la agitación por なぱ h más. Finalmente la mezcla se volcó en hielo/agua y el análisis por CCD 岫hexano/EtOAc, に:な岻 reveló la presencia de un producto mayoritario con Rf 噺ど,ねね, junto con uno minoritario con Rf 噺ど,のひ. Ambos productos se aislaron mediante una columna cromatográfica que se eluyó con mezclas de polaridad creciente de hexano/EtOAc ひ:な蝦ぬ:な. El compuesto menos polar 岫Rf 噺ど,のひ岻 se identificó como metil に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐galactopiranósidoぬは岫な,どの g, にに%岻. De las siguientes fracciones de la


197

columna se aisló el metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐O‐tosil‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねな, に,どど g, ぬひ%岻; 岷峅Dにど噺髪なはね,な岫c 噺ど,ぬ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どど–ば,など岫m, なひH, H‐aromáticos岻, の,ひど岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,の, Jに,ぬ噺など,ぬ Hz, H‐ぬ岻, の,ぱの岫dd, なH, Jね,の噺な,な, Jぬ,ね噺ぬ,の Hz, H‐ね岻, の,のば岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,は, Jに,ぬ噺など,ぬ Hz, H‐に岻, の,にね岫d, なH, Jな,に噺ぬ,は Hz, H‐な岻, ね,ねひ岫br t, なH, Jね,の噺な,な, Jの,は’ 噺の,ば, Jの,は噺ば,ど Hz, H‐の岻, ね,にね岫dd, なH, Jの,は噺ば,ど, Jは,は’ 噺など,ぬ Hz, H‐は岻, ね,どひ岫dd, なH, Jは,は’ 噺の,ば, Jの,は’ 噺ば,ど, Jは,は’ 噺など,ぬ Hz, H‐は’岻, ぬ,ねの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ぬぬ岫s, ぬH, CHぬAr岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺なははど, なはの,ぱ, なはの,ぬ岫PhCO岻, なにば,ひ岫C‐aromáticos岻, ひば,の岫C‐な岻, はひ,ど, はぱ,ば, はぱ,な, はば,ぬ, はは,は岫C‐に,ぬ,ね,の,は岻, のの,ぱ岫CHぬO岻, にな,は岫CHぬAr岻. Análisis calculado para CぬのHぬにOななS: C, はぬ,はぬ, H, ね,ぱぱ, S, ね,ぱの. Encontrado: C, はぬ,にの, H, ね,ぱぬ, S, ね,ひど. El compuesto tosilado なねな岫ぬねど mg, ど,のな mmol岻 se disolvió en DMF anhidra 岫ね mL岻 y se agregó KSCN 岫にひど mg, ぬ,どど mmol岻. La mezcla se reflujó a なにど °C durante ねぱ h cuando la CCD 岫tolueno/EtOAc, なば:な岻 reveló la formación de un producto mayoritario de Rf 噺ど,ねね. El mismo se aisló por cromatografía en columna con tolueno/EtOAc, ひひ:な y se identificó como metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐desoxi‐は‐tiociano‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねに, なはど mg, のの%岻; 岷峅Dにど噺髪なぱに,の岫c 噺な,に, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,なな–ば,にど岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ひば岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,ね, Jに,ぬ噺など,は Hz, H‐ぬ岻, の,ぱひ岫dd, なH, Jね,の噺ど,ひ, Jぬ,ね噺ぬ,ね Hz, H‐ね岻, の,はば岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,の, Jに,ぬ噺など,は Hz, H‐に岻, の,には岫d, なH, Jな,に噺ぬ,の Hz, H‐な岻, ね,にね岫br t, なH, Jの,は Jの,は’ ば,な Hz, H‐の岻, ぬ,ねぱ岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,なぬ岫d, にH, Jの,は Jの,は’ ば,な Hz, H‐は, H‐は’岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,な, なはの,ぱ, なはの,ね岫PhCO岻, なにぱ,ぬ岫C‐aromático岻, なにの,ぬ岫SCN岻, ひば,ば岫C‐な岻, ばど,ぬ, はぱ,ひ, はぱ,な, はば,ひ岫C‐に,ぬ,ね,の岻, のは,な岫CHぬO岻, ぬね,は岫C‐は岻. Análisis calculado para CにひHにのOぱSN.な,のHにO: C, はど,はに; H, ね,ひな; S, の,のぱ. Encontrado: C, はど,ねぱ; H, ね,ひど; S, の,ねど. El tiociano derivado なねに岫ばどど mg, な,にぱ mmol岻 disuelto en ácido acético glacial 岫にの mL岻, se reflujó con Zn 岫な,はば g, にの,はひ mmol岻 durante にね h. La mezcla se volcó en agua y se extrajo con CHにClに. Se lavó la fase orgánica sucesivamente con solución saturada de NaCOぬH y solución saturada de NaCl; se secó con MgSOね y se evaporó el solvente. El jarabe resultante mostró por CCD 岫tolueno/EtOAc, なば:な岻 un producto principal de Rf 噺ど,ねひ. Mediante la purificación por columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひひ:な岻 se aisló el compuesto なねぬ岫のにど mg, ばぱ%岻; 岷峅Dにど噺髪にねど,ば岫c 噺な,な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫にどど


198

MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,など–ば,なの岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ひひ–の,ひぬ岫m, にH, H‐ぬ, H‐ね岻, の,はね岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,ば, Jに,ぬ噺など,ば Hz, H‐に岻, の,にぱ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ね,には岫dd, なH, Jの,は’ 噺の,ぱ, Jの,は噺ば,ひ Hz, H‐の岻, ぬ,のに岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ぱな岫ddd, なH, Jの,は Jは,SH 噺ば,ひ, Jは,は’ 噺なね,ど Hz, H‐は岻, に,はね岫ddd, なH, Jの,は’ 噺の,ぱ, Jは’,SH 噺ひ,の, Jは,は’ 噺なね,ど Hz, H‐は’岻, な,ばは岫dd, なH, Jは,SH 噺ば,ひ, Jは’,SH 噺ひ,の Hz, SH岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,な, なはの,ぱ, なはの,の岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, ひば,は岫C‐な岻, ばな,ど, ばど,な, はひ,ね, はぱ,は岫C‐に,ぬ,ね,の岻, のの,ぱ岫s, ぬH, CHぬO岻, にね,ぱ岫C‐は岻. Análisis calculado para CにぱHにはOぱS: C, はね,ぬは; H, の,どな; S, は,なぬ. Encontrado: C, はね,ねな; H, の,など; S, は,なぱ. な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐desoxi‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのぬ岻. Me2CO

H

151150

HO

O

OH

HO

HO

OHO

O

O

O

O

OH

1) TsCl, C5H5N

2) KSAc, DMF

O

O

O

O

O

SAc

153152

O

O

O

O

O

SH

H2N(CH2)2SH

CH3CN

Se disolvió galactosaの岫なのど, の g, にば,ばぱ mmol岻 en acetona 岫なぱの mL岻 y se agitó a ど °C. Se agregó a la solución HにSOね cc 岫の mL岻, se removió el baño de agua/hielo y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante ね h. La mezcla de reacción se neutralizó con NaにCOぬ, se filtró y evaporó el solvente en rotavap. Se obtuvo un jarabe con un Rf 噺ど,ぬば岫hexano/EtOAc, な:な岻 correspondiente al な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのな岻. A una solución de なのな crudo 岫なぬ,ひ mmol岻 en piridina 岫なに mL岻, se le agregó cloruro de tosilo 岫ぬ,には g, なば,など mmol岻 y se agitó a temperatura ambiente durante にね h. La reacción se volcó en agua y se extrajo con CHにClに. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna eluyendo con hexano/EtOAc, ぱ:に. Se obtuvo el compuesto tosilado con un rendimiento del ばの%. La な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐tosil‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫な,どど g, に,ねな mmol岻 se disolvió en DMF 岫など mL岻, se le agregó KSAc 岫な,など g, ひ,はぬ mmol岻 y se agitó a ばど °C durante にね h. Cumplido este tiempo, se volcó la mezcla en


199

agua y se extrajo con CHにClに. La fase orgánica se secó, filtró y concentró en rotavap. Se obtuvo el compuesto なのに suficientemente puro para proseguir la reacción. Para ello, se disolvió なのに岫ひなど mg, に,ぱは mmol岻 en acetonitrilo 岫の mL岻 y se le agregó exceso de cisteamina 岫にねぱ mg, ぬ,にど mmol岻. La mezcla se agitó a はの °C durante な h. En ese momento la CCD 岫hexano/EtOAc, に:な岻 reveló el consumo del compuesto de partida 岫Rf 噺ど,はぬ岻 y la aparición del producto なのぬ岫Rf 噺ど,ばぬ岻. La mezcla de reacción se concentró y purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con hexano/EtOAc, ひ:な. ぱ.ね.に Procedimiento general para la tioglicosilación de derivados de Galf, Araf y Ribof. Método A岻 Tioglicosilación de los compuestos などな, なねね ó なのの promovida por SnClね. La furanosa de partida, な,に,ぬ,の,は‐penta‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosa 岫などな岻, な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosa 岫なねね岻 ó な‐O‐acetil‐に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosa 岫なのの岻, se disolvió en CHにClに anhidro y se enfrió a ど °C. a esta solución se agregó SnClね y luego de など min se agregó el tioazúcar correspondiente 岫なぬひ ó なねぬ岻 y la mezcla se mantuvo con agitación a ど °C. Completada la reacción, la mezcla se extrajo con solución saturada de NaHCOぬ y solución saturada de NaCl. La fase orgánica se secó con MgSOね y se evaporó el solvente. El residuo se purificó por columna cromatográfica con la mezcla de solventes especificada en cada caso en particular. Método B岻 Tioglicosilación del compuesto ぱひ, なねね ó なのの promovida por MoOにClに. A una solución de MoOにClに en CHにClに anhidro y atmósfera de argón, se agregó la な‐O‐acetil‐に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐が‐D‐ribofuranosa 岫ぱひ岻な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosa 岫なねね岻 ó な‐O‐acetil‐に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosa 岫なのの岻, disuelta en CHにClに anhidro. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente por など min y se agregó la solución del tioazúcar 岫なぬひ ó なのぬ岻 en CHにClに anhidro 岫ど,の mL岻. La solución tomó coloración azul y gradualmente fue tornándose marrón. Luego de agitar a temperatura ambiente durante にね h la reacción se diluyó con


200

CHにClに岫にど mL岻 y se extrajo con solución saturada de NaHCOぬ y solución saturada de NaCl. El extracto orgánico se secó con MgSOね y se concentró el solvente. El residuo resultante se purificó por columna cromatográfica con la mezcla de solventes adecuada en cada caso. Método A岻 Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なねの岻. SnCl4

CH2Cl2

145 (50%)139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OAc

OAc

AcO

OAc

144 Se hizo reaccionar la な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosa 岫なねね, のど mg, ど,なは mmol岻 con el compuesto なぬひ岫ひひ mg, ど,なひ mmol岻 en presencia de SnClね岫にど µL, ど,なば mmol岻 como se describió anteriormente 岫Método A岻. La solución se agitó a ど °C durante ね h, observándose por CCD 岫tolueno/EtOAc, の:な岻 un compuesto mayoritario de Rf 噺ど,ぬね. El mismo se purificó por columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひの:の岻 y se obtuvo なねの岫はな mg, のど%岻 como un jarabe color amarillo pálido; 岷峅Dにど噺 −にひ,ぬ岫c 噺ど,は, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どど–ば,にぱ岫m, なのH, H‐aromáticos岻, は,なに岫t, なH, Jに,ぬ噺 Jぬ,ね噺ひ,の Hz, H‐ぬ岻, の,はな岫s, なH, Jな’,に’ 隼な Hz, H‐な’岻, の,はぱ岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ひ,ば Hz, H‐ね岻, の,にぬ岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,は, Jに,ぬ噺ひ,の Hz, H‐に岻, の,にに岫d, なH, Jな,に噺ぬ,は Hz, H‐な岻, の,どぱ岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺な,ば Hz, H‐に’岻, の,どに岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺な,ば, Jぬ’,ね’ 噺の,な Hz, H‐ぬ’岻, ね,ぬひ岫m, にH, H‐ね’, H‐の’a岻, ね,にば岫m, にH, H‐の, H‐の’b岻, ぬ,のに岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どど岫dd, なH, Jの,はa 噺ひ,ば, Jはa,はb 噺なね,の Hz, H‐はa岻, に,ぱな岫dd, なH, Jの,はb 噺に,ぬ, Jはa,はb 噺なね,の Hz, H‐はb岻, に,なな, に,どひ岫にs, ひH, CHぬCO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,は, なばど,ど, なはひ,の岫MeCO岻, なはの,ぱ, なはの,ば, なはの,の岫PhCO岻, なぬぬ,の–なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, ひは,ば岫C‐な岻, ぱぱ,ひ岫C‐な’岻, ぱな,ぱ岫C‐に’岻, ばひ,ば岫C‐ね’岻, ばば,ぬ岫C‐ぬ’岻, ばに,ね岫C‐ね岻, ばに,な岫C‐に岻, ばな,に岫C‐の岻, ばど,な岫C‐ぬ岻, はに,ひ岫C‐の’岻, のの,の岫CHぬO岻, ぬな,ば


201

岫C‐は岻, にど,ぱ, にど,ば岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬひHねどOなのS: C, のひ,ひば; H, の,なば. Encontrado: C, はど,どば; H, の,ねね. Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねは岻. O

OAc

OAc

AcO

OAcSnCl4

CH2Cl2

143 146 (61%)144

BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO La な,に,ぬ,の‐tetra‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosa 岫なねね, のど mg, ど,なは mmol岻 y el compuesto なねぬ岫ひひ mg, ど,なひ mmol岻 reaccionaron en presencia de SnClね岫にど µL, ど,なば mmol, Método A岻. Mediante la purificación por columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひの:の岻 se obtuvo el tiodisacárido なねは岫ばの mg, はな%岻 como un jarabe; Rf 噺ど,ぬぬ岫tolueno/EtOAc, の:な岻; 岷峅Dにど噺髪はば,の岫c 噺ど,ね, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,など–ば,なの岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ひね岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,の, Jに,ぬ噺など,は Hz, H‐ぬ岻, の,ひど岫dd, なH, Jね,の噺ど,ば, Jぬ,ね噺ぬ,の Hz, H‐ね岻, の,はに岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,は, Jに,ぬ噺など,は Hz, H‐に岻, の,のに岫br s, なH, H‐な’岻, の,にぱ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,は Hz, H‐な岻, の,どひ岫t, なH, Jな’,に’ 噺Jに’,ぬ’ 噺な,は Hz, H‐に’岻, の,どぬ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺な,は, Jぬ’,ね’ 噺の,ね Hz, H‐ぬ’岻, ね,ねな岫ddd, なH, Jね,の噺ど,ば, Jの,はb 噺ね,に, Jの,はa 噺ひ,に Hz, H‐の岻, ね,ぬね岫ddd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ね, Jぬ’,ね’ 噺の,ね, Jね’,の’b 噺は,な Hz, H‐ね’岻, ね,ぬに岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ね, Jの’a,の’b 噺なに,は Hz, H‐の’a岻, ね,にね岫dd, なH, Jね’,の’b 噺は,な, Jの’a,の’b 噺なに,は Hz, H‐の’b岻, ぬ,のな岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どね岫dd, なH, Jの,はa 噺ひ,に, Jはa,はb 噺なね,な Hz, H‐はa岻, に,ばね岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,に, Jはa,はb 噺なね,な Hz, H‐はb岻, に,など, に,どひ, に,どば岫ぬs, ひH, CHぬCO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,の, なばど,ど, なはひ,の岫MeCO岻, なはは,な, なはの,ば, なはの,の岫PhCO岻, なぬぬ,の–なにぱ,に岫C‐aromáticos岻, ひば,ね岫C‐な岻, ぱぱ,ば岫C‐な’岻, ぱな,ば岫C‐に’岻, ばひ,ば岫C‐ね’岻, ばば,に岫C‐ぬ’岻, ばど,ば岫C‐ね岻, ばど,ど岫C‐の岻, はひ,ぬ岫C‐に岻, はぱ,ね岫C‐ぬ岻, はに,ば岫C‐の’岻, のの,ば岫CHぬO岻, ぬな,な岫C‐は岻, にど,ば岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬひHねどOなのS: C, のひ,ひば; H, の,なば. Encontrado: C, はど,など; H, の,なひ.


202

Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なねば岻. SnCl4

CH2Cl2

147 (61%/59%)139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

101

O

OBz

OBz

OBz

OBz

SnCl4

CH2Cl2

139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz

155 Se siguió el ╉Método A╊ 岫procedimiento de tioglicosilación promovido por SnClね岻, a partir del compuesto などな岫はど mg, ど,どひ mmol岻. Éste se disolvió en CHにClに anhidro 岫な mL岻 y se le agregó SnClね岫なに µL, ど,など mmol岻. Luego de agregar el metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido なぬひ岫のね mg, ど,など mmol岻 la mezcla se agitó a ど °C por ね h. A continuación se procedió de la forma indicada en el procedimiento general. Se llevó a cabo la purificación del producto de Rf 噺ど.のひ岫tolueno/EtOAc, など:な岻 a través de una columna cromatográfica eluyendo con tolueno/EtOAc, ひぱ:に, para dar el tiodisacárido なねば岫のぱ mg, はな%岻; 岷峅Dにど噺 −なね,ば岫c 噺な,な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,なに–ば,にば岫m, ぬのH, H‐aromáticos岻, は,なに岫t, なH, Jに,ぬ噺 Jぬ,ね噺ひ,ぱ Hz, H‐ぬ岻, は,どぱ岫ddd, なH, Jね’,の’ Jの’,は’a 噺ね,ど, Jの’,は’b 噺は,ひ Hz, H‐の’岻, の,ひぬ岫br s, なH, Jな’,に’ 隼な Hz, H‐な’岻, の,はぱ岫dt, なH, Jに’,ぬ’ 噺な,な, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ぬ’岻, の,ねは岫d, なH, Jに’,ぬ’ 噺な,な Hz, H‐に’岻, の,ねね岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ひ,ぱ Hz, H‐ね岻, の,にに岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,は, Jに,ぬ噺ひ,ぱ Hz, H‐に岻, の,なひ岫d, なH, Jな,に噺ぬ,は Hz, H‐な岻, ね,ぱに岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ね,ど, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ね’岻, ね,ばば岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,ね, Jは’a,は’b 噺なな,ひ Hz, H‐は’a岻, ね,ばね岫dd, なH, Jの’,は’b 噺は,ひ, Jは’a,は’b 噺なな,ひ Hz, H‐は’b岻, ね,ぬな岫ddd, なH, Jの,はb 噺に,に, Jね,の噺 Jの,はa 噺ひ,ぱ Hz, H‐の岻, ぬ,ねひ岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どば岫dd, なH, Jの,はa 噺ひ,ぱ, Jはa,はb 噺なね,は Hz, H‐はa岻, に,ぱの岫dd, なH, Jの,はb 噺に,に, Jはa,はb 噺なね,は Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはの,ば岫に岻, なはの,は, なはの,ね岫に岻, なはの,ぬ岫に岻岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, ひは,は岫C‐な岻, ぱひ,に岫C‐な’岻, ぱに,は岫C‐に’岻, ぱな,ぬ岫C‐ね’岻, ばば,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばに,ぬ岫C‐ね岻, ばに,な岫C‐に岻, ばな,の岫C‐の岻, ばど,に岫に, C‐ぬ,の’岻, はぬ,ね岫C‐は’岻, のの,の岫CHぬO岻, ぬな,ぬ岫C‐は岻. Análisis calculado para CはにHのにOなばS: C, はば,はな; H, ね,ばは; S, に,ひな. Encontrado: C, はば,にば; H, ね,ぱぬ; S, に,のの.


203

El mismo procedimiento 岫Método A岻 se aplicó a la reacción de la な‐O‐acetil‐に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosa 岫なのの, はど mg, ど,どひ mmol岻 con なぬひ岫のひ mg, ど.なな mmol岻, para obtener なねば岫はな mg, のひ%岻. Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なねぱ岻. SnCl4

CH2Cl2

148 (52%)143

BzO

O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

101

O

OBz

OBz

OBz

OBz A partir del compuesto などな岫ばひ mg, ど,なな mmol岻, SnClね岫なは µL, ど,なぬ mmol岻 y el compuesto なねぬ岫ばな mg, ど,なね mmol岻, se llevó a cabo el proceso de tioglicosilación promovido por SnClね岫Método A岻, agitando la mezcla en CHにClに anhidro, a ど °C durante ぬ,の h. Luego de purificar por columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひぱ:に岻 se obtuvo el tiodisacárido なねぱ岫はの mg, のに%岻; Rf 噺ど,のに岫tolueno/EtOAc, など:な岻; 岷峅Dにど噺髪はの,ど岫c 噺ど,ね, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,なぬ–ば,にに岫m, ぬのH, H‐aromáticos岻, は,どぬ岫ddd, なH, Jね’,の’ 噺 Jの’,は’a 噺ね,ぬ, Jの’,は’b 噺は,ぱ Hz, H‐の’岻, の,ひの岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,ね, Jに,ぬ噺など,ば Hz, H‐ぬ岻, の,ぱひ岫bd, なH, Jね,の隼な, Jぬ,ね噺ぬ,ね Hz, H‐ね岻, の,ぱひ岫br s, なH, Jな’,に’ 隼な Hz, H‐な’岻, の,ばど岫d, なH, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ぬ’岻, の,はに岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,は, Jに,ぬ噺など,は Hz, H‐に岻, の,ねぱ岫br s, なH, Jな’,に’ Jに’,ぬ’ 隼な,ど Hz, H‐に’岻, の,にば岫d, なH, Jな,に噺ぬ,は Hz, H‐な岻, ね,ばひ岫t, なH, Jね’,の’ 噺ね,ぬ, Jぬ’,ね’ 噺の,ど Hz, H‐ね’岻, ね,ばな岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,の, Jは’a,は’b 噺なな,ぱ Hz, H‐は’a岻, ね,はば岫dd, なH, Jの’,は’b 噺ば,ど, Jは’a,は’b 噺なな,ぱ Hz, H‐は’b岻, ね,ねは岫dd, なH, Jの,はb 噺ぬ,の, Jの,はa 噺ひ,の Hz, H‐の岻, ぬ,のど岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,なに岫dd, なH, Jの,はa 噺ひ,の, Jはa,はb 噺なね,ぬ Hz, H‐はa岻, に,ばは岫dd, なH, Jの,はb 噺ぬ,ぱ, Jはa,はb 噺なね,ぬ Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,な, なはの,ひ, なはの,ば岫に岻, なはの,の岫に岻, なはの,ぬ岫PhCO岻, なぬぬ,は–なにぱ,に岫C‐aromáticos岻, ひば,ね岫C‐な岻, ぱひ,ど岫C‐な’岻, ぱに,は岫C‐に’岻, ぱな,ぬ岫C‐ね’岻, ばば,ば岫C‐ぬ’岻, ばど,ぱ岫C‐ね岻, ばど,ね岫C‐の岻, ばど,に岫C‐の’岻, はひ,ぬ岫C‐に岻, はぱ,の岫C‐ぬ岻, はぬ,に岫C‐は’岻, のの,ば岫CHぬO岻, ぬど,ば岫C‐は岻. Análisis calculado para CはにHのにOなばS: C, はば,はな; H, ね,ばは; S, に,ひな. Encontrado: C, はば,ぬは; H, ね,ばは; S, に,はぬ.


204

Método B岻 Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐acetil‐ゎ‐L‐arabinofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なねの岻. MoO2Cl2

CH2Cl2

O

OAc

OAc

AcO

OAc

144 145 (65%)139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO En forma alternativa, なねの岫ひね mg, はの%岻 se obtuvo a través del Método B a partir de なねね岫などど mg, ど,ぬな mmol岻, なぬひ岫ひば mg, ど,なひ mmol岻 y MoOにClに岫ぬ,ぱ mg, ど,どに mmol岻. Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なねば岻. S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz147 (56%)139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz155

MoO2Cl2

CH2Cl2

En forma alternativa, el tiodisacárido なねば se sintetizó utilizando MoOにClに como catalizador 岫Método B岻. A una solución de MoOにClに岫な,に mg, ど,どな mmol岻 en CHにClに anhidro 岫ど,に mL岻 en atmósfera de argón, se le agregó una solución del compuesto なのの岫のの mg, ど,どひ mmol岻 en CHにClに anhidro 岫ど,の mL岻. La mezcla se agitó durante など min a temperatura ambiente y se le agregó el metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なぬひ, にね mg, ど,どの mmol岻 disuelto en ど,の mL de CHにClに anhidro. Luego del procedimiento habitual para cortar la reacción y purificar la mezcla, se obtuvo el tiodisacárido なねば岫にぱ mg, のは%岻. Este producto resultó idéntico al descripto anteriormente.


205

Metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐‐D‐ribofuranosil岻‐は‐tio‐‐D‐glucopiranósido 岫なねひ岻. O

OBzOBz

BzO OAc

149 (52%)139

BzO O

OMe

BzO

BzO

SH

+

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

89

MoO2Cl2

CH2Cl2

O

OBzOBz

BzO

A una solución de MoOにClに岫ど,ひ mg, ど,どな mmol岻 en CHにClに anhidro 岫ど,な mL岻 se le adicionó una solución del compuesto ぱひ岫ねの mg, ど,どひ mmol岻 en el mismo solvente 岫ど,ぬ mL岻 de acuerdo al método B. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por など min, bajo atmósfera de argón. A dicha mezcla se le incorporó el metil に,ぬ,ね‐tri‐O‐benzoil‐は‐tio‐D‐glucopiranósido 岫なぬひ, ばど mg, ど,なぬ mmol岻 disuelto también en CHにClに anhidro 岫ど,に mL岻. Luego de に h de agitación, la CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 mostró la presencia de un producto principal de Rf 噺ど,のは. Finalmente, el residuo se purificó por columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひの:の岻. Se obtuvo así el compuesto なねひ岫ねの mg, のに%岻 como un jarabe; 岷峅Dにど噺髪にに,は岫c 噺ど,ぱ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ–ば,にぱ岫m, なのH, H‐aromáticos岻, は,なな岫t, なH, Jに,ぬ Jぬ,ね噺など Hz, H‐ぬ岻, の,ぱば岫t, なH, Jに’,ぬ’ Jぬ’,ね’ 噺の,の Hz, H‐ぬ’岻, の,ばぬ岫dd, なH, Jな’,に’ 噺ぬ,ぬ Hz, H‐に’岻, の,ばど岫d, なH, H‐な’岻, の,ねの岫t, なH, Jね,の噺ひ,ぱ Hz, H‐ね岻, の,にぬ岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,は Hz, H‐に岻, の,なひ岫d, なH, H‐な岻, ね,ばど岫m, にH, H‐ね’, H‐の’a岻, ね,のね岫dd, なH, Jね’,の’b 噺の,の, Jの’a,の’b 噺なに,ひ Hz, H‐の’b岻, ね,には岫ddd, なH, Jの,はa 噺ひ,の, Jの,はb 噺に,に Hz, H‐の岻, ぬ,ねの岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どは岫dd, なH, Jはa,はb 噺なね,ね Hz, H‐はa岻, に,ひな岫dd, なH, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,な, なはの,ぱ, なはの,ぬ岫PhCO岻, なぬぬ,の−なにぱ,に岫C‐aromáticos岻, ひは,ば岫C‐な岻, ぱは,ひ岫C‐な’岻, ばひ,ひ岫C‐ね’岻, ばの,ば岫C‐に’岻, ばに,の岫C‐ぬ’岻, ばに,に岫C‐ね岻, ばに,な岫C‐に岻, ばど,ぱ岫C‐の岻, ばど,ぬ岫C‐ぬ岻, はね,ど岫C‐の’岻, のの,は岫CHぬO岻, ぬな,は岫C‐は岻. Análisis calculado para CのねHねはOなのS: C, はば,どば; H, ね,ばひ; S, ぬ,ぬな. Encontrado: C, はは,ぱひ; H, ね,ぱひ; S, ぬ,にの.


206

な,に:ぬ,ね‐Di‐O‐isopropilidén‐は‐S‐岫に,ぬ,の‐tri‐O‐benzoil‐‐D‐ribofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのね岻. O

OBzOBz

BzO OAc

+

89

MoO2Cl2

CH2Cl2

S

153

O

O

O

O

O

SH

154 (39%)

O

O

O

O

O

O

OBzOBz

BzO

Se partió del compuesto ぱひ岫ひの mg, ど,なひ mmol岻 y de な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐tio‐D‐galactosa 岫なのぬ, ばぱ mg, ど,にぱ mmol岻 y se siguió el procedimiento descripto anteriormente para el compuesto なねひ. Luego de purificar a través de una columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひば:ぬ岻 se obtuvo el tiodisacárido なのね岫のぬ mg, ぬひ%岻; 岷峅Dにど噺 −ねぱ,の岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,など–ば,なは岫m, なのH, H‐aromáticos岻, の,ひど岫dd, なH, Jに’,ぬ’ Jぬ’,ね’ 噺の,ぬ Hz, H‐ぬ’岻, の,ばな岫dd, なH, Jな’,に’ 噺ぬ,ひ, Jに’,ぬ’ 噺の,ぬ Hz, H‐に’岻, の,はな岫d, なH, H‐な’岻, の,のに岫d, なH, Jな,に噺の,ど Hz, H‐な岻, ね,はひ岫dd, なH, Jね’の’a 噺ぬ,ぱ, Jの’a,の’b 噺なな,な Hz, H‐の’a岻, ね,はは岫ddd, なH, Jね’,の’b 噺ね,な Hz, H‐ね’岻, ね,はな岫dd, なH, H‐の’b岻, ね,のぱ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,の, Jぬ,ね噺ば,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ね,ぬな–ね,ぬぱ岫m, にH, H‐に, H‐ね岻, ぬ,ひの岫ddd, なH, Jね,の噺な,ね Hz, H‐の岻, ぬ,どば岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,ぬ, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はa岻, に,ひど岫dd, なH, Jの,はb 噺は,に Hz, H‐はb岻, な,ねひ, な,ねぬ, な,ぬな, な,ぬど岫ねs, なにH, に岫CHぬ岻にC岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,に, なはの,に, なはの,な岫PhCO岻, なぬぬ,ね−なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, などひ,ぬ, などぱ,は岷岫CHぬ岻にC峅, ひは,の岫C‐な岻, ぱは,ぬ岫C‐な’岻, ぱど,ど岫C‐ね’岻, ばの,ば岫C‐に’岻, ばに,は岫C‐ぬ’岻, ばな,の, ばど,の岫C‐に, C‐ね岻, ばど,ぱ岫C‐ぬ岻, はぱ,ね岫C‐の岻, はね,の岫C‐の’岻, ぬど,の岫C‐は岻, には,ど, にの,ひ, にね,ひ, にね,ね岫ね岫CHぬ岻にC岻. Análisis calculado para CぬぱHねどOなにS: C, はぬ,ぬに; H, の,のひ; S, ね,ねの. Encontrado: C, はぬ,なの; H, の,はは; S, ね,ぬば. な‐O‐Acetil‐に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なのの岻. SnCl4

Ac2O

155 (78%)

O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz101

O

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz


207

La な,に,ぬ,の,は‐penta‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosa 岫などな, ねはど mg, ど,はは mmol岻 se disolvió en ClにCHに anhidro 岫なな mL岻. Se enfrió la solución a ど °C y se agregó a la misma SnClね岫ひに µL, ど,ばば mmol岻 y luego de agitar por など min, se agregó también anhídrido acético 岫なぬは µL, な,ねね mmol岻. Se continuó la agitación a ど °C por は h, cuando la CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 mostró la conversión del compuesto de partida en なのの岫Rf 噺ど,ねぱ岻. Se diluyó la solución con ClにCHに, y se extrajo con solución saturada de NaHCOぬ岫ぬにど mL岻 y solución saturada de NaCl. Se secó el extracto orgánico con MgSOね y se evaporó el solvente. El residuo se purificó mediante una columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひぱ:に岻 para obtener el compuesto なのの como un aceite incoloro 岫にひど mg, ばぱ%岻, que recristalizó de EtOH; pf ななの °C; 岷峅Dにど噺 −の,ば岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どば–ば,にぱ岫m, にどH, H‐aromáticos岻, は,のに岫br s, なH, H‐な岻, は,どぱ岫ddd, なH, Jね,の噺ぬ,は, Jの,はa 噺ね,ど, Jの,はb噺ば,ぬ Hz, H‐の岻, の,ばな岫dd, なH, Jに,ぬ噺な,ど, Jぬ,ね噺ね,ね Hz, H‐ぬ岻, の,はど岫d, なH, Jに,ぬ噺な,ど Hz, H‐に岻, ね,ぱど岫dd, なH, Jの,はa 噺ね,ど, Jはa,はb 噺なに,ど Hz, H‐はa岻, ね,ばひ岫dd, なH, Jね,の噺ぬ,は, Jぬ,ね噺ね,ね Hz, H‐ね岻, ね,ばに岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,ぬ, Jはa,はb’ 噺なに,ど Hz, H‐はb岻, に,なひ岫s, ぬH, CHぬCO岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはひ,ど岫MeCO岻, なはは,ど, なはの,ば, なはの,の, なはの,に岫PhCO岻, なぬぬ,ば–なにぱ,に岫C‐aromáticos岻, ひひ,ね岫C‐な岻, ぱぬ,は岫C‐ね岻, ぱな,ぬ岫C‐に岻, ばば,ね岫C‐ぬ岻, ばは,な岫C‐の岻, はぬ,の岫C‐は岻, にな,ど岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CぬはHぬどOなな: C, はば,ばな; H, ね,ばぬ. Encontrado: C, はば,ばぱ; H, ね,のの. な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐S‐岫に,ぬ,の ‐tri‐O‐acetil‐ ゎ ‐L‐arabinofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのは岻. MoO2Cl2

CH2Cl2

O

OAc

OAc

AcO

OAc

144

+

O

OAc

OAc

AcO

S

153

O

O

O

O

O

SH

156 (20%)

O

O

O

O

O Se siguió el método B: A una solución de MoOにClに岫な,ね mg, ど,どな mmol岻 en CHにClに anhidro 岫ど,の mL岻 se le agregó el compuesto なねね岫ぱど mg, ど,にぱ mmol岻 también disuelto en el mismo solvente 岫ど,の mL岻 y luego el compuesto なのぬ岫ねば mg, ど,なば


208

mmol岻. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante にね h. Por CCD 岫tolueno/MeOH, の:な岻 se observó un producto principal de Rf 噺ど,はど. La mezcla de reacción se sometió a una cromatografía en columna utilizando hexano/EtOAc は:な蝦ぬ:な, pero no se logró purificar completamente el producto. Por ello las fracciones impuras se repurificaron por cromatografía en columna eluyendo ahora con tolueno/EtOAc, ひ:な. Se obtuvo así el tiodisacárido なのは岫なぱ mg, にど%岻岷峅Dにど噺 −などの,の岫c 噺ど,は, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,のに岫d, なH, Jな,に噺の,ど Hz, H‐な岻, の,ねに岫d, なH, Jな’,に’ 噺に,ど Hz, H‐な’岻, の,なは岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺に,ど Hz, H‐に’岻, の,どぬ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺に,ど, Jぬ’,ね’ 噺ね,ひ Hz, H‐ぬ’岻, ね,はに岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ね, Jぬ,ね噺ば,ひ Hz, H‐ぬ岻, ね,ぬひ岫ddd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,は, Jぬ’,ね’ 噺ね,ひ, Jね’,の’b 噺は,ね Hz, H‐ね’岻, ね,ぬば岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,は, Jの’a,の’b 噺なに,ぱ Hz, H‐の’a岻, ね,ぬな岫dd, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jぬ,ね噺ば,ひ Hz, H‐ね岻, ね,ぬど岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ね, Jな,に噺の,ど Hz, H‐に岻, ね,にば岫dd, なH, Jね’,の’b 噺は,ね, Jの’a,の’b 噺なに,ぱ Hz, H‐の’b岻, ぬ,ひぬ岫m, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jの,はb 噺は,ど, Jの,はa 噺ば,は Hz, H‐の岻, に,ひひ岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,は, Jはa,はb 噺なぬ,ぱ Hz, H‐はa岻, に,ぱな岫dd, なH, Jの,はb 噺は,な, Jはa,はb 噺なぬ,ぱ Hz, H‐はb岻; に,なな, に,など岫にs, ひH, CHぬCO岻な,のぬ, な,ねの, な,ぬね, な,ぬぬ岫ねs, なにH, に岫CHぬ岻にC岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,は, なばど,ど, なはひ,の岫MeCO岻, などひ,ぬ, などぱ,は岫MeにC岻, ひは,の岫C‐な岻, ぱぱ,に岫C‐な’岻, ぱな,ぱ岫C‐に’岻, ばひ,ば岫C‐ね’岻, ばば,ぬ岫C‐ぬ’岻, ばな,ば, ばど,ぱ, ばど,ね岫C‐に, ぬ, ね岻, はぱ,に岫C‐の岻, はに,ぱ岫C‐の’岻, ぬど,ひ岫C‐は岻, には,ど岫に岻, にね,ひ, にね,ね岫ね岫CHぬ岻にC岻, にど,ば岫CHぬCO岻. Análisis calculado para CにぬHぬねOなにS: C, のな,はぱ; H, は,ねな. Encontrado: C, のな,ぱに; H, は,のば. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CにぬHぬねOなにS 髪Na: ののば,なははぬに; Encontrado: ののば,なはばひね. な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのば岻.

+

SO

OBz

OBz

OBz

OAc

OBz

155

O

OBz

OBz

OBz

OBz

MoO2Cl2

CH2Cl2

153

O

O

O

O

O

SH

157 (37%)

O

O

O

O

O

Se siguió el procedimiento en el cual el catalizador utilizado es el MoOにClに岫Método B岻. Se partió de una solución del compuesto なのの岫なはど mg, ど,にの mmol岻, MoOにClに


209

岫に,ば mg, ど,どな mmol岻 y なのぬ岫ぬの mg, ど,なぬ mmol岻 en CHにClに anhidro 岫な,に mL岻. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante にね h. Se observó mediante CCD un producto principal de Rf 噺ど,ねぱ岫tolueno/EtOAc, ば:な岻, el cual se purificó por cromatografía en columna 岫tolueno/EtOAc, ひば:ぬ岻 para dar el tiodisacárido なのば岫ねど mg, ぬば%岻; 岷峅Dにど噺 −ばぬ,の岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,など–ば,など岫m, なのH, H‐aromáticos岻, は,どひ岫ddd, なH, Jの’,は’a 噺ね,に, Jね’,の’ 噺ね,ぱ, Jの’,は’b 噺ば,ぬ Hz, H‐の’岻, の,ばの岫t, なH, Jな’,ぬ’ 噺ど,ぱ, Jな’,に’ 噺な,の Hz, H‐な’岻, の,はば岫dddd, なH, Jな’,ぬ’ 噺ど,ぱ, Jに’,ぬ’ 噺な,の, Jぬ’,ね’ 噺ね,ぱ Hz, H‐ぬ’岻, の,のの岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺な,の Hz, H‐に’岻, の,のに岫d, なH, Jな,に噺の,ど Hz, H‐な岻, ね,ぱな岫t, なH, Jぬ’,ね’ 噺 Jね’,の’ 噺ね,ぱ Hz, H‐ね’岻, ね,ばぱ岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,に, Jは’a,は’b 噺なな,ひ Hz, H‐は’a岻, ね,ばに岫dd, なH, Jの’,は’b 噺ば,ぬ, Jは’a,は’b 噺なな,ひ Hz, H‐は’b岻, ね,はど岫dd, Jに,ぬ噺に,ね, Jぬ,ね噺ぱ,ど Hz, H‐ぬ岻, ね,ぬど岫m, にH, H‐に, H‐ね岻, ぬ,ひば岫ddd, なH, Jね,の噺な,ば, Jの,はb 噺は,ぬ, Jの,はa 噺ば,の Hz, H‐の岻, ぬ,どは岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,の, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はa岻, に,ぱひ岫dd, なH, Jの,はb 噺は,ぬ, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はb岻, な,ねひ, な,ねね, な,ぬに, な,にひ岫ねs, なにH, に岫CHぬ岻にC岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,ど, なはの,ば, なはの,の, なはの,ぬ岫PhCO岻, なぬぬ,の–なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, などひ,ね, などぱ,は岫MeにC岻, ひは,の岫C‐な岻, ぱぱ,ね岫C‐な’岻, ぱに,は岫C‐に’岻, ぱな,の岫C‐ね’岻, ばば,ひ岫C‐ぬ’岻, ばな,ば, ばど,の岫C‐に,ね岻, ばど,ぱ岫C‐ぬ岻, ばど,ぬ岫C‐の’岻, はぱ,ぬ岫C‐の岻, はぬ,の岫C‐は’岻, ぬど,の岫C‐は岻, には,ど, にの,ひ, にね,ひ, にね,の岫ね岫CHぬ岻にC岻. Análisis calculado para CねはHねはOなねS: C, はね,はな; H, の,ねぬ. Encontrado: C, はね,ひね; H, の,ぬぬ. ぱ.ね.ぬ Desacilación de los tiodisacáridos なねの, なねは, なねば, なねぱ, なのね y なのば. Procedimiento general El derivado O‐acilado de cada tiodisacárido se suspendió en una mezcla de MeOH:EtぬN:HにO, ぬ:な:ぬ, la cual se agitó a temperatura ambiente, hasta que la CCD 岫n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻 mostró el consumo total del compuesto de partida. Se evaporó el solvente y se eluyó a través de una columna rellena con resina de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻. El eluato se concentró y, según el caso, se purificó mediante una mini columna octadecil Cなぱ. Se colectaron las fracciones según CCD en n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な o MeOH y se concentraron para obtener así el tiodisacárido libre correspondiente.


210

Metil は‐S‐岫ゎ‐L‐arabinofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なのぱ岻. 145

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

158 (69%)

O

OH

OH

HO

S

HO O

OMe

HO

HO La eliminación de los grupos protectores de なねの岫はね mg, ど,どぱ mmol岻 se realizó mediante el mismo procedimiento general, para dar el tiodisacárido libre なのぱ岫なひ mg, はひ%岻; Rf 噺ど,のば岫n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻; 岷峅Dにど噺 −なぬ,に岫c 噺な,ど, HにO岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,なば岫d, なH, Jな’,に’ 噺ね,ぱ Hz, H‐な’岻, ね,ばど岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ぬ,ひは岫t, なH, Jな’,に’ 噺Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ Hz, H‐に’岻, ぬ,ひの岫m, なH, H‐ね’岻, ぬ,ぱひ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ, Jぬ’,ね’ 噺ば,に Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ばぬ岫dd, なH, Jね’,の’a 噺に,ひ, Jの’a,の’b 噺なに,ね Hz, H‐の’a岻, ぬ,ばな岫m, なH, H‐の岻, ぬ,はぬ岫dd, なH, Jね’,の’b 噺の,ぬ, Jの’a,の’b 噺なに,の Hz, H‐の’b岻, ぬ,のぬ岫t, なH, Jに,ぬ噺 Jぬ,ね噺ひ,の Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ねぱ岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,ば, Jに,ぬ噺ひ,の Hz, H‐に岻, ぬ,ぬは岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,にぬ岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ひ,の Hz, H‐ね岻, ぬ,どぱ岫dd, なH, Jの,はa 噺に,ど, Jはa,はb 噺なね,に Hz, H‐はa岻, に,ばぱ岫dd, なH, Jの,はb 噺ぱ,ぱ, Jはa,はb 噺なね,に Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひひ,に岫C‐な岻, ぱひ,ね岫C‐な’岻, ぱに,に, ぱな,ね岫C‐に’,ね’岻, ばの,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばに,ひ岫C‐ぬ岻, ばに,ば岫C‐ね岻, ばな,ぱ岫C‐の岻, ばな,に岫C‐に岻, はど,は岫C‐の’岻, のの,な岫CHぬO岻, ぬに,ひ岫C‐は岻. Análisis calculado para CなにHににOひS.ど,のHにO: C, ねな,どど; H, は,はど. Encontrado: C, ねな,ぬは; H, は,ぱは. Metil は‐S‐岫ゎ‐L‐arabinofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なのひ岻. 146

O

OAc

OAc

AcO

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

159 (77%)

O

OH

OH

HO

S

HO

O

OMe

HO

HO

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3 Mediante la O‐desacilación de なねは岫ななぬ mg, ど,なね mmol岻 por el procedimiento general se obtuvo el tiodisacárido なのひ岫ぬば mg, ばば%岻; Rf 噺ど,ばひ岫MeOH岻; 岷峅Dにど噺 −ねね,ね岫c 噺ど,ひ, MeOH岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,なは岫d, なH, Jな’,に’ 噺ね,ぱ Hz, H‐な’岻, ね,ばに岫d, なH, H‐な岻, ぬ,ひば岫ddd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ど, Jね’,の’b 噺の,ぬ, Jぬ’,ね’ 噺ば,ぬ Hz, H‐ね’岻, ぬ,ひは岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ Hz, H‐に’岻, ぬ,ひぬ岫bdd, なH, Jの,はb 噺ね,の, Jの,はa 噺ひ,ど Hz, H‐の岻, ぬ,ひな岫br s, なH, H‐ね岻, ぬ,ひど岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ, Jぬ’,ね’ 噺ば,ぬ Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ばぬ岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ど, Jの’a,の’b 噺なに,は Hz, H‐の’a岻, ぬ,ばに岫m, にH, H‐に, H‐ぬ岻, ぬ,はね岫dd, なH, Jね’,の’b 噺の,ぬ, Jの’a,の’b 噺


211

なに,は Hz, H‐の’b岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ひに岫dd, なH, Jの,はa 噺ひ,ど, Jはa,はb 噺なね,ど Hz, H‐はa岻, に,ばは岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,の, Jはa,はb 噺なね,ど Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひひ,ね岫C‐な岻, ぱひ,に岫C‐な’岻, ぱに,に, ぱな,ぬ岫C‐に’,ね’岻, ばの,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばど,ば, ばど,に岫C‐ね,の岻, はひ,ね, はぱ,ど岫C‐に,ぬ岻, はど,は岫C‐の’岻, のの,に岫CHぬO岻, ぬな,ね岫C‐は岻. Análisis calculado para CなにHににOひS: C, ねに,どぱ; H, は,ねぱ. Encontrado: C, ねな,のぱ; H, は,はば. Metil は‐S‐岫が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐glucopiranósido 岫なはど岻.

147

S

BzO O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz160 (67%)

S

HO O

OMe

HO

HO

O

OH

OH

OH

OH

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

El compuesto なねば岫ばど mg, ど.どは mmol岻 se dejó reaccionar durante ぬど h en la solución de MeOH:EtぬN:HにO, ぬ:な:ぬ岫など mL岻. Transcurrido ese tiempo se concentró el solvente y se aplicó el residuo a una columna rellena con resina de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻 que se eluyó con metanol:agua な:な. El eluato se concentró y se purificó nuevamente mediante una mini columna octadecil Cなぱ, la cual se eluyó con など mL de agua y ぬ mL de MeOH. Se obtuvo así el tiodisacárido libre なはど岫なの mg, はば%岻, Rf 噺ど,ねね岫n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻; 岷峅Dにど噺 −ぬな,ぱ岫c 噺ど,の, HにO岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,なの岫d, なH, Jな’,に’ 噺の,ぬ Hz, H‐な’岻, ね,ばど岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ば Hz, H‐な岻, ね,どぬ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺の,ね, Jぬ’,ね’ 噺ば,の Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ひね岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺の,ぬ Hz, H‐に’岻, ぬ,ぱぱ岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,の, Jぬ’,ね’ 噺ば,の Hz, H‐ね’岻, ぬ,ばの岫ddd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,の, Jの’,は’a 噺ね,ば, Jの’,は’b 噺ば,ば Hz, H‐の’岻, ぬ,ばど岫ddd, なH, Jの,はa 噺に,に, Jの,はb 噺ぱ,ぱ, Jね,の噺ひ,ど Hz, H‐の岻, ぬ,はど岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,ば, Jは’a,は’b 噺なな,は Hz, H‐は’a岻, ぬ,のは岫dd, なH, Jの’,は’b 噺ば,ば, Jは’a,は’b 噺なな,は Hz, H‐は’b岻, ぬ,のね岫t, なH, Jに,ぬ噺 Jぬ,ね噺ひ,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ねひ岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,ば, Jに,ぬ噺ひ,ぱ Hz, H‐に岻, ぬ,ぬは岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,にぬ岫dd, なH, Jね,の噺ひ,ど, Jぬ,ね噺ひ,ぱ Hz, H‐ね岻, ぬ,どば岫dd, なH, Jの,はa 噺に,に, Jはa,はb 噺なね,ぬ Hz, H‐はa岻, に,ばぱ岫dd, なH, Jの,はb 噺ぱ,ぱ, Jはa,はb 噺なね,ぬ Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひひ,に岫C‐な岻, ぱひ,ね岫C‐な’岻, ぱな,ぬ岫C‐ね’岻, ぱな,な岫C‐に’岻, ばは,ど岫C‐ぬ’岻, ばに,ひ岫C‐ぬ岻, ばに,は岫C‐ね岻, ばな,ひ岫C‐の岻, ばな,に岫C‐に岻, ばど,ね岫C‐の’岻, はに,ぱ岫C‐は’岻, のの,に岫CHぬO岻, ぬに,ね岫C‐は岻. Análisis calculado para CなぬHにねOなどS.ど,のHにO: C, ねど,ひに; H, は,はな. Encontrado: C, ねど,ぱに; H, は,ぱの.


212

Metil は‐S‐岫が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranósido 岫なはな岻. MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

148

S

BzO

O

OMe

BzO

BzO

O

OBz

OBz

OBz

OBz161 (67%)

S

HO

O

OMe

HO

HO

O

OH

OH

OH

OH La O‐desbenzoilación de なねぱ岫ななど mg, ど,など mmol岻 en なの mL de solución MeOH:EtぬN:HにO, ぬ:な:ぬ condujo a なはな luego de にの h de reacción y el mismo proceso de purificación descripto para el compuesto なはど岫はば%岻; Rf 噺ど,はぱ岫MeOH岻; 岷峅Dにど噺 −なぬ,の岫c 噺ど,ひ, HにO岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, DにO岻: δ 噺の,なに岫d, なH, Jな’,に’ 噺の,ぬ Hz, H‐な’岻, ね,ばな岫d, なH, H‐な岻, ね,どぬ岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺の,ぬ, Jぬ’,ね’ 噺ば,ね Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ひぬ岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺の,ぬ Hz, H‐に’岻, ぬ,ひに–ぬ,ぱは岫m, にH, H‐ね, H‐の岻, ぬ,ぱぱ岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,の, Jぬ’,ね’ 噺ば,の Hz, H‐ね’岻, ぬ,ばは岫ddd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,の, Jの’,は’a 噺ね,は, Jの’,は’b 噺ば,は Hz, H‐の’岻, ぬ,ばな岫m, にH, H‐に, H‐ぬ岻, ぬ,はど岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ね,は, Jは’a,は’b 噺なな,は Hz, H‐は’a岻, ぬ,のの岫dd, なH, Jの’,は’b 噺ば,は, Jは’a,は’b 噺なな,は Hz, H‐は’b岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ひど岫dd, なH, Jの,はa 噺ぱ,ひ, Jはa,はb 噺なね,ど Hz, H‐はa岻, に,ばね岫dd, なH, Jの,はb 噺ね,ぱ, Jはa,はb 噺なね,ど Hz, H‐はb岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, DにO岻: δ 噺ひひ,の岫C‐な岻, ぱひ,な岫C‐な’岻, ぱな,ぬ岫C‐ね’岻, ぱな,ど岫C‐に’岻, ばは,ど岫C‐ぬ’岻, ばど,ひ, ばど,ぬ, ばど,な岫C‐ね,の,の’岻, はひ,の, はば,ひ岫C‐に,ぬ岻, はに,ば岫C‐は’岻, のの,に岫CHぬO岻, ぬな,ね岫C‐は岻. Análisis calculado para CなぬHにねOなどS: C, ねな,ひな; H, は,のど. Encontrado: C, ねに,には; H, は,ばど. な,に:ぬ,ね‐Di‐O‐isopropilidén‐は‐S‐岫‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なはに岻. S

O

OBz

OBz

OBz

OBz157

O

O

O

O

O

MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

S

O

OH

OH

OH

OH162 (91%)

O

O

O

O

O La desprotección del compuesto なのば岫はど mg, ど,どば mmol岻 con la solución de MeOH:EtぬN:HにO ぬ:な:ぬ岫など mL岻 condujo al tiodisacárido libre なはに岫にひ mg, ひな%岻 luego de ぬど h de reacción y posterior purificación a través de una columna rellena


213

con resina de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻 que se eluyó con MeOH:acetona な:な; Rf 噺ど,はね岫MeOH岻; 岷峅Dにど噺なのど,ぱ岫c 噺な,ど, HにO岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻: δ 噺の,ねは岫d, なH, Jな,に噺の,ど Hz, H‐な岻, の,なに岫d, なH, Jな’,に’ 噺ね,ぬ Hz, H‐な’岻, ね,はぬ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ね, Jぬ,ね噺ば,ひ Hz, H‐ぬ岻, ね,ぬぱ岫dd, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jぬ,ね噺ば,ひ Hz, H‐ね岻, ね,ぬね岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ね, Jな,に噺の,ど Hz, H‐に岻, ね,どの岫dd, なH, Jに’,ぬ’ 噺ね,ぱ, Jぬ’,ね’ 噺ば,ね Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ひは岫ddd, なH, Jね,の噺な,は, Jの,はb 噺は,ば, Jの,はa 噺ば,ど Hz, H‐の岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,な, Jぬ’,ね’ 噺ば,ね Hz, H‐ね’岻, ぬ,ひど岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ の,ど Hz, H‐に’岻, ぬ,ばぬ岫ddd, なH, Jね’,の’ 噺ぬ,な, Jの’,は’a 噺 Jの’,は’b 噺は,ぱ Hz, H‐の’岻, ぬ,はど岫m, にH, H‐は’a, H‐は’b岻, に,ぱば岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,ど, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はa岻, に,ばば岫dd, なH, Jの,はb 噺は,ぱ, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はb岻, な,のな, な,ねど, な,ぬね, な,ぬぬ岫ねs, なにH, に岫CHぬ岻にC岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻: δ 噺ななど,ぬ, などひ,ひ岫MeにC岻, ひば,ひ岫C‐な岻, ひど,ば岫C‐な’岻, ぱぬ,ひ岫C‐に’岻, ぱぬ,に岫C‐ね’岻, ばぱ,の岫C‐ぬ’岻, ばに,ぱ岫C‐ね岻, ばに,ぬ岫C‐の’岻, ばに,に岫C‐ぬ岻, ばな,ひ岫C‐に岻, はひ,ぱ岫C‐の岻, はね,は岫C‐は’岻, ぬな,ぬ岫C‐は岻, には,ね, には,ぬ, にの,な, にね,は岫ね岫CHぬ岻にC岻. Análisis calculado para CなぱHぬどOなどS: C, ねひ,ぬど; H, は,ひど. Encontrado: C, のど,どど; H, ば,ぬひ. な,に:ぬ,ね‐Di‐O‐isopropilidén‐は‐S‐岫‐D‐ribofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なはね岻. MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

S

154

O

O

O

O

O

O

OBzOBz

BzOS

164 (78%)

O

O

O

O

O

O

OHOH

HO

El tiodisacárido なのね岫ばの mg, ど,など mmol岻 se trató con la solución de MeOH:EtぬN:HにO ぬ:な:ぬ岫など mL岻 a temperatura ambiente durante ぬ h. El producto O‐desbenzoilado se purificó mediante una columna rellena con resina de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻, eluída con solución metanol:acetona な:な. Posteriormente, el eluato se concentró y se repurificó con una mini columna octadecil Cなぱ con MeOH 岫など mL岻. Se obtuvo así el tiodisacárido libre なはね岫ぬに mg, ばぱ%岻; Rf 噺ど,はひ岫n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻; 岷峅Dにど噺 −などな,ひ岫c 噺な,ど, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻: δ 噺の,ねぱ岫d, なH, Jな,に噺の,ど Hz, H‐な岻, の,どは岫d, なH, Jな’,に’ 噺


214

ね,な Hz, H‐な’岻, ね,はね岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ね, Jぬ,ね噺ぱ,ど Hz, H‐ぬ岻, ね,ぬは岫dd, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jぬ,ね噺ぱ,ど Hz, H‐ね岻, ね,ぬの岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ぬ, Jな,に噺の,ど Hz, H‐に岻, ね,どひ岫t, なH, Jに’,ぬ’ 噺 Jぬ’,ね’ 噺の,ね Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ひの岫m, にH, H‐に’, H‐の岻, ぬ,ひな岫ddd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ぱ, Jぬ’,ね’ 噺 Jね’,の’b 噺の,ぬ Hz, H‐ね’岻, ぬ,ばど岫dd, なH, Jね’,の’a 噺ぬ,ぱ, Jの’a,の’b 噺なに,ど Hz, H‐の’a岻, ぬ,はな岫dd, なH, Jね’,の’b 噺の,ぬ, Jの’a,の’b 噺なに,ど Hz, H‐の’b岻, に,ぱひ岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,に, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はa岻, に,ぱぬ岫dd, なH, Jの,はb 噺は,ば, Jはa,はb 噺なぬ,ば Hz, H‐はb岻, な,のな, な,ねな, な,ぬね, な,ぬぬ岫ねs, なにH, に岫CHぬ岻にC岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻: δ 噺ななど,ぬ, などひ,ひ岫MeにC岻, ひば,ひ岫C‐な岻, ぱひ,ば岫C‐な’岻, ぱは,な岫C‐ね’岻, ばば,な岫C‐に’岻, ばに,ひ, ばな,ぱ岫C‐に, ね岻, ばに,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばに,な岫C‐ぬ岻, はひ,の岫C‐の岻, はぬ,ぱ岫C‐の’岻, ぬな,の岫C‐は岻, には,ぬ岫に岻, にの,な, にね,の岫ね岫CHぬ岻にC岻. Análisis calculado para CなばHにぱOひS: C, ねひ,ひひ; H, は,ひな. Encontrado: C, のど,ぬの; H, ば,なな. ぱ.の Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución nucleofílica な,ぬ,ね,は‐Tetra‐O‐acetil‐に‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐glucopiranosil岻‐に‐tio‐ゎ‐D‐manopiranosa 岫なばね岻. O

AcOAcO

OAc

SC(NH)NH2

AcO

25

+

173174 (25%)

O

AcOAcO

OAc

OAc

OTf

O

AcOAcO

OAcS

OAc

O

AcOAcO

OAc

OAcEt3N, DTT

CH3CN

En un balón se disolvió la sal de isotiouronio de la Galp にのは岫なひの mg, ど,ねど mmol岻 en DMF 岫は mL岻 y se agregó ditiotreitol 岫DTT, はに mg, ど,ねど mmol岻, la な,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐に‐O‐triflil‐が‐D‐manopiranosaば岫なばに mg, ど,ぬは mmol岻 y EtぬN 岫はぱ µl, ど,ねぱ mmol岻. Se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante に,の h, cuando se observó por CCD 岫tolueno/EtOAc, な:な岻, el consumo total de la Man‐に‐OTf 岫なばぬ岻. Se diluyó la reacción con CHにClに岫にの mL岻 y se extrajo con HCl ac. の% 岫になど mL岻, solución saturada de NaHCOぬ岫など mL岻 y HにO 岫など mL岻. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻 y se evaporó el solvente. El crudo de reacción se purificó mediante columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ぱ:に岻. Se obtuvo un compuesto con Rf 噺ど,ぬど岫tolueno/EtOAc, な:な岻 que se asignó como el tiodisacárido なばね岫はに mg, にの%岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,はば岫d, なH, Jな,に噺ひ,ぬ Hz, H‐な岻, の,なひ岫dd, なH, Jぬ,ね噺ひ,は, Jに,ぬ噺なな,ど Hz, H‐ぬ岻, の,なは岫t, なH, Jに’,ぬ’ 噺 Jぬ’,ね’ 噺など,に Hz, H‐ぬ’岻, の,どは岫t, なH, Jぬ’,ね’ 噺


215

Jね’,の’ 噺など,に Hz, H‐ね’岻, ね,ひひ岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ひ,は Hz, H‐ね岻, ね,ひな岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,に Hz, H‐に’岻, ね,はぱ岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,に Hz, H‐な’岻, ね,ぬな岫dd, なH, Jの,はa 噺ね,は, Jはa,はb 噺なに,ぬ Hz, H‐はa岻, ね,にぱ岫dd, なH, Jの’,は’a 噺の,に, Jは’a,は’b 噺なに,ぬ Hz, H‐は’a岻, ね,なな岫dd, なH, Jの’,は’b 噺に,に, Jは’a,は’b 噺なに,ぬ Hz, H‐は’b岻, ね,どぱ岫dd, なH, Jの,はb 噺に,ど, Jはa,はb 噺なに,ぬ Hz, H‐はb岻, ぬ,ぱな岫dddd, なH, Jの,はb 噺に,ど, Jの,はa 噺ね,は, Jね,の噺ひ,は Hz, H‐の岻, ぬ,はぱ岫dddd, なH, Jの’,は’b 噺に,に, Jの’,は’a 噺の,に, Jね’,の’ 噺など,に Hz, H‐の’岻, ぬ,どぱ岫dd, なH, Jな,に噺ひ,ぬ, Jに,ぬ噺なな,ど Hz, H‐に岻, に,なね, に,どぱ, に,どは, に,どぬ, に,どに, に,どど岫に岻, な,ひぱ岫ぱs, にねH, CHぬCO岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,は, なばど,の, なばど,に, なはひ,ぱ, なはひ,の, なはひ,ぬ, なはひ,に, なはぱ,ば岫MeCO岻, ひに,ぬ岫C‐な岻, ぱぬ,ぱ岫C‐な’岻, ばの,ひ, ばぬ,ば, ばぬ,は, ばに,の, ばど,ぱ, はぱ,ぱ, はぱ,ど岫C‐ぬ, ね, の, に’, ぬ’, ね’, の’岻 , はに,ど, はな,は岫C‐は, は’岻, ねひ,な岫C‐に岻, にに,ば, にど,ば岫ね岻, にど,は岫に岻, にど,の岫ぱ CHぬCO岻. な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐O‐triflil‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なばひ岻.

151

O

O

O

O

O

OH O

O

O

O

O

OTf

179 (88%)

CH2Cl2, 0 °C

N Tf2O,

En un balón provisto con septum se disolvió, な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのな, にどど mg, ど,ばば mmol岻 en CHにClに anhidro 岫ぬど mL岻 y se enfrió la solución externamente a ど °C.ぱ Se agregó に,は‐di‐ter‐butil‐ね‐metil piridina 岫ねばは mg, に,ぬに mmol岻 y se agitó la solución durante unos minutos, luego se le agregó, con jeringa, anhídrido tríflico 岫にどど μL, な,なは mmol岻. Se dejó agitando a ど °C durante な,の h, momento en que se observó, por CCD 岫hexano/EtOAc, な:な岻 la desaparición del compuesto de partida 岫Rf 噺ど,ぬは岻 y aparición de un único producto de Rf 噺ど,ばひ. Se volcó la reacción en agua helada y se extrajo con CHにClに岫ににの mL岻. La fase orgánica se secó con MgSOね y se evaporó el solvente. Se obtuvo un sólido blanco, que se purificó mediante columna cromatográfica 岫hexano/EtOAc, の:な岻 para obtener el compuesto なばひ岫にはば mg, ぱぱ%岻; RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,のの岫d, Jな,に噺ね,ひ Hz, なH, H‐な岻, ね,はぱ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,の, Jぬ,ね噺ば,ば Hz, H‐ぬ岻, ね,はは−ね,のば岫m, にH, H‐はa, H‐はb岻, ね,ぬは岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,の, Jな,に噺ね,ひ Hz, H‐に岻, ね,にの岫dd, なH, Jね,の噺に,ど, Jぬ,ね噺ば,ば Hz, H‐ね岻, ね,なな岫dddd, なH, Jね,の噺に,ど, Jの,は噺の,な, Jの,は噺ば,ど Hz, H‐の岻, な,のね, な,ねの, な,ぬね,


216

な,ぬぬ岫ねs, なにH, に岫CHぬ岻にC岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺ななど,な, などひ,な岫MeにC岻, ひは,な岫C‐な岻, ばば,は, ばど,は, ばど,ぬ, ばど,に, はは,ど岫C‐に, ぬ, ね, の, は岻, にの,ひ, にの,ぱ, にね,ぱ, にね,ね岫ね岫CHぬ岻にC岻. な,に:ぬ,ね‐di‐O‐isopropilidén‐は‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐ゎ‐D‐galactopiranosa 岫なのば岻. O

O

O

O

O

OTf

179

O

OBz

OBz

OBz

SC(NH)NH2

OBz

Et3N

102

+

DMF

SO

OBz

OBz

OBz

OBz

157 (26%)

O

O

O

O

O

Se sintetizó la sal de tiouronio de Galf 岫などに岻 a partir de などな岫のど mg, ど,どぱ mmol岻, según técnica ya descripta. Se evaporó el solvente de reacción, se redisolvió el residuo en DMF 岫に mL岻 y se agregó el triflato なばひ岫にぱ mg, ど,どば mmol岻 y EtぬN 岫にど µL岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante な h y se agregaron にど µL más de EtぬN. La solución tomó coloración naranja y se continuó la agitación a のど °C durante にね h. Se evaporó el solvente y el residuo se extrajo con CHにClに/agua, la fase orgánica se secó 岫MgSOね岻 y se evaporó el solvente. El producto crudo se purificó mediante columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, ひぱ:にひは:ね岻 para obtener el compuesto なのば岫なはmg, には%岻, previamente descripto. Metil ゎ,が‐D‐galactofuranosiduronato de metilo 岫なぱな岻.

180

OH

O

OH

HO

OH

COOH O

OH

OH

OH

OMe

COOMe

181 (81%)

Dowex 50 (H+)

MeOH

Se siguió la técnica descripta por Bordoni y col.ひ Se agitó una suspensión de ácido D‐galacturónico 岫に g, など,ぬな mmol岻 con la misma cantidad de resina Dowex のど岫H髪岻 en MeOH 岫はど mL岻 a ぬの °C durante ね días.


217

Transcurrido este tiempo se filtró y concentró la solución obteniéndose un jarabe color naranja, que se purificó a través de una columna de sílica rápidamente eluída con solución de EtOAc/tolueno のど:な. Se obtuvo el producto final 岫な,ぱの g, ぱな%岻 como mezcla de anómeros. Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosiduronato de metilo 岫なぱに岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

182 (99%)

TBSCl imidazol

CH3CN

O

OH

OH

OH

OMe

COOMe

181 Se disolvió la mezcla de anómeros なぱな岫ぱぱの mg, ぬ,ひひ mmol岻 en acetonitrilo anhidro 岫なに mL岻 y se le agregó TBSCl 岫に g, なぬ,にば mmol岻 e imidazol 岫な,ぱど g, には,ねぬ mmol岻. Se agitó la suspensión blanquecina a temperatura ambiente durante にね h para asegurar sililación completa de los grupos hidroxilos. Se evaporó el solvente, el jarabe resultante se redisolvió en CHにClに y se lavó con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y concentró. La CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 mostró que el compuesto なぱに岫Rf 噺ど,のぱ岻 se encontraba suficientemente puro para ser utilizado sin más tratamiento en el siguiente paso de síntesis 岫に,にぬ g, ひひ% が:ゎひ:な岻; 岷峅Dにど噺 −なば,な岫c 噺な,な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻 anómero が: δ 噺ね,ばの岫d, なH, Jな,に噺な,ぱ Hz, H‐な岻, ね,ぬね岫d, なH, Jね,の噺ぬ,な Hz, H‐の岻, ね,なひ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,は, Jぬ,ね噺の,は Hz, H‐ぬ岻, ね,なは岫dd, なH, Jね,の噺ぬ,な, Jぬ,ね噺の,は Hz, H‐ね岻, ぬ,ひひ岫dd, なH, Jな,に噺な,ぱ, Jに,ぬ噺に,は Hz, H‐に岻, ぬ,ばの岫s, ぬH, CHぬCOに岻, ぬ,ぬに岫s, ぬH, CHぬO岻, ど,ひぬ, ど,ぱぱ, ど,ぱば岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なぬ, ど,どひ岫に岻, ど,どぱ, ど,どば, ど,どは岫の s, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばに,ど岫C‐は岻, などひ,の岫C‐な岻, ぱの,ね岫C‐ね岻, ぱね,ぬ岫C‐に岻, ばひ,に岫C‐ぬ岻, ばに,な岫C‐の岻, のの,ど岫CHぬO岻, のな,ひ岫CHぬCOに岻にの,ひ, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,の, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,な, ‐ね,ね, ‐ね,の岫に岻, ‐ね,ひ, ‐の,な岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにはHのはOばSiぬ: C, のの,にば; H, ひ,ひひ. Encontrado: C, のの,ぬひ; H, など,どに.


218

Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐ゎ‐D‐galactofuranósido 岫なぱぬa岻, metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱぬb岻 y metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱね岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH183a182

LiH4Al

THF, -18 °C

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH183b 184

+ +

Se disolvió なぱに岫な mmol岻 en THF anhidro 岫なの mL岻 y se enfrió la solución a −なぱ °C. Se agregó LiHねAl 岫な,ぬ mmol岻 y se agitó la mezcla de reacción durante ぬど ó のど min 岫Tabla なね岻. Para detener la reacción se agregó EtOAc 岫なの mL岻, MeOH 岫なの mL岻 y AcOH hasta neutralidad y se concentró la mezcla. El precipitado gris se resuspendió en CHにClに y se centrifugó para eliminar restos del agente reductor. Esta operación se repitió ね−の veces. Para completar la purificación se realizó una columna cromatográfica eluyendo con tolueno/EtOAc, はど:な蝦EtOAc. Se obtuvieron tres compuestos, con los siguientes valores de Rf en tolueno/EtOAc, にど:な: なぱぬa 岫Rf 噺ど,ねば岻, なぱぬb 岫Rf 噺ど,ねぬ岻 y なぱね岫Rf 噺ど,どど岻. Tabla なね. Rendimientos para la síntesis de los derivados なぱぬa, なぱぬb y なぱね, dependiendo del tiempo de reacción. Compuesto Rendimiento ぬど min de reacción Rendimiento のど min de reacciónなぱぬa なぬ % にど %なぱぬb ねぬ %なぱねにぬ % はに% Rend. Total ばひ% Rend. Total ぱに%


219

なぱぬa: 岷峅Dにど噺髪ねに,に岫c 噺な,な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばば岫d, なH, Jな,に噺ぬ,ぱ Hz, H‐な岻, ね,なひ岫t, なH, Jに,ぬ噺 Jぬ,ね噺ね,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jな,に噺ぬ,ぱ, Jに,ぬ噺ね,ぱ Hz, H‐に岻, ぬ,ぱの岫ddd, なH, Jね,の噺ね,ぱ Hz, H‐の岻, ぬ,ぱぬ岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ね,ぱ Hz, H‐ね岻, ぬ,はひ岫dddd, なH, Jの,はa 噺ね,ぱ, Jはa,HO 噺は,ね, Jはa,はb 噺なな,に Hz, H‐はa岻, ぬ,はに岫dddd, なH, Jの,はb 噺ね,ぱ, Jはa,HO 噺は,ね, Jはa,はb 噺なな,に Hz, H‐はb岻, ぬ,ねど岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ぬね岫t, なH, Jはa,OH 噺 Jはb,OH 噺は,ね Hz, OH岻, ど,ひに, ど,ひど, ど,ぱば岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なね, ど,なに, ど,なな, ど,など, ど,どば, ど,どは岫はs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などぬ,の岫C‐な岻, ぱの,ね岫C‐ね岻, ばぱ,は岫C‐に岻, ばは,は岫C‐ぬ岻, ばに,ぱ岫C‐の岻, はね,の岫C‐は岻, のの,ひ岫CHぬO岻, にの,ひ岫に岻, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,ぬ, なぱ,に, なば,ひ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,ぱ, ‐ね,に, ‐ね,の, ‐ね,は, ‐ね,ば, ‐ね,ぱ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにのHのはOはSiぬ: C, のの,ひに; H, など,のな. Encontrado: C, のの,ばは; H, など,のひ. なぱぬb: 岷峅Dにど噺 −なひ,な岫c 噺な,な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばね岫br s, なH, H‐な岻, ね,どひ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ど, Jぬ,ね噺ね,ひ Hz, H‐ぬ岻, ね,どな岫dd, なH, Jな,に噺な,に, Jに,ぬ噺に,ど Hz, H‐に岻, ぬ,ひぱ岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ね,ひ Hz, H‐ね岻, ぬ,ぱひ岫c, なH, Jね,の噺 Jの,はa 噺 Jの,はa 噺ね,ひ Hz, H‐の岻, ぬ,ばな岫ddd, なH, Jの,はa 噺の,ど, Jはa,HO 噺は,ぬ, Jはa,はb 噺なな,ぬ Hz H‐はa岻, ぬ,はは岫ddd, なH, Jの,はb 噺の,ど, Jはb,HO 噺は,ぬ, Jはa,はb 噺なな,ぬ Hz H‐はb岻, ぬ,ぬは岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ぬの岫br s, なH, HO岻, ど,ひね, ど,ひに, ど,ひど岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なは, ど,なの, ど,なぬ, ど,なに, ど,なな岫に岻岫のs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,に岫C‐な岻, ぱは,ぱ岫C‐ね岻, ぱぬ,ば岫C‐に岻, ばひ,ね岫C‐ぬ岻, ばに,の岫C‐の岻, はね,の岫C‐は岻, のね,ぱ岫CHぬO岻, には,ど, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,ね, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,な, ‐ね,ね岫に岻, ‐ね,の, ‐ね,は, ‐ね,ぱ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにのHのはOはSiぬ: C, のの,ひに; H, など,のな. Encontrado: C, のの,のに; H, など,ぱひ. なぱね: 岷峅Dにど噺なな,は岫c 噺な,ど, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばに岫d, なH, Jな,に噺な,ね Hz, H‐な岻, ね,なぬ岫dd, なH, Jに,ぬ噺ぬ,な, Jぬ,ね噺の,ば Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひひ岫dd, なH, Jな,に噺な,ね, Jに,ぬ噺ぬ,な Hz, H‐に岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jね,の噺な,ば, Jぬ,ね噺の,ば Hz, H‐ね岻, ぬ,ばは−ぬ,はぱ岫m, ぬH, H‐の, H‐はa, H‐はb岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,はに, に,にぬ岫にd, にH, J ば,ば Hz, HO‐の y HO‐は岻, ど,ひど, ど,ぱぱ岫にs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな, ど,など, ど,ひど岫に岻岫ぬs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,ば岫C‐な岻, ぱね,ひ岫C‐ね岻, ぱぬ,な岫C‐に岻, ばひ,な岫C‐ぬ岻, はひ,ぱ岫C‐の岻, はの,ぬ岫C‐は岻, のの,な岫CHぬO岻, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,ば岫に岻, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CなひHねにOはSiに: C, のぬ,ひひ; H, など,どな. Encontrado: C, のぬ,はぱ; H, など,など.


220

Metil に,ぬ,は‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐ゎ‐D‐galactofuranósido 岫なぱぬa’岻, metil に,ぬ,は‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱぬb’岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

COOMe

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTBS

183a' (17%)182

LiH4Al

THF, -18 a 0 °C

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTBS

183b' (29%)

+

Se variaron las condiciones de reacción para obtener los compuestos con la posición の libre, es decir productos de migración del grupo protector TBS, desde la posición の a la は. Se disolvió el compuesto なぱに岫ばど mg, ど,なに mmol岻 en THF anhidro 岫ぬ mL岻 y se enfrió la solución a 伐なぱ°C. Se agregó LiHねAl 岫など mg, ど,には mmol岻 y se agitó la mezcla de reacción hasta alcanzar los ど °C, pasadas aproximadamente な,の h. Para detener la reacción se procedió de la forma previamente descripta, agregando EtOAc 岫の mL岻, MeOH 岫の mL岻 y HOAc hasta neutralidad y luego se concentró la mezcla. El residuo gris obtenido se resuspendió en CHにClに y se centrifugó. Se purificó la mezcla de anómeros a través de una columna cromatográfica eluyendo con hexano/EtOAc ぱど:な y utilizando hexano/EtOAc など:な como solvente para CCD. Se obtuvieron los compuestos なぱぬa’ 岫Rf 噺ど,ぬひ, なな mg, なば%岻 y なぱぬb’ 岫Rf 噺ど,ぬに, なひ mg, にひ%岻なぱぬa’: RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,はぱ岫d, なH, Jな,に噺ね,ね Hz, H‐な岻, ね,ぬぬ岫dd, なH, Jぬ,ね噺は,ぬ, Jに,ぬ噺ば,な Hz, H‐ぬ岻, ね,どば岫dd, なH, Jな,に噺ね,ね, Jに,ぬ噺ば,な Hz, H‐に岻, ね,どね岫dd, なH, Jの,はa 噺は,に, Jはa,はb 噺なな,ど Hz, H‐はa岻, ね,どぬ岫dddd, なH, Jの,はa 噺は,に, Jの,HO 噺ば,の Hz, H‐の岻, ぬ,はは−ぬ,のね岫m, にH, H‐ね, H‐はb岻, ぬ,ねの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ぱど岫d, なH, Jの,OH 噺ば,の Hz, HO岻, ど,ひに, ど,ぱぱ岫に岻岫にs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,など岫に岻, ど,どひ岫に岻, ど,どは, ど,どの岫ねs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などぬ,な岫C‐な岻, ぱな,ば岫C‐ね岻, ばひ,ど岫C‐に岻, ばの,は岫C‐ぬ岻, はひ,ひ岫C‐の岻, はぬ,の岫C‐は岻, のは,に岫CHぬO岻, にの,ぱ, にの,ば, にの,ぬ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,な岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,は, ‐の,ね岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにのHのはOはSiぬ: C, のの,ひに; H, など,のな. Encontrado: C, のの,ぱね; H, など,はな. なぱぬb’: RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばに岫d, なH, Jな,に噺な,な Hz, H‐な岻, ね,など岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,ど Jに,ぬ噺の,は Hz, H‐ぬ岻, ね,どね岫dd, なH, Jな,に噺な,な, Jに,ぬ噺の,は Hz, H‐に岻, ね,どど岫dd, なH,


221

Jね,の噺な,ぬ, Jぬ,ね噺ぬ,ど Hz, H‐ね岻, ぬ,ばぬ−ぬ,はど岫m, ぬH, H‐の, H‐はa, H‐はb岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,のば岫d, なH, Jの,HO 噺の,ひ Hz, HO岻, ど,ひど, ど,ぱひ, ど,ぱぱ岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,など, ど,どひ岫に岻, ど,どぱ岫に岻, ど,どば岫ねs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,ね岫C‐な岻, ぱぬ,ぬ岫C‐ね岻, ぱに,ば岫C‐に岻, ばひ,に岫C‐ぬ岻, ばど,ぬ岫C‐の岻, はね,な岫C‐は岻, のね,ひ岫CHぬO岻, にの,ひ, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,に, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,は, ‐ね,ば, ‐ね,ひ, ‐の,ね, ‐の,の岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにのHのはOはSiぬ: C, のの,はに; H, など,ばど. Encontrado: C, のの,ばは; H, など,のひ. Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐tosil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱの岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

183b

C5H5N, T amb.

TsCl

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

185 (84%) A una solución de なぱぬb 岫ななど mg, ど,にど mmol岻 en piridina anhidra 岫に mL岻, se le agregó cloruro de tosilo 岫などど mg, ど,のに mmol岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante にね h. Para detener la reacción se agregó MeOH 岫の mL岻 y se concentró. El jarabe obtenido se redisolvió en CHにClに y se realizaron lavados con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y concentró, co‐evaporando con tolueno para eliminar restos de piridina. La CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 mostró un compuesto principal de Rf 噺ど,のぱ, que fue purificado mediante columna cromatográfica eluyendo con hexano/EtOAc にの:な. Así se obtuvo el compuesto なぱの岫ななは mg, ぱね%岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ば,ばぱ, ば,ぬぬ岫にd, ねH, J ぱ,に Hz, H‐aromáticos岻, ね,はの岫d, なH, Jな,に噺な,の Hz, H‐な岻, ね,なに岫dd, なH, Jの,は噺ぬ,に, Jはa,はb 噺ひ,ぬ Hz, H‐はa岻, ね,どな岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ば, Jぬ,ね噺の,ば Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひぱ岫ddd, なH, Jの,はa 噺ぬ,に, Jね,の噺ぬ,ば, Jの,はb 噺ば,に Hz, H‐の岻, ぬ,ひの岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,に, Jはa,はb 噺ひ,ぬ Hz, H‐はb岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jな,に噺な,の, Jに,ぬ噺に,ば Hz, H‐に岻, ぬ,ばひ岫dd, なH, Jね,の噺ぬ,ば, Jぬ,ね噺の,ば Hz, H‐ね岻, ぬ,にぱ岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ねね岫s, ぬH, CHぬPh岻, ど,ぱば岫に岻, ど,ぱの岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,どぱ, ど,どば岫ぬ岻, ど,どの, ど,どね岫はs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なねね,ば, なぬぬ,ど, なにひ,ぱ, なにぱ,ど岫C‐aromáticos岻, などひ,ぬ岫C‐な岻, ぱね,ね岫C‐ね岻, ぱね,な岫C‐に岻, ばひ,ね岫C‐ぬ岻, ばな,ぬ岫C‐は岻,


222

ばど,の岫C‐の岻, のね,ひ岫CHぬO岻, にの,ひ, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にな,は岫CHぬPh岻, なぱ,ぬ, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ど, ‐ね,な, ‐ね,ね, ‐ね,は岫に岻, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐triflil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱは岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OH

186183b

CH2Cl2, 0 °C

N Tf2O,

A una solución del compuesto なぱぬb 岫なぬど mg, ど,にね mmol岻 en CHにClに anhidro 岫など mL岻 previamente enfriada a ど °C, se le agregó に,は‐di‐ter‐butil‐ね‐metil‐piridina 岫なひの mg, ど,ひの mmol岻 y anhídrido tríflico 岫ぱど μL, ど,ねば mmol岻 bajo atmósfera de Nに. Se agitó la reacción durante な h y luego se volcó en hielo/agua. La mezcla se disolvió con CHにClに y se extrajo con agua; la fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y evaporó el solvente. Se obtuvo un sólido blanco de Rf 噺ど,ばぱ岫hexano/EtOAc, など:な岻, que se utilizó sin más tratamiento en el paso siguiente de síntesis; RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばな岫br s, , Jな,に隼な,ど Hz, なH, H‐な岻, ね,はに岫dd, なH, Jの,は噺ぬ,ぬ, Jはa,はb 噺など,な Hz, H‐はa岻, ね,ぬば岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,ば, Jはa,はb 噺など,な Hz, H‐はb岻, ね,なね岫dddd, なH, Jの,はa 噺ぬ,ぬ, Jね,のね,に, Jの,はb 噺ば,ば Hz, H‐の岻, ぬ,ひひ岫m, にH, H‐に, H‐ぬ岻, ぬ,ひに岫dd, なH, Jぬ,ね噺 Jね,のね,に Hz, H‐ね岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, ど,ひに, ど,ぱひ, ど,ぱば岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なぬ, ど,など, ど,どぱ岫ぬs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,ね岫C‐な岻, ぱの,ね岫C‐ね岻, ぱぬ,ね岫C‐に岻, ばひ,な岫C‐ぬ岻, ばば,ひ岫C‐は岻, ばど,は岫C‐の岻, のね,ひ岫CHぬO岻, にの,ぱ, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,に, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ど, ‐ね,ね, ‐ね,の, ‐ね,は, ‐ね,ば, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅.


223

Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐は‐tio‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱひ岻. O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

185

18-crown-6+

DMF

S

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

189 (86%)8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

188

OAcO

AcO OAc

S

OAc

NaNaH

THF anh.

OAcO

AcO OAc

OAc La に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐galactopiranosa 岫ぱ, ぬは mg, ど,など mmol岻 y NaH 岫の mg, ど,にな mmol岻 se disolvieron en THF anhidro 岫の mL岻 y se dejó que proceda la reacción a temperatura ambiente durante ぬど min. Transcurrido este tiempo se evaporó el solvente y la sal obtenida se agregó a una solución de なぱぱ岫ぬど mg, ど,どね mmol岻 en DMF 岫に mL岻 y se agregó también なぱ‐crown‐は岫なの mg, ど,どは mmol岻. La mezcla de reacción, que tomó coloración amarilla y luego se oscureció, se agitó a temperatura ambiente durante には h. Al evidenciar mediante CCD 岫hexano/EtOAc, に:な岻 la presencia de un nuevo compuesto de Rf 噺ど,のは se finalizó la reacción evaporando el solvente. Se realizó cromatografía en columna eluyendo con hexano/EtOAc にど:な蝦の:な. Así se obtuvo el tiodisacárido なぱひ岫ぬぬ mg, ぱは%岻;岷峅Dにど噺 −ぬの,に岫c 噺な,に, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,ねね岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ひ, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね Hz, H‐ね’岻, の,にね岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐に’岻, の,どに岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね, Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,ばど岫d, なH, Jな,に噺に,ど Hz, H‐な岻, ね,ねは岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,ど Hz, H‐な’岻, ね,なの岫dd, なH, Jの’,は’a 噺ば,に, Jは’a,は’b 噺なな,ぬ Hz, H‐は’a岻, ね,なな岫dd, なH, Jの’,は’b 噺は,ね, Jは’a,は’b 噺なな,ぬ Hz, H‐は’b岻, ね,など岫dd, なH, Jに,ぬ噺ぬ,な, Jぬ,ね噺は,ど Hz, H‐ぬ岻, ね,どに岫dd, なH, Jね,の噺に,ひ, Jぬ,ね噺は,ど Hz, H‐ね岻, ぬ,ひひ岫dd, なH, Jな,に噺に,ど, Jに,ぬ噺ぬ,な Hz, H‐に岻, ぬ,ひに岫m, にH, H‐の, H‐の’岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ひぬ岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,ぱ, Jはa,はb 噺なぬ,に Hz, H‐はa岻, に,ぱば岫dd, なH, Jの,はb 噺は,ど, Jはa,はb 噺なぬ,に Hz, H‐はb岻, に,なの, に,どの, に,どね, な,ひひ岫ねs, なにH, CHぬCO岻, ど,ひに, ど,ぱぱ岫に岻岫にs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なは, ど,なね, ど,など, ど,どひ岫に岻, ど,どば岫のs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,ぬ, なばど,に, なばど,な, なはひ,ね岫MeCO岻, などひ,な岫C‐な岻, ぱね,は岫C‐に岻, ぱね,ど岫C‐ね岻, ぱぬ,ば岫C‐な’岻, ばひ,は岫C‐ぬ岻, ばね,の, ばな,ぱ, ばな,ば岫C‐ぬ’, の, の’岻, はば,に, はば,ど岫C‐に’, ね’岻, はな,に岫C‐は’岻, のの,な岫CHぬO岻, ぬに,ね岫C‐は岻, には,ど, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ば岫に岻, にど,は岫に岻岫CHぬCO岻, なぱ,に, なば,ひ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,の, ‐ね,ど, ‐ね,に, ‐ね,ぬ, ‐ね,ね,


224

‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CぬひHばねOなねSSiぬ: C, のぬ,どぬ; H, ぱ,ねね. Encontrado: C, のに,ひに; H, ぱ,ぬひ. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CぬひHばねOなねSSiぬ髪Na: ひどの,ぬひひひぬ; Encontrado: ひどの,ねどにはぬ. に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ‐D‐galactofuranosil tricloroacetimidato 岫なひに岻. O

OBz

OBz

OBz

OBz

OBz

O

OBz

OBz

OBz

OH

OBz

O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

Ac2O, HBr/AcOH

CH2Cl2, 0 °C

CCl3CN, K2CO3

101 191 (99%) 192 (97%)

CH2Cl2, T amb

CCl3

NH

La な,に,ぬ,の,は‐penta‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosa 岫などな, のばど mg, ど,ぱな mmol岻 se disolvió en ClにCHに岫にに mL岻. Se enfrió la solución a ど °C y se agregó a la misma anhídrido acético 岫ど,ぱ mL, ぱ,ねば mmol岻 y HBr/AcOH 岫ぬ,ぱ mL岻. Se agitó la mezcla a baja temperatura durante に h, cuando la CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 mostró la conversión del compuesto de partida en la mezcla anomérica なひな岫anómero mayoritario: が, Rf 噺ど,ぬど岻. Se diluyó la solución con ClにCHに, y se extrajo con agua fría, solución saturada de NaHCOぬ y nuevamente agua. Se secó el extracto orgánico con MgSOね y se evaporó el solvente. El residuo, una espuma naranja, se purificó mediante una columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, なに:な岻 para obtener なひな岫ねぱど mg, ひひ%岻. A continuación la に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐ゎ,が‐D‐galactofuranosa 岫なひな, なばど mg, ど,にぱ mmol岻 se disolvió en ClにCHに岫に mL岻 y se agregó KにCOぬ岫なひぱ mg, な,ねぬ mmol岻 y CClぬCN 岫なのね μL, な,のね mmol岻. Se agitó la suspensión a temperatura ambiente durante なに h, cuando la CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 mostró la conversión del compuesto de partida en el anómero mayoritario なひに con un Rf 噺ど,のに. Se agregó ClにCHに, se filtró a través de un lecho de celite lavado bien con el mismo solvente y el filtrado se extrajo con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻 y se evaporó el solvente. Se obtuvo un jarabe amarillo suficientemente puro para proseguir la síntesis 岫にどど mg, ひば%岻.


225

Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐tioacetil‐β‐D‐galactofuranósido 岫なひぬ岻 KSCOCH3

DMF, 70-80 °C

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTs

185

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SAc

193

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

OTf

186

KSCOCH3

CH3CN, 0 °C

a岻 A partir del metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐tosil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱの岻 ya descripto: Se disolvió el compuesto なぱの岫ねど mg, ど,どは mmol岻 en DMF 岫な,の mL岻 y se agregó tioacetato de potasio 岫ぱの mg, ど,ばの mmol岻. La mezcla se agitó a ばど伐ぱど °C durante のど h aproximadamente, cuando se observó mediante CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 un producto principal de Rf 噺ど,はど. La mezcla de reacción se había oscurecido y se evaporó la DMF en rotavap. Se redisolvió el crudo de reacción en CHにClに y se lavó con agua. La fase orgánica se secó, se filtró y se evaporó nuevamente el solvente. Se realizó una columna cromatográfica utilizando hexano/EtOAc, ねど:な como solvente de elución, para obtener el compuesto なひぬ岫にど mg, のぱ%岻. b岻 A partir del metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐triflil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なぱは岻 ya descripto: Se disolvió el compuesto なぱは crudo 岫ど,ぬは mmol岻 en acetonitrilo anhidro 岫など mL岻. Se agregó tioacetato de potasio 岫なはは mg, な,ねは mmol岻. Se agitó la mezcla a ど °C durante ぬ h, cuando se observó mediante CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 un producto principal de Rf 噺ど,はど, como ya se mencionó. Se evaporó el solvente en rotavap. Se purificó el producto mediante columna cromatográfica eluyendo con hexano/EtOAc, ひど:な, obteniéndose así el compuesto なひぬ岫ななば, mg のね%, en dos pasos de reacción岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばね岫d, なH, Jな,に噺な,ぱ Hz, H‐な岻, ね,など岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ぱ, Jぬ,ね噺の,ぬ Hz, H‐ぬ岻, ね,どど岫dd, なH, Jな,に噺な,ぱ, Jに,ぬ噺に,ぱ Hz, H‐に岻, ぬ,ひに岫dd, なH, Jね,の噺ね,な, Jぬ,ね噺の,ね Hz, H‐ね岻, ぬ,ぱぬ岫ddd, なH, Jね,の噺ね,な Hz, H‐の岻, ぬ,ぬば岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,なの岫dd, なH, Jの,はa 噺は,ぱ, Jはa,はb 噺なぬ,の Hz, H‐はa岻, ぬ,どは岫dd, なH, Jの,はb 噺は,な, Jはa,はb 噺なぬ,の Hz, H‐はb岻, に,ぬの岫s, ぬH, SCOCHぬ岻, ど,ひね, ど,ひど, ど,ぱぱ岫ぬs, にばH,


226

岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なぱ, ど,なば, ど,なな岫に岻, ど,など, ど,どひ岫はs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひの,ぬ岫SCOMe岻, などひ,ぬ岫C‐な岻, ぱの,の岫C‐ね岻, ぱね,に岫C‐に岻, ばひ,ぱ岫C‐ぬ岻, ばな,ば岫C‐の岻, のの,ど岫CHぬO岻, ぬに,は岫C‐は岻, ぬど,ね岫SCOCHぬ岻, には,ど, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,ぬ, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,ひ, ‐ね,ど, ‐ね,ね, ‐ね,の, ‐ね,は, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐tio‐が‐D‐galactofuranósido 岫なひね岻 O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SAc193

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SH194 (61%)

NaOMe/MeOH

CH2Cl2, -15 °C

Se disolvió el compuesto なひぬ岫ぱね mg, ど,なね mmol岻 en CHにClに岫の mL岻, se enfrió externamente a −なの °C y se agregó una solución ど,のM de NaOMe/MeOH 岫の mL岻. Se agitó la reacción durante に h. Se evaporó el solvente y luego se redisolvió el crudo de reacción en CHにClに y se lavó con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y concentró. Mediante CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 se observó un compuesto de Rf 噺ど,ぱに, que fue purificado mediante columna cromatográfica con hexano/tolueno ば:な蝦な:な; para dar なひね岫ばど mg, はな%岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばど岫d, なH, Jな,に噺な,の Hz, H‐な岻, ね,どぱ岫dd, なH, Jね,の噺ね,ね, Jぬ,ね噺の,に Hz, H‐ね岻, ね,どな岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,の, Jぬ,ね噺の,に Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひぱ岫dd, なH, Jな,に噺な,の, Jに,ぬ噺に,の Hz, H‐に岻, ぬ,ぱど岫ddd, なH, Jね,の噺ね,ね Hz, H‐の岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ばひ岫dddd, なH, Jの,はa 噺は,ね, Jはa,HS 噺ぱ,は, Jはa,はb 噺なぬ,は Hz, H‐はa岻, に,のぱ岫dddd, なH, Jの,はb 噺の,ぱ, Jはb,HS 噺ぱ,は, Jはa,はb 噺なぬ,は Hz, H‐はb岻, な,ねぱ岫t, なH, Jはa,HS 噺 Jはb,HS 噺ぱ,は Hz, HS岻, どひに, ど,ぱひ, ど,ぱぱ岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なね, ど,なぬ, ど,など, ど,どひ, ど,どぱ, ど,どば岫はs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,に岫C‐な岻, ぱの,ど岫C‐ね岻, ぱね,に岫C‐に岻, ばひ,ぱ岫C‐ぬ岻, ばね,ね岫C‐の岻, のね,ひ岫CHぬO岻, にば,ひ岫C‐は岻, には,ど, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,ぬ岫に岻, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,ひ, ‐ね,ど, ‐ね,な, ‐ね,ぬ, ‐ね,ね, ‐ね,の, ‐ね,ぱ岷岫CHぬ岻にSiBut峅.


227

Metil に,ぬ,の‐tri‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,の,は‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐tio‐が‐D‐galactofuranósido 岫なひの岻 O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

MS, TMSOTf

192 194

CH2Cl2, -18 °C

CCl3

NH

+S

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

O

OBz

OBz

OBz

OBz195 (47%)

O

OTBS

OTBS

OTBS

OMe

SH

Se procedió a acoplar el tricloroacetimidato なひに con el tiol なひね según la siguiente técnica.など A una solución del tricloroacetimidato なひに岫にどど mg, ど,にぱ mmol岻 en CHにClに anhidro 岫ね mL岻, se le agregó el tiol なひね岫のぱ mg, ど,など mmol岻 y molecular sieves ね Å en polvo, activado previamente ぬ h. La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante な,の h en atmósfera de argón. Luego se enfrió a 伐なぱ °C, se agregó TMSOTf 岫なに μL, ど,どば mmol岻 y se continuó la agitación a baja temperatura durante ぬど min. Se diluyó la mezcla de reacción con CHにClに, se filtró y se extrajo con solución saturada de NaHCOぬ y con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, se evaporó el solvente y se observó mediante CCD un producto de Rf 噺ど,はの岫tolueno/EtOAc, なの:な岻 que se purificó por columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, はど:な岻. Se obtuvo así, el tiodisacárido なひの constituído por dos unidades furanósicas 岫のは mg, ねば%岻; 岷峅Dにど噺 −のど,は岫c 噺な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ−ば,にぱ岫H‐aromáticos岻, は,どひ岫m, なH, H‐の’岻, の,ばど岫dt, なH, Jぬ’,ね’ 噺ね,ぬ Hz, H‐ぬ’岻, の,はに岫br s, なH, H‐な’岻, の,のに岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺な,に Hz, H‐に’岻, ね,ぱぬ岫t, なH, Jぬ’,ね’ 噺 Jね’,の’ 噺ね,ぬ Hz, H‐ね’岻, ね,ばの岫m, にH, H‐は’a, H‐は’b岻, ね,ばに岫d, なH, Jな,に噺な,ひ Hz, H‐な岻, ね,なな岫t, にH, H‐ぬ, H‐ね岻, ね,どど岫t, にH, H‐に, H‐の岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ひぱ岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,の, Jはa,はb 噺なぬ,ぬ Hz, H‐はa岻, に,ひに岫dd, なH, Jの,はb 噺は,ど, Jはa,はb 噺なぬ,ぬ Hz, H‐はb岻, ど,ぱひ, ど,ぱば, ど,ぱね岫ぬs, にばH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なに, ど,なな, ど,どぱ岫に岻, ど,どば岫に岻岫はs, なぱH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なはは,ど, なはの,は, なはの,ね, なはの,に岫PhCO岻, なぬぬ,の−なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, などひ,な岫C‐な岻, ぱぱ,な岫C‐な’岻, ぱね,の岫C‐ね岻, ぱね,ね岫C‐に岻, ぱに,は


228

岫C‐に’岻, ぱな,の岫C‐ね’岻, ばひ,ば岫C‐ぬ岻, ばば,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばな,の岫C‐の岻, ばど,ぬ岫C‐の’岻, はぬ,の岫C‐は’岻, のの,ど岫CHぬO岻, ぬぬ,ば岫C‐は岻, には,ど, にの,ば岫に岻, 岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なぱ,に, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,ば, ‐ね,ど, ‐ね,ぬ, ‐ね,ね岫に岻, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CのひHぱにOなねSにSiぬ.にHにO: C, はど,はひ; H, ば,ねに. Encontrado: C, はど,ぱね; H, ば,ぬは. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CのひHぱにOなねSSiぬ髪Na: ななのぬ,ねはにのぬ; Encontrado: ななのぬ,ねはのはねぱ.は Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de apertura de tiiranos de azúcares. Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐pivaloil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なひは岻. Me3CCOCl

C5H5N, 0 °C

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

184

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OPiv

196 (74%) Piv = (CH3)3CO

25 °C

A una solución de なぱね岫になど mg, ど,のど mmol岻 en piridina anhidra 岫ぬ,は mL岻, se le agregó cloruro de pivaloílo 岫なぬの μL, な,など mmol岻, en tres partes cada ぬど min.なな La mezcla se agitó a ど °C durante ぬ h y luego a temperatura ambiente な h más, cuando la CCD 岫tolueno/EtOAc, の:な岻 mostró un compuesto de Rf 噺ど,はは. Se agregó en el balón hielo/agua, se extrajo con CHにClに, se lavó la fase orgánica sucesivamente con HCl の%, HにO destilada y solución saturada de NaCOぬH. Se secó con MgSOね y se evaporó el solvente. El residuo se purificó mediante columna cromatográfica, eluyendo con tolueno/EtOAc, にど:な. 岫なひは, なぱの mg, ばね%岻; 岷峅Dにど噺 −にひ,ひ岫c 噺な,に, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばに岫d, なH, Jな,に噺な,ど Hz, H‐な岻, ね,にぬ岫dd, なH, Jの,はa 噺は,の, Jはa,はb 噺なな,ど Hz, H‐はa岻, ね,など岫dd, なH, Jね,の噺に,ね, Jぬ,ね噺の,は Hz, H‐ね岻, ね,どひ岫dd, なH, Jの,はb 噺は,の, Jはa,はb 噺なな,ど Hz, H‐はb岻, ね,どど岫dd, なH, Jな,に噺な,ど, Jに,ぬ噺な,ぱ Hz, H‐に岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jに,ぬ噺な,ぱ, Jぬ,ね噺の,は Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ぱぱ岫m, なH, Jの,はa 噺 Jの,はb は,の, Jの,HO 噺ぱ,ど Hz, H‐の岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, に,のに岫d, なH, Jの,HO 噺ぱ,ど Hz, HO岻, な,にに岫s, ひH, COC岫CHぬ岻ぬ岻, ど,ひど, ど,ぱぱ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな, ど,どひ岫に岻, ど,どぱ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばぱ,ぬ岫COC岫CHぬ岻ぬ岻, などひ,の岫C‐な岻, ぱぬ,ね岫C‐ぬ岻, ぱぬ,に岫C‐に岻,


229

ばひ,な岫C‐ね岻, はば,ひ岫C‐の岻, はの,ぬ岫C‐は岻, のね,ひ岫CHぬO岻, ぬぱ,ぱ岫COC岫CHぬ岻ぬ岻, にば,に岫COC岫CHぬ岻ぬ岻, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,は, ‐ね,ば, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにねHのどOばSiに: C, のは,ぱぱ; H, ひ,ひね. Encontrado: C, のは,ひぬ; H, など,にに. Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐pivaloil‐の‐O‐tosil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なひば岻. TsCl

O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OPiv

197 (91%)

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OPiv

196

C5H5N, T amb.

A una solución de なひは岫ぬのど mg, ど,はひ mmol岻 en piridina anhidra 岫にど mL岻, se le agregó un importante exceso de cloruro de tosilo 岫な,にね g, は,ねぱ mmol岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ぬ días. Para detener la reacción se agregó MeOH 岫など mL aprox.岻 y se evaporó en rotavap. Se redisolvió el jarabe obtenido en CHにClに y se realizaron lavados con agua. La fase orgánica se secó con MgSOね, se filtró y concentró, co‐evaporando con tolueno para eliminar restos de piridina. La CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 mostró un compuesto principal de Rf 噺ど,ばな, que se purificó mediante columna cromatográfica utilizando tolueno/EtOAc, はど:な como solvente de elución. Se obtuvo así el compuesto なひば岫ねなの mg, ひな%岻. RMN‐なH 岫にどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ば,ぱぬ, ば,ぬな岫にd, ねH, J ぱ,に Hz, H‐aromáticos岻, ね,ひの岫m, なH, Jの,はa 噺の,な, Jの,はb 噺は,は Hz H‐の岻, ね,のは岫d, なH, Jな,に噺な,な Hz, H‐な岻, ね,ぬの岫dd, なH, Jの,はa 噺の,な, Jはa,はb 噺なな,ひ Hz, H‐はa岻, ね,なに岫dd, なH, Jの,はb 噺は,は, Jはa,はb 噺なな,ひ Hz, H‐はb岻, ぬ,ひど−ね,どの岫m, ぬH, H‐に, H‐ぬ, H‐ね岻, ぬ,にね岫s, ぬH, CHぬO岻, に,ねぬ岫s, ぬH, CHぬPh岻, な,なひ岫s, ひH, COC岫CHぬ岻ぬ岻, ど,ぱひ, ど,ぱは岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,どひ岫に岻, ど,どぱ, ど,どは岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫のど,ぬ MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばぱ,ど岫COC岫CHぬ岻ぬ岻, なにひ,ひ, なにぱ,ど岫C‐aromáticos岻, などひ,の岫C‐な岻, ぱぬ,ひ岫C‐ぬ岻, ぱに,の岫C‐に岻, ばひ,ね岫C‐ね岻, ばば,の岫C‐の岻, はに,ね岫C‐は岻, のね,ひ岫CHぬO岻, にば,な岫COC岫CHぬ岻ぬ岻, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にな,ば岫CHぬPh岻, なば,ひ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,の, ‐ね,ぱ, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅.


230

Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐acetil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なひぱ岻. Ac2O, imidazol

CHCl3, T amb

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

184

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OAc

198 (69%) A una solución de imidazol 岫ばぬ mg, ど,ぱに mmol岻 en CHClぬ, enfriada a ど °C, se le agregó なぱね岫にはど mg, ど,はに mmol岻 y AcにO 岫ねに μL, ど,はば mmol岻. Se dejó agitar a baja temperatura durante など min y luego se continuó la agitación a temperatura ambiente durante にど h. Por CCD 岫tolueno/EtOAc, の:な岻 se detectó un compuesto principal de Rf 噺ど,のな. La mezcla de reacción se lavó con agua, se secó la fase orgánica con MgSOね, se filtró y concentró en rotavap. La purificación mediante columna cromatográfica 岫tolueno/EtOAc, なの:な岻 condujo al producto なひぱ岫なひは mg, はひ%岻; 岷峅Dにど噺 −にぱ,は岫c 噺ど,ば, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばに岫br s, なH, H‐な岻, ね,にぬ岫dd, なH, Jの,はa 噺ば,は, Jはa,はb 噺なな,ぬ Hz, H‐はa岻, ね,なぬ岫dd, なH, Jの,はb 噺の,ど, Jはa,はb 噺なな,ぬ Hz, H‐はb岻, ね,など岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ぱ, Jぬ,ね噺の,ぬ Hz, H‐ぬ岻, ね,どど岫dd, なH, Jな,に噺な,に, Jに,ぬ噺に,ぱ Hz, H‐に岻, ぬ,ひぬ岫dd, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jぬ,ね噺の,ぬ Hz, H‐ね岻, ぬ,ぱひ岫m, なH, H‐の岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, に,のば岫d, なH, Jの,HO 噺ば,ぱ Hz, HO岻, に,など岫s, ぬH, CHぬCO岻, ど,ひど, ど,ぱぱ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな, ど,どひ岫に岻, ど,どぱ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばな,ど岫MeCO岻, などひ,は岫C‐な岻, ぱぬ,ぱ岫C‐ね岻, ぱぬ,な岫C‐に岻, ばひ,に岫C‐ぬ岻, はぱ,に岫C‐の岻, はは,に岫C‐は岻, のの,ど岫CHぬO岻, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ひ岫CHぬCO岻, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,ば岫に岻, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CになHねねOばSiに: C, のね,にば; H, ひ,のね. Encontrado: C, のぬ,ひば; H, ひ,ぬば. Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐acetil‐の‐O‐tosil‐が‐D‐galactofuranósido 岫なひひ岻. O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OAc

199 (91%)

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OAc

198

TsCl

C5H5N, T amb.


231

Para obtener el compuesto なひひ se siguió el mismo procedimiento descripto para なひば. A una solución de なひぱ岫ににの mg, ど,ねぱ mmol岻 en piridina anhidra 岫など mL岻, se le agregó cloruro de tosilo 岫はばど mg, ぬ,のに mmol岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ぬ días. Para detener la reacción se agregó MeOH 岫など mL aprox.岻 y se evaporó en rotavap. Se redisolvió el jarabe obtenido en CHにClに y se realizaron lavados con agua. La fase orgánica se secó con MgSOね, se filtró y concentró, co‐evaporando con tolueno para eliminar restos de piridina. La CCD 岫tolueno/EtOAc, ひ:な岻 mostró un compuesto principal de Rf 噺ど,のど, que se purificó mediante columna cromatográfica. Se utilizó tolueno/EtOAc, のど:な como solvente de elución para obtener el compuesto なひひ岫にばど mg, ひな%岻. Metil の,は‐anhidro‐に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐ゎ‐L‐altrofuranósido 岫にどど岻. O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OAc

199 (83%)

NaOMe/MeOH

O

OTBS

OTBS

OTs

OMe

OPiv

197

O

OTBS

OTBS

OMe

O

200

CH2Cl2, 0 °C

NaOMe/MeOH

CH2Cl2, 0 °C

Se disolvió el compuesto なひば岫なはど mg, ど,にね mmol岻 en CHにClに岫は mL岻 y se agregó a la solución, previamente enfriada a ど °C, solución にM de NaOMe/MeOH 岫な,ぬ mL岻. Se agitó la reacción durante に h. Transcurrido este tiempo, se detectó por CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 el consumo total del compuesto de partida y aparición de un producto de Rf 噺ど,ねぱ. Se diluyó con CHにClに y se extrajo con agua. La fase orgánica se secó y se concentró en rotavap, obteniéndose así el epóxido にどど que se purificó mediante columna cromatográfica que se eluyó con hexano/EtOAc, ねど:な岫ぱど mg, ぱぬ%岻; 岷峅Dにど噺 −ねど,な岫c 噺な,な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばね岫br s, なH, H‐な岻, ね,どぬ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ね, Jぬ,ね噺ね,ね Hz, H‐ぬ岻, ね,どな岫dd, なH, Jな,にな,ど, Jに,ぬ噺に,ね Hz, H‐に岻, ぬ,ばば岫dd, なH, Jぬ,ね噺ね,ね, Jね,の噺の,は Hz, H‐ね岻, ぬ,ぬの岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どば岫dddd, なH, Jの,はb 噺に,ば, Jの,はa 噺ぬ,ひ, Jね,の噺の,ば Hz, H‐の岻, に,ぱな岫dd, なH, Jの,はa 噺ぬ,ひ, Jはa,はb 噺の,に Hz, H‐はa岻, に,ばぬ岫dd, なH, Jの,はb 噺に,ば, Jはa,はb 噺の,に Hz, H‐はb岻, ど,ぱひ岫に岻岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな, ど,など岫に岻, ど,どひ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺ななど,な岫C‐な岻, ぱね,ば岫C‐ね岻, ぱぬ,ね岫C‐に岻, ぱな,に岫C‐ぬ岻, のの,ど岫CHぬO岻, のに,ど岫C‐の岻,


232

ねの,ね岫C‐は岻, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なば,ひ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ね, ‐ね,ば, ‐ね,ぱ, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CなひHねどOのSiに: C, のは,ぬひ; H, ひ,ひは. Encontrado: C, のは,はひ; H, など,には. De la misma forma, se sintetizó にどど también a partir del なひひ岫にばど mg, ど,ねね mmol岻 en CHにClに岫など mL岻 solución にM de NaOMe/MeOH 岫に,の mL岻 a ど °C. Se agitó la reacción durante な h. Se detectó por CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 el producto de Rf 噺ど,ねぱ岫にどど岻 descripto anteriormente. Metil の,は‐epitio‐に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐が‐D‐galactofuranósido 岫にどな岻.

201 (83%)

O

OTBS

OTBS

OMe

O

200

MeOH, T amb

O

OTBS

OTBS

OMe

S

(NH2)2CS

A una solución del compuesto にどど岫ぱの mg, ど,にな mmol岻 en MeOH anhidro 岫ぬ mL岻. se agregó tiourea 岫ねに mg, ど,のの mmol岻 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ねぱ h. Se evaporó el solvente y el residuo se tomó con CHにClに/agua. Se secó la fase orgánica con MgSOね, se filtró y concentró. Se observó por CCD 岫hexano/EtOAc, など:な岻 un nuevo compuesto de Rf 噺ど,はぱ, el cual se purificó mediante columna cromatográfica que se eluyó con hexano/EtOAc, ばど:な, para dar にどな岫ばぬ mg, ぱぬ%岻; 岷峅Dにど噺 −ねな,に岫c 噺ど,ぱ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,はひ岫d, なH, Jな,に噺な,ぱ Hz, H‐な岻, ね,どど岫dd, なH, Jな,に噺な,ぱ, Jに,ぬ噺ね,な Hz, H‐に岻, ぬ,ひど岫dd, なH, Jに,ぬ噺ね,な, Jぬ,ね噺は,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ぬ,のの岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺ば,ど Hz, H‐ね岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どね岫ddd, なH, Jの,はb 噺の,ね, Jの,はa 噺は,の, Jね,の噺ば,ど Hz, H‐の岻, に,ねひ岫dd, なH, Jはa,はb 噺な,な, Jの,はa 噺は,の Hz, H‐はa岻, に,ぬば岫dd, なH, Jはa,はb 噺な,な, Jの,はb 噺の,ね Hz, H‐はb岻, ど,ひど, ど,ぱひ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな, ど,など, ど,どひ, ど,どぱ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,に岫C‐な岻, ぱの,は岫C‐ね岻, ぱね,ね岫C‐に岻, ぱに,ひ岫C‐ぬ岻, のの,な岫CHぬO岻, ぬの,ぬ岫C‐の岻, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にな,ぱ岫C‐は岻, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,な, ‐ね,は岫に岻, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CなひHねどOねSSiに: C, のね,にね; H, ひ,のぱ. Encontrado: C, のね,はど; H, ひ,はの. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CなひHねどOねSSiに髪Na: ねねぬ,にどぱね; Encontrado: ねねぬ,にどぱぬ


233

Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐が‐D‐galactofuranósido 岫にどに岻, bis 岷metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐が‐D‐galactofuranosil峅 disulfuro 岫にどぬ岻, な‐S‐岷に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐が‐D‐galactopiranosil峅‐の‐S‐岷metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐が‐D‐galactofuranosil峅 disulfuro 岫にどね岻.

18-crown-6, DTT+

THF

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

188

OAcO

AcO OAc

S

OAc

Na

NaH, THF

OAcO

AcO OAc

OAc

201

O

OTBS

OTBS

OMe

S

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

S

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

+

+

2203

202

204

O

AcO AcO OAc

OAc La に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐galactopiranosaなに岫なねに mg, ど,ぬひ mmol岻 y NaH 岫なは mg, ど,はば mmol岻 se disolvieron en THF anhidro 岫にど mL岻 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ぬど min. Transcurrido este tiempo se evaporó el solvente y la sal resultante se agregó a una solución enfriada a ど °C del tiirano にどな岫ぱに mg, ど,なひ mmol岻 y DTT 岫ぬに mg, ど,にな mmol岻 en THF anhidro 岫ね mL岻. A los など min se agregó なぱ‐crown‐は岫にど mg, ど,どぱ mmol岻 y se continuó la agitación. A los ぬど min se agregó nuevamente なぱ‐crown‐は岫にど mg, ど,どぱ mmol岻 y se dejó reaccionar ぬど


234

min más. Por CCD 岫tolueno/EtOAc, に:な岻 se observó la formación de tres compuestos de Rf 噺ど,ばに, ど,のね y ど,ねね, correspondientes al tiodisacárido にどに y los disulfuros にどぬ y にどね. La mezcla se separó mediante una columna cromatográfica que se eluyó con tolueno/EtOAc, ば:な蝦EtOAc. El compuesto mayoritario resultó ser el tiodisacárido にどに岫なねは mg, ひぱ%岻; 岷峅Dにど噺 −ぬば,ぱ岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,ねぬ岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ひ, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ぬ Hz, H‐ね’岻, の,にね岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐に’岻, の,どに岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ぬ, Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,はは岫d, なH, Jな,に噺に,ど Hz, H‐な岻, ね,のの岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,ど Hz, H‐な’岻, ね,にな岫dd, なH, Jに,ぬ噺ぬ,ひ, Jぬ,ね噺ば,ね Hz, H‐ぬ岻, ね,なぱ岫dd, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jぬ,ね噺ば,ね Hz, H‐ね岻, ね,なの岫dd, なH, Jの’,は’a 噺は,ば, Jは’a,は’b 噺なな,ぬ Hz, H‐は’a岻, ね,なぬ岫dd, なH, Jの’,は’b 噺は,ば, Jは’a,は’b 噺なな,ぬ Hz, H‐は’b岻, ね,どな岫dd, なH, Jな,に噺に,ど, Jに,ぬ噺ぬ,ひ Hz, H‐に岻, ぬ,ひに岫ddd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ひ, Jの’,は’a 噺 Jの’,は’b 噺は,ば Hz, H‐の’岻, ぬ,ぬに岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,なね岫dd, なH, Jの,はa 噺の,の, Jはa,はb 噺なに,の Hz, H‐はa岻, ぬ,どね岫m, なH, Jね,の噺な,ぱ, Jの,はa 噺の,の, Jの,はb 噺ぱ,ぬ, Jの,HS 噺ひ,ね Hz, H‐の岻, ぬ,どど岫dd, なH, Jの,はb 噺ぱ,ぬ, Jはa,はb 噺なに,の Hz, H‐はb岻, に,なは, に,どば, に,どは, な,ひぱ岫ねs, なにH, CHぬCO岻, な,ひに岫d, なH, Jの,HS 噺ひ,ね Hz, HS岻, ど,ひど, ど,ぱひ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな, ど,など, ど,どひ, ど,どぱ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,に岫に岻, なばど,ど, なはひ,の岫MeCO岻, などひ,ど岫C‐な岻, ぱね,ぬ岫C‐に岻, ぱぬ,ば岫C‐な’岻, ぱな,に岫C‐ね岻, ぱど,に岫C‐ぬ岻, ばね,ね岫C‐の’岻, ばな,ぱ岫C‐ぬ’岻, はば,に岫C‐に’岻, はば,な岫C‐ね’岻, はな,に岫C‐は’岻, のの,ど岫CHぬO岻, ねな,ば岫C‐の岻, ぬは,ば岫C‐は岻, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にな,ね, にど,ば, にど,は, にど,の岫CHぬCO岻, なば,ぱ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,な, ‐ね,ぬ, ‐ね,は, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CぬぬHはどOなぬSにSiに: C, のど,ねぱ; H, ば,ばど. Encontrado: C, のど,ぱど; H, ば,ねは. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CぬぬHはどOなぬSにSiに髪Na: ぱどば,にひどはな; Encontrado: ぱどば,にひなはは. De fracciones posteriores se aislaron にどぬ y にどね. にどぬ: 岷峅Dにど噺髪なに,ぬ岫c 噺な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,ねの岫dd, なH, Jね’,の’ 噺な,ど, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね Hz, H‐ね’岻, の,にど岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐に’岻, の,どば岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね, Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,はの岫d, なH, Jな,に噺な,は Hz, H‐な岻, ね,のぱ岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,ど Hz, H‐な’岻, ね,ぬど岫dd, なH, Jね,の噺に,ぬ, Jぬ,ね噺は,ば Hz, H‐ね岻, ね,なば岫m, にH, H‐は’a, H‐は’b岻, ね,なは岫dd, なH, Jに,ぬ噺ぬ,の, Jぬ,ね噺は,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひひ岫m, なH, H‐の’岻, ぬ,ひぱ岫dd, なH, Jな,に噺な,は, Jに,ぬ噺ぬ,の Hz, H‐に岻, ぬ,ぬに岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,なは岫m, ぬH, H‐の, H‐はa, H‐はb岻, に,なは, に,どば, に,どね, な,ひぱ岫ねs, なにH, CHぬCO岻, ど,ひど, ど,ぱひ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なに岫に岻, ど,どひ, ど,どぱ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,ぬ, なばど,に, なばど,ど, なはひ,の岫MeCO岻, などひ,ど岫C‐な岻, ぱね,の岫C‐


235

な’岻, ぱね,な岫C‐に岻, ぱに,な岫C‐ね岻, ぱど,ど岫C‐ぬ岻, ばね,ぬ岫C‐の’岻, ばな,ぱ岫C‐ぬ’岻, はば,は岫C‐に’岻, はば,な岫C‐ね’岻, はな,ど岫C‐は’岻, のの,な岫CHぬO岻, のね,ど岫C‐の岻, ぬに,は岫C‐は岻, にの,ぱ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ぱ, にど,ば岫に岻, にど,は岫CHぬCO岻, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ど, ‐ね,に, ‐ね,の, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CははHななぱOにはSねSiね: C, のど,のの; H, ば,のぱ. Encontrado: C, のど,のに; H, ば,のば. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CははHななぱOにはSねSiね髪Na: なのぱひ,のばはぬね; Encontrado: なのぱひ,のばななの. にどね: 岷峅Dにど噺 −ど,のひ岫c 噺な, acetona岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, 岫CDぬ岻にCO岻: δ 噺の,ねば, の,ねの岫にdd, にH, H‐ね’, H‐ね’’岻, の,にぱ−の,なは岫m, ねH, H‐に’, H‐に’’, H‐ぬ’, H‐ぬ’’岻, ね,ひな岫d, なH, Jな’’,に’’ 噺ひ,ひ Hz, H‐な’’岻, ね,ぱば岫d, なH, Jな’,に’ 噺ひ,ば Hz, H‐な’岻, ね,ばに岫d, なH, Jな,に噺な,に Hz, H‐な岻, ね,ねぬ岫d, にH, H‐は’a, H‐は’b岻, ね,ねに岫dd, なH, Jね,のぬ,ど, Jぬ,ねは,ぱ Hz, H‐ね岻, ね,ぬは岫ddd, なH, Jね’’,の’’ 噺な,に, Jの’’,は’’a Jの’’,は’’ は,は Hz, H‐の’’岻, ね,にぱ岫dd, なH, Jに,ぬ噺ぬ,ど, Jぬ,ね噺は,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ね,にの−ね,なは岫m, ぬH, H‐の’, H‐は’’a, H‐は’’b岻, ね,どば岫dd, なH, Jな,にな,に, Jに,ぬぬ,ど Hz, H‐に岻, ぬ,のね岫dd, なH, H‐はa岻, ぬ,ぬは岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,ぬの岫m, なH, H‐の岻, ぬ,なぱ岫dd, なH, Jの,はb 噺ぱ,ば, Jはa,はb 噺なぬ,ね Hz, H‐はb岻, に,なば, に,なは, に,どば岫に岻, に,どの, に,どぬ, な,ひね岫に岻岫ぱs, にねH, CHぬCO岻, ど,ひは, ど,ひの岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,にに, ど,にど, ど,なは, ど,なの岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, 岫CDぬ岻にCO岻: δ 噺なばど,ぱ岫に岻, なばど,は, なばど,の, なばど,な岫に岻, なばど,ど, なはひ,ぱ岫MeCO岻, などひ,ば岫C‐な岻, ひな,ね岫C‐な’’岻, ぱの,の岫C‐に岻, ぱね,は岫C‐な’岻, ぱぬ,に岫C‐ね岻, ぱな,は岫C‐ぬ岻, ばの,は岫C‐の’’岻, ばの,な岫C‐の’岻, ばに,の, ばに,ね岫C‐ぬ’, ぬ’’岻, はぱ,ね, はぱ,ぬ, はぱ,に岫に岻岫C‐に’, に’’, ね’, ね’’岻, はに,に, はに,ど, 岫C‐は’, は’’岻, のの,の, のの,に岫C‐の, CHぬO岻, ぬぬ,ね岫C‐は岻, には,ぬ岫ぬ岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ぱ岫ぬ岻, にど,ば岫に岻, にど,は, にど,の岫に岻岫CHぬCO岻, なぱ,の岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,ば, ‐ぬ,ぱ, ‐ね,に, ‐ね,は岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CねばHばぱOににSぬSiに.のHにO: C, ねの,はな; H, ば,なば. Encontrado: C, ねの,ねに; H, は,ねひ. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CねばHばぱOににSぬSiに髪Na: ななはひ,ぬのばばは; Encontrado: ななはひ,ぬのぬぱぬ. Metil の‐S‐acetil‐に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐が‐D‐galactofuranósido 岫にどの岻.

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc202

S

O

OTBS

OTBS

SAc

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc205

Ac2O

C5H5N


236

Se disolvió el tiodisacárido にどに岫なの mg, ど,どに mmol岻 en piridina 岫ど,の mL岻 y se agregó AcにO 岫ど,の mL岻. Se agitó a temperatura ambiente durante なに h. Una vez obtenido el compuesto acetilado にどの岫Rf 噺ど,ぱな, tolueno/EtOAc, に:な岻 se concentró el solvente en rotavap, co‐evaporando con tolueno y la estructura del producto crudo se confirmó mediante espectroscopía; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,ねば岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ば, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ぬ Hz, H‐ね’岻, の,にの岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐に’岻, の,どば岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ぬ, Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,ぱね岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,ど Hz, H‐な’岻, ね,のひ岫d, なH, Jな,に噺な,ひ Hz, H‐な岻, ね,にば岫dd, なH, Jね,の噺な,ね, Jぬ,ね噺ば,ぱ Hz, H‐ね岻, ね,なに岫m, ぬH, Hの’, H‐は’a, Hは’b岻, ぬ,ひぱ岫dd, なH, Jな,に噺な,ひ, Jに,ぬ噺ね,ね Hz, H‐に岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jに,ぬ噺ね,ね, Jぬ,ね噺ば,ぱ Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ばば岫dddd, なH, Jね,の噺な,ね, Jの,はa 噺ぬ,は, Jの,はb 噺なな,な Hz, H‐の岻, ぬ,ぬに岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どぱ岫dd, なH, Jの,はa 噺ぬ,は, Jはa,はb 噺なね,な Hz, H‐はa岻, に,ひど岫dd, なH, Jの,はb 噺なな,な, Jはa,はb 噺なね,な Hz, H‐はb岻, に,ぬば岫s, ぬH, SCOCHぬ岻, に,なの, に,どの, に,どに, な,ひぱ岫ねs, なにH, CHぬCO岻, ど,ひど, ど,ぱぱ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,どば, ど,どは, ど,どの, ど,どな岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なひね,ひ岫SCOMe岻, なばど,ぬ岫に岻, なばど,ど, なはひ,ば岫MeCO岻, などぱ,ひ岫C‐な岻, ぱね,の岫C‐に岻, ぱに,な岫C‐な’岻, ぱど,ね岫C‐ぬ岻, ばひ,ぬ岫C‐ね岻, ばね,ね岫C‐の’岻, ばに,ど岫C‐ぬ’岻, はば,の岫C‐に’岻, はば,ぬ岫C‐ね’岻, はな,な岫C‐は’岻, のの,に岫CHぬO岻, ねの,な岫C‐の岻, ぬに,は岫C‐は岻, ぬど,ひ岫SCOCHぬ岻, にの,ぱ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ぱ, にど,ば岫に岻, にど,は岫CHぬCO岻, なば,ひ, なば,ぱ岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,に, ‐ね,の, ‐ね,ぱ, ‐の,ど岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐O‐tosil‐が‐D‐galactofuranósido 岫にどは岻. TsCl

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTs

206 (99%)

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OH

184

C5H5N, T amb.

Se tosiló selectivamente el hidroxilo primario del compuesto なぱね. Para ello se preparó una solución de なぱね岫にのど mg, ど,のひ mmol岻 en piridina anhidra 岫は mL岻 y se agregó un exceso de cloruro de tosilo 岫にには mg, な,なぱ mmol岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ぬ días. La solución tomó coloración amarillen y ta. Para detener la reacción se agregó MeOH 岫など mL岻 y se evaporó el solvente. Se


237

redisolvió el jarabe obtenido en CHにClに y se realizaron lavados con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻, filtró y concentró, co‐evaporando con tolueno para eliminar restos de piridina. La CCD 岫hexano/EtOAc, ね:な岻 mostró un compuesto principal de Rf 噺ど,ねば. Se obtuvo así el compuesto にどは岫ぬぬば mg, ひひ%岻 suficientemente puro para la reacción siguiente; 岷峅Dにど噺 −にの,の岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ば,ぱな, ば,ぬね岫にd, ねH, J ぱ,に Hz, H‐aromáticos岻, ね,はば岫br s, なH, H‐な岻, ね,どぱ岫d, にH, Jの,はa 噺 Jの,はb 噺は,ね Hz, H‐はa, H‐はb岻, ね,どの岫dddd, なH, Jに,ぬ噺に,は, Jぬ,ね噺の,な Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひは岫dd, なH, Jな,に噺な,な, Jに,ぬ噺に,は Hz, H‐に岻, ぬ,ひね岫dd, なH, Jね,の噺な,は, Jぬ,ね噺の,な Hz, H‐ね岻, ぬ,ぱひ岫dddd, なH, Jね,の噺な,は, Jの,はa 噺 Jの,はb 噺は,ね, Jの,HO 噺ば,ぬ Hz, H‐の岻, ぬ,にひ岫s, ぬH, CHぬO岻, に,はね岫d, なH, Jの,HO 噺ば,ぬ Hz, HO岻, に,ねね岫s, ぬH, CHぬPh岻, ど,ぱば岫に岻岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,どひ, ど,どば岫に岻, ど,どの岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なねね,ぱ, なぬに,ひ, なにひ,ぱ, なにぱ,ど岫C‐aromáticos岻, などひ,の岫C‐な岻, ぱぬ,ね岫C‐ね岻, ぱに,ば岫C‐に岻, ばひ,ど岫C‐ぬ岻, ばど,ば岫C‐は岻, はば,ぱ岫C‐の岻, のね,ひ岫CHぬO岻, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にな,は岫CHぬPh岻, なば,ぱ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ね, ‐ね,ば, ‐ね,ぱ, ‐の,ど岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CにはHねぱOぱSSiに: C, のね,なぬ; H, ぱ,ぬひ. Encontrado: C, のね,どぬ; H, ぱ,ねぬ. Metil の,は‐anhidro‐に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐β‐D‐galactofuranósido 岫にどば岻.

O

OTBS

OTBS

OH

OMe

OTs

206 207

O

OTBS

OTBS

OMe

O

NaOMea/MeOH

CH2Cl2, 0 °C

Se procedió según la metodología descripta para sintetizar el compuesto にどど. Se disolvió el compuesto にどは crudo 岫ぬぬば mg, ど,のぱ mmol岻 en CHにClに岫なね mL岻 y se agregó a la solución, previamente enfriada a ど °C, una solución にM de NaOMe/MeOH 岫ぬ mL岻. Se agitó la reacción durante な h; cuando se detectó por CCD 岫tolueno岻 el consumo total del compuesto de partida y aparición de un producto de Rf 噺ど,ねど. La mezcla de reacción se diluyó con CHにClに y se extrajo con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻 y se concentró para dar el epóxido にどば como un jarabe


238

amarillo, que se empleó crudo para el siguiente paso de síntesis; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,はぱ岫d, なH, Jな,に噺に,ど Hz, H‐な岻, ね,どな岫dd, なH, Jな,に噺に,ど, Jに,ぬ噺ね,ね Hz, H‐に岻, ぬ,ひぱ岫dd, なH, Jに,ぬ噺ね,ね, Jぬ,ね噺ば,ぬ Hz, H‐ぬ岻, ぬ,はに岫dd, なH, Jね,の噺は,ど, Jぬ,ね噺ば,ぬ, Hz, H‐ね岻, ぬ,ぬは岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どひ岫dddd, なH, Jの,はb 噺に,ば, Jの,はa 噺ね,ぬ, Jね,の噺は,ど Hz, H‐の岻, に,ぱぬ岫dd, なH, Jの,はa 噺ね,ぬ, Jはa,はb 噺の,に Hz, H‐はa岻, に,ばの岫dd, なH, Jの,はb 噺に,ば, Jはa,はb 噺の,に Hz, H‐はb岻, ど,ひど, ど,ぱぱ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,など, ど,どひ, ど,どぱ, ど,どば岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺などひ,ね岫C‐な岻, ぱね,ぬ岫C‐に岻, ぱに,ね岫C‐ね岻, ぱど,な岫C‐ぬ岻, のの,ぬ岫CHぬO岻, のな,ば岫C‐の岻, ねね,に岫C‐は岻, にの,ぱ, にの,は岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, なば,ひ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,に, ‐ね,は, ‐ね,ひ岫に岻岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Metil の,は‐epitio‐に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐ゎ‐L‐altrofuranósido 岫にどぱ岻.

207

O

OTBS

OTBS

OMe

S

208 (47% apartir de 184)

MeOH, T amb

O

OTBS

OTBS

OMe

O

(NH2)2CS

Se disolvió el compuesto にどば crudo 岫ににな mg, ど,ののmmol岻 en MeOH anhidro 岫ぱ mL岻 y se agregó tiourea 岫ななど mg, な,ねの mmol岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante にね h. Se evaporó el solvente y se realizó una partición entre CHにClに/agua. Se secó la fase orgánica 岫MgSOね岻, se filtró y concentró. El jarabe amarillo obtenido mostró por CCD 岫tolueno岻 un Rf 噺ど,のば. El producto se purificó mediante columna cromatográfica eluyendo con hexano/EtOAc, のど:な, para dar にどぱ岫ななは mg, ねば% en tres pasos a partir del なぱね岻; 岷峅Dにど噺 −なば,ぬ岫c 噺ど,ば, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ね,ばぱ岫br s, なH, H‐な岻, ね,どね岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,な, Jぬ,ね噺ぬ,ば Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひひ岫dd, なH, Jな,に噺ど,ぱ, Jに,ぬ噺に,な Hz, H‐に岻, ぬ,のな岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,ば, Jね,の噺ぱ,に Hz, H‐ね岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どね岫dddd, なH, Jの,はb 噺の,ぬ, Jの,はa 噺は,な, Jね,の噺ぱ,に Hz, H‐の岻, に,のぬ岫dd, なH, Jはa,はb 噺な,に, Jの,はa 噺は,な Hz, H‐はa岻, に,ぬど岫dd, なH, Jはa,はb 噺な,に, Jの,はb 噺の,ぬ Hz, H‐はb岻, ど,ひど, ど,ぱひ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なな岫に岻, ど,など岫に岻岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺ななど,ね岫C‐な岻, ぱひ,ひ岫C‐ね岻, ぱぬ,に岫C‐に岻, ぱに,は岫C‐ぬ岻, のね,ひ岫CHぬO岻, ぬね,の岫C‐の岻, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にぬ,の岫C‐は岻, なば,ひ岫


239

に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,の, ‐ね,は, ‐ね,ぱ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CなひHねどOねSSiに: C, のね,にね; H, ひ,のぱ. Encontrado: C, のね,どば; H, ひ,ぱな. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CなひHねどOねSSiに髪Na: ねねぬ,にどぱね; Encontrado: ねねぬ,にどぱぬ Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐ゎ‐L‐altrofuranósido 岫にどひ岻, な‐S‐岷に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐な‐tio‐が‐D‐galactopiranosil峅‐の‐S‐岷metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐は‐S‐岫に,ぬ,ね,は‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐ゎ‐L‐altrofuranosil峅‐disulfuro 岫になど岻.

O

AcO AcOOAc

OAc

18-crown-6, DTT+

THF

S

O

OTBS

OTBS

HS

OMe8

OAcO

AcO OAc

SH

OAc

188

OAcO

AcO OAc

S

OAc

Na

NaH, THF

OAcO

AcO OAc

OAc

208

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

+

209

210

O

OTBS

OTBS

OMe

S

S

S

Se procedió en forma análoga a la apertura del tiirano にどな descripta anteriormente, excepto que el tiempo que llevó la reacción de acoplamiento fue に,の h y solo se obtuvieron dos productos, el tiodisacárido 岫にどひ岻 y el disulfuro 岫になど岻 con valores de Rf 噺ど,はば y ど,ぬに respectivamente 岫tolueno岻. にどひ: 岫なのば mg, ぱば%岻; 岷峅Dにど噺 −にひ,の岫c 噺ど,ひ, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺の,ねぬ岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ひ, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね Hz, H‐ね’岻, の,にぬ岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐に’岻, の,どね岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね, Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,ばね岫s, なH, H‐な岻, ね,のひ岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,ど Hz, H‐な’岻, ね,なね岫d, にH, H‐はa, H‐はb岻, ね,なに岫dd, なH, Jに,ぬ噺な,に, Jぬ,ね噺ぬ,ね Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひは岫dd, なH, Jぬ,ね噺ぬ,ね Hz, H‐ね岻, ぬ,ひぱ−ぬ,ひに岫にH, H‐に, H‐の’岻, ぬ,ぬに岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,にね


240

岫dd, なH, Jの,はa 噺ね,ど, Jはa,はb 噺なぬ,ね Hz, H‐はa岻, ぬ,なひ岫dddd, なH, Jね,の Jの,はa 噺ね,ど, Jの,はb 噺ば,の Hz, H‐の岻, に,ひば岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,の, Jはa,はb 噺なぬ,ね Hz, H‐はb岻, に,なは, に,どぱ, に,どね, な,ひひ岫ねs, なにH, CHぬCO岻, ど,ぱひ, ど,ぱぱ岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なに岫に岻ど,など, ど,どひ岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,ぬ, なばど,に, なばど,ど, なはひ,の岫MeCO岻, ななど,に岫C‐な岻, ぱひ,ど, ぱに,ね岫C‐に, ね岻, ぱの,ど岫C‐な’岻, ぱど,ば岫C‐ぬ岻, ばね,ね岫C‐の’岻, ばな,ひ岫C‐ぬ’岻, はば,は岫C‐に’岻, はば,な岫C‐ね’岻, はな,に岫C‐は’岻, のね,ば岫CHぬO岻, ねぬ,ど岫C‐の岻, ぬは,は岫C‐は岻, にの,ば岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ぱ, にど,は岫ぬ岻岫CHぬCO岻, なば,ぱ岫に岻岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ね,ぬ, ‐ね,ね, ね,ば, ‐ね,ぱ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CぬぬHはどOなぬSにSiに: C, のど,ねぱ; H, ば,ばど. Encontrado: C, のど,ぱな; H, ば,ぱな. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CぬぬHはどOなぬSにSiに髪Na: ぱどば,にひどはな; Encontrado: ぱどば,にひなはは. になど: 岷峅Dにど噺 −ねな,の岫c 噺な, acetona岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, 岫CDぬ岻にCO岻: δ 噺の,ねば, の,ねは岫にdd, にH, H‐ね’, H‐ね’’岻, の,にぬ−の,なは岫m, ねH, H‐に’, H‐に’’, H‐ぬ’, H‐ぬ’’岻, の,どは岫d, なH, Jな’,に’ 噺ひ,ひ Hz, H‐な’岻, ね,ひど岫d, なH, Jな’’,に’’ 噺ひ,ひ Hz, H‐な’’岻, ね,ばぱ岫br s, なH, H‐な岻, ね,にの岫m, なH, H‐の’’岻, ね,にぬ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,に, Jぬ,ね噺の,ど Hz, H‐ぬ岻, ね,にな岫t, なH, Jぬ,ね Jね,のの,に Hz, H‐ね岻, ね,なは−ね,どな岫m, はH, H‐に, H‐の’, H‐は’a, H‐は’b, H‐は’’a, H‐は’’b岻, ぬ,ねな岫m, なH, Jね,の Jの,はa の,は Hz, H‐の岻, ぬ,ぬね岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,にに岫dd, なH, Jの,はa 噺の,は, Jはa,はb 噺なぬ,は Hz, H‐はa岻, ぬ,なね岫dd, なH, Jはa,はb 噺なぬ,は Hz, H‐はb岻, に,なの岫に岻, に,どぱ, に,どの, に,どな, に,どど, な,ひぬ岫ぱs, にねH, CHぬCO岻, ど,ひぬ, ど,ひに岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,なひど,なぱ, ど,なの, ど,なね岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, 岫CDぬ岻にCO岻: δ 噺なばど,ば岫に岻, なばど,の岫に岻, なばど,に岫に岻, なばど,ど岫に岻岫MeCO岻, ななど,ね岫C‐な岻, ぱは,ぱ岫C‐ね岻, ぱの,ぬ岫C‐な’’岻, ぱね,ぱ岫C‐に岻, ぱに,ば岫C‐な’岻, ぱな,ば岫C‐ぬ岻, ばの,に, ばの,な岫C‐の’,の’’岻, ばに,の岫ぬ岻, はぱ,ね岫に岻, はぱ,な岫C‐に’, に’’, ぬ’, ぬ’’, ね’, ね’’岻, はに,に岫に岻岫C‐は’, は’’岻, のの,な岫CHぬO岻, ねぱ,ひ岫C‐の岻, ぬに,ぱ岫C‐は岻, には,ぬ岫に岻, には,に岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,ひ, にど,ぱ, にど,ば岫に岻, にど,は岫に岻, にど,の岫に岻岫CHぬCO岻, なぱ,は, なぱ,ね岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ‐ぬ,ば, ‐ぬ,ひ, ‐ね,ぬ, ‐ね,の岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CねばHばぱOににSぬSiに.はHにO: C, ねね,ひは; H, ば,にに. Encontrado: C, ねの,ねに; H, は,ねひ.


241

Bis 岷metil は‐S‐岫が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐が‐D‐galactofuranosil峅 disulfuro 岫になな岻.

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc202

S

O

OH

OH

S

OMe

OHO

HO OH

OH211 (67%)

2) MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

1) FTBA

2

A una solución del tiodisacárido にどに岫なぱな mg, ど,にぬ mmol岻 en THF 岫は,の mL岻 enfriada a ど °C, se le agregó FTBA なM en THF 岫なはど μL, ど,のの mmol岻, para hidrolizar los ésteres de sililo. La mezcla se agitó durante など min a ど °C y luego a temperatura ambiente durante なぱ h. La CCD 岫tolueno/EtOAc, に:な岻 mostró un compuesto de Rf 噺ど. Se concentró la solución y se redisolvió el residuo en CHにClに. La fase orgánica se lavó con agua, se secó 岫MgSOね岻 y se evaporó el solvente. Se obtuvo un jarabe marrón 岫Rf 噺ど,のひ, n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻 que se redisolvió en solución de MeOH:EtぬN:HにO ぬ:な:ぬ岫にの mL岻. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante は h, luego se concentró co‐evaporando con tolueno y metanol. Se obtuvo un jarabe naranja que se purificó mediante una columna rellena con resina de intercambio iónico 岫Dowex MR‐ぬC mixed bed岻, que se eluyó con solución metanol:agua な:な岫なの mL岻. El eluato se concentró y se repurificó con una mini columna octadecil Cなぱ con MeOH:agua な:な岫など mL岻. Se obtuvo así el disulfuro になな岫はど mg, はば%岻; 岷峅Dにど噺 −なばは,ぱ岫c 噺な, MeOH岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻: δ 噺ね,ばに岫d, なH, Jな,に噺に,な Hz, H‐な岻, ね,ねの岫d, なH, Jな’,に’ 噺ひ,は Hz, H‐な’岻, ね,ねど岫dd, なH, Jね,の噺ぬ,な, Jぬ,ね噺ば,ね Hz, H‐ね岻, ね,にに岫dd, なH, Jに,ぬ噺ね,ぬ, Jぬ,ね噺ば,ね Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひば岫dd, なH, Jな,に噺に,な, Jに,ぬ噺ね,ぬ Hz, H‐に岻, ぬ,ひな岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ば, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね Hz, H‐ね’岻, ぬ,ぱど岫dd, なH, Jの’,は’a 噺は,ば, Jは’a,は’b 噺なな,の Hz, H‐は’a岻, ぬ,ばど岫dd, なH, Jの’,は’b 噺の,な, Jは’a,は’b 噺なな,の Hz, H‐は’b岻, ぬ,はに岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺ひ,に Hz, H‐に’岻, ぬ,のぬ岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね, Jに’,ぬ’ 噺ひ,に Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ねは岫dd, なH, Jの,はa 噺の,ぬ, Jはa,はb 噺なぬ,は Hz, H‐はa岻, ぬ,ねど岫m, なH, Jの,はa 噺の,ぬ, Jの,はb 噺ひ,ぬ Hz, H‐の岻, ぬ,ぬに岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,どね岫dd, なH, Jの,はb 噺ひ,ぬ, Jはa,はb 噺なぬ,ぱ Hz, H‐はb岻, な,ひに岫s, なH, HS岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば


242

MHz, CDぬOD岻: δ 噺ななど,ど岫C‐な岻, ぱば,の岫C‐な’岻, ぱね,ど岫C‐に岻, ぱに,ね岫C‐ね岻, ぱど,の, ばな,に岫C‐の’,に’岻, ばひ,ぱ岫C‐ぬ岻, ばは,な岫C‐ぬ’岻, ばど,は岫C‐ね’岻, はに,ば岫C‐は’岻, のの,ば岫C‐の岻, のの,ね岫CHぬO岻, ぬぬ,の岫C‐は岻. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CにはHねはOなぱSね髪Na: ばひば,なねのひに; Encontrado: ばひば,なねのばの. Bis 岷metil は‐S‐岫が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐ゎ‐L‐altrofuranosil峅 disulfuro 岫になに岻.

S

O

OTBS

OTBS

HS

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc209

S

O

OH

OH

S

OMe

212 (45%)

2) MeOH:Et3N:H2O

3:1:3

1) FTBA

2

O

HOOH

OH

OH

Se procedió según la metodología descripta anteriormente para obtener になな, a partir del tiodisacárido にどひ岫なねぱ mg, ど,なひ mmol岻. Se obtuvo el disulfuro になに岫Rf 噺ど,のぱ, n‐BuOH/EtOH/HにO, に,の:な:な岻 aunque con un rendimiento más bajo 岫ぬぬ mg, ねの%岻; 岷峅Dにど噺 −ひば,ぱ岫c 噺な, MeOH岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDぬOD岻: δ 噺ね,ば岫br s, なH, H‐な岻, ね,ねば岫d, なH, Jな’,に’ 噺ひ,は Hz, H‐な’岻, ね,にの岫t, なH, Jぬ,ね噺 Jね,の噺の,は Hz, H‐ね岻, ね,なぱ岫dd, なH, Jに,ぬ噺に,ば, Jぬ,ね噺の,は Hz, H‐ぬ岻, ぬ,ひの岫dd, なH, Jな,に噺な,ね, Jに,ぬ噺に,ば Hz, H‐に岻, ぬ,ひど岫dd, なH, Jね’,の’ 噺ど,ぱ, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ぬ Hz, H‐ね’岻, ぬ,ばひ岫dd, なH, Jの’,は’a 噺は,ひ, Jは’a,は’b 噺なな,の Hz, H‐は’a岻, ぬ,はひ岫dd, なH, Jの’,は’b 噺の,な, Jは’a,は’b 噺なな,の Hz, H‐は’b岻, ぬ,はに−ぬ,のば岫m, にH, H‐の’, H‐に’岻, ぬ,のど岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ぬ, Jに’,ぬ’ 噺ひ,に Hz, H‐ぬ’岻, ぬ,ねに岫m, なH, H‐の岻, ぬ,ぬば岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,ぬぬ−ぬ,ぬは岫m, なH, H‐はa岻, ぬ,どぬ岫dd, なH, Jの,はb 噺ば,ぱ, Jはa,はb 噺なね,ぬ Hz, H‐はb岻, な,ひに岫s, なH, HS岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDぬOD岻: δ 噺ななど,ぬ岫C‐な岻, ぱば,ば岫C‐な’岻, ぱの,ぱ岫C‐ね岻, ぱぬ,ぬ岫C‐に岻, ぱど,は, ばな,の岫C‐の’,に’岻, ぱど,な岫C‐ぬ岻, ばは,に岫C‐ぬ’岻, ばど,は岫C‐ね’岻, はに,ば岫C‐は’岻, のは,な岫C‐の岻, のの,ね岫CHぬO岻, ぬな,は岫C‐は岻. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CにはHねはOなぱSね髪Na: ばひば,なねのひに; Encontrado: ばひば,なねねぬな.


243

Metil に,ぬ‐di‐O‐ter‐butildimetilsilil‐の‐S‐岫に,ぬ,のは‐tetra‐O‐benzoil‐が‐D‐galactofuranosil岻‐は‐S‐岫に,ぬ,ねは‐tetra‐O‐acetil‐が‐D‐galactopiranosil岻‐の,は‐ditio‐が‐D‐galactofuranósido 岫になぬ岻. O

OBz

OBz

OBz

O

OBz

MS, TMSOTf

192

S

O

OTBS

OTBS

SH

OMe

OAcO

AcO OAc

OAc

202

CH2Cl2, -18 °C

CCl3

NH

+

S

O

OTBS

OTBS

S

OMe

OAcO

AcO OAc

OAcO

OBz

OBz

OBz

OBz

213 (29%) Se procedió a acoplar el tiodisacárido にどに con el tricloroacetimidato なひに según la técnica descripta previamente para la obtención de なひの. A una solución del tricloroacetimidato なひに岫なひの mg, ど,には mmol岻 en CHにClに anhidro 岫の mL岻 se le agregó el tiodisacárido にどに岫ぱに mg, ど,など mmol岻 y molecular sieves ね Å en polvo, activado previamente ぬ h. La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante な,の h en atmósfera de argón. Luego se enfrió a 伐なぱ °C, se agregó TMSOTf 岫なに μL, ど,どば mmol岻 y se continuó la agitación な,の h cuando la CCD 岫hexano/EtOAc, に:な岻 mostró un producto de Rf 噺ど,にね. Se diluyó la mezcla de reacción con CHにClに, se filtró y se extrajo con solución saturada de NaHCOぬ y con agua. La fase orgánica se secó 岫MgSOね岻 y se evaporó el solvente. El residuo se purificó por columna cromatográfica eluyendo con mezclas de hexano/EtOAc, の:な蝦に:な岫ねど mg, にひ%岻; 岷峅Dにど噺 −ぬは,ぱ岫c 噺な, CHClぬ岻; RMN‐なH 岫のどど MHz, CDClぬ岻: δ 噺ぱ,どひ−ば,にぱ岫H‐aromáticos岻, は,など岫dddd, なH, Jの’’,は’’a 噺ぬ,は, Jね’’,の’’ 噺ね,は, Jの’’,は’’b 噺ば,ぬ, Hz H‐の’’岻, の,ひの岫br s, なH, H‐な’’岻, の,ばぬ岫d, なH, Jぬ’’,ね’’ 噺ね,ば Hz, H‐ぬ’’岻, の,のぱ岫br s, なH, H‐に’’岻, の,ぬひ岫d, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね Hz, H‐ね’岻, の,にに岫t, なH, Jな’,に’ 噺 Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐に’岻, の,どば岫dd, なH, Jぬ’,ね’ 噺ぬ,ね, Jに’,ぬ’ 噺など,ど Hz, H‐ぬ’岻, ね,ぱは岫t, なH, Jぬ’’,ね’’ 噺 Jね’’,の’’ 噺ね,は Hz, H‐ね’’岻, ね,ぱに岫dd, なH, Jの’’,は’’a 噺ぬ,は, Jは’’a,は’’b 噺なに,な Hz, H‐は’’a岻, ね,ばぬ岫dd, なH, Jの’’,は’’b 噺ば,ぬ, Jは’’a,は’’b 噺なに,な Hz, H‐は’’b岻, ね,はぱ岫d, なH, Jな,に噺な,ぱ Hz, H‐な岻, ね,はぬ岫d, なH, Jな’,に’ 噺など,ど Hz, H‐な’岻, ね,ぬは岫dd, なH, Jね,の噺に,な, Jぬ,ね


244

噺ば,に Hz, H‐ね岻, ね,にに岫dd, なH, Jに,ぬ噺ね,ど, Jぬ,ね噺ば,に Hz, H‐ぬ岻, ね,など岫m, にH, H‐は’a, Hは’b岻, ね,どど岫dd, なH, Jな,に噺な,ぱ, Jに,ぬ噺ね,ど Hz, H‐に岻, ぬ,ひね岫t, なH, H‐の’岻, ぬ,ぬぬ岫dd, なH, Jの,はa 噺の,は, Jはa,はb 噺なぬ,ど Hz, H‐はa岻, ぬ,ぬな岫s, ぬH, CHぬO岻, ぬ,にば岫ddd, なH, Jね,の噺な,ひ, Jの,はa 噺の,は, Jの,はb 噺ぱ,ぬ Hz, H‐の岻, ぬ,なひ岫dd, なH, Jの,はb 噺ぱ,ぬ, Jはa,はb 噺なぬ,ど Hz, H‐はb岻, に,どひ, な,ひひ, な,ひは, な,ひに岫ねs, なにH, CHぬCO岻, ど,ぱの, ど,ぱね岫にs, なぱH, 岫CHぬ岻ぬCSiMeに岻, ど,どひ, ど,どば岫に岻, ど,どは岫ねs, なにH, 岫CHぬ岻にSiBut岻; RMN‐なぬC 岫なにの,ば MHz, CDClぬ岻: δ 噺なばど,に岫に岻, なはひ,ひ, なはひ,の岫MeCO岻, なはは,ど, なはの,は, なはの,ね, なはの,に岫PhCO岻, なぬぬ,の−なにぱ,ぬ岫C‐aromáticos岻, などぱ,ひ岫C‐な岻, ぱぱ,に岫C‐な’’岻, ぱね,ね岫C‐に岻, ぱぬ,ぬ岫C‐な’岻, ぱぬ,な岫C‐に’’岻, ぱに,ね岫C‐ね岻, ぱな,ひ岫C‐ね’’岻, ぱど,な岫C‐ぬ岻, ばば,ば岫C‐ぬ’’岻, ばね,に岫C‐の’岻, ばな,ぱ岫C‐ぬ’岻, ばど,ね岫C‐の’’岻, はば,の岫C‐に’岻, はば,な岫C‐ね’岻, はぬ,ば岫C‐は’’岻, はな,ど岫C‐は’岻, のの,な岫CHぬO岻, ねは,ぬ岫C‐の岻, ぬぬ,な岫C‐は岻, にの,ぱ, にの,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, にど,は岫ぬ岻, にど,の岫CHぬCO岻, なば,ぱ, なば,ば岷岫CHぬ岻ぬCSiMeに峅, ね,に, ‐ね,ぬ, ‐ね,の, ‐ね,ひ岷岫CHぬ岻にSiBut峅. Análisis calculado para CはばHぱはOににSにSiに: C, のひ,どな; H, は,ぬは. Encontrado: C, のぱ,はぬ; H, の,ひは. HRMS m/z 岷M髪Na峅髪 calculado para CはばHぱはOににSにSiに髪Na: なぬぱの,ねねぱにひ; Encontrado: なぬぱの,ねねひばひ. ぱ.ば Ensayos de inhibición de la が‐D‐galactofuranosidasa Para evaluar la actividad enzimática de la exo が‐D‐galactofuranosidasa aislada a partir Penicillium fellutanum, se utilizó el ね‐nitrofenil‐が‐D‐galactofuranósico como sustrato y la D‐galactono‐な,ね‐lactona como inhibidor de referencia 岫ICのどど,どに mM岻.なぬ La reacción enzimática se llevó a cabo en presencia de los posibles inhibidores 岫ななね, ななの, ななは, なのぱ, なのひ, なはど, なはな y なはに岻 en concentraciones comprendidas entre ど,に y など mM, a pH ね,ど岫buffer acetato岻. La reacción enzimática comenzaba con el agregado de la enzima y luego de な,の h a ぬば °C, se agregó buffer carbonato 岫pH ひ岻 para detener la reacción. Se determinó la cantidad de ね‐nitrofenol liberado a partir del ね‐nitrofenil が‐D‐galactofuranósido, espectrofotométricamente 岫ねなど nm岻.

Bibliografía. Parte experimental.

245

Bibliografía. な. Gandolfi‐Donadío, L.; Gallo‐Rodriguez, C.; Lederkremer, R. M. Can. J. Chem. にどどは, ぱね, ねぱは–ねひな. に. D’Accorso, N. B.; Thiel, I. M. E.; Sch“ller, M. Carbohydr. Res. なひぱぬ, なにね, なばば–なぱね. ぬ. Lemieux, R. U. Tetra‐O‐acetyl‐ゎ‐D‐glucopyranosyl chloride. In Methods Carbohydr. Chem, Vol II, Academic Press, New York, なひはぬ, ににぬ. ね. Sherry, B. D.; Loy, R. N.; Toste, F. D. J. Am. Chem. Soc. にどどね, なには, ねのなど伐ねのなな. の. Martins Alho, M. A.; D’Accorso, N. B.; Thiel, I. M. E. J. Heterocycl. Chem. なひひは, ぬぬ, なぬぬひ伐なぬねぬ. は. Ibatullin, F. M.; Selivanov, S. I.; Shavva, A. G. Synthesis にどどな, ぬ, ねなひ–ねにに. Ibatullin, F. M.; Shabalin, K. A.; Jänis, J. V.; Selivanov, S. I. Tetrahedron Lett. にどどな, ねに, ねのはの–ねのはば. ば. Hamacher, K. Carbohydr. Res. なひぱね, なにぱ, にひな–にひの. Deferrari, J. O.; Gros, E. G.; Mastronardi, I. O. Carbohydr. Res. なひはば, ね, ねぬに–ねぬね. ぱ. Iriarte Capaccio, C. A. Tesis Doctoral, ╉Síntesis de dihidropiranonas ópticamente activas derivadas de hidratos de carbono. Su uso como dienófilos de cicloadiciones 岷ね髪に峅╊; Departamento de Química Orgánica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, にどどぬ. ひ. Bordoni, A.; Lima, C.; Mariño, K.; de Lederkremer, R. M.; Marino, C. Carbohydr. Res. にどどぱ, ぬねぬ, なぱはぬ–なぱはひ. など. Choudhury, A. K.; Roy, N. Carbohydr. Res. なひひぱ, ぬどぱ, にどば−になな. なな. Gandolfi‐Donadío, L.; Gallo‐Rodriguez, C.; de Lederkremer, R. M. J. Org. Chem. にどどぬ, はぱ, はひにぱ−はひぬの. なに. Ding, Y.; Contour‐Galcera, M‐O.; Ebel, J.; Ortiz‐Mellet,C.; Defaye, J. Eur. J. Org. Chem. なひひひ, ななねぬに−ななのに

Bibliografía. Parte experimental.

246

なぬ. Marino, C.; Mariño, K.; Miletti, L.; Manso Alves, M. J.; Colli, W.; Lederkremer, R. M. Glycobiology なひひぱ, ぱ, ひどな–ひどね.

Abreviaturas.

Abreviaturas. .

247

BzCl CCD DMF DMSO DTE DTT EtOAc FTBA J n‐BuOH pf PivCl ppm Rf RMN TBSCl TFA TfにO THF TMSBr TMSOTf TsCl

cloruro de benzoílo cromatografía en capa delgada dimetilformamida dimetilsulfóxido ditioeritritol ditiotreitol acetato de etilo fluoruro de tetra n‐butilamonio constante de acoplamiento escalar n‐butanol punto de fusión cloruro de pivaloílo partes por millón relación de frente resonancia magnética nuclear cloruro de ter‐butildimetilsililo ácido trifluoro acético anhídrido tríflico tetrahidrofurano bromuro de trimetilsililo triflato de trimetilsililo cloruro de tosilo

Resumen.

Resumen. .

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Resumen. Por tratarse de los componentes mayoritarios de la biomasa renovable, por sus propiedades bioquímicas destacables y por su utilidad síntesis de variadas moléculas, los hidratos de carbono han despertado un inusitado interés en la comunidad científica. Es conocido que cambios estructurales relativamente menores en un azúcar resultan en alteraciones importantes en su comportamiento químico y propiedades biológicas. Así, en el área de la glicobiología, se han desarrollado análogos de oligosacáridos en los cuales el oxígeno interglicosídico se ha sustituido por azufre u otros heteroátomos. Los glicomiméticos resultantes son usualmente resistentes a los procesos metabólicos y suelen ser reconocidos por enzimas, con las cuales interactúan e inhiben su actividad biológica. En particular, numerosos tiooligosacáridos han sido descriptos como potentes inhibidores de glicosidasas. Por estos motivos la síntesis de tiooligosacáridos ha atraído considerable atención. Dada la importancia de los tiooligosacáridos como inhibidores enzimáticos y que prácticamente no se encuentran ejemplos de tiodisacáridos y tiooligosacáridos de azúcares furanósicos se planteó como objetivo general de esta tesis el diseño y síntesis de tiodisacáridos constituidos por al menos una unidad furanósica 岫pentofuranosa o hexofuranosa岻 para ser evaluados como posibles inhibidores enzimáticos. El interés en tiomiméticos de azúcares en configuración furanósica reside en que las furanosas se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza y que presentan variadas propiedades bioquímicas. Por ejemplo, la arabinofuranosa se encuentra en bacterias del suelo, hongos y plantas y tanto la arabinosa como la galactosa son constituyentes, en configuración furanósica, de polisacáridos de micobacterias como el Mycobacterium tuberculosis, agente causante de la tuberculosis. La Galf es esencial para la sobrevida o virulencia de varios microorganismos patogénicos, pero por el momento no se ha encontrado en mamíferos, lo cual constituye un hecho destacable. La degradación de los glicoconjugados que contienen Galf en algunos microorganismos es resultado de la acción de una が‐D‐galactofuranosidasa, la cual es un blanco adecuado para la

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acción de inhibidores de la misma. Se presume que la inhibición de las enzimas involucradas en la biosíntesis o degradación de dichos polifuranósidos evitaría la proliferación de las micobacterias, protozoarios u hongos. Además, estos inhibidores serían inocuos para los mamíferos, ya que éstos no procesan Galf. Por las razones enunciadas precedentemente, en este trabajo de Tesis se desarrollaron metodologías generales de síntesis de tiooligosacáridos que poseen como constituyentes azúcares en configuración furanósica, en particular Galf y Araf. Como resultado de estas investigaciones, se han obtenido tiodisacáridos con unidades furanósicas localizadas tanto en el extremo reductor como el no reductor. También se presenta una síntesis satisfactoria de un tiodisacárido constituido exclusivamente por dos azúcares furanósicos. Asimismo, se ha descrito una nueva metodología, basada en la apertura de tiiranos de azúcares por una な‐tioaldosa, para la construcción de ditiotrisacáridos con unidades furanósicas. La introducción de este trabajo de tesis comprende dos capítulos, en el primero de los cuales se reseñan la glicobiología de azúcares furanósicos y las características conformacionales de este tipo de anillos, destacándose la presencia de Galf en oligosacáridos de microorganismos, muchos de ellos patogénicos. Se describe también el uso de glicomiméticos como inhibidores de enzimas que participan en el metabolismo de azúcares furanósicos. En el segundo capítulo introductorio se presentan sucintamente las reacciones clave para la construcción de enlaces tioglicosídicos, que se emplean en las distintas aproximaciones sintéticas de tiooligosacáridos. Se detallan, asimismo, los escasos ejemplos en los cuales dichas metodologías han sido empleadas para obtener tiodisacáridos con un componente furanósico. Para las reacciones más relacionadas con el presente trabajo, se detallan los mecanismos aceptados. En el capítulo ぬ se describen los objetivos generales y específicos de la Tesis, haciéndose hincapié en cual era nuestro interés por obtener particularmente determinados tiooligosacáridos de azúcares furanósicos.

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El capítulo cuarto se refiere a la metodología basada en la reacción de Michael para preparar tiodisacáridos. Se comienza con una breve introducción del uso de esta reacción para la síntesis de tiodisacáridos de azúcares piranósicos, incluyendo los antecedentes de esta temática en nuestro laboratorio. Se detallan luego los avances realizados en el marco de la Tesis, en reacciones en las cuales se emplea como aceptor de Michael una enona de azúcar y como donores de tioglicosilo derivados furanósicos convenientemente sustituídos de Araf, Ribof, Xilof y Galf. Se estableció que los procedimientos que resultan adecuados para obtener な‐tiopiranosas no eran adecuados para las な‐tiofuranosas. Esta seria dificultad se superó utilizando glicofuranosil isotioureas estables como precursores de な‐tiofuranosas. Estas últimas, generadas in situ, fueron atrapadas por la enona para dar glicofuranosil‐S‐岫な蝦ね岻‐hexopiranos‐に‐ulósidos. El carbonilo de la ulosa se redujo diasteroselectivamente y los productos resultantes 岫ぬ‐desoxi‐岫な蝦ね岻‐tiodisacáridos岻 poseían una unidad furanósica como extremo no reductor. Luego de la desprotección de los grupos hidroxilo, los tidodisacáridos libres se evaluaron como inhibidores de la が‐galactofuranosidasa de Penicillium fellutanum. En el capítulo の se detallan los estudios de síntesis de 岫な蝦は岻‐tiodisacáridos con una unidad furanósica como extremo no reductor, análogos de disacáridos naturales encontrados en una gran variedad de microorganismos. Se verificó la utilidad del SnClね y del MoOにClに como promotores de reacciones de tioglicosilación en derivados convenientes de は‐tioazúcares, que se sintetizaron para estos efectos. Los 岫な蝦は岻‐tiodisacáridos libres, con unidades de Galf o Araf , se analizaron como inhibidores de la が‐galactofuranosidasa de P. fellutanum. En el capítulo は se describen los resultados de la aplicación de reacciones de sustitución SNに de な‐tioaldosas nucleofílicas sobre derivados de Galf portadores de buenos grupos salientes. Estos compuestos se sintetizaron mediante metodologías adecuadas. Los procedimientos desarrollados produjeron ditiodisacáridos con una unidad Galf como extremo reductor. También se estudiaron reacciones de la は‐tioGalf sobre el centro anomérico de otra unidad de Galf activado para la tioglicosidación. En este sentido, es de destacar que cuando el C‐な de la Galf se

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activó como tricloroacetimidato fue posible el acoplamiento con la は‐tioGalf para dar, por primera vez, un tiodisacárido constituido por dos unidades furanósicas, un tioanálogo de estructuras encontradas en diversos microorganismos. En el último capítulo de discusión, el capítulo ば, se diseñó y ejecutó una nueva metodología para formación del enlace tioglicosídico mediante la apertura de un tiirano de azúcar 岫un の,は‐episulfuro de Galf y Altf岻. Interesantemente, el producto de apertura deja un grupo tiol libre sobre el C‐の de Galf, que se demostró puede dar lugar, aunque con cierta dificultad estérica, a la incorporación de otra unidad de Galf, obteniéndose así un ditiotrisacárido ramificado. Uno de los productos obtenidos contiene la unidad Galf‐S‐岫な蝦の岻‐Galf cuyo análogo oxigenado es componente de glicoconjugados de microorganismos. Estos resultados alentadores incentivan la profundización de estos estudios en el futuro. En el capítulo ぱ se detallan los métodos experimentales utilizados. Parte de este trabajo de Tesis dio lugar a las siguientes publicaciones: ╉Synthesis of に,ぬ,ね,は‐Tetra‐O‐Acetyl‐な,の‐Anhidro‐D‐lyxo‐Hex‐な‐enitol and its Conversion into Benzyl ぬ,ね‐Dideoxy‐ゎ‐D‐glycero‐Hex‐ぬ‐enopyranosid‐に‐ulose.╊ Verónica Manzano, Evangelina Repetto, Maria Laura Uhrig, Markus Baráth, Oscar Varela. Carbohydrate Chemistry: Proven Methods. En prensa, にどなど. ╉Thiodisaccharides with galactofuranose or arabinofuranose as terminal units: Synthesis and inhibitory activity of an exo が‐D‐galactofuranosidase.╊ Evangelina Repetto, Carla Marino, Maria Laura Uhrig, Oscar Varela. Bioorganic & Medicinal Chemistry にどどひ,なば, にばどぬ−にばなな. ╉Two Straightforward Strategies for the Synthesis of Thiodisaccharides with a Furanose Unit as the Nonreducing End.╊ Evangelina Repetto, Carla Marino, Maria Laura Uhrig, Oscar Varela. European Journal of Organic Chemistry にどどぱ, ぬ, のねど−のねば.

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Índice. INTRODUCCIÓN Capítulo なな Glicobiología de azúcares furanósicos. な Glicomiméticos. なな Capítulo になの Síntesis de tiooligosacáridos. なの Adiciones de Michael o tipo Michael de tioles de azúcares a aceptores insaturados. なば Desplazamiento nucleofílico de buenos grupos salientes por parte de azúcares que contienen un sustituyente tiol. なひ Apertura de anillos de aziridinas y oxiranos por tioazúcares. にな Acoplamientos de tioazúcares catalizados por enzimas. にの Capítulo ぬにひ Objetivos de la Tesis. にひ Bibliografía. ぬな RESULTADOS Y DISCUSIÓN Capítulo ね. Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada ぬひ Introducción. ぬひ Tiodisacáridos con unidades furanósicas en el extremo no reductor. ねに Reducción de tiodisacáridos. はど Obtención de tiodisacáridos libres. ばの Evaluación de la actividad inhibitoria. ばひ Bibliografía. ぱな

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Capítulo の. Síntesis de 岫な蝦は岻 tiodisacáridos mediante reacciones de transtioglicosilación ぱぬ Introducción. ぱぬ Tiodisacáridos con unidades furanósicas en el extremo no reductor. Tioglicosilaciones promovidas por SnClね. ぱぱ Tioglicosilaciones promovidas por MoOにClに. ひの Obtención de tiodisacáridos libres. などね Evaluación de la actividad inhibitoria. ななぬ Bibliografía. ななの Capítulo は. Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución Nucleofílica ななば Introducción. ななば Reacciones SNに a partir de monosacáridos con grupo saliente tosilo ó triflato ななぱ Activación del centro anomérico de la Galf como halogenuro de glicosilo. なぬひ Activación del centro anomérico de la Galf como tricloroacetimidato なねな Bibliografía. なねひ Capítulo ば. Reacciones de apertura de tiiranos de azúcares por una な‐tioaldosa なのな Bibliografía. なばば EXPERIMENTAL Capítulo ぱ. Parte experimental なばひ Instrumentos y métodos generales. なばひ Purificación de solventes. なばひ Síntesis. なぱど Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de adición conjugada. なぱど Síntesis de 岫な蝦は岻 tiodisacáridos mediante reacciones de transtioglicosilación. なひの

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Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de sustitución nucleofílica. になね Síntesis de tiodisacáridos mediante reacciones de apertura de tiiranos de azúcares. ににぱ Ensayos de inhibición de la が‐D‐galactofuranosidasa にねね Bibliografía. にねの APÉNDICE Abreviaturas にねば Resumen にねひ

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