Biotecnologia FlorestalMicropropagao In Vitro

O que Biotecnologia Florestal? A aplicao da engenharia gentica em espcies florestais os protocolos mais frequentes so os que visam primacialmente de obter plantas tolerantes aos herbicidas, resistncia aos insetos, modificao da lenhina e marcadores genticos.O que a propagao In Vitro? Nessa tcnica pequenos fragmentos de tecido vivo, chamados explantes, so isolados de um organismo vegetal desinfestado e cultivado assepticamente, por perodos indefinidos em um meio de cultura apropriado. Qual o objetivo da propagao In Vitro? obter nova planta idntica original, ou seja, realizar uma clonagem vegetal que definida como uma propagao assexuada de clulas ou organismos de modo a obter indivduos, mantendo-se o gentipo idntico quele ancestral comum.O que o explante? Todo segmento de tecido ou rgo vegetal utilizado para iniciar uma cultura In Vitro. Pode ser um fragmento de folha, raiz, de caule ou de qualquer tecido que responda as condies de meio de cultura.Quais os fatores que afetam a Micropropagao In Vitro? O gentipo (qual espcie, cultivar ou variedade que esta sendo utilizada); a fonte de explante (folha, raiz, caule, meristema etc.); condio da cultura (meio de cultura, luz, temperatura, vasilhame). O sucesso da iniciao e da regenerao da cultura In Vitro depende da deciso correta no estabelecimento de todos esses fatores. Quais so as fases da Micropropagao In Vitro? Fase 01- Seleo: Prestar ateno especial da planta do qual sero retirados os explantes. As plantas matrizes ser previamente tratadas com hormnios desinfetantes, fazer testes de viroses, todo em vista ao xito da cultura In Vitro. Fase 02- Inoculao (Estabelecimento da Cultura): Seleo de explante, desinfeco de explante, meio de cultura, condies ambientais como luz, umidade etc. Fase 03- Multiplicao: O objetivo desta fase a multiplicao propriamente dita dos rgos e estruturas que so capazes de dar origem a uma planta completa. Fase 04- Enraizamento: As plntulas derivadas da fase 02, so muito pequenas e incompletas, no sendo possvel a sua transferncia direta para o solo, nesta fase, so seguidos procedimentos para que estas plantas desenvolvam sua capacidade fotossinttica e sejam capazes de sobreviver a condies naturais. Obs.( Auxinas reguladoras de crescimento usadas para induzir o enraizamento). Fase 05- Aclimatao: O objetivo desta fase de otimizar a transferncia das plantas de condies de campo ou estufa.

Quais as vantagens e desvantagens da Micropropagao In Vitro? Produz plantas livres de doenas; Produz plntulas enraizadas prontas para a plantao e crescimento, o que melhor do que o recurso a sementes e a estacas; Possui uma fecundidade extremamente elevada, pelo que se obtm milhares de plantas enquanto que atravs das tcnicas convencionais se obtm apenas dezenas de plantas no mesmo perodo de tempo; um bom mtodo de multiplicar plantas que no produzam sementes ou que apenas produzam em quantidades pouco lucrativas; A micropropagao produz plantas mais resistentes, com um crescimento mais rpido do que as plantas produzidas atravs de mtodos convencionais.Desvantagens? A propagao massiva no pode ser aplicada atualmente em todas as espcies vegetais, podem no ter um crescimento uniforme e em lugar disso ter diferentes taxas de crescimento e maturao in vitro.

HormniosAuxinas: Crescimento do caule e da raiz - ocorre atravs do processo de alongamento das clulas vegetais. Quando a planta apresenta baixa quantidade de auxinas, suas razes podem crescer, porm o caule no se desenvolve. J a alta concentrao de auxinas pode provocar o crescimento do caule, deixando as razes pouco desenvolvidas.Citocininas: So os hormnios vegetais fabricados nas razes e transportados para todo o corpo do vegetal. Atua na diferenciao e diviso das clulas vegetais, desenvolvimento das razes e das gemas laterais. Estes hormnios tambm so importantes para atrasar o envelhecimento do vegetal.

Giberelinas: So fabricadas nos meristemas, folhas novas e frutos das plantas. A funo destes hormnios estimular o alongamento e diviso da clula vegetal. Agem tambm na produo de flores, desenvolvimento das folhas e germinao das sementes.

Etileno: Este fitormnio um gs fabricado em diversas partes da planta. Atua no amadurecimento dos frutos e no processo de perdas das folhas dos vegetais.

cido Abscsico: Hormnio fabricado pelas folhas, caule e pice radicular das plantas. muito importante para o desenvolvimento do caule. responsvel tambm pela inibio da germinao de sementes. Em casos de estresse hdrico (falta de gua), este hormnio realiza vrios processos na planta fazendo com que esta possa diminuir a perda de gua, mantendo assim a hidratao necessria para sua sobrevivncia.

Prticas Laboratrio

Equipamentos Utilizados: Pinas, porta-ch, papel alumnio, placas de Petri, Becker, Pipeta, Potes, Bisturis, agua destilada, meio de cultura, gar, sacarose e hormnios, agitador magntico, phmetro. Todos os aparatos (vidrarias, pinas, bisturis, porta-ch) so embrulhados com papel alumnio para a esterilizao no autoclave. A agua colocada em vidrarias e tambm esterilizada em autoclave.

O meio deve ser dissolvido no agitador magntico e durante esse processo o pH medido com o pHmetro e corrigido at 5, 8 com a base NAOH. Depois que o meio j foi dissolvido e corrigido no agitador adicionado a sacarose, o gar e o hormnio BAP uma citocinina que tem a funo de tirar a dominncia apical e fazer crescer os ramos laterais.

Clculos:

Soluo fungicida: 0,1 g______100 ml Meio de Cultura: 1 L______4,43g X _______ 300 ml 2 L______ x X= 0,3 g x= 8,86 g

Sacarose: gar: 30 g _____ 1 L 7 g _____ 1 L X ______ 2 L x ______ 2 LX= 60 g x= 14g

BAP x = 0,05 mililitro 100 ml C1. V1 = C2. V2 20.000. X = 1 mg. 1000X= 1 mg. 1000 20.000 mg

Desinfeco de Sementes

Seleo e desinfeco do material vegetal; cmara de fluxo- Lmpada UV

01- lcool 96% 36 segundos (agitando)02- Hipoclorito (peroxido de hidrognio) agitando 15 minutos03- Dois Beckers com gua destilada, agitando 5 minutos cada04- Um Becker com fungicida, agitando 5 min05- Um Becker com gua destilada, agitando 5 min.

O que influencia a proliferao de microrganismos na Micropropagao In Vitro? Tempo, concentrao e explante.