Resultados/Discussão
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Resultados/DiscussãoA expressão recombinante mostrou uma banda intensa de ~25 kDa, sendo a purificação em condições híbridas mais eficiente que em condições nativas.
A liberação de b-hexosaminidase é tempo e concentração depentente, indicando que a LiRecTCTP age como um fator de liberação de histamina.LiRecTCTP não induz o influxo de cálcio intracelular podendo isso indicar que a degranulação seja independente de IgE.
Caracterização de um fator de liberação de histamina do veneno de aranha-marrom (Loxosceles intermedia)Lucas Pedrosa da Silva - Bolsista PIBIC Fundação AraucáriaOrientadores : Silvio Sanches Veiga, Olga Meiri Chaim, Marianna Bóia Ferreira.
ConclusõesAo fim dos experimentos, concluímos que a proteína da família das TCTP’s contida no veneno da Loxoscelis intermedia é um fator liberador de histamina (HRF), porém o seu mecanismo de liberação ainda é pouco entendido, tornando interessante o avanço no estudo sobre essa toxina.
Introdução / Objetivos Aranhas do gênero Loxosceles (aranhas-marrons) produzem veneno composto por diversas toxinas, responsáveis pelo envenenamento conhecido como loxoscelismo. Uma proteína da família TCTP foi identificada nesta mistura, e seu papel ainda não está bem esclarecido, porém na literatura há trabalhos que descrevem seu papel biológico em outros organismos, como um fator liberador de histamina (HRF), sendo assim o objetivo deste trabalho e a caracterização biológica de um possível fator de liberação de histamina da família TCTP obtido a partir de biblioteca de cDNA da glândula de veneno de aranha-marrom (Loxosceles intermedia).
Método - Expressão foi realizada em cepa BL21 DR PlysS por 4 horas a 23 ºC, com indutor 0,01mM IPTG e a purificação se deu em condições híbridas.- A expressão foi analisada em SDS-PAGE e em Western Blotting.- Cultivo Celular RBL-2H3- Dosagem de b-hexosamina.- Ensaio de influxo de cálcio.
Referencias:MEKORI,Y.A.; METCALFE,D.D. Mast cells in innate immunity. Immunological reviews, v.173, p. 131-140, 2000.