15/09/2016

1

Renata Rodrigues Cocco

Universidade Federal de São Paulo

PROAL – 2004 J Pediatr (Rio J). 2004;80(3):203-10

15/09/2016

2

PROAL 2004

Desenho do estudo: IgE total /específica para alérgenos inalatórios e alimentares (RAST, UniCAP®,Pharmacia) : 457 crianças (1-12 anos) acompanhadas em serviços de Alergia Pediátrica nas 5 regiões brasileiras + 62 controles pareados. <2 anos = 19,4%; 2 - 3a = 20,9%; 3 - 4a = 14,5%; 4 - 5a = 21,0% ; 5 - 12a = 24,2%.

4 grupos • Lactentes sibilantes (n = 20) ~5% • Alergia Alimentar (n = 16) ~4% • Dermatite atópica (n = 56) ~15% • Alergias respiratórias (n =348) ~76%

Alérgenos avaliados Inalatórios: D. pteronyssinus, D. farinae, Blomia tropicalis, epitélio de cão, epitélio de gato, epitélio de cavalo, epitélio de vaca, fungos, polens (gramíneas) e barata. Alimentares: leite de vaca, ovo, amendoim, trigo, painel de peixes/frutos do mar. Valores >0,35 kU/L: positivos

J Pediatr (Rio J). 2004;80(3):203-10

IgE específica + para inalantes e/ou alimentos: 361/457 (79%) dos pacientes e 16/62 (25,8%) controles

PROAL 2004

Distribuição dos pacientes de acordo com a positividade do teste aos diferentes alérgenos

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3

IgE específica + para inalantes e/ou alimentos: 361/457 (79%) dos pacientes e 16/62 (25,8%) controles

PROAL 2004

Distribuição dos pacientes de acordo com a positividade do teste aos diferentes alérgenos

PROAL 2004

Pacientes com testes positivos de acordo com o grupo de doença à qual pertencem

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2004

2014

Avanço da Biologia Molecular

- Melhor conhecimento das proteínas alergênicas

- Melhor acurácia no diagnóstico

- Aumento no número de proteínas identificadas, clonadas e disponíveis para análise laboratorial (detecção IgE específica).

- Componentes para diagnóstico (CRD): prognóstico, risco de reações cruzadas, marcadores de reações clínicas, história natural da doença, refinamento de imunoterapias.

2004 – 2014:

- Alteração no padrão de sensibilização da população brasileira?

- Análise da sensibilização aos componentes atualmente disponíveis.

- O padrão de sensibilização varia de acordo com a doença alérgica avaliada?

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“Sensibilização a alérgenos inalantes e alimentares em crianças brasileiras atópicas pela mensuração in vitro de IgE específica– proteínas totais e componentes – Projeto Alergia (PROAL) II” Renata Rodrigues Cocco Carolina Aranda Dirceu Solé Disciplina de Alergia, Imunologia Clínica e Reumatologia – Departamento de Pediatria da Escola Paulista de Medicina - Universidade Federal de São Paulo.

Objetivos: 1. Caracterizar o padrão de sensibilização de pacientes atópicos

acompanhados em diferentes serviços de alergia no Brasil, incluindo a análise dos principais componentes proteicos (CRD).

2. Comparar os dados atuais com os obtidos em 2004 (PROAL I).

3. Avaliar a relação de proteínas totais e seus respectivos componentes.

4. Comparar o método convencional de mensuração de IgE específica (ImmunoCAP®) com a tecnologia do microarray (ImmunoCAP ISAC®).

5. Avaliar a relação entre os resultados de Phadiatop (USA, EU, infant) e a IgE total.

PROAL II – 2014/2016

Métodos: - 500 crianças e adolescentes provenientes de 11 serviços de alergia em diferentes

regiões do país (cerca de 40 pacientes/centro), com idade entre 6 meses e 18 anos: 400 doentes + 100 controles não alérgicos, pareados por gênero e idade.

Critérios de inclusão: - Pacientes atendidos em serviços especializados em alergia de diferentes regiões do país e que tenham como diagnóstico: lactente sibilante, dermatite atópica, asma e/ou rinite alérgica e alergia alimentar, alocados de modo a constituírem grupos homogêneos quanto ao número. Os pacientes e/ou seus familiares foram submetidos a um questionário e a coleta de sangue periférico para análise: 1. Mensuração de IgE total. 2. Mensuração de Phadiatop (EU, USA, infant). 3. Avaliação de IgE específica de 23 fontes alergênicas. 4. Na dependência da positividade das proteínas totais, os respectivos componentes. 5. Mensuração individual do ISAC para avaliação da eficácia clínica.

PROAL II – 2014/2016

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PROAL II - 2016

Centros participantes: 1. Coordenação: UNIFESP Dr. Dirceu Solé Dra Carolina Aranda Dra Renata R. Cocco 2. Instituto da Criança/USP Dr. Antonio Carlos Pastorino 3. Universidade Federal de Passo Fundo Dr. Arnaldo Porto 4. UFRJ Dra. Ekaterini Goudouris 5. UFPE Dr. Emanuel Sarinho 6. Hospital Nipo-Brasileiro/SP Dr. Flávio Sano 7. UFSE Dra Jackeline Motta Franco

8. Clínica de Alergia de Goiânia Dra. Letícia Chavarria 9. UFMT Dra Lillian Moraes 10. UFPR Dr. Nelson Rosário 11. FMABC Dra Neusa Wandalsen Dra Márcia Mallozi

Passo 1: Submissão do projeto ao comitê de ética (CEP) respectivo de cada centro

Passo 2: Seleção dos pacientes e assinatura do termo de consentimento:

Passo 3: Preenchimento da ficha clínica

Passo 4: Coleta de sangue.

Passo 5: Após a finalização das coletas – envio das fichas clínicas + soros (UNIFESP)

PROAL II - 2016

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1. D. pteronyssinus (d1)

2. D. farinae (d2)

3. B. tropicalis (d201)

4. Mix castanhas: pecan, castanha de

caju, pistache, nozes (fx22)

5. P. americana (i206)

6. Epitélio de gato (e1)

7. Epitélio de cavalo (e3)

8. Epitélio de vaca (e4)

9. Epitélio de cão (e5)

10. Mix de gramíneas (gx2)

11. Mix de polens (wx1)

12. Mix de fungos (mx1)

13. Mix de pólens de árvores (tx3)

14. Ascaris lumbricoides (p1)

15. Clara de ovo (f1)

16. Leite de vaca (f2)

17. Peixe (f3)

18. Trigo (f4)

19. Milho (f8)

20. Amendoim (f13)

21. Soja (f14)

22. Camarão (f24)

23. Castanha de caju (f202)

PROAL II - 2016

PROTEÍNAS TOTAIS AVALIADAS

inalantes alimentos parasita

1. f424 rGad c 1 Parvalbumina (peixe)

2. f416 rTri a 19 Omega-5 Gliadina (trigo)

3. f433 rTri a 14 nLTP (trigo)

4. f98 Gliadina (trigo)

5. f422 Ara h 1 (amendoim)

6. f423 Ara h 2 (amendoim)

7. f424 Ara h 3 (amendoim)

8. f352 Ara h 8 PR-10 (amendoim)

9. f427 Ara h 9 nLTP (amendoim)

10. f353 rGlym4 PR-10 (soja)

11. f431 rGly m 5 Beta-conglicinina (soja)

12. f432 rGly m 6 Glicinina (soja)

13. f233 nGal d 1 Ovomucoide (ovo)

14. f232 nGal d 2 Ovalbumina (ovo)

15. f323 nGal d 3 Conalbumina (ovo)

16. f76 nBos d 4 Alfa-lactalbumina (leite)

17. f77 nBos d 5 Beta-lactoglobulina (leite)

18. f78 nBos d 8 Caseina (leite)

19. e204 nBos d 5 albumina sérica bovina

(leite/epitélio de animais)

20. d202 Der p 1 (ácaro)

21. d203 rDerp 2 (ácaro)

22. d205 Der p 10 Tropomiosina (ácaro)

23. rPen a 1 Tropomiosina (camarão)

PROAL II - 2016

COMPONENTES AVALIADOS MEDIANTE POSITIVIDADE DA FONTE ALERGÊNICA

inalantes alimentos

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PROAL I vs II: semelhanças e diferenças

PROAL I PROAL II

Faixa etária 6m-12 anos 6m-18 anos

Distinção fenótipos Predominância alergias respiratórias (~76%)

Divisão homogênea (asma/rinite, lactente sibilante, DA, AA)

Alérgenos completos avaliados

10 aeroalérgenos, 5 alimentos

12 aeroalérgenos, 10 alimentos, 1 parasita

Componentes (CRD) avaliados

Nenhum 23

Centros brasileiros envolvidos

13 11

Valor de referência IgE específica (kU/L)

0,35 0,1

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1. Aplicação ficha clínica

- 120 questionários: 1-18 anos de idade

• Média de idade do início dos sintomas: 7,8 meses

• Média de idade na data da avaliação: 56,5 meses (4,7 anos)

• Prevalência dos alérgenos alimentares mais referidos:

1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados

Aceito para apresentação no Food Allergy and Anaphylaxis Meeting, Roma, out/2016

leite

ovo

trigo

soja

amendoim

frutos do mar

86%

2,5%

2,5%

3,3%

4,1%

32%

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10

1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados

AA única 72%

AA múltipla 28%

Número de alérgenos alimentares referidos

44

29

22,5

2,5 1,7 05

101520253035404550

Sintomas referidos

Aceito para apresentação no Food Allergy and Anaphylaxis Meeting, Roma, out/2016

leve 33%

moderada 29%

grave 38%

Gravidade dos sintomas

(17% com hospitalizações decorrentes da AA)

1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados (todos os grupos)

História familiar alergia

73,1%

26,9%

47,3% 52,7%

92,5%

7,5%

91,4%

8,6%

Não Sim Não Sim Não Sim Não Sim

Asma Rinite AA DA

47.5% : asma e/ou RA.

TPO para diagnóstico

0,0%

10,0%

20,0%

30,0%

40,0%

50,0%

60,0%

70,0%

80,0%

Nãorealizou

Realizou Negativo Positivo

TPO Resultado TPO

36%

64% 72,7%

27,3%

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11

76,3%

23,7%

77,4%

22,6%

93,5%

6,5%

0,0% 20,0% 40,0% 60,0% 80,0% 100,0%

1

Tabagismo gestacional

Tabagismo

Tabagismo passivo

Não

Não

Não

89,2%

10,8%

0,0%

10,0%

20,0%

30,0%

40,0%

50,0%

60,0%

70,0%

80,0%

90,0%

100,0%

Não Sim

Prematuridade

93,4%

6,6%

68,1%

31,9%

Não

Sim

Não

Sim

Presença de animais domésticos

Não

Não Gato

Cão

1. Ficha clínica: avaliação parcial dos resultados (todos os grupos)

Aceito para apresentação no Food Allergy and Anaphylaxis Meeting, Roma, out/2016

Histórico Familiar de asma 100,0%

Não 73,1% Sim 26,9%

Histórico Familiar de rinite 100,0%

Não 47,3% Sim 52,7%

Histórico Familiar de DA 100,0%

Não 92,5% Sim 7,5%

Histórico Familiar de AA 100,0%

Não 91,4% Sim 8,6%

Tabagismo 100,0% Não 76,3% Sim 23,7%

Tabagismo passivo 100,0% Não 77,4% Sim 22,6%

Tabagismo gestacional 100,0% Não 93,5% Sim 6,5%

Animais 100,0% Não 64,5% Sim 35,5%

Gato 100,0% Não 93,4% Sim 6,6%

Cão 100,0% Não 68,1% Sim 31,9%

Outro 100,0% Não 98,9% Sim 1,1%

Prematuridade 100,0% Não 89,2% Sim 10,8%

- Fatores de risco associados: • História familiar de RA (OR=4.1; 95%CI=1.41-4.5),

• História familiar de asma (OR=2.5; 95%CI=1.5-3.7)

• Tabagismo (OR=1.4; 95%=1.1-2.0).

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2. Subdivisão em 4 grupos + 100 controles

- Lactente sibilante

- Asma/rinite alérgica

- Dermatite atópica

- Alergia Alimentar: 92 pacientes – perfil:

Média DP Mínimo Máximo 1° Quartil Mediana 3° Quartil N Média (IC95%)

Idade atual (meses) 54,48 (4,5a)

42,76 6,00 204,00 (17a)

24,00 (2a)

36,00 (3a)

84,00 (7a)

92 54,48 (45,62 - 63,33)

Idade de início (meses) 6,66 5,34 1,00 24,00 4,00 5,00 7,00 92 6,66 (5,56 - 7,77)

N %

Gênero 92 100,0

Feminino 44 47,8

Masculino 48 52,2

Classificação da doença principal

92 100,0

Leve 25 27,2

Moderada 37 40,2

Grave 30 32,6

GêneroClassificação da doença principal

Chi-Square ,174a 2,370b

df 1 2

Asymp. Sig. ,677 ,306

18,5%

35,9%

41,3%

43,5%

43,5%

45,7%

56,5%

70,7%

83,7%

peixe

castanha caju

camarão

milho

soja

amendoim

trigo

clara de ovo

leite

Prevalência alérgenos alimentares

RESULTADOS PRELIMINARES PROAL II - 2016

15/09/2016

13

29,3%

30,4%

37,0%

38,0%

44,6%

52,7%

54,3%

67,4%

70,7%

72,5%

81,5%

cavalo

fungo mix

barata de esgoto

gramíneas

ascaris

gato

Blomia tropicalis

cão

D fariane

D pteronyssinus

vaca

Prevalência outros alérgenos

RESULTADOS PRELIMINARES PROAL II - 2016

0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00

fungo mix

castanha caju

soja

barata de esgoto

cavalo

peixe

milho

amendoim

ascaris

gramíneas

trigo

camarão

cão

gato

clara de ovo

vaca

Blomia tropicalis

leite

D fariane

D pteronyssinus

0,19

0,67

0,88

0,99

1,05

1,07

1,20

1,60

1,89

2,04

2,81

3,11

3,49

3,98

6,02

6,38

12,12

17,89

20,13

28,46

MÉDIAS DOS VALORES SÉRICOS DE IgE ESPECÍFICA (kU/L)

15/09/2016

14

62,50

50,00

43,80

18,00

12,50

6,30

62,50

6,30

6,30

6,30

18,80

50,00

68,80

31,30

12,50

18,80

12,50

72,7

70,7

54,3

37

52,7

38

81,5

67,4

29,3

30,4

18,5

70,7

83,7

56,5

45,7

43,5

43,5

D.pt

Df

Blomia

Barata

Gato

Gramíneas

Vaca

cão

cavalo

fungos

peixe

ovo

leite

trigo

amendoim

soja

milho

PROAL I vs PROAL II: sensibilização do grupo com alergia alimentar

RESULTADOS PRELIMINARES PROAL II – 2016

ISAC

trop. camarão Barata trop. ácaro Ovoalbumina ASB Βlac Caseína αlac Camarão (AQ) Anisakis Ácaro Blomia D. farinae D. farinae D. pteronyss. D. pteronyss.

trop. camarão Barata

trop. ácaro Ovoalbumina

ASB Βlac

Caseína αlac

Camarão (AQ) Anisakis

Ácaro Blomia

D. farinae D. farinae

D. pteronyss. D. pteronyss.

(n=93) (n=123)

15/09/2016

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• Análise dos componentes: • Presença de marcadores de reatividade clínica (ex, Ara h 1,2,3; ω-5

gliadina, ovomucoide);

• Identificação da sensibilização a albumina sérica bovina ImmunoCAP (reatividade cruzada leite e epitélio de vaca?)

• Perfil brasileiro de sensibilização aos componentes proteicos (ImmunoCAP/ISAC).

• Avaliação do perfil de sensibilização de cada um dos grupos, comparação entre si e com o grupo controle.

• Identificação de possíveis marcadores de sensibilização

• lactente sibilante: asma? DA? AA?

...Girassol 2017, 2018, 2019, 2020.....................................................

PROAL II – A SEGUIR...........

AGRADECIMENTOS

Dr. Dirceu Solé Dra Carolina Aranda Felipe Pierotti

15/09/2016

16

AGRADECIMENTOS

Dr. Dirceu Solé Dra Carolina Aranda Felipe Pierotti Dr. Antonio Carlos Pastorino Dr. Arnaldo Porto Dra. Ekaterini Goudouris Dr. Emanuel Sarinho Dr. Flávio Sano Dra. Jackeline Motta Franco Dra Lillian Moraes Dra. Márcia Mallozi Dra. Maria Letícia Chavarria Dr. Nelson Rosário Dra. Neusa Wandalsen

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